量子点联合ELISA检测胆管癌抗原CA199

目的 本研究应用量子点荧光探针技术联合ELISA对胆管癌抗原CA199进行检测,以探索量子点技术在胆管癌诊断方面的应用.方法 制备偶联CA199二抗的量子点,联合ELISA分别检测0.01 ng/mL、0.1ng/mL和1.0 ng/mL的CA199抗原,并设置多组对照.将各组干燥的ELISA孔与硅片进行光致发光(PL)谱的扫描,并比较各组的PL峰的平均位置和区间.结果 研究发现,量子点偶联CA199抗体后,PL光谱发生蓝移,最大幅度可达26 nm.CA199抗原浓度与偶联量子点PL谱的蓝移幅度呈负相关性.量子点-ELISA技术对CA199抗原的检测灵敏度可达0.01 ng/mL,比传统ELISA检测的灵敏度(1 ng/mL)高100倍.结论 该研究方法提高了ELISA对癌症抗原检测的敏感度,具有广阔的应用前景.     

基于量子点免疫层析技术的IL-6定量检测方法建立

目的本研究建立了一种基于量子点标记技术和免疫层析技术的IL-6的检测方法,并对其性能及临床应用进行初步探讨。方法在偶联剂碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)作用下,使抗IL-6单克隆抗体Ⅰ(Ab1,小鼠)与羧基量子点(CdSe/ZeS)偶联,制备量子点标记物;以抗IL-6单克隆抗体Ⅱ(Ab2,小鼠)作为捕获抗体,建立双抗体夹心量子点免疫层析法试纸条检测IL-6,依据建立方法制备IL-6试剂,并考核试剂的精密度、灵敏度和线性范围;应用该试剂检测重症监护室住院感染患者及健康人血清临床标本200份,与罗氏电化学发光法进行方法学比较。结果本研究建立的量子点免疫层析法试剂的分析内和分析间精密性均小于10%;空白检测限为0.27pg/mL,最低检测限为0.79pg/mL,功能灵敏度为2.0pg/mL;线性范围为2.0-5000pg/mL;与罗氏电化学发光法相比较,两种方法测定结果的回归方程为Y=0.9704X+4.685,相关系数R2=0.9963。结论本研究所建立的量子点免疫层析法IL-6试剂性能良好,该方法操作简便、检测快速、灵敏度高,适用于炎症及感染人群的早期鉴别诊断。     

快速灵敏检测HCV核心抗原的免疫新方法及其性能分析

目的建立一种用于快速、灵敏检测血清丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCcAg)含量的免疫新方法,并对其性能进行评价。方法采用新型纳米材料修饰电极,将HCV核心抗体固定到电极表面,制备检测HCV核心抗原的电化学免疫传感器,并分析该传感器的检测性能。结果该免疫传感器对HCV核心抗原反应灵敏,其线性范围为2.50～300.00ng/mL,相关系数为0.997,检出限为1.20ng/mL。此外,该传感器具有较好的准确性、选择性和精密度。结论该电化学免疫传感器性能良好,可实现对HCcAg的快速、灵敏检测。     

基于碳纳米管-硫堇/苝四甲酸二酐衍生物膜/纳米金的新型癌胚抗原电流型免疫传感器的研究

目的探讨采用碳纳米管-硫堇(CNTs-THi)/苝四甲酸二酐衍生物膜(PTC-NH2)/纳米金(nano-Au)构建的新型的高灵敏癌胚抗原(CEA)免疫传感器的性能。方法以氧化铟锡(ITO)电极为基底,在其表面首先电沉积一层纳米金,然后依次修饰CNTs-Thi、PTC-NH2、nano-Au,固载癌胚抗原特异性抗体(anti-CEA)制得新型高灵敏癌胚抗原(CEA)免疫传感器。通过循环伏安法考察电极修饰过程的电化学特性。结果该免疫电极的峰电流响应与癌胚抗原的浓度在1.0～75.0 ng/mL的范围内保持良好的线性关系,相关系数为0.991 5,检测下限为0.5 ng/mL。结论利用该方法制备的免疫传感器具有灵敏度高、线性范围宽、检测下限低等优点。     

基于双重信号放大的电化学免疫法对前列腺特异性抗原的检测

以谷胱甘肽修饰的CdTe量子点(GSH-CdTe QDs)与金纳米粒(AuNPs)形成复合材料(AuNPs@GSH-CdTe)为信号标记物,并在还原氧化石墨烯(rGO)和AuNPs双重信号放大的作用下,建立了一种高灵敏检测前列腺特异性抗原(PSA)的三明治免疫夹心式电化学方法。在rGO/AuNPs表面固定二抗蛋白(Ab₂),捕获目标物PSA和标记有一抗蛋白(Ab₁)的AuNPs@GSH-CdTe信号物,形成“三明治”免疫夹心结构。经HNO₃溶解后,采用方波溶出伏安法(SWSV)测定酸解的Cd²⁺的峰电流用于定量分析PSA。其中AuNPs较大的比表面积以及较好的生物相容能力,达到了成功装载抗体以及放大信号的效果,同时具有较大表面积的rGO起到了协同放大的作用。所构建的免疫分析方法实现了对肿瘤标志物PSA的检测,其线性范围为0.5~200 ng/mL,检测限为5.0 pg/mL,并且该方法专属性、重复性以及稳定性好。此外,在实际样品的检测中,加标样回收率为98.20%~106.2%,结果准确度良好,为检测PSA提供了准确可靠且灵敏度高的新方法。     

壳聚糖/碳纳米管修饰电极电化学免疫传感器用于甲胎蛋白检测

目的构建壳聚糖/碳纳米管(CNT)修饰电极电化学免疫传感器用于甲胎蛋白(AFP)检测的新技术。方法采用壳聚糖/CNT复合物修饰玻碳电极,通过共价键合方式将AFP抗体固定在修饰电极表面,固定抗体的电极与AFP、辣根过氧化物酶(HRP)标记的AFP抗体反应,构筑夹心型免疫复合结构。HRP催化TMB底物产生电流信号,电流信号大小与AFP浓度成正相关,实现对AFP的高灵敏检测。结果该电化学免疫传感器可以准确检测AFP标准样品,也可用于检测血清中AFP的浓度。结论壳聚糖/CNT修饰电极构建的用于AFP检测的电化学免疫传感器具有较高的灵敏度和准确性。     

电化学发光法和放射免疫法对AFP检测的比较

目的:探讨电化学发光法和放射免疫法对AFP检测的比较.方法:运用电化学发光法和放射免疫法对32例肝癌患者血清标本中AFP的含量进行检测.结果:两种方法检测血清中AFP的值进行定量分析,结果表明电化学发光法检测AFP水平(1240±20.4) ng/mL与放射免疫法检测结果(1073±50.9)ng/mL,结果无显著性差异.结论:两种方法均是较好的检验技术,尤其电化学发光法具有更好的临床应用价值.     

基于AgI模拟酶纳米材料构建阻抗型免疫传感器用于检测癌胚抗原

目的 设计一种基于AgI模拟酶纳米材料的阻抗型免疫传感器,对血清样品中的癌胚抗原(CEA)进行高灵敏检测.方法 合成一种壳聚糖修饰的碘化银(CS-AgI)纳米材料,利用透射电镜(TEM)和傅里叶红外光谱(FTIR)法对合成的CS-AgI进行表征,以CS-AgI为信号标记物修饰CEA抗体,采用夹心式免疫分析法在金电极表面制备一种高效、灵敏的电化学免疫传感器,采用电化学工作站定量分析检测所构建免疫传感器的电化学性能.结果 成功合成CS-AgI纳米颗粒,颗粒呈球形,粒径约为100 nm.以CS-AgI纳米颗粒为信号标记物构建的免疫传感器在pH7.0的磷酸盐缓冲液中检测CEA时表现出良好的电化学性能,其交流阻抗响应值与样品中的CEA浓度的对数呈线性增加趋势,并在CEA浓度为0.1～80 ng/mL范围内展现出良好的线性关系(r=0.996),检测限达到0.05 ng/mL.结论 基于AgI模拟酶纳米材料构建的阻抗型免疫传感器可以高灵敏检测CEA,同时具有较好的精确性、重现性和选择性,为癌症的早期诊断和早期治疗提供了实验依据.     

电化学免疫传感器超灵敏检测髓过氧化物酶的研究

目的：本研究拟建立一种电化学免疫传感器用于超灵敏检测人血清中髓过氧化物酶（MPO）水平的方法。方法通过石墨化多孔碳-金复合纳米材料（AuNPs＠ GMCs）将 MPO 抗体固定到玻碳电极表面,研制出一种新型 MPO 电化学免疫传感器,探讨了实验条件对传感器性能的影响,并与酶联免疫吸附试验（ELISA）进行方法学比较。结果在最优条件下该传感器对MPO 反应灵敏,其线性范围为2．000～300．000 ng／mL ,相关系数为0．999,检出限为0．5 ng／mL ,与 ELISA 法检测结果的相关系数为0．983。结论该电化学免疫传感器可实现对 MPO 的超灵敏检测。     

Pt@GR复合物用于构建高灵敏电化学甲胎蛋白传感器的研究

目的 构建基于铂与石墨烯纳米复合物(Pt@GR)的电化学免疫传感器.方法 在洁净的玻碳电极表面滴涂一层壳聚糖与Pt@GR的复合物,通过共价作用将纳米金固定在电极表面,进一步固载甲胎蛋白抗体制得甲胎蛋白免疫传感器,采用循环伏安法(cyclic voltammetry,CV)、示差脉冲伏安法(differential pulse voltammetry,DPV)对实验条件进行优化,对该传感器的响应特性进行研究.同时制备基于普鲁士蓝和石墨烯的免疫传感器以对照研究不同传感器的性能特点.结果 免疫反应最佳时间为24 min,测试底液最佳pH为6.5.在最优的实验条件下,连续扫描100圈,其电流响应下降5.1％.平行测定5支电极的RSD为8.1％,加标回收率为96.40％ ～ 102.49％.在测试底液中加入过氧化氢,其线性范围为0.1 ～ 100.0 ng/mL,检测限为0.026 ng/mL.结论 基于Pt@GR复合物修饰的电化学传感器具有灵敏度高和稳定性好的特点,可用于甲胎蛋白的高灵敏检测.     

用于AFP检测的电流型免疫传感器的研究

目的 研制一种新的检测AFP的电流型免疫传感器。方法 通过把抗体固定在电聚合邻苯二胺膜的铂电极上，夹心法连接HRP标记的AFP抗体，电流法检测HRP作用于底物对苯二酚后的产物产生的还原电流间接检测血清AFP浓度。结果 制得的传感器在5～400ng／ml范围内．电流和AFP浓度的对数成线性关系，相关系数为0．986．最低检测限为0．51ng／ml，初步临床实验结果良好。结论 研制的传感器具有保存时间长、灵敏度高、特异性好、重复性好、无放射性等优点．有望在临床检测中发挥作用。     

采用石墨烯修饰的电化学免疫传感器检测猪肉中的己二烯雌酚含量

利用石墨烯及己二烯雌酚修饰电极,研制了一种用于检测己二烯雌酚的高灵敏新型电化学免疫传感器;通过竞争结合,以铁氰化钾为探针,实现了对己二烯雌酚的高灵敏快速检测。结果表明:研制的石墨烯/己二烯雌酚电化学免疫传感器具有很高的灵敏度,并且在己二烯雌酚质量浓度为500~5 000 ng/mL的范围内具有良好的线性关系,检测限可达到0.2 ng/mL。该传感器具有良好的稳定性和重复性,对猪肉实际样品进行了己二烯雌酚的含量分析,回收率在83.8%~97.7%之间,结果令人满意。     

压电免疫传感器与ELISA、TPPA法在梅毒筛查试验中的对比研究

目的研制压电免疫传感芯片法快速检测梅毒特异性抗体。方法采用吸附-交联法将梅毒基因工程重组抗原固定在镀金石英晶体表面。运用压电免疫传感阵列检测技术快速检测梅毒特异性抗体。以压电免疫传感芯片为实验方法,以ELISA作对照方法,以TPPA作为确认方法进行对比研究。结果30份临床样本,实验方法与对照方法的灵敏度均为100％,特异度分别是85％和75％,一致率分别是90％和83．3％。压电蛋白芯片法与TPPA法检测数据之间存在相关关系,属半定量实验。结论运用压电免疫传感阵列对梅毒螺旋体抗体进行快速检测,具有灵敏度高、特异性好,检测速度快等优点,特别适用于野战条件下献血者血液快速筛查。     

压电石英晶体甲胎蛋白免疫传感器的实验研究

目的　构建一种新型压电甲胎蛋白 (AFP)免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定组成检测池 ,抗人AFP单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电AFP免疫传感器。结果　构建的压电AFP免疫传感器对AFP的响应特性良好 ,其线性检测范围为 2 0～ 10 0 0ng ml ,癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原 (PSA)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等对AFP的检测基本无干扰 ;传感器可再生后重复使用 5次 ;68例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合 ,两种方法的相关系数为 0 92 ,P <0 0 1。结论　研制的压电AFP免疫传感器是一种灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能重复使用和实时在线检测AFP的新方法 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断 ,具有临床推广价值。     

基于多壁碳纳米管-壳聚糖-硫堇纳米复合物修饰甲胎蛋白免疫传感器的研究

目的采用多壁碳纳米管-壳聚糖-硫堇(MWCNT-CS-THi)纳米复合物及半胱氨酸盐酸盐共修饰于玻碳电极表面固载抗体制得高灵敏甲胎蛋白免疫传感器。方法先在玻碳电极表面滴涂一层MWCNT-CS-THi纳米复合物,随后利用壳聚糖和硫堇分子中大量的正电荷氨基固定纳米金(GNPs)并吸附半胱氨酸盐酸盐(CH),最后用戊二醛(GA)交联甲胎蛋白特异性抗体制得电流型免疫传感器。结果在最佳实验条件下,该传感器响应的峰电流值与甲胎蛋白抗原(AFP)浓度在0.1～200.0ng/ml的范围内保持良好的线性关系,检测下限为0.07ng/ml。结论成功建立了甲胎蛋白免疫传感器,该方法制备简单,线性范围宽,检测下线低。     

胱抑素C的IgG-和IgY-ELISA检测体系的建立与评价

目的建立适用于检测人胱抑素C（Cystatin C）的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋抗鸡IgY酶标抗体;Ⅱ：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋兔F（ab＇）2抗鸡酶标抗体;Ⅲ：捕捉抗体IgY＋检测抗体IgG＋抗兔IgG酶标抗体。通过比较Cystatin C的最低检测浓度和阴性对照的OD值评价三种夹心法的灵敏度和特异性。结果体系I的Cystatin C最低检测浓度为7.5ng/mL（阴性对照OD值为0.737）,体系Ⅱ的Cystatin C最低检测浓度为13ng/mL（阴性对照OD值为0.313）,体系Ⅲ的Cystatin C最低检测浓度为10ng/mL（阴性对照OD值为0.31）。结论成功建立了Cystatin C的双抗体夹心ELISA检测体系,体系I的灵敏度最高但其特异性差,体系Ⅱ和Ⅲ的检测灵敏度和特异性均较好,可以用于Cystatin C的检测。     

应用量子点及磁微粒技术快速检测阴道毛滴虫抗原

目的 以阴道毛滴虫(trichomonas vaginalis,Tv)检测为切入点,构建以量子点和磁微粒技术为基础的夹心法快速检测抗原技术,为同步多项抗原检测作准备.方法 针对Tv特异性黏附蛋白AP33制备其抗体,以碳二亚胺交联法,分别连接抗体.量子点及抗体-磁微粒加入待测抗原AP33结合后,在荧光显微镜下观测结果.结果 确立了本检测系统的最优条件,对AP33的检测与儿种阴道常见病原菌无交叉反应,检测限为0.05υg/ml.结论 成功构建了量子点磁微粒检测技术,对Tv抗原检测,特异度为90%,准确率为88%.