狼疮性肾炎患者可溶性内皮细胞蛋白C受体水平变化及意义

研究对象为46例单纯SLE患者（SLE组）、52例并发狼疮性肾炎（LN）的SLE患者（LN组）及28例健康献血员（正常对照组），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和反向聚合酶链反应（RT—PCR）技术对其血浆可溶性内皮细胞蛋白C受体（sEPCR）水平及外周血循环系统sEPCR mRNA表达进行检测。结果LN组和SLE组血浆sEPCR水平及sEPCR mRNA表达均明显高于正常对照组（P〈0．01、0．05），且LN组显著高于SLE组（P〈0．01、0．05）。认为sEPCR在SLE及LN发病中可能起重要作用，可作为LN早期诊断标志物；以血管内皮细胞蛋白C受体（EPCR）为靶位可能成为治疗SLE的新方法。     

内皮细胞蛋白C受体在狼疮性肾炎患者血浆中的表达及意义

目的探讨内皮细胞蛋白C受体（EPCR）表达在狼疮性肾炎（LN）患者发生、发展中的作用。方法采用ELISA和RT-PCR技术分别对38例LN患者（LN组）和20例健康献血者（对照组）血浆可溶性EPCR（sEPCR）水平及外周循环sEPCRmRNA表达进行检测。结果LN组外周血sEPCR蛋白及sEPCRmRNA表达水平均显著高于对照组,且并感染者显著高于无感染者。结论sEPCR不仅在LN发病中起重要作用,且与其并发严重感染密切相关;循环系统sEPCR水平升高不仅是早期发现LN的标志物之一,而且持续增高也预示并发严重感染的可能。     

活化蛋白C治疗重症急性胰腺炎机制的实验研究

目的观察重症急性胰腺炎（SAP）大鼠给子活化蛋白C（APC）后胰腺组织中血栓调节素（TM）和内皮细胞蛋白C受体（EPCR）的表达，并同时评估胰腺损伤的严重程度。方法SD大鼠随机分为SAP组（胆胰管逆行注射5％牛黄胆酸钠诱导sAP）、高剂量治疗组（诱导SAP时静脉注射50〉g／kgAPC）和低剂量治疗组（10〉g／kgAPC）以及正常对照组。于动物造模后16h取材，行胰腺组织损伤评分，胰腺湿／干重系数、血淀粉酶测定评估胰腺损伤严重度，并测定胰腺组织基质金属蛋白酶9（MMP-9），TM和EPCR蛋白及mRNA表达水平。结果胰腺损伤严重度指标在APC两种剂量治疗组均较SAP组明显减轻（P〈0．01或P〈0．05）。高剂量治疗组的MMP-9表达较SAP组明显下调（P〈0，01），EPCR和TM表达较SAP组和正常对照组上调（P〈0，01）。同时发现两种剂量APC治疗组的TM蛋白及mRNA表达呈量效关系（P〈0．01）。结论APC可能通过降低MMP-9表达，减少EPCR脱落及弱化炎症介质对TM和EPCR表达的抑制作用，而提高组织TM和EPCR的表达，能有效强化蛋白C途径在SAP中的作用，降低胰腺组织的损伤程度，因此有可能成为临床治疗疾病的新手段。     

低分子肝素对脓毒症大鼠可溶性血栓调节蛋白、可溶性内皮细胞蛋白C受体及可溶性E-选择素的影响

目的探讨低分子肝素对脓毒症大鼠肺血管内皮细胞功能的影响。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型。清洁级雄性Wistar大鼠104只被随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症模型组和低分子肝素治疗组,每组8只,其中后三组按术后处死时间分为12、24、48、72 h共4个亚组。各组分别在相应时间点处死大鼠,经腹主动脉取血进行常规检测,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定可溶性血栓调节蛋白(s TM)、可溶性内皮细胞蛋白C受体(s EPCR)浓度以及炎症反应可溶性E-选择素(s E-selectin)的含量。结果正常对照组和假手术组s TM、s EPCR和s E-selectin的表达水平均无显著差异(P均0.05)。脓毒症模型组伤后12 h开始在各个时间点s TM、s EPCR和s E-selectin的表达均有不同程度增高(P均0.05),并持续至伤后72 h;与模型组比较,低分子肝素治疗组于CLP后12 h开始,至24、48 h,s TM、s EPCR和s E-selectin的表达均明显降低,并持续至72 h(P均0.05)。结论低分子肝素能通过对脓毒症凝血-炎症网络的调节,降低脓毒症大鼠s TM的表达水平,并降低大鼠体内s E-selectin的水平,从而减轻肺组织炎症损害,在一定程度上缓解脓毒症的进程。     

络风宁1号方对心肌梗死大鼠血栓调节蛋白-活化蛋白C-内皮细胞蛋白C受体系统的调节作用

目的探讨络风宁1号方对心肌梗死大鼠血栓调节素-活化蛋白C-内皮细胞蛋白C受体系统的调节作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组(7只)、模型组(8只)、络风宁1号方组(7只)、联合用药组(8只)、卡托普利组(8只),心肌梗死造模后络风宁1号组及联合用药组予含生药量4.81 g/(kg·d)的络风宁1号方汤剂,卡托普利组及联合用药组予卡托普利片7.5 mg/(kg·d),假手术组及模型组予相同体积蒸馏水,2/d,连续4周。4周后测定各组大鼠心肌梗死边缘组织血栓调节蛋白(TM)、活化蛋白C(APC)、内皮细胞蛋白C受体(EPCR)基因及蛋白的表达。结果模型组大鼠EPCR.TM的mRNA、sEPCR、sTM含量较假手.术组明显升高(P0.05),EPCR、TM的蛋白表达及APC含量较假手术组下降(P0.05);络风宁1号组、联合用药组EPCR、TM的mRNA以及含量较模型组降低,差异有统计计学意义(P0.05),EPCR蛋白表达较模型组增加,差异有统计学意义(P0.05);络风宁1号组、联合用药组血清APC含量较模型组增加(P0.05)。结论络风宁1号方能够减轻膜结合型EPCR、TM的损伤,抑制了TM、EPCR的mRNA代偿性增加,使sEPCR.sTM含量下降,APC含量增加。     

系统性红斑狼疮可溶性内皮细胞蛋白C受体的研究

系统性红斑狼疮(SEE)是一种原因未明的自身免疫性疾病。其病理标志是反复发作的广泛的血管损害。SLE的血管损害分为两大类：炎症性和非炎症性(即血栓性)，在临床上表现为大小血管血栓形成，局部缺血坏死及血管炎，许多患者同时具有这两种血管损害，其形成的确切机制尚不明确。新近发现的血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)在体内抗凝和炎症反应方面起着重要作用。国外文献初步报道可溶性EPCR(sEPCR)在SLE患者血浆中呈高水平表达，但其在SLE中的作用及意义尚未明确，为此我们检测了55例SLE患者血浆sEPCR水平，并进一步分析其临床意义。     

EPCR与肺癌等恶性肿瘤相关研究进展

内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)是蛋白C系统成员之一,除止凝血外还参与了炎症与肿瘤等诸多病理过程,是当前医学研究领域热点之一.近年来发现EPCR可在肺癌、卵巢癌、乳腺癌、黑色素瘤、结肠癌以及白血病细胞高表达,是恶性肿瘤的重要生物学特征.然而,EPCR在肺癌等恶性肿瘤发病中的作用机理尚未完全明确,现将近年来EPCR与肺癌等恶性肿瘤的相关研究进展综述如下.     

The specific gene expression in endothelial cell protein C receptors with cerebral infarction in chinese kazakh population of Xinjiang

目的 了解哈萨克族脑梗死患者内皮细胞蛋白C受体(EPCR) A6936G基因型及等位基因的分布特征,探讨EPCR A6936G基因多态性与哈萨克族患者脑梗死之间的相关性.方法 运用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性技术检测80例哈萨克族脑梗死患者及100例健康体检者的EPCR A6936G基因多态性分布情况.结果 80例脑梗死患者有3种基因型:A/A基因型(254 bp)、A/G基因型(254bp、290 bp)和G/G基因型(290 bP),而100例健康体检者只有2种基因型,没有发现G/G型,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EPCR A6936G基因变异可能与脑梗死的发生发展具有一定的相关性.     

不同降压药物干预对自发性高血压大鼠主动脉瞬时受体电位通道C亚族表达的影响

目的:研究雷米普利、缬沙坦和氨氯地平对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉(内膜及平滑肌)的瞬时受体电位通道C亚族3亚型及6亚型(TRPC3、TRPC6)表达的影响.方法:24只SHR随机分成4个组(η=6),1个SHR对照组,雷米普利组、缬沙坦组和氨氯地平组,采用灌胃法给药4周,另用6只Wistar鼠(WKY)作正常WKY组,观察给药治疗4周前后血压变化,实验结束时取主动脉组织进行TRPC3和TRPC6的检测,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测信使核糖核酸(mRNA)的表达,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测蛋白的表达.结果:SHR对照组与正常WKY组治疗前比较,血压明显增高(P<0.05),SHR对照组与正常WKY组治疗后比TR-PC3、TRPC6的mRNA和蛋白表达显著增加(P均<0.05),差异均有统计学意义.药物治疗4周后,雷米普利组、缬沙坦组、氨氯地平组与治疗前比血压均有效地降低(P均<0.05),TRPC3的mRNA和蛋白表达均减少(P均<0:05),差异均有统计学意义.TRPC6的mRNA和蛋白表达改变不明显,雷米普利组、缬沙坦组、氨氯地平组间TRPC3、TRPC6的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义.结论:SHR大鼠主动脉TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达明显增高,给予雷米普利、缬沙坦和氨氯地平4周后血压下降,同时TRPC3mRNA和蛋白表达降低,提示TRPC3可能参与了SHR大鼠血压调控.     

HSP70在急性白血病外周血细胞中的表达及临床意义

应用RT-PCR半定量分析法,测定热休克蛋白70(HSP70)mRNA在急性白血病(AL)外周血细胞(AL组)中的表达。结果AL组初治和复发者HSP70 mRNA表达水平均显著高于缓解者和对照组(P<0.001),复发者表达水平显著高于初治者(P<0.05)。认为HSP70 mRNA在AL细胞中表达较正常人明显增高,可能是AML预后较差的一种标志。     

GPR14在大鼠心肌纤维化中的表达及作用

目的 探讨GPR14在大鼠心肌纤维化(MF)中的表达及作用.方法 注射盐酸异丙肾上腺素(lso) 15 mg/kg复制大鼠MF模型.利用HE染色、Masson三色染色观察大鼠的心肌病变情况,免疫组化染色及RT-PCR分析GPR14在大鼠心肌中mRNA和蛋白表达水平.结果 与正常对照组比较,注射Iso后12 h,GPR14 mRNA表达明显增加(P＜0.01);1w后GPR14 mRNA表达有所回落,3 w后仍未降至正常(P＜0.05).结论 GPR14的基因和蛋白表达在缺血性坏死心肌中明显增加,提示GPR14的表达与纤维化程度有关,可能参与了大鼠MF的过程.     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激通路相关分子葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的 探讨AT1受体自身抗体(AT1-AA)对DN大鼠肾脏内质网应激(ERS)通路相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响. 方法 制备DN大鼠模型,ELISA检测血清AT1-AA,根据ELISA结果随机选择AT1-AA阳性和阴性DN大鼠纳入DN组(n=12),同时设立正常对照组(NC,n=6).电镜观察肾脏超微结构变化;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;RT-PCR测定大鼠肾组织GRP78和CHOP mRNA水平;Western blot分析肾组织中GRP78和CHOP蛋白的表达量. 结果 DN组肾脏细胞凋亡率较NC组升高,其中,AT1-AA阳性大鼠凋亡率高于AT1-AA阴性大鼠[(20.05±1.71)％vs(13.24±4.93)％](P＜0.01).与NC组相比,DN组肾组织GRP78、CHOP蛋白和mRNA水平均上调;进一步比较发现,AT1-AA阳性DN大鼠GRP78,CHOP蛋白及mRNA水平升高较AT1-AA阴性DN大鼠更明显. 结论 AT1-AA可能通过诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并经ERS相关的CHOP凋亡信号通路而促进肾脏细胞凋亡,加重肾脏损害.     

C反应蛋白增加人内皮细胞糖基化终产物受体表达

目的 探讨C反应蛋白(CRP)及其单体(mCRP)对人脐静脉内皮细胞晚期糖基化终产物受体(RAGE)蛋白表达及mRNA的影响.方法 将人脐静脉内皮细胞用不同浓度(5、25、50、100 μg/mL) 的CRP孵育24 h及同一浓度(50 μg/mL)CRP不同时间孵育0、6、12 、24 、48 h,采用流式细胞仪及RT-PCR方法检测RAGE蛋白及mRNA的表达水平.分析50 μg/mL CRP和mCRP孵育0 、6、24 h后对RAGE 蛋白表达的影响.结果 (1) 与对照组比较,5 μg/mL的CRP培养内皮细胞24 h显著增高RAGE蛋白的表达(175.2%±8.1%,P＜0.05),50 μg/mL时达到顶峰(527.3%±5.8%,P＜0.01);50 μg/mL CRP孵育不同时间,RAGE蛋白的表达从6h明显增高(179.8% ± 29.1%,P＜0.05 ).(2) 与对照组比较,5 μg/mL CRP即可升高RAGE的mRNA表达(135.4%±11.1%,P＜0.05),并在50 μg/mL时达到峰值(186.6%±29.0%,P＜0.05);6 h时可以检测到RAGE mRNA的升高(134.3%±22.8%,P＜0.05),在12 h为最高(214.2%±33.1%,P＜0.05).(3)mCRP也会升高RAGE蛋白表达,与CRP组没有差别(P＞0.05). 结论 C反应蛋白以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞RAGE蛋白及mRNA的表达.CRP与其单体(mCRP)作用相似.     

乳黄制剂对肝硬化模型大鼠肝组织脂多糖结合蛋白mRNA、CD14 mRNA及Toll样受体4 mRNA的影响

目的:研究乳黄制剂对肝硬化大鼠肝组织LBP(脂多糖结合蛋白)mRNA、CD14 mRNA、TLR4(Toll样受体-4)mRNA的影响.方法:SPF级雄性Wister大鼠88只随机分为6组:正常组、模型组、预防组、预防对照组、模型治疗组、模型治疗对照组.采用CCl4复合因素法制造肝硬化模型.用乳黄制剂进行预防和治疗,并与乳果糖对照药进行比较,分别检测大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA的表达水平.结果:治疗组大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达水平明显低于模型组(P＜0.05),预防组大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与正常组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:乳黄制剂能有效抑制内毒素调节蛋白及其相关受体的表达,从而减少内毒素血症的发生.     

LOX-1在糖尿病大鼠大血管病变中的表达及普罗布考的干预作用

目的探讨糖尿病大鼠大血管病变低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）的表达及普罗布考的干预机制。方法 50只健康SD大鼠随机分为4组,A组为对照组,给予普通饮食。B、C、D三组（糖尿病组）给予高糖高脂饮食。B组在造模前8周和造模后8周普罗布考全程干预,C组在造模后加普罗布考干预8周。采用免疫荧光法测定大鼠主动脉原位活性氧（ROS）,用RT-PCR和Western blot定量测定LOX-1 mRNA和蛋白水平。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠主动脉原位ROS水平及LOX-1 mRNA、蛋白水平明显增高（P均〈0.05）;普罗布考干预组糖尿病大鼠主动脉原位ROS水平及LOX-1 mRNA、蛋白水平较未干预组明显降低（P均〈0.05）。结论 LOX-1在2型糖尿病大鼠大血管病变早期表达增高,其增高与血管原位ROS水平增高有关;普罗布考可以降低2型糖尿病血管LOX-1的表达水平。     

去卵巢对大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探索去卵巢对大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将20只3月龄SD雌性大鼠随机分为去势组和正常对照组,每组10只。去势组大鼠行双侧卵巢切除术,正常对照组大鼠不作任何处理。去除卵巢12 w后,取血检测血清雌二醇、骨源性碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶水平;取左股骨进行骨密度检测;取右股骨骨髓检测低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)和β-catenin mRNA和蛋白表达。结果去势组大鼠血清雌二醇水平较正常对照组显著下降(P<0.01),骨源性碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶水平较正常对照组显著增高(P<0.01);去势组大鼠骨密度比正常对照组显著降低(P<0.01);去势组的β-cantenin mRNA和蛋白表达比正常对照组显著增高(P<0.05),尽管去势组的LRP5 mRNA和蛋白表达比正常对照组增高,但差异没有统计学意义。结论大鼠去卵巢12 w后Wnt/β-catenin信号通路被激活。     

C反应蛋白增加人内皮细胞糖基化终产物受体表达

目的探讨C反应蛋白(CRP)及其单体(mCRP)对人脐静脉内皮细胞晚期糖基化终产物受体(RAGE)蛋白表达及mRNA的影响。方法将人脐静脉内皮细胞用不同浓度(5、25、50、100μg/mL)的CRP孵育24h及同一浓度(50μg/mL)CRP不同时间孵育0、6、12、24、48h,采用流式细胞仪及RT-PCR方法检测RAGE蛋白及mRNA的表达水平。分析50μg/mLCRP和mCRP孵育0、6、24h后对RAGE蛋白表达的影响。结果(1)与对照组比较,5μg/mL的CRP培养内皮细胞24h显著增高RAGE蛋白的表达(175.2%±8.1%,P<0.05),50μg/mL时达到顶峰(527.3%±5.8%,P<0.01);50μg/mLCRP孵育不同时间,RAGE蛋白的表达从6h明显增高(179.8%±29.1%,P<0.05)。(2)与对照组比较,5μg/mLCRP即可升高RAGE的mRNA表达(135.4%±11.1%,P<0.05),并在50μg/mL时达到峰值(186.6%±29.0%,P<0.05);6h时可以检测到RAGE mRNA的升高(134.3%±22.8%,P<0.05),在12h为最高(214.2%±33.1%,P<0.05)。(3)mCRP也会升高RAGE蛋白表达,与CRP组没有差别(P>0.05)。结论C反应蛋白以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞RAGE蛋白及mRNA的表达。CRP与其单体(mCRP)作用相似。     

乌司他丁对内毒素血症大鼠心肌TOLL样受体4表达的影响

目的 观察乌司他丁对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导心肌TOLL样受体4(TLR4)受体表达的影响及与炎症反应的关系.方法 选取8周龄的雄性SD大鼠32只,分成四组:正常对照组,内毒素血症组(LPS组),LPS+乌司他丁组,LPS+地塞米松组.除正常对照组以外,其余三组给予脂多糖8 mg/kg大鼠阴茎静脉注射,LPS+乌司他丁组与LPS+地塞米松组分别同时给予乌司他丁2.5万/kg、地塞米松5 mg/kg;正常对照组给予同量的生理盐水,3h后断头取血并取心肌液氮保存;ELISA法测血浆TNF-α的水平;放免法测定心肌组织中AngⅡ水平;RT-PCR法测定心肌组织TLR4 mRNA表达;免疫组化法和蛋白免疫印迹法测心肌组织TLR4含量.结果 (1)LPS组TNF-α、CRP、IL-6水平和心肌AngⅡ水平显著增高;与LPS组相比,乌司他丁组TNF-α 、CRP、IL-6和心肌AngⅡ显著降低(2)LPS可明显增加心肌中TLR 4 mRNA及蛋白表达,乌司他丁明显抑制心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.结论 乌司他丁能抑制LPS诱导大鼠心肌的炎症反应.乌司他丁能降低LPS诱导大鼠的心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.乌司他丁可能通过降低TLR4水平抑制LPS诱导的炎症反应.     

肝纤维化组织中抗衰老蛋白及抗增殖蛋白的表达及其作用机制

目的探讨肝纤维化大鼠肝组织中抗衰老标志蛋白(RGN)及抗增殖蛋白(PHB)的表达及其作用机制。方法 48只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(12只)、造模组(36只)。使用猪血清诱导大鼠肝纤维化,造模成功后随机分为肝纤维化组(16只)、CGII干预组(16只)。CGII干预组给予60 mg/ml CGII肌肉注射,肝纤维化组和正常对照组给予等量的等渗盐水肌肉注射,1次/d,连续6 w。取大鼠肝组织行HE和Masson染色;RT-PCR检测肝组织中RGN和PHB mRNA表达,免疫组化检测蛋白表达。结果 HE和Masson染色显示,肝纤维化组大鼠纤维化程度明显高于正常对照组;CGII干预组大鼠肝组织胶原变细、减少,纤维化程度较肝纤维化组明显改善。纤维化组大鼠肝组织中RGN和PHB蛋白表达量明显少于正常对照组(P0.01);CGII干预组RGN和PHB蛋白表达量明显高于纤维化组(P0.01)。肝纤维化组RGN和PHB mRNA表达水平明显低于正常对照组(P0.05);CGII干预组RGN和PHB mRNA表达水平明显高于肝纤维化组(P0.01)。结论 RGN和PHB在大鼠肝纤维化组织中表达降低,与肝纤维化存在相关性。     

失血性休克时大鼠心脏G蛋白含量的变化及其意义

目的 :研究失血性休克时大鼠心脏 G蛋白含量及功能的变化。方法 :大鼠失血性休克 ,记录平均动脉压 ,呼吸频率及失血量 ,各时相点血气分析 ;免疫印迹法测定大鼠心脏 Giα和 Gsα含量。结果 :休克 6 h,心脏 Gsα含量 （第一条带19772± 1186像素 ,第二条带 2 0 86 5± 80 4像素 ）较正常对照组 （第一条带 2 35 83± 714像素 ,第二条带 2 4 777± 6 90像素 ）下降 （P<0 .0 5 ,P<0 .0 1） ;Giα含量 （2 776 7± 80 1像素 ）较正常对照组 （1735 3± 799像素 ）升高 （P<0 .0 1）。结论 :心脏 Gsα含量下降和 Giα含量升高可能是导致细胞膜 AC信号转导功能障碍和心功能抑制的重要原因