人巨细胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡的实验研究

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)活动性感染可以通过胎盘垂直传播 ,导致流产、畸形、死胎、新生儿神经系统及其他脏器的损害 ,已成为影响胎儿及新生儿生长发育的常见病原。现已证实 ,许多病毒性疾病的发生与凋亡失常有关〔1〕。我们采用流式细胞技术对ＨＣＭＶ感染细胞进行细胞周期和凋亡分析 ,以探讨ＨＣＭＶ对宿主细胞的影响及机理。1　材料和方法1 1　病毒和细胞　ＨＣＭＶＡＤ16 9毒株由湖北省病毒研究所提供 ,按常规方法传代 ,滴定 ,其滴度为 10 3ＴＣＩＤ5 0 0 .1ｍｌ;人胚肺成纤维细胞 (ＨＥＬ)由同济医科大学附属同济医院儿科病毒室提供 ,…     

监测HCMV活动性感染的一种新方法-HCMV PP65抗原血症检测

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)感染对人类的影响甚广 ,尤其是对免疫功能低下者 ,往往是致死的[1] 。随着移植学的长足进步 ,严重困扰移植术后生存率的棘手问题之一仍是移植受者ＨＣＭＶ的原发或潜伏—再激活感染[2 ] 。ＨＣＭＶ感染对宿主有两方负效应 ,即病毒本身导致的细胞损伤和病毒诱导的免疫病理损伤外 ,还极易激发宿主受损于细菌、真菌、原虫以及其他病毒的双重感染。　　ＨＣＭＶＰＰ6 5抗原血症检测能早期、快速监测ＨＣＭＶ的激活 ,适时以予抗病毒药物治疗 ,对免疫功能受抑的宿主来说是至关重要的。1　ＨＣＭＶＰＰ6 5抗原血症检测方法…     

急性呼吸道感染患儿巨细胞病毒感染的研究

巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)在人群中感染非常普遍 ,但大多数呈亚临床不显性感染或潜伏感染 ,在宿主特殊的状态下 ,这种潜伏感染可被激活为其重要的生物学特征[1,2 ] 。为研究小儿急性呼吸道ＨＣＭＶ感染 ,根据 1994年全国小儿巨细胞病毒感染学术会议上拟定的诊断标准[3 ,4 ] ,选用ＨＣＭＶ ＩｇＭ为ＨＣＭＶ活动感染指标 ,对 2 5 0例冬春季急性呼吸道感染 (ＡＲＩ)患儿和 5 0名同期健康儿童进行了ＨＣＭＶ ＩｇＭ、呼吸道合胞病毒ＩｇＭ(ＲＳＶ ＩｇＭ) ,腺病毒ＩｇＭ(ＡｄＶ ＩｇＭ)特异抗体同步检测和部分临床资料分析。1　材料和方法1.1　病…     

儿童巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)感染是目前我国小儿中最最常见的感染性疾病。亦是引起小儿各种畸形和病残的主要病因之一[1] 。新生儿先天性感染率大约占出生婴儿的 0 .5 -0 .1% [2 ] 。婴儿期死亡率高达 12 % ,幸存者中 80 % - 90 %有后遗症 ,即使无症状的ＨＣＭＶ感染患儿 ,10 % - 15 %亦可发生后遗症[3] 。ＨＣＭＶ感染亦可在新生儿期及围产期间通过获得而建立 ,并可能引起肺炎或脓肿 ,出血性胃肠炎及生长发育障碍[2 ] 。因而 ,儿童ＨＣＭＶ感染是一个值得重视的问题。ＨＣＭＶ感染的临床诊断通常较为困难 ,故需借助快速和准确的实验室检测方法…     

肝炎患者外周血单个核细胞IL-18 mRNA和蛋白水平与HBV感染的关系

检测了慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(ＰＢＭＣ )ＩＬ 18基因及蛋白表达水平 ,以探讨ＩＬ 18在乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ )感染中的作用。1　材料与方法1 1　病例　慢性乙型肝炎 30例 ,排除合并感染其他病毒性肝炎 ,近 6月无应用影响免疫功能的药物。所有病例均检测血清ＨＢＶＤＮＡ水平 (斑点杂交法 )。1 2　方法　分别以逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ )技术 ,流式细胞术检测ＩＬ 18基因的转录及表达水平。方法见文献[1]。ＰＢＭＣ内ＨＢＶＤＮＡ检测 ,抽提细胞内ＤＮＡ后采用ＰＣＲ法扩增。所得实验结果采用ＳＰＳＳ 8 0软件进…     

人巨细胞病毒感染致血小板减少性紫癜病因研究

血小板减少性紫癜 (ＩＴＰ)是临床上常见的一类出血性疾病 ,其中部分患者常发生于病毒感染后。目前发现人类巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)、人细小病毒Ｂ19、风疹病毒等感染后均有可能引起血小板减少。ＨＣＭＶ感染相关性ＩＴＰ的发病机理目前尚未完全定论。我们检测了合并有ＨＣＭＶ感染的ＩＴＰ患者的巨核系祖细胞内的ＨＣＭＶ晚期抗原ｍＲＮＡ ,以探讨ＨＣＭＶ感染相关性ＩＴＰ可能的发病机制。对ＩＴＰ患者抗凝外周血和非抗凝外周血分别进行ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ ＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ检测ＣＭＶ ＩｇＭ。选择ＨＣＭＶ及ＣＭＶＩｇＭ均阳性的病例共…     

巨细胞病毒宫内感染的诊断及对胎儿的影响

采用地高辛探针斑点杂交技术和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对５１例人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）血清学抗体ＩｇＭ阳性孕妇的羊水、脐血和产后两周内的新生儿尿液，进行ＨＣＭＶＤＮＡ检测。同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测脐血、羊水中ＨＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果，地高辛探针斑点杂交检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２１．５７％，脐血３３．３３％，新生儿尿液２７．４５％。ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２９．４１％，脐血４３．１４％，新生儿尿液３Ｓ，２９％。羊水ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为１１．７６％，脐血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为２３．５３％。脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性的新生儿平均出生体重明显低于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿，而脐血ＨＤＷ－ＤＮＡ阳性的新生儿肝功能异常、血小板减少以及低Ａｐｇａｒ评分的发生率明显高于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿。结果表明：采用ＥＲ技术检测羊水、脐血或产后两周内新生儿尿液ＨＣＭＶＤＮＡ有助于ＨＣＭＶ官内感染的早期诊断，便于临床早期干预，ＨＣＭＶ官内感染严重影响胎儿的生长发育，可造成胎儿肝功能异常、血小板减少和新生儿窒息的发生。     

惭肝患者重叠巨细胞病毒感染的肝组织学观察

乙型肝炎患者可重叠巨细胞病毒 (ＣＭＶ)感染。近年来 ,一些血清学的资料提示 ,ＣＭＶ重叠ＨＢＶ感染后可以加重患者的临床症状。我们采用免疫组化对一组乙肝患者肝组织中的ＣＭＶ进行了检测 ,并对ＨＢＶ与ＣＭＶ在肝组织中表达与分布的相关关系进行了探讨。材料与方法标本 :2 0 0 0～ 2 0 0 1年北京佑安医院收治的慢性乙型肝炎患者 6 6例 ,血清学 (酶联免疫吸附 )及肝组织学免疫组化仅ＨＢＶ检测阳性。其中男 4 9例 ,女 17例 ,17～ 4 8岁 ,平均 30 .4岁。每例肝活检组织经甲醛固定 ,石蜡包埋 ,5 μｍ厚连续切片 ,常规ＨＥ染色。病理诊断按…     

新生儿肺透明膜病与先天性人巨细胞病毒感染的相 …

目的 探讨新生儿肺透明膜病与先天性人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染之间的关系。方法 选择ＨＣＭＶ直接早期保守区基因序列，合成两对引物，应用套式聚合酶链式反应检测了３０例新生儿肺透明膜病患儿和１０例新生儿非肺透明膜病患儿的肺组织石腊组织石腊切片中的ＨＣＭＶ ＤＮＡ。结果 ３０例新生儿肺透明膜病患儿肺组织石蜡切片标本中有１１例（ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性，阳性率为３６．７％，对照组肺组织ＨＣＭＶ ＤＮＡ 阴性。     

几种细胞因子对HSV-1感染单核巨噬细胞的影响

以ＨＳＶ－１接种Ｕ９３７和小鼠腹腔巨噬细胞，并在接种前后分别以不同的细胞因子处理细胞，借助病滴定、免疫荧光抗体试验检测病毒抗原，用ＰＣＲ检测病毒基因，研究了细胞因子对ＨＳＶ－１感染单核巨噬细胞的影响。结果报告如下。Ｍ－ＣＳＦ对ＨＳＶ－１感染Ｕ９３７细胞具有抑制作用。病毒接种前或后三天以２００Ｕ／ｍｌＭ－ＣＳＦ持续处理Ｕ９３７细胞，接种ＨＳＶ－１后病毒滴度的下降、病毒抗原及基因组ＤＮＡ的消失较末处理组迅速，Ｍ－ＣＳＦ还能拮抗ＬＰＳ对病毒增殖的促进作用。ＩＦＮ－α中和单抗与Ｍ－ＣＳＦ同时持续处理Ｕ９…     

孕妇巨细胞病毒感染后的治疗分析

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)在人群中感染广泛 ,对人类的危害 ,尤其对胎儿的危害严重 ,孕期发生ＨＣＭＶ原发感染或复发感染均可经胎盘或产道感染胎儿 ,可导致早期流产、死胎、新生儿死亡及活产婴儿先天性畸形。部分病例出生时可无异常 ,但随着年龄的增长 ,逐渐表现出语言障碍、智     

人巨细胞病毒协同人乳头瘤病毒16型诱导宫颈上皮细胞癌变的研究

目的 探讨宫颈癌的发生发展与人乳头头瘤病毒（ＨＰＶ）和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）协同感染的关系。方法 应用我室建立的ＨＰＶ１６永化化的人宫颈上皮细胞系,转染ＨＣＭＶ即早基因（ＩＥ）。结果 ＨＣＭＶ整合在细胞染色体中,协同ＨＰＶ１６促进宫颈上皮细胞的恶性转化,在裸鼠中形成肿瘤。结论 ＨＣＭＶ ＩＥ基因可协同ＨＰＶ１６恶性转化宫颈上皮细胞,并对其协同机制进行了细胞和分子生物学的探讨。     

脐带血中巨细胞病毒DNA的检测

脐带血中巨细胞病毒ＤＮＡ的检测张吉旺，彭晓，朱俊芳人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染可导致死胎、早产、畸形。新生儿巨细胞包涵体病和间质性肺炎等多种疾病，母婴垂直传播和输血是ＨＣＭＶ感染的主要途径。为探讨ＣＭＶ的先天感染率，我们对５６份正常胎儿脐带血单个核...     

幼儿园儿童巨细胞病毒分离毒株的限制性酶切图谱分析

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)感染在儿童时期尤为常见。由于绝大多数ＨＣＭＶ感染无明显临床表现 ,其病毒的排出常为间歇性和多位点性 ,用传统的流行病学方法难以调查人群中ＨＣＭＶ的传播情况。为探讨幼儿园儿童中该病的流行情况及传播机制 ,我们对青岛市 2所幼儿园的儿童及其保育员和父母的尿标本进行病毒分离 ,并对分离出的部分ＨＣＭＶ毒株进行限制性酶切图谱分析 ,现将结果报告如下 :材料与方法病毒分离 :采集青岛市 2所幼儿园部分儿童的尿标本 ,经抗生素处理接种人胚肺成纤维细胞分离和培养病毒。分离毒株的鉴定 :用免疫过氧化物酶法 (Ｉ…     

病毒性造血祖细胞损伤的实验研究进展

临床研究已表明许多病毒感染可引起骨髓造血功能衰竭,其作用机制尚不明。近年随着造血祖细胞体外培养体系的建立与完善,为研究病毒对造血祖细胞的影响提供了重要的实验室依据,本文概括介绍近年研究的新进展。一、人巨细胞病毒(ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ)ＨＣＭＶ是一种在人群中广泛存在的感染因子,在正常人群中ＨＣＭＶ感染可超过50%,是引起小儿各种畸形和病残的主要原因之一[1]。近年又发现ＨＣＭＶ感染还可导致患儿严重的造血功能紊乱,主要表现为:异常淋巴细胞增多、肝脾肿大、血小板减少、粒细胞减少及贫血等[2…     

肾移植术后受者人巨细胞病毒感染与其它机会感染的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测６５例肾移植受者（ＲＴＲ）尿中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）－ＤＮＡ，配合捕获ＥＬＩＳＡ法及间接ＥＬＩＳＡ法检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ及ＩｇＧ，诊断ＨＣＭＶ感染，感染率为６０％（３９／６５）。应用临床及实验室方法诊断其它病原体（如革兰氏细菌，结核杆菌，霉菌，ＨＳＶ及ＶＺＶ等）所致的机会感染，结果表明，ＨＣＭＶ感染组机会感染率明显高于ＨＣＭＶ未感染组（Ｐ＜０．０１）。对其机理的分析表明，ＨＣＭＶ感染后外周血Ｔ细胞亚群产生了变化，即ＨＣＭＶ感染组ＣＤ４水平显著低于ＨＣＭＶ未感染组，ＣＤ８水平显著增高，导致ＣＤ４／ＣＤ８值显著降低（Ｐ均小于０．０１），说明ＨＣＭＶ感染组患者细胞免疫受到严重抑制，招致其它病原体的机会感染。     

甲状腺疾病与TOX,RV,MCV,HSV关系的探讨

为了探讨甲状腺疾病的诱因 ,我们利用放射免疫分析确定甲亢、甲减、桥本氏甲状腺炎患者以及正常人 ,利用他们的血清同时检测弓形体 (ＴＯＸ -ＩｇＭ) ,风疹病毒 (ＲＶ -ＩｇＭ)、巨细胞病毒 (ＭＣＶ -ＩｇＭ)、疮疹病毒 (ＨＳＶ -ＩｇＭ) ,发现甲亢、甲减、桥本氏甲状腺炎的ＴＯＲＣＨ系列阳性率明显高于正常组(ｐ <0 0 1) ;而三者之间ＴＯＲＣＨ系列推测阳性率无显著性的差别 (ｐ >0 0 5 )。提示ＴＯＲＣＨ系列病毒不仅是人体不孕症的原因之一 ,而且可能是甲状腺疾病的诱因之一。对象、方法和结果一、对象和检测指标 :(一 )正常对照组 :3…     

趋化因子受体CCR5在病毒性肝炎患者PBMC中的表达

Ｌｏｃａｔｉ等[1] 报道外周血单个核细胞中的细胞因子趋化因子受体 5 (ＣＣＲ5 )的表达与ＨＩＶ的感染有一定的关系 ,且与激活的Ｔｈ1和Ｔｃ1细胞密切相关。本文用流式细胞仪对病毒性肝炎患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ )ＣＣＲ5的表达水平进行了检测 ,部分作了细胞培养前后的检测。籍以了解病毒性肝炎患者体内的ＣＣＲ5的表达状况 ,同时探讨ＣＣＲ5在病毒性肝炎发病机制中的作用。1　材料与方法1 1　研究对象　依据 1995北京传染病学与寄生虫学会制定的诊断标准确诊的乙型肝炎 (ＨＢ )患者 2 0例 ,另选健康者 2 0例以资对照 (ＮＣ )。1 2…     

抗HCVNS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)是一种单链正链ＲＮＡ病毒 ,可通过输血等方式传播 ,引起急、慢性肝炎。目前 ,ＨＣＶ的常规诊断方法主要有抗ＨＣＶ ＩｇＧ ,抗ＨＣＶ ＩｇＭ及ＨＣＶ ＲＮＡ的ＲＴ ＰＣＲ检测。对ＨＣＶ抗原的检测文献报道较少。我们利用基因工程表达的ＨＣＶＮＳ3蛋白作为免疫原 ,研制其单克隆抗体(ｍＡｂ) ,试图用于ＨＣＶ抗原诊断的研究。1材料和方法1 1　材料　Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,由南京军区实验动物中心提供。Ｓｐ2 / 0小鼠骨髓瘤细胞 ,从解放军 30 2医院引进 ,液氮保存。ＨＣＶＮＳ3蛋白及ＣＰ9,ＣＰ10抗原 ,由南京军区军事医学…     

丙型肝炎病毒核心区蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

已有越来越多的证据表明肝细胞和外周血淋巴细胞凋亡在丙型肝炎的发生和慢性化过程中起着重要作用。ＨＣＶ核心区 (ＨＣＶ Ｃ)具有较强的免疫调节功能 ,但ＨＣＶ Ｃ蛋白究竟是促进细胞凋亡还是抑制细胞凋亡目前还有争论。目前尚未见有关ＴＲＡＩＬ(ＴＮＦｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ)所介导细胞凋亡在丙型肝炎致病过程中所起作用的研究报道。本实验主要研究ＨＣＶ Ｃ蛋白对ＨｅｐＧ2细胞凋亡的影响。通过基因重组技术构建包括ＨＣＶ Ｃ的重组真核表达质粒 ,将重组真核表达质粒经脂质体介导稳定转染肝癌细…