大鼠大脑中动脉闭塞局灶脑缺血再灌注改良模型的建立

目的 介绍一种简便可靠的插线法，可用于制作SD大鼠大脑中动脉(MCA)闭塞局灶脑缺血再灌注模型。方法 结扎并游离颈外动脉，用2-0丝线悬吊翼腭动脉，用插入端蘸不饱和聚酯的白色鱼线从颈外动脉切口处插入，经颈内动脉，可逆性阻断大鼠一侧大脑中动脉。随后进行神经病学评分、TTC染色、亚甲蓝染色以观察模型的可靠性，将此改良法与经典的Longa法进行对比研究。结果 大鼠MCA阻断2h后进行再灌注，模型成功则出现Horner’s征阳性、神经病学评分≥1分，TTC染色显示梗死范围，亚甲蓝染色提示MCA供血区神经元大量缺失。与经典的Longa法模型对比，改良模型的成功率高、死亡率低。结论 该改良模型简便可靠，稳定性好，是研究MCA局灶脑缺血再灌注较为理想的实验动物模型。     

大脑中动脉闭塞后同侧黑质变化的研究

目的 研究大鼠大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）后同侧黑质的变化。方法 ３５只ＳＤ大鼠，用Ｔａｍｕｒａ法作脑缺血模型，分别对缺血后２周、１个月、３个月、６个月的鼠脑切片用微管相关蛋白－２作免疫组化和甲紫醇染色。用计算机测定黑质长度与面积，用计数器计算神经细胞数。结果 用１００％表示对侧黑质的长度。同侧黑质长度，ＭＣＡＯ２周时为８４％，１个月８１％，３个月７７％，６个月６４％。用１表示对侧黑质的面积，ＭＣＡ     

长期大脑中动脉闭塞后远隔部位MAP—2和GFAP变化的实验研究

目的 探讨长期大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）后丘脑、黑质网状部（ＳＮｒ）ＭＡＰ－２及ＧＦＡＰ的变化。方法 ３５只ＳＤ大鼠分为正常且、伪手术后２周组和１个月组、ＭＣＡＯ后２周组、１个月组、３个月组和６个月组等７组,每组５只。Ｔａｍｕｒａ法制作动物模型。脑切片分别用离ＭＡＰ－２、ＧＦＡＰ抗体,ＡＢＣ法染色。观察丘脑的面积改变,ＳＮｒ的面积和长度和改变;ＳＮｒ神经细胞和胶质细胞数的变化。结果 丘脑面积逐渐缩     

钙调神经磷酸酶的研究新进展

本文对CaN的分子结构、酶学特性、组织分布、信号传导及生物学功能方面的研究进展进行文献复习。     

大鼠心肌细胞钙调磷酸酶Aβ基因的克隆与真核表达

目的 从原代培养的大鼠心肌细胞中扩增钙调磷酸酶( Calcineurin,CaN)Aβ cDNA序列,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CaN,并检测其表达情况,为进一步研究CaN及其在心肌损伤的信号转导途径中的作用奠定基础.方法 用RT-PCR方法从原代培养的大鼠心肌细胞RNA中扩增出CaN A β cDNA序列,测序后将其用限制性内切酶双酶切,然后与真核表达质粒pcDNA3.1(+)进行连接,再转化DH5α,将鉴定为阳性的真核表达质粒转染人胚肾293T细胞,用免疫荧光细胞化学技术检测其表达情况.结果 ①将鉴定为阳性的质粒进行测序后,所测序列结果与GeneBank的CaNAβ基因序列同源性达到91.7%;②真核表达载体pcDNA3.1-CaN转染293T细胞后经免疫荧光细胞化学染色检测到钙调磷酸酶基因在人胚肾293T细胞中表达.结论 正确克隆出了大鼠心肌细胞CaNAβ基因并建立了CaNAβ基因的真核表达栽体pcDNA3.1-CaN.     

大脑中动脉闭塞后丘脑进展性萎缩实验性研究

35只鼠均分为7组，除正常组和伪手术对照组外，其余5组用Tamura法行大脑中动脉闭塞（MCAO），用大鼠脑单克隆抗体微管蛋白-2（MAP-2）分别对MCAO后2周、1、3、6个月的脑切片进行免疫组化染色，用数字计算机测量各组鼠脑切片的丘脑面积。结果，正常组0．99±0．01，伪手术对照2周组1．02±0．02，伪手术对照1个月组0．99±0．01，MCA02周组0．87±0.03，MCAO1个月组0.78±0．03，MCAO3个月组0．71±0．04，MCAO6个月组0．61±0．05，伪手术对照组和MCAO组丘脑萎缩面积差异显著（P＜0．001）。结论：长期MCAO可导致丘脑萎缩。     

钙调神经磷酸酶的纯化及其亚基分离

报道一种从牛脑中纯化钙调神经磷酸产分离其亚基的方法，牛脑匀浆液经ＤＥ－５２纤维素离子交换层析，Ａｆｆｉ－ｇｅｌ－Ｂｌｅ层，６０％饱和（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀，ＧａＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲合层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００凝胶过滤，从１Ｋｇ牛脑中可得到３０ｍｇ电泳纯的钙调神经磷酸酶，回收率为４１％，比活力提高２８５倍，纯的钙调神经磷酸酶经含６Ｍ尿素和８０ｍｍｏｌ‘Ｌ ＬｉＢｒ缓冲液透析，过ＤＥＡＥ－Ｓｅ     

功能训练对脑梗死大鼠钙调神经磷酸酶水平影响的实验研究

目的 探讨功能训练对局灶性脑梗死后大鼠钙凋神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)水平的影响.方法 采用局灶性大脑中动脉闭塞动物模型,运用免疫荧光染色技术,检测功能训练对脑梗死不同时间内CaN-A水平变化情况.结果 功能训练6～72h梗死灶周围区CaN水平渐升高,并在功能训练第3天CaN水平达到高峰,第7天逐渐回落,但仍保持较高水平,均明显高于制动组(P＜0.05).结论 局灶性脑梗死后功能训练通过调节CaN的去磷酸化水平,达到保护缺血神经元损伤的目的,促进运动功能的恢复.     

钙调神经磷酸酶活性与皮层神经元轴突生长的相关性研究

目的研究钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）与皮层神经元轴突生长的相关性。方法原代培养大鼠大脑皮层神经元。细胞分为正常对照组和环孢霉素A（Cyclosporin A,CsA）处理组。CsA处理组是在细胞更换无血清的NB培养基2h后加入10nmol/L CsA刺激。采用倒置相差显微镜和数码影像采集系统观察培养3、7、10d的神经元,并用SPOT软件测量神经元轴突长度。CaN活性采用酶底物显色的方法进行检测。结果10nmol/L CsA刺激后3d和7d的神经元轴突均能较显著地增长（P〈0.05）,而这种作用在10d更为明显（P〈0.01）;而所有时相点神经元CaN的活性均受到显著抑制（P〈0.01）。CsA处理组各时相点CaN活性与皮层神经元轴突的长度均呈显著负相关（r=-0.994,-0.990,-0.998,P〈0.01）。结论CaN活性与皮层神经元轴突的生长呈负相关。     

大鼠大脑中动脉永久性缺血和缺血再灌注模型的比较

目的:比较大鼠大脑中动脉永久性阻塞模型和缺血再灌注模型的差异,寻找一种制作简单,成功率高的脑缺血模型。方法:将150只SD雄性大鼠随机分为:永久性大脑中动脉阻塞60只,线栓阻塞大脑中动脉4h、8h、24h后生理盐水灌注后取脑;大脑中动脉缺血再灌注60只,线栓阻塞大脑中动脉100min后,拔出线栓形成再灌注,分别在再灌注4h、8h、24h后灌注取脑;对照组30只。比较模型制作的成功率、术后存活率、神经功能缺失评分、脑梗死体积及模型稳定性。结果:脑缺血再灌注组模型成功率高于永久性脑缺血组,差异有统计学意义(P<0.05);永久性脑缺血模型组死亡率较脑缺血再灌注模型组死亡率有升高趋势,但无统计学意义;TTC染色:永久性大脑中动脉阻塞梗死灶随着缺血时间的延长逐渐扩大,大脑中动脉缺血再灌注梗死灶随再灌注时间的延长无明显变化;结论:大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型手术方式简单、结果稳定、缺血时间可控,是一种较理想的模拟脑梗死的动物模型。     

地氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的　探讨地氟醚预处理对脑局灶性缺血损伤的影响 .方法　采用大脑中动脉阻闭 (middle cerebral artery oc-clusion,MCAO)模型 ,将 30只雄性 SD大鼠随机分成 3组 :对照组 (C组 ,n=10 ) ,动物不接受任何处理 ;地氟醚组 (Des组 ,n=10 ) ,动物每日接受 1h的地氟醚预处理 (5 7m L· L- 1地氟醚 ,94 0 m L· L- 1 O2 ) ,连续 5 d;吸 O2 组 (O2 组 ,n=10 ) ,动物每日接受 1h的吸 O2 预处理 (94 0 m L· L- 1 O2 ,无地氟醚 ) ,连续 5 d.所有动物均在大脑中动脉阻闭 12 0 min后恢复再灌注 ,观察再灌注后 2 4 h动物神经行为学改变及脑梗死容积 .结果　再灌注后 2 4 h神经行为学评分 Des组明显低于 C组和 O2 组 (P<0 .0 1) ;2 4 h脑梗死容积 C组为 (2 76 .10±15 5 .6 3) m m3,O2 组为 (2 5 3.84± 174 .39) mm3,Des组 (5 9.5 6± 30 .37) m m3,Des组明显低于对照组 (P<0 .0 1) .结论　地氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血损伤具有保护作用 .     

Relationship between glutamate in the limbic system and hypothalamus-pituitary-adrenal axis after middle cerebral artery occlusion in rats

Glutamateisamajorexcitatoryaminoacid (EAA)inthemammaliancentralnervoussystem (CNS) IthasbeendemonstratedthatexcitotoxicitydamageduetoexcessivereleaseofEAA ,especially glutamateinneuron ,isthepivotalfactorinthepathogenesisoffocalor globalischemia 1　GlutamateisdistributedextensivelyintheCNS ,includingthe presynapticbuttonsofavarietyofimportanthypothalamicnucleuswithhighconcentration Themajorityoftheresearchworkinthisfieldhasbeenfocusedontheroleof glutamateinthemodulationofneuroendocrinese…     

Relationship between glutamate in limbic system and hypothalamuspituitary-adrenal axis after middle cerebral artery occlusion in rats

Glutamate(Gin)Isthemajorexcltatoryaminoacid(EAA)inthernanlmallancentralnervorssystem(CNS).IthasbeendemonstratedthatexcitotoxicdamageduetoexcessivereleaseofncuronalGinisthepivotalfactorinthepathogenesisoffocalorglobalcerebralischernia[lj.Ginisalsoinhighconcentrationsinthepresynapticboutonsofavarietyofimportanthypothalamicnuclei.Atpresent,themajorityoftheresearchworkhasfocusedontheroleofGininthemodulationoftheneuroendocrineunderphysiologicalconditionssuchasthecontrolofthesecretionofcorticotr…     

局灶脑缺血／再灌注后nNOS、iNOSmRNA的表达

目的:了解nNOS mRNA和iNOSmRNA在局灶性脑梗死表达中的时程变化与细胞定位。方法，鼠局灶性脑缺血／再灌注模型；用原位杂交技术进行缺血／再灌注后1，3，5天nNOSmRNA、iNOSmRNA表达的细胞定位并用点杂交方法测量不同时间段梗死半球与非梗死半球内nNOSmRNA、iNOSmRNA水平。结果:正常鼠nNOSmRNA以神经元表达为主，iNOSmRNA无表达,梗死后iNOSmRNA表达以小胶质细胞为主，梗死区未见nNOSmRNA;nNOSmRNA表达从4h就开始下降，1～3天最低，5天左右又上升，iNOSmRNA在缺血再灌注后12h开始表达，1天左右升至高峰，3天左右缓慢下降。结论:nNOSmRNA在缺血损伤后有一短暂表达增高，而在缺血损伤4h后就开始缓慢下降;而iNOSmRNA在缺血／再灌注后12h开始表达，高峰在1天左右，3天左右开始下降，其细胞定位以小胶质细胞为主。     

介入治疗大脑中动脉急性闭塞后脑缺血再灌注损伤的影像学观察

目的 探讨介入治疗大脑中动脉急性闭塞后脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影像学变化.方法 选择2013年1月至2014年11月该院收治的大脑中动脉急性闭塞患者32例 ,16例患者进行溶栓和(或)机械取栓后血管再通治疗(再通组) ,16例患者未进行溶栓治疗(非再通组),对比分析其发病时及第3、7天的头颅影像学变化差异.结果 在发病后第3天再通组患者侧脑室受压程度比例、中线移位程度均重于非再通组[0.50±0.11 vs.0.58±0.10,0.57(0.18,0.83)vs.0.22(0,0.57)cm],两组比较差异有统计学意义( P＜0 .05 );在发病后第7天再通组患者侧脑室受压程度比例、中线移位程度均轻于非再通组[0 .80 ± 0 .11 v s . 0.55±0.12,0(0,0.13)vs.0.46(0,0.88)cm],两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 介入治疗虽是缺血性卒中早期治疗的重要手段 ,但其加重了早期的脑水肿 ,应该重视介入治疗所导致的CIRI.     

大鼠脑缺血后1H磁共振波谱分析的实验研究

目的:1H磁共振波谱(1HMRS)分析大鼠大脑中动脉梗塞后1周脑内代谢物的动态变化,并随访2个月.方法:18只Wistar大白鼠随机分为正常对照组,假手术组和永久性脑缺血组,每组各6只.脑缺血组右侧颈内动脉栓塞制作永久性脑缺血模型.采用1H磁共振波谱(1HMRS)于脑缺血后30min、1、3、6、12、24h、3、7、15d、1、2月对梗塞区域和对侧半球相应区域进行代谢物的波谱分析.结果:正常对照组和假手术组双侧代谢物无异常改变,分布对称(P＞0.05);脑缺血组梗塞区与对照区N-乙酰基天门冬氨酸(N-acetyl-aspartate,NAA),胆硷(choline,Ch)和肌酸(creatine,Cr)均于脑缺血后30min开始升高,3～6h后逐渐降低,但梗塞区与对照区NAA,Ch和Cr没有显著性差别(P＞0.05),24h双侧NAA达最低水平,Ch和Cr于3天后降到最低,随缺血时间的延长,NAA,Ch和Cr逐渐增加,尤其是NAA增加最明显,2个月时NAA较24h增加2.5倍(P＜0.01).患侧最早于脑缺血后10min检测到乳酸(lactate,Lac),随后Lac持续增加3天后开始降低.随访中未发现Lac再次升高.结论:(1)1H MRS能及早反映动物脑缺血后脑内代谢物的改变.(2)1HMRS能客观反映脑缺血慢性期脑内代谢物的异常,为临床评价脑保护药物疗效提供重要信息.     

电针介导eNOS动员内源性EPCs促MCAO/R大鼠脑内血管再生

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶（eNOS）在电针干预下对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血中内皮祖细胞（EPCs）数量变化的影响,及其促大鼠脑内血管再生的机制。方法 线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,选择“百会”穴及左侧“四关”穴为针刺穴位,刺激时间为20 min,每日1次。100只SD雄性大鼠随机分为正常组（N组）、模型组（I/R组）、模型 电针组（I/RE组）、模型 电针 L-NAME组（I/REL组）。除N组外的各组局灶脑缺血1.5h后分为再灌注1d、2d、7d三个亚组,每个亚组10只大鼠。在各时间点采用流式细胞术检测外周血及骨髓中VEGFR2 EPCs数量,荧光定量PCR技术检测缺血脑区VEGFR2 mRNA的表达,免疫组化法检测缺血大脑皮质CD34标记的微血管的计数。结果 与I/R组比较,电针可明显提高骨髓及外周血中EPCs的数量（P＜0.01,P＜0.05）,而I/REL组的VEGFR2 EPCs数量相比于I/RE组则显著降低（P＜0.01）。各时间点I/RE组缺血大脑皮质区VEGFR2 mRNA及CD34血管计数明显高于I/R组（P＜0.01）,而I/REL组与之比较则显著减少（P＜0.01）。结论 电针可动员局灶脑缺血/再灌注大鼠内源性EPCs促大鼠缺血脑区血管再生,该作用在eNOS被抑制后减弱,推测电针动员EPCs促血管再生的作用与eNOS的激活有关。     

氯胺酮对小鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的:观察不同非麻醉剂量氯胺酮对小鼠短暂性局灶性脑缺血性再灌注损伤的影响.方法:通过栓塞大脑中动脉制备小鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注,以神经行为评分达Bederson's 3级视为模型成功标准,再灌注24h处死取全脑进行TTC染色,测量梗死面积,HE染色观察海马病理变化.结果:25mg/kg氯胺酮能显著减少脑缺血再灌注损伤引起的梗死面积(P＜0.05)和改善海马神经细胞坏死,而10mg/kg和15 mg/kg氯胺酮无统计学意义,但呈明显剂量依赖性关系.结论:非麻醉剂量氯胺酮能改善小鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注损伤并呈明显剂量依赖性关系.     

大鼠大脑中动脉梗死模型的评价标准探讨

[目的] 选择适合的评价方法及纳入排除标准,以提高对脑缺血模型是否成功的准确判定程度。[方法] 采用线栓法建立Wistar大鼠的大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,用激光多普勒分别测量造模前、后局部脑血流量(rCBF).分别在缺血后1、2、3、6、9、12、15、18、21、24 h进行Longa神经行为学评分,断头取脑,利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法对脑梗死情况进行判定。[结果] 经解剖和TTC染色验证,神经行为学评分法对44只MCAO大鼠模型判读准确,准确率为75.86%,结合解剖结果,准确率为86.21%.多普勒脑血流量检测法对51只模型MCAO大鼠模型判读准确,准确率为87.93%.结合解剖结果,准确率为100%.[结论] 激光多普勒血流测量法对大鼠大脑中动脉梗死模型是否成功的判断具有良好的敏感性和准确性,尤其适用于超急性期大脑中动脉梗死模型的判定。