血管紧张素Ⅱ2型受体基因对血管平滑肌细胞的促凋亡作用

目的探索血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型(AT2)受体基因对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响.方法用同源重组技术构建携带AT2受体基因的复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV-AT2R),将VSMC分为对照组及转染组(体外转染培养的大鼠VSMC),用流式细胞术检测其细胞转染率,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测AT2受体、bcl-2和baxmRNA表达,流式细胞术、原位末端标记法检测VSMC凋亡.结果构建的AdCMV-AT2受体体外转染培养的VSMC的表达率为89.51%,VSMC表达AT2受体后,其凋亡发生率较对照组增加4.2倍(P＜0.01),bax表达增加76.3%,bcl-2则无明显变化,原位末端标记法检测结果表明转染组出现大量凋亡细胞.结论转染AT2受体基因可显著增加VSMC的凋亡,这对血管再狭窄的防治是有益的.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的作用及其机理。方法:本实验采用培养大鼠胸主动脉VSMC、用细胞计数和流式细胞仪(FCM)进行VSMC增殖和凋亡的检测。结果:(1)不同浓度AngⅡ对VSMC增殖均有显著促进作用、呈剂量依赖关系至10μmol/L时趋于饱和,AngⅡ能促进VSMC从G_0/G_1期进人S期、进行DNA合成,AngⅡ的促增殖作用为一快相作用。(2)Losartan和CGP42112A均能不同程度地取消AngⅡ对VSMC的促增殖作用。(3)100μmol/L AngⅡ能很好地诱导VSMC凋亡的发生、且随时间延长而增加,CGP42112A能阻止凋亡的发生而Losartan则不能。结论:本实验显示AngⅡ能通过ATR-1和ATR-2共同促进VSMC进入合成期、进行增殖反应,同时证实AngⅡ能诱导VSMC发生凋亡,可能主要由ATR-2介导。     

血管紧张素Ⅱ促高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖机制的研究

本工作以培养的正常血压WKY大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)为对照,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养的SHR ASMC促增殖的机制.结果表明:AngⅡ(10~(-9)～10~(-6)mol/L)对SHR和WKY大鼠的ASMC均有促增殖作用且随剂量增加其作用加强,但对SHR ASMC的促增殖效应明显高于WKY大鼠.应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(A-bFGF)和反义bFGF mR-NA均可明显抑制AngⅡ促SHR ASMC的增殖效应.此外,基础状态下及AngⅡ(10~(-6)mol/L)刺激8h后,SHR ASMC的bFGF基因表达均明显高于WKY大鼠.提示,AngⅡ的促细胞增殖作用部分是通过先诱发bFGF的产生而引起.     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的调节作用

肾素－血管紧张素系统在调节血压、维持水电解质平衡等方面起重要作用，近来研究表明血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌细胞、成纤维细胞及血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）具有生长激素样作用，可能参与了阻塞性血管疾病如冠心病、血管成形术后再狭窄的发生。随着ＡｎｇⅡ受体分...     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及可能的机制.方法 原代培养大鼠血管平滑肌细胞,取第4～8代细胞进行实验.用终浓度为1 μmol/L血管紧张素Ⅱ诱导6 h,随机分成对照组(含10% FBS的DMEM培养基)、1 μmol/L血管紧张素Ⅱ组、不同浓度罗格列酮(20、30、40及50μmol/L) 干预组,30 μmol/L罗格列酮干预不同时间组 (6、12、18及24 h).分别采用MTT和流式细胞术观察血管平滑肌细胞增殖和增殖周期的变化;逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定不同干预条件下血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达水平.结果 血管紧张素Ⅱ组吸光值明显高于对照组(P<0.01),20、30、40及50μmol/L罗格列酮干预12 h及30μmol/L 罗格列酮干预6、12、18及24 h后,吸光值明显降低(P<0.05或P<0.01);血管紧张素Ⅱ组增殖指数和S期细胞分数明显高于对照组(P<0.01).随着罗格列酮干预浓度的增加或干预时间的延长,增殖指数、S期细胞分数及处于S期分数均明显下降(P<0.05或P<0.01).与血管紧张素Ⅱ组相比,不同浓度(20、30及50μmol/L)罗格列酮干预12 h及同一浓度(30μmol/L)干预不同时间(6、12及24 h)显著升高血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结论 罗格列酮至少部分通过上调血管紧张素Ⅱ2型受体表达,阻止血管平滑肌细胞从G0/G1期向S期、G2/M期转化,从而抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖、迁移,发挥血管保护作用.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球系膜细胞MMP-2和TIMP-2 mRNA表达的影响

正常大鼠肾小球系膜细胞的实验研究显示，血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）对其质金属蛋白酶-2（MMP-2）的mRNA表达起降调节作用，对MMP-2基质金属蛋白酶组织抑制物-2（TIMP-2）的mRNA表达无明显影响。结果是，ATⅡ对MMP-2mRNA／TIMP-2mRNA二者表达的比值，起到降调节作用。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞生物学行为的多重影响

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移和凋亡等生物学行为多重影响的机制。方法　用腺病毒介导基因转染方法使VSMC表达AngⅡ 2型受体 (AT2R)并检测不同时相点AT2R表达率 ;对比AT2R表达前后AngⅡ 1型受体 (AT1R)表达量的变化以及对AngⅡ刺激的反应 ;通过 5 溴尿苷 (BrdU)参入法、改良Boyden′s趋化小室及流式细胞仪分别检测VSMC增殖、迁移及凋亡等生物学行为所受的影响。结果　VSMC的AT2R转染最高表达率在转染后 4 8h(89 5 1% ) ,AT1R最高表达率为 77 94 %。AT2R峰值表达时 ,转染组VSMC的BrdU参入量降低 5 1 6 %(P <0 0 1) ,细胞跨膜迁移数减少 6 2 2 % (P <0 0 5 ) ,细胞凋亡率由 7 6 %± 1 6 %显著地增加至32 1%± 5 5 % (P <0 0 1)。而未转染组以AT1R表达为主 ,AngⅡ作用明显具有促进VSMC增殖、迁移和抑制其凋亡的作用。结论　VSMC转染表达AT2R后 ,可显著地抑制AngⅡ通过AT1R所介导的促进VSMC增殖、迁移以及减少其凋亡的生物学作用。     

肾上腺髓质素抑制血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增生作用

目的　观察肾上腺髓质素 (adrenomedullinADM)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激血管平滑肌细胞增生作用的影响。方法　测定ADM、AngⅡ对细胞3H leu掺入及 (MAPK)和 (PKC)活性的作用。结果　AngⅡ促进细胞3H leu掺入及MAPK和PKC活性增加 ;ADM对细胞3H leu掺入及MAPK、PKC活性均无明显影响 ,但呈浓度依赖方式抑制AngⅡ促细胞3H leu掺入及MAPK活性增加。结论　ADM通过抑制AngⅡ对MAPK的激活 ,拮抗其促血管平滑肌细胞增生作用。     

腺病毒介导血管平滑肌细胞转染表达血管紧张素Ⅱ2型受体的研究

目的：体外培养大鼠血平滑肌细胞（VSMC）并以腺病毒介导转染表达血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）。方法：取大鼠主动脉血管,以常规组织块贴壁法培养VSMC;用同源重组方法构建带AT2R基因的复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R),并加以鉴定,扩增,以制取高滴度AdCMV-AT2R转染液,体外转染,VSMC,;用RT－PCR方法检测AT2RmRNA表达,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测AT2R蛋白表达,流式细胞仪检测AT2R表达率,同时检测AT1R的表达变化。结果：构建的AdCMV-AT2R体外转染培养VSMC表达率为89．51％,以免疫组化、免疫印迹和RT－PCR检测AT2R表明,转染后AT2R表达明显增强,并随表达时间延长而增加,48小时达峰值,AT2R转染表达不影响AT1R表达。结论：腺病毒载体可较高效率介导AT2R在体外培养的VSMC转染表达,AT1R表达不受其影响,转表达AT2R的SMC可作研究AngⅡ对其增殖、迁移以及凋亡等生物学行为影响的良好细胞模型。     

血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的影响

目的:探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ在诱导巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)中的作用及机制.方法:以5 ng/ml佛波醇诱导人类单核细胞株细胞成巨噬细胞后,倒置相差显微镜观察诱导情况;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法监测不同Ang Ⅱ刺激下的细胞活性;逆转录聚合酶链式反应及蛋白质印迹检测不同时间及不同浓度的Ang Ⅱ对EMMPRIN基因及蛋白表达的影响;进一步用Ang Ⅰ受体拮抗剂(10 μM)及Ang Ⅱ受体拮抗剂(10μM)探讨信号传导机制,检测Ang Ⅱ对EMMPRIN的诱导情况.结果:在5 ng/ml佛波醇诱导下可很好的建立巨噬细胞模型.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法结果示Ang Ⅱ在0.01～10μM浓度下,细胞的活性不受影响(P>0.05),50 μM Ang Ⅱ刺激下细胞活性改变(P<0.05),差异有统计学意义.不同浓度Ang Ⅱ刺激下巨噬细胞内EMMPRIN基因及蛋白的表达成时间依赖性,6 h后开始增高(P<0.05),12 h后达峰值(P<0.01),24 h后开始下降(P<0.05),差异有统计学意义;Ang Ⅱ对EMMPRIN的刺激作用亦呈剂量依赖型,随着浓度(0 μM、0.01μM、0.1μM和1μM)的增加,EMMPRIN基因及蛋白的表达亦明显增加(P<0.05),差异有统计学意义;进一步的信号通路研究实验结果示Ang Ⅰ受体拮抗剂可抑制AngⅡ的诱导作用(P<0.05),AngⅡ受体拈抗剂则无影响.结论:在佛波醇诱导的人类单核细胞株细胞中,Ang Ⅱ通过Ang Ⅰ受体上调巨噬细胞中EMMPRIN的表达,氯沙坦可抑制其上调作用.     

血管紧张素Ⅱ与基质金属蛋白酶关系研究进展

目前研究表明,在急性冠脉综合征发生过程中基质金属蛋白酶家族与斑块性质变化有密切关系。血管紧张素Ⅱ作为肾素-血管紧张素系统最重要效应因子也在动脉粥样硬化的发生发展病理过程起关键作用。近年来有较多研究探讨血管紧张素Ⅱ与基质金属蛋白酶之间的关系及其内在机制,现就此进行综述。     

骨桥蛋白参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用.方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs.以免疫印迹(Western blot)法检测OPN表达.运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用.结果 (1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P＜0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P＜0.05),而其2型(AT2)受体拮抗剂PD123319对OPN的表达没有影响.(3)反义OPN可以明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移(每个视野平均迁移细胞数目26.34±5.47 vs 50.23±6.12,P＜0.05),而OPN正义、错配义组无此变化.结论 (1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达.(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移.     

腺病毒介导血管平滑肌细胞转染表达血管紧张素Ⅱ2型受体的研究

目的体外培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）并以腺病毒介导转染表达血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT     

大鼠血管平滑肌细胞迁移能力变化与血管紧张素Ⅱ的关系

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ）及其受体拮抗剂对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）迁移能力影响,以探讨AngⅡ介导高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄斑块形成的生物学机制。方法 采用改良Boyden小室,对不同浓度AngⅡ及其AT1R、AT2R拮抗剂作用下VSMC跨膜 迁移细胞数进行评价。结果 AngⅡ在一定的浓度范围内（10^-11～10^-7mol/L）可以剂量依赖性地刺激体外培养的大鼠VSMC发生迁移。迁移的VSMC数在AngⅡ浓度为10^-7mol/L时达到峰值,更高浓度的AngⅡ(10^-6mol/L）干预VSMC后,VSMC迁移数量的增加幅度反而比较低浓度的AngⅡ作用时减小（与10^-7mol/L AngⅡ组比较,P＜0．01）。AT1R拮抗剂CV－11974剂量依赖性抑制AngⅡ诱导VSMC跨膜迁移,AT2R拮抗剂PD123319对此无影响。结论 AngⅡ在AT1R介导下发挥其影响VSMC迁移行为的生物学效应,较低浓度AngⅡ促进VSMC迁移,高浓度AngⅡ上述作用明显减弱。     

血管紧张素Ⅰ抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法采用组织贴块法培养VSMCs,取生长良好的第3～5代细胞用于实验。随机分为对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7) (A-779)组,通过3H胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法测定VSMCs的DNA合成,用结晶染色的方法检测细胞数目,观察VSMCs的增殖情况。结果①与对照组比,AngⅡ(100nmol/L)孵育细胞24h后可明显诱导VSMCs3H-TdR掺入量增加;Ang-(1-7)(1000nmol/L)可减少3H-TdR掺入量。②与AngⅡ组比较,Ang-(1-7)(10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的VSMCs3H-TdR掺入量。加入Ang-(1-7)特异性受体阻断剂A-779后,Ang-(1-7)此作用消失。③结晶染色结果显示,AngⅡ可诱导VSMCs数目明显增加(P<0.05)。Ang-(1-7)可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增加,亦呈浓度依赖性(P<0.05)。结论Ang-(1-7)能抑制基础和AngⅡ诱导的VSMCs增殖,通过其特异性受体发挥作用。     

骨桥蛋白参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用。方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs。以免疫印迹(Western blot)法检测OPN表达。运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用。结果(1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P<0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P<0.05),而其2型(AT2)受体拮抗剂PD123319对OPN的表达没有影响。(3)反义OPN可以明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移(每个视野平均迁移细胞数目26.34±5.47 vs 50.23±6.12,P<0.05),而OPN正义、错配义组无此变化。结论(1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达。(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移。     

血管紧张素Ⅱ1型受体在血管球囊损伤后平滑肌细胞凋亡中的作用

目的探讨血管球囊损伤后平滑肌细胞(SMC)凋亡的机制。方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学技术检测球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达的变化。结果球囊损伤后第3天,血管中层AT1R表达比假手术组显著增多(P<0.05),以后无显著改变;损伤后第7天内膜层AT1R为中层的近2倍;至损伤后第28天,内膜层AT1R表达最高;球囊损伤后第3天,血管中层出现凋亡的SMC;损伤后第7天,内膜和中层SMC凋亡率最高,凋亡的SMC主要分布在内膜层;以后逐渐降低,至损伤后第28天,仅内膜层有少量凋亡的SMC,AT1R拮抗剂Irbesartan显著增加SMC凋亡。结论血管球囊损伤后,AT1R上调,血管紧张素Ⅱ通过与AT1R结合抑制VSMC凋亡。     

血管紧张素Ⅱ对胰岛细胞的作用

肾素-血管紧张素系统(RAS)包括循环RAS和局部RAS,其核心活性物质均为血管紧张素Ⅱ(AngⅡ).已证实胰岛局部存在RAS,并可不依赖于循环RAS独立合成AngⅡ.现在认为,胰岛局部RAS对胰岛细胞的内分泌功能调节起重要作用.AngⅡ和相应胞膜、胞浆内的不同AngⅡ受体结合后,通过改变血管收缩性而改变胰岛供血和局部氧张力,通过蛋白激酶通路等机制,影响胰岛素和生长抑素的分泌.但局部RAS的过度激活会使胰腺局部的活性氧簇牛成增多,导致胰岛细胞功能异常.促进胰岛细胞凋亡进程,参与胰岛局部炎性反应过程和胰腺的纤维化,同时在外周组织中介导胰岛素抵抗的产生,从而间接影响胰岛细胞功能.     

氯沙坦和硝苯地平对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察血管紧张素 (Ang )对培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的作用及 AT1受体拮抗剂氯沙坦和钙通道阻滞剂硝苯地平对增殖的影响。方法 :幼龄 Wistar大鼠 (4周龄 ) 12只 ,分成对照组、Ang 组、氯沙坦加 Ang 组及硝苯地平加 Ang 组 ,采用组织块贴壁法培养胸主动脉平滑肌细胞 ,分别测定 3H-胸腺嘧啶 (3H- Td R)、3H-亮氨酸 (3H- L eu)的掺入量和细胞周期中各期细胞构成比。结果 :Ang (0 .1μmol/ L)作用 2 4h能使 VSMC的 3H- Td R与 3H- L eu的掺入量比对照组 (1%胎牛血清 )增多 ,且 S期和 G2 / M期细胞增多 ,细胞增殖指数增大。与 Ang 组相比 ,Ang 加氯沙坦 (10 μm ol/ L)组和 Ang 加硝苯地平 (10 μmol/ L)组 ,3H-Td R、3H- L eu的掺入量减少 ,S期细胞构成比和细胞增殖指数减少。结论 :Ang 对 VSMC有促增殖作用 ,能被氯沙坦与硝苯地平所拮抗     

血管紧张素Ⅱ诱发自噬对血管平滑肌细胞表型转换的调控作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)自噬的影响以及自噬对细胞表型转换的调控作用。方法原代培养小鼠VSMC,用10~(-6)mol/L AngⅡ作用VSMC不同时间,采用Western blot检测微管相关蛋白轻链-3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表达以观察AngⅡ对VSMC自噬的影响,透射电镜观察对照组及AngⅡ组的自噬小体。用Western blot检测自噬抑制剂3-MA和Baf-A1干预后对AngⅡ诱导自噬及细胞表型转换的影响。使用siRNA抑制自噬相关基因Atg7的表达,qRT-PCR检测转染后Atg7的表达变化,Western blot检测转染siRNA Atg7后对LC3-Ⅱ及细胞表型蛋白标志物的影响。结果 AngⅡ以时间依赖方式促进LC3-Ⅱ表达,自噬抑制剂3-MA抑制AngⅡ促LC3-Ⅱ的表达作用,而Baf-A1则增强AngⅡ促LC3-Ⅱ的表达作用,两种自噬抑制剂均可抑制AngⅡ促VSMC表型转换作用。转染siRNA Atg7后显著抑制AngⅡ促LC3-Ⅱ的表达作用,并可抑制AngⅡ促细胞表型转换作用。结论 AngⅡ促进VSMC从收缩表型转化为合成表型可能是自噬依赖性的,抑制自噬可以抑制AngⅡ诱导的VSMC表型转换。