人非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的研究

目的 探讨人类非小细胞肺癌组织中ｐ１６基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。方法 应用控制模板ＤＮＡ量的银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测４０例非小细胞肺癌手术切除标本中ｐ１６基因第２外显子。结果 ４０例中有１３例发生纯合缺失，３例发生突变，缺失及突变率为４０％，其缺失及突变率与肺癌的临床分期有密切关系（Ｐ〈０．０５）。结论ｐ１６基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要作用。     

80例冀东非小细胞肺癌患者中EGFR基因突变研究

摘 要：［目的］探讨冀东非小细胞肺癌患者中表皮生长因子受体(EGFR)的突变情况及其与临床特征间的关系。［方法］ 收集80例非小细胞肺癌患者采用Real-time PCR扩增法检测EGFR的突变情况。［结果］ 80例非小细胞肺癌样本中,女性EGFR突变率明显高于男性（P<0.05）;腺癌患者EGFR突变率明显高于其他两种非小细胞肺癌患者（P<0.05）;无吸烟史患者EGFR突变率明显高于有吸烟史患者（P<0.05）;满族患者EGFR突变率明显高于汉族患者（P<0.05）。［结论］ 在非小细胞肺癌中,女性EGFR基因的突变率高于男性;不吸烟患者突变率高于吸烟患者;较鳞癌和大细胞癌,腺癌最容易发生突变;满族突变率高于汉族。而且无论是满族还是汉族,没有发现EGFR基因外显子19缺失突变和EGFR外显子21的L858R错义突变间差异。     

肺癌患者吸烟量与痰液细胞p53和Ki—ras基因突变的关系

目的　了解痰液细胞癌基因突变是否与肺癌患者的吸烟量有相关性。方法　将痰液 0 .5毫升加入痰处理液制备细胞沉淀液 ,酚氯仿提取DNA ;应用SSCP PCR银染和RFLP PCR方法对痰液中p5 3、K ras突变情况进行检测。统计肺癌患者的香烟消耗量 ,分析p5 3、K ras突变与吸烟量的关系。结果　在确诊的 110例肺癌中 ,存在p5 3或K ras基因突变者有 76例 ,突变率达 69.1% ,其中 16例为p5 3和K ras基因均有突变。全组中有 71例重度吸烟者吸烟指数 (≥ 40 0支·年 ) ,71例中 5 5例有p5 3或K ras基因突变 ,突变率达 77.5 % ,显著高于非吸烟组 (P <0 .0 0 1) ;p5 3和K ras突变患者的平均吸烟指数分别达到 861和 63 0支·年 ;而未突变的平均吸烟指数为 2 84和 5 5 4支·年 ,二者之间有显著性差异 ( χ2 =3 6.5 6,P =0 .0 0 2 ,双尾检验 )。结论　痰液细胞癌基因突变检测具有简便、实用、可行的特点 ,吸烟的肺癌患者中癌基因突变率显著高于非吸烟的肺癌患者 ,提示吸烟尤其是重度吸烟可能是支气管癌基因突变的主要原因之一 ,值得临床进一步开展深入的研究。     

肺癌p16基因纯合缺失,突变,表达及临床意义

目的探讨P16基因的改变与肺癌生物学行为的关系。方法控制正常细胞对肿瘤组织污染后，用聚合酶链反应一单链构型多态性分析（PCR－SSCP）和免疫组织化学法对60例肺癌组织P16基因纯合缺失、突变、表达进行了研究。结果小细胞肺癌无P16基因纯合缺失、突变和蛋白表达异常。非小细胞肺癌P16基因纯合缺失率和突变率分别为40．5％和5．7％且与肿瘤细胞的分化程度、组织类型、转移和预后明显相关。非小细胞肺癌P16蛋白表达缺失率为42．3％，与p16基因纯合缺失有高度的一致性，两者的缺失符合率为76％。结论P16基因异常和失活可能与非小细胞肺癌的组织学类型、分化和预后有一定关系。     

青老年肺癌患者p53基因突变情况的对比研究

目的 分析45例青老年肺癌中p53基因突变,比较青年肺癌与老年肺癌p53基因突变的差异。方法 45例患者均为温州医学院附属第一医院胸外科收治的病例,其中22例为20－45岁肺癌患者,23例为55－80岁肺癌患者。应用PCR－SSCP银染技术检测p53基因的突变情况,并进行PCR产物直接测序。结果 发现青年组和老年组中p53基因突变情况基本相同（50．0％比52．2％）,其中小细胞肺癌突变率分别为70．0％（7／10）和75．0％（6／8）,非小细胞肺癌突变率分别为33．3％（4／12）和40．0％（6／15）,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 青年肺癌和老年肺癌p53基因突变并无明显差异,提示p53基因的突变不属“先天”致癌因素。     

非小细胞肺癌p73基因突变与表达的研究

[目的]研究p73基因在非小细胞啼癌中的突变及表达情况，分析其与非小细胞肺癌的临床分期、组织学分型的相关性，探讨p73与肺癌发生、发展的关系．[方法]应用催化信号放大（CSA）法检测40例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁组织p73蛋白表达；酚-氯仿-异戊醇法提取基因组DNA，应用PCR—SSCP法（单链构象多态性分析）检测p73基因突变，并对出现异常条带样本进行DNA测序分析．[结果]40例非小细胞肺癌组织中p73阳性表达率52．5％（21／40）明显高于癌旁肺组织（0）（P〈0．005）。p73阳性表达率与肿瘤临床分期、组织学分型有相关性（P〈0．01）。有3例p73基因第2位外显子序列存在遗传多态性，碱基T→C置换、[结论]p73在非小细胞肺癌组织中存在过度表达及遗传多态性，D73可能参与调控非小细胞肺癌的发生、发展过程．     

肺癌组织中p16基因缺失的初步研究

目的　探讨p16基因缺失与肺癌发生的关系。方法　采用PCR方法检测 48例肺癌组织标本中p16基因缺失的情况 ,其中包括 2 3例原发性小细胞肺癌 (SCLC)和 2 5例原发性非小细胞肺癌 (NSCLC)。结果　在 2 3例SCLC中没发现p16基因缺失 ,而 2 5例NSCLC中 ,7例存在p16基因缺失 ,缺失率达 2 8%。结论　结果提示p16基因的变异与原发性非小细胞肺癌的发生及发展相关。     

β-Catenin基因突变与非小细胞肺癌临床病理特征的关系

目的了解β-catenin基因外显子3在非小细胞肺癌组织中的突变及其与肿瘤病理分型、分化程度和淋巴结转移的关系.方法采用PCR-SSCP和DNA测序等方法对36例非小细胞肺癌术后标本,进行了β-catenin基因外显子3突变研究分析.结果在36例非小细胞肺癌组织标本中,19.44%(7/36)发生了β-catenin基因外显子3突变,其中4例突变位于密码子53.β-catenin基因外显子3的突变率与病理类型无关(P＞O.05);而与肿瘤的分化程度有相关性(P＜O.05);在有淋巴结转移的病例标本中,β-catenin基因外显子3的突变率明显高于无转移病例(P＜0.05).结论研究显示在非小细胞肺癌组织中的β-catenin基因外显子3有突变,并且在我国的突变率较国外的报道要高;β-catenin基因外显子3的突变与非小细胞肺癌淋巴结转移和肿瘤分化程度相关,提示β-catenin基因外显子3的突变是非小细胞肺癌患者的不良预后因素之一.     

原发性非小细胞肺癌P16基因的缺失及其临床意义

目的　探讨P16基因缺失与非小细胞肺癌病理类型、临床分期的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,检测 3 1例非小细胞肺癌及相应匹配癌旁正常组织中P16基因外显子 2的缺失情况。结果　 3 1例非小细胞肺癌组织中 ,7例P16基因纯合性缺失 ,缺失频率为 2 2 .6 %。其中鳞癌 6例 ,腺癌 1例。 7例缺失均为Ⅲ、Ⅳ期临床病例。结论　P16基因缺失可能在非小细胞肺癌的发生、发展中起作用 ,并与病理类型、临床分期有关。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体双向基因测序研究

目的 探讨中国人非小细胞肺癌表皮生长因子受体（EGFR）第18、19、21外显子基因突变状态。方法 32例病理证实的非小细胞肺癌组织标本,通过模板DNA提取、定量和Touchdown PCR扩增EGFR exon18、19、21序列,进行正、负链基因测序分析,并与10例非小细胞肺癌患者血液标本对照。结果 32例非小细胞肺癌组织发现7例共9种突变,即已报道的5例19外显子缺失和未见报道的21exonT〉G（L833V）及A〉T（H835L）杂合性突变,另有2例内含子多态改变。中国人非小细胞肺癌突变率为28．1％（9／32）,肺腺癌突变率为31．6％（6／19）。结论 中国人非小细胞肺癌的EGFR突变率与已报道的亚洲人女性肺腺癌的突变率相似,但存在中国人自身新的突变位点（L833V和H835L）及内含子改变,该突变率与国内易瑞沙治疗非小细胞肺癌有效率基本吻合。     

非小细胞肺癌中p16基因表达的意义

 目的　检测人NSCLC中p16基因蛋白表达与NSCLC的临床病理类型及预后的关系。方法　用S—P免疫组化法对80例NSCLC及40例肺部良性病变的石蜡标本中p16蛋白进行对比检测。结果　(1)NSCLC中p16蛋白阳性率为55%(44/80),良性病变的阳性率为92.5%(37/40),两者存在显著性意义(P<0.005)。(2)NSCLC中p16蛋白表达下降的程度随病期进展而明显,提示对预后判断有意义。(3)p16蛋白表达与NSCLC的具体病理亚型无明确关系。结论　S—P法检测分析p16基因的表达产物简便易行,对预后判断有意义。     

p16基因在肺癌中突变和表达改变的研究

 目的 检测非小细胞肺癌ｐ１６ 基因蛋白表达及其第 ２外显子突变，并探讨其与非小细胞肺癌的临床病理类型和预后的关系。方法 用Ｓ－Ｐ免疫组化法对ｐ１６基因蛋白表达进行对比检测，并用 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测ｐ１６基因第 ２外显子的突变情况。结果 非小细胞肺癌中 ｐ１６蛋白表达阳性率５２．５％，肺部非癌性病变阳性率９２．５％，两者比较差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；非小细胞肺癌中 Ｐ１６基因第 ２外显子突变率为 ５％，而肺部非癌性病变中无一例突变。结论 ｐ１６蛋白表达下调在非小细胞肺癌的发生发展中起重要作用，对判断其预后有意义，提示 Ｐ１６／ＭＴＳ１基因在非小细胞肺癌发生中具有一定的作用。     

Alterations of the p16(ink4a) gene in resected nonsmall cell lung tumors and exfoliated cells within sputum

Recently, we reported that p16 protein expression was nondetectable in 49.5% of 107 resected nonsmall cell lung cancers (NSCLCs), suggesting that the p16(INK4a) gene is frequently inactivated in primary NSCLC. To identify the molecular basis for this p16 immunohistochemical negativity further, we performed a genetic and epigenetic study of p16(INK4a) status in a series of 115 NSCLC samples parallel to the clinicopathologic and prognostic analyses. Microdissected tumor DNA samples were screened for homozygous deletion using comparative multiplex-polymerase chain reaction (PCR), for intragenic mutation using direct sequencing and for loss of heterozygosity (LOH) using an intragenic microsatellite marker, D9S942. Of these samples, 67 were further analyzed by SmaI-based PCR methylation assay to evaluate aberrant methylation at the gene. To examine the correlation of aberrant methylation in tumor and sputum samples, sputum samples from 12 matched patients were assessed for this change. We found that methylation of the p16(INK4a) gene was present in 38 of the 67 (56.7%) tumors and was significantly associated with negative p16 protein expression (p = 0.029). A 92% (11/12) concordance of sputum samples with matched resected tumors was found. The survival rates among adenocarcinoma patients with p16(INK4a) methylation were lower, but at a level of borderline significance compared with those patients without methylation (p = 0.071). In addition, 29.4% of the informative cases were found to harbor LOH at D9S942. None of the 115 microdissected tumors exhibited homozygous deletion in the p16(INK4a) gene. Only 1 patient exhibited a complex mutation at the fourth ankyrin repeat consensus sequence and concordantly demonstrated p16 immunohistochemical negativity. Overall, 69% (79/115) of NSCLC tumors had at least 1 type of p16(INK4a) alteration. Our data provide compelling evidence that p16(INK4a) alterations are involved in NSCLC tumorigenesis and that promoter methylation is the predominant mechanism in p16(INK4a) deregulation.     

乳腺癌中P16基因缺失与突变的研究

背景与目的:了解乳腺癌与p16基因的关系.材料与方法:采用PCR和DNA测序方法,对33例乳腺癌患者肿瘤组织标本的p16基因进行检测,研究p16基因的缺失和突变情况.结果:所有标本均未检出纯合缺失,10例标本进行了外显子2的序列测定,也未发现点突变.结论:p166基因的纯合缺失和点突变可能与乳腺癌的发生无关.     

非小细胞肺癌分子病理学的研究

目的　探讨上海地区人肺癌发生及发展过程中的分子病理学模式。方法　采用DNAslotblot、PCR、PCR SSCP等方法 ,先后检测 2 0 0例NSCLC组织DNA标本中C erbB2、C myc、EGFR癌基因扩增 ,抑癌基因中p5 3基因外显子 5～ 8点突变、p15基因的纯合性丢失 ,以及某些与肺癌相关的染色体 3p及 17p13 .3位点的杂合性丢失 (LOH)。结果　多种癌基因共扩增率与肺癌TNM分期呈正相关 (P <0 .0 0 1)。p5 3基因外显子 5～8点突变率为 49.2 % ( 3 1/63 ) ,其中以外显子 8为主。肺癌组织中p15基因出现高频率纯合性丢失 ,并与肺癌TNM分期密切相关 (P <0 .0 0 5 )。 17p13 .3杂合性丢失率为 40 % ( 8/2 0 ) ,并与p5 3基因的点突变相关联。 3p14及 3p2 5位点处的杂合性总丢失率可高达 66.7% ( 10 8/162 ) ,其中肺腺癌中 3p14及 3p2 5二位点的共丢失率明显高于鳞癌 (P <0 .0 5 )。结论　根据上述结果 ,提出上海市区居民的非小细胞肺癌分子病理学的初步模式 :癌前期病变时已可出现 3p丢失 ,原位癌时以p5 3基因突变及 17p13 .3丢失为主 ,浸润癌及向转移性癌过渡时有多种癌基因C myc、C erbB2及EGFR癌基因共扩增 ,并出现p15基因纯合性丢失。     

p16基因及产物在原发性肺癌中的表达及其临床病理学意义

目的 探讨Ｐ１６基因及产物的异常表达与肺癌发生、发展关系。方法 应用免疫组化检测１１４例原发性肺癌组织中Ｐ１６蛋白的表达,应用ＰＣＲ技术分析６２例Ｐ１６蛋白表达丢失的肺癌组织中Ｐ１６外显子２（Ｅ２）的缺失情况,并以１４例癌旁正常肺组织作对照。结果 Ｐ１６蛋白阳性表达率在鳞癌、腺癌和小细胞肺癌中分别为４３．２％、８４．５％和２７．０％,各组间无显著差异（Ｐ〉０．０５）;Ｐ１６蛋白表达水平与非小细胞肺     

非小细胞肺癌中p16/MTS1基因失活及其意义

目的：研究抑癌基因ｐ１６ＭＴＳ１基因失活与肺癌发生发展的关系。方法：采用双重ＰＣＲ和免疫组化技术分析４８例原发性非小细胞肺癌中ｐ１６基因存在状态。结果：２５例ｐ１６蛋白表达阳性（５２．１％）,其中１４例ｐ１６基因第二外显子缺失。有淋巴结转移者和无淋巴结转移者的Ｐ１６蛋白表达阴性率有显著性差异。ｐ１６基因缺失率亦如此。肺鳞癌中ｐ１６蛋白表达阴性率显著高于腺癌。结论：ｐ１６基因存在状态与非小细胞肺癌的     

EGFR19/21基因突变与NSCLC组织中p53蛋白表达的关系及对预后的影响

目的 探讨表皮生长因子受体19/21(EGFR19/21)基因突变与非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中p53蛋白表达的关系及对患者预后的影响.方法 收集98例NSCLC患者的NSCLC组织标本,采用Taqman-ARMS法检测肿瘤组织中EGFR19/21基因的突变情况,采用免疫组化检测p53蛋白的表达情况,并根据EGFR19/21基因检测结果将患者分为突变组(n=44)和野生型组(n=54),分析EGFR19/21基因突变与p53蛋白表达及患者预后的关系.结果 EGFR19/21基因突变组NSCLC患者p53蛋白的阳性表达率为38.64％,低于野生型组NSCLC患者的59.26％,差异有统计学意义(P﹤0.05).不同年龄、性别、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移情况、分化程度、病理类型、ECOG评分NSCLC患者的EGFR19/21基因突变发生率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);Cox比例风险回归分析结果显示,TNM分期高、发生淋巴结转移、分化程度为低分化、p53蛋白阳性表达是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05),EGFR19/21突变是影响NSCLC患者预后的保护因素(P﹤0.05).结论 EGFR19/21基因突变的NSCLC患者,其p53蛋白呈现低表达,EGFR19/21野生型患者的预后较突变型差.     

Absence of deletions but frequent loss of expression of p16INK4 in human ovarian tumours.

The cyclin-dependent kinase inhibitor p16 gene (P16, MTS1, CDKN2) has been shown to be altered by deletion or point mutation in some human tumours and cancer cell lines, suggesting that it works as a tumour suppressor. We analysed p16 gene mutation and p16 protein expression in 42 primary ovarian carcinomas and in five human ovarian cancer cell lines. Polymerase chain reaction (PCR) amplifications of exons 1 and 2 of the gene showed no deletion or gross rearrangement in the p16 gene. The lack of deletion was further demonstrated by Southern blot analysis. Looking for point mutations, we used single-strand confirmation polymorphism (SSCP) analysis and, in half of the tumours, we sequenced both strands of exons 1 and 2. No mutations were detected. In 11 out of 42 patients (26%), however, we detected no protein expression by Western blot analysis, suggesting that decreased expression of p16 rather than deletion of the gene can occur in a significant percentage of human ovarian cancers. In the same experiment CDK4 protein was found homogeneously expressed in all the tumour specimens and in the five cell lines. The lack of expression of p16 was not due to hypermethylation of the gene assessed by digestion of genomic DNAs with a methylation sensitive enzyme, suggesting that other mechanisms, not yet identified, are involved in the decreased expression of the p16 gene in human ovarian tumours.