钨酸钠作为稳定剂的新的高灵敏HRP-TMB法——Ⅱ、电镜研究

本文研究了各种不同锇化步骤对TMB-ST反应产物的影响。结果发现:TMB-ST法结合DAB-Co后处理步骤用于电镜束路追踪时,具有反应产物电子密度很高,呈特征性的细杆状,组织超微结构保存良好的特点,且灵敏度较高。而未后处理的TMB-ST产物锇化后大多数只具有中等电子密度。此外,通过对以硝普钠、钼酸铵、柠檬酸镍离子络合物、钨酸钠作为稳定剂的各种TMB法的比较,我们首次提出了稳定剂是影响TMB产物电子密度的最重要因素的观点。     

四甲基联苯胺—钨酸钠(TMB-ST)反应产物的后处理方法研究

在大白鼠尾壳核-黑质投射模型上,研究了不同pH的DAB-硫酸镍铵或DAB-钴对TMB-钨酸钠(TMB-ST)反应产物的后处理效果。结果发现,用高pH的DAB-硫酸镍铵温育是TMB-ST反应产物的一种较好的后处理步骤,它使TMB-ST反应产物完全转变为蓝黑色,能耐受pH 7.4的环境,并增加反应产物的嗜锇性和电子密度,而反应液很少出现非特异性沉淀。可是,与DAB-钴处理类似,它也导致TMB-ST成色法的灵敏度下降,两者引起的下降程度也很接近。根据对DAB-钴后处理的研究,TMB-ST成色法在用DAB-重金属离子处理后,其灵敏度仍接近未经任何处理的Mesulam 的TMB法。用 Hancock 的DAB-硫酸镍铵反应液(pH 6.0)作为TMB-ST反应产物的后处理方法则没有成功。本文还讨论了DAB-重金属离子溶液对TMB反应产物起稳定作用的机制,认为与TMB反应产物的不稳定性以及重金属离子引起DAB的非酶氧化有关。     

HRP—TMB反应中醋酸缓冲液的pH值与反应敏感性、组织超微结构保存的关系

为了探索HRP—TMB电镜技术中既能保持TMB反应敏感性高的优点又可较好地保存组织超微结构象,本文将WGA—HRP注入大白鼠红核及其周围,通过用不同pH值的醋缓配的反应液(pH3.3,4.0,4.2,4.4,4.6,4.8,5.2,5.6)后,在光镜及电镜下观察了下橄榄核区标记终末的密度及组织超微结构像。生现醋缓pH为4.0及3.3时,标记终末密度相似,或4.0时多于3.3,但4.0的组织像较3.3者有明显的改善。当pH值进一步提高时,尽管电镜下组织像逐渐改善,但标记的密度却逐步下降,至5.6时,几无阳性标记。另外,pH4.0的材料中,TMB反应产物变小,其跨膜现象也较3.3者少见。故作者认为,选用pH值为4.0的醋缓液较为合适。     

大鼠外侧膝状体背核神经元超微结构定性与定量观察——HRP—TMB—ST电镜法

本文首次用HRP逆行标记并结合新的HRP电镜法(HRP—TMB—ST电镜法),对大鼠外侧膝状体背核(DLG)中间神经元与中继神经元的超微结构进行了定性与定量观察。结果表明,中间神经元胞体较中继神经元小,但胞核的体密度较大而多有较深的皱折,其细胞器相对稀疏但线粒体的体密度与中继神经元无差别。高尔基氏器数量在中间神经元明显比中继神经元少,可作为区别两类神经元的指标之一。     

内脏大神经初级传入神经元向中枢投射的光镜和电镜研究——CT-HRP跨神经节运送法

用猫20只,于内脏大神经注射CT—HRP,对初级传入在中枢内的投射进行了光、电镜观察。光镜下,内脏初级传入神经元的中枢投射纤维主要经Lissauer's束到脊髓后角边缘,部分可能终止于Ⅰ层,大部分分为内、外侧束包绕灰质后角边缘由浅部板层向深部板层进入Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ层。内侧束可能有部分上升到薄束核。电镜观察,在Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ层看到标记的轴突末梢且可直接与交感节前神经元形成突触。本文还对内脏传入通路进行了讨论并认为交感传入纤维可能经脊髓后角神经元中继上传至孤束核。     

大白鼠伏核的神经联系—HRP、WGA-HRP、荧光法研究

用HRP和荧光素—伊凡氏兰(EB)、核黄(NY)对大白鼠伏核的传入性联系,用WGAHRP对其传出性联系进行了实验研究。单纯HRP(19例)和荧光素EB(6例)、NY(4例)注入或泳入伏核后所产生的逆行标记结果基本一致。在丘脑,标记细胞大量出现于丘脑的带旁核、室周核、丘脑内侧核、板内核群;其它如连合核、菱形核和丘脑后内侧核也见到一些标记细胞。在中脑、黑质密带内侧份、被盖腹侧区有大量标记细胞。在边缘系统的海马、杏仁体有大量标记细胞,而内嗅区皮质和下脚仅在一些例中有明显的标记细胞。外例隔核、苍白球、尾壳核和丘脑下部等均未见标记。将WGA-HRP注入伏核内(7例),顺行性标记纤维主要经前脑内侧束下行。标记终支最明显的部位是腹侧苍白球、终纹床核和黑质网状带;其他如外侧隔核、下丘脑外侧核、丘脑底核和Forel H_2区、未定带、黑质密带等处也可见到少量的标记终支。     

大白鼠海马传入纤维的来源——HRP法研究

本研究用25只雌性成年大白鼠,体重150～250g。将33％的HRP(Sigma Ⅵ)分别注射于右侧背海马或腹海马区,在下列各核区发现有HRP标记细胞。 1.本侧:内侧隔核、上乳头体核、下乳头丘脑束核、中缝背核、正中中缝核、蓝斑、内嗅皮层、斜角带和上丘等。 2.对侧:海马的CA_3区、CA_4区和蓝斑。     

大鼠下丘脑到脊髓的直接纤维投射——WGA-HRP法研究

实验用28只170～285g SD大鼠。将WGA-HRP/HRP混合液注入颈、胸、腰及骶髓的一侧灰质。在下丘脑看到大量非均一性标记细胞。呈双侧分布,同侧较多;随着注射部位从头端向尾端移动,标记数量明显地递减。标记细胞以室旁核、下丘脑外侧区最为密集;视交叉后区、穹窿周核及未定带次之;下丘脑内侧区、室周核、背部下丘脑和后部下丘脑只有散在标记细胞;弓状核和视前区只有个别标记细胞。与文献相比,本实验表明,室旁核内的脊髓投射神经元并不局限于小细胞区,大细胞区也有较多分布;视上核和视交叉上核可能不直接投射到脊髓。     

大鼠脊髓灰质向孤束核的投射——HRP法研究

本实验用微电泳法将10％HRP导入20例实验动物的一侧孤束核,标记细胞出现在颈、胸、腰、骶(C_1-S_3)各节段的脊髓灰质内,多见于注射部位的同侧。标记细胞出现的数量以腰髓最多,骶髓最少,其在脊髓灰质各板层的分布也不相同,各板层均可见到,但以Ⅱ—Ⅵ板层分布最多。标记细胞以中、小型为主,可见长梭形、圆形、三角形及星形细胞。本文还就体壁与内脏两种感觉终末在孤束核内的会聚及其意义进行了讨论。     

猫中缝核向嗅球的投射——HRP法研究

本研究用HRP逆轴突传递法观察了猫脑干中缝各核向嗅球的上行投射。实验证明,将HRP注入一侧嗅球后,标记细胞规律性地出现在上位脑干的各中缝核中,即中缝背核(RD)、中央上核(CS)、中间线形核(LI)和吻侧线形核(LR);下位脑干的中缝各核(中缝隐核、中缝苍白核,中缝大核和中缝桥核)全无标记。四个核中出现的标记细胞数各不相同,细胞的分布各有特点。RD中的标记细胞数是四个核中最多的,它们沿中线排列,主要集中于核的中、吻段,尾段极少。CS内的标记细胞数占第二位,仅见于核的尾段,吻段无标记。LI中的标记细胞最少,分散在核的全长。LR中的标记细胞不多,主要出现在同侧核的腹侧部。本研究支持文献中关于RD和CS与嗅球的上行联系的报导,证明了尚未见报导的LI和LR是嗅球传入纤维的另外来源。     

家兔中脑网状结构内巨细胞至脊髓的投射——HRP法及WGA HRP法研究

在家兔中脑网状结构中,我们看到一些散在的巨细胞,位于红核头侧半背外方的中脑被盖内,形态和大小与延髓网状核的巨细胞相似。将HRP或WGA-HRP注入家兔颈、胸或腰段脊髓后,这些散在的巨细胞超过半数被标记。并以红核头端平面出现最多。在标记细胞附近还出现了标记终末,说明中脑网状结构与脊髓之间存在着往返联系。     

家兔前庭核与脊髓的联系——HRP法研究

将HRP注入家兔颈、胸或腰髓的一侧灰质内,追踪前庭四核内的逆行标记细胞和顺行标记终支。发现同侧外侧核内标记细胞数量甚多,且具有体部定位规律。内侧核及降核的尾段标记细胞也较多,内侧核者甚为密集,它们投射到双侧脊髓的颈、胸、腰段,对侧多于同侧,无体部定位关系。降核的头段及在此平面的内侧核内也有一定数量的标记细胞,也投射到颈、胸、腰髓,同侧为主,无体部定位关系。上核内只有极少量标记细胞,主要投射到对侧颈髓。顺行标记终支于降核、内侧核的见端小范围内及外侧核的尾端背面较为恒定,颈、腰注射例在降核和内侧核的尾端尤为密集。     

北京鸭胃的传入神经元定位——HRP法研究

将HRP蒸馏水溶液注入北京鸭(Anas Dome8tic L)胃的肌层及浆膜下,逆行追踪了分布于北京鸭胃的传入神经元胞体的位置。结果表明:1.来自前胃的交感传入神经元胞体位于T_1～L_1各节中。集中存在于T_(1～6)各节,峰值在T_3脊神经节。2.来自前胃的迷走传入神经元胞体位于结状神经节和颈静脉神经节内。其中前胃腹侧肌注入HRP后,在颈静脉神经节出现标记细胞数最多。3.来自肌胃的交感传入神经元胞体出现在T_1～L_1。其前背薄肌区集中出现在T_(1～6),T_3最多;前腹厚肌、后腹薄肌和后背厚肌集中出现于T_(2～6),T_4内最多。4.来自肌胃的迷走传入神经元胞体主要存在于结状神经节。前背薄肌注射例,在颈静脉神经节内也出现标记细胞。     

猫臂旁核向大脑皮质的投射——HRP逆轴突传递法研究

用HRP逆轴突传递法观察了24只猫臂旁核(PB)向大脑皮质的投射。结果表明:本实验所涉及到的所有皮质区均从PB接受数量不等的投射纤维。PB投射纤维的起源细胞主要分布在臂旁内侧核(PBm),少量在臂旁外侧核(PB1)和结合臂(CB)内;这些细胞主要出现在PB的吻侧2/3,以中等大的梭形细胞居多。根据各注射例PB内标记细胞数的多少可知:PB发出的纤维广泛投向皮质各脑回,重点投向前半皮质,其中前,后乙状回是投射中心,其余各脑回(包括未见报道的听区、梨状区、压上回、压旁回和海马)只接受PB的少量上行投射纤维。     

山羊迷走神经感觉纤维的来源——HRP法研究

为了探讨山羊迷走神经感觉纤维的来源,本文将HRP注入颈迷走神经干后,在结状节出现大量密集的标记细胞,颈静脉节中也有较多的细胞被标记,但其密度和数量远不如结状节。在颈1—8和胸1—3的背根节中出现一定数量的标记细胞。此外,少量的标记细胞见于迷走神经干的纤维束中,这些标记细胞的形态与结状节的基本相同。     

家兔脊髓固有束的起始细胞和终支的分布——HRP法研究

将HRP分别注入家兔脊髓的C_(6,7)、L_(5,6)和T_(5～7),C注射者观察L_5和T_5,L注射者观察C_5和T_5,T注射者观察C_5和L_5的标记细胞和顺行标记终支。标记细胞大量且恒定地存在于Ⅶ(包括胸髓的侧角)、Ⅷ层;其次为Ⅴ层和Ⅹ区;Ⅰ层的标记细胞多见于C、L,于T基本未见;Ⅳ、Ⅵ层的标记细胞不恒定且数量少;Ⅸ层在T可见少量,于L仅见个别,在C则未见到;Ⅱ、Ⅲ层于所有各例均未见到标记细胞。标记终支分布范围较广,几乎见于灰质各层。以Ⅹ区、Ⅶ层(包括胸髓的侧角)和Ⅷ层较为密集;L注射例在C_5腹角的腹外侧可见到明显的丛状终支,而于C注射例在L_5则未见到此特殊结构。还见到一些标记终支重叠在标记细胞上或紧挨其附近,也见到标记终支存在于未标记的运动神经元旁。根据形态学结果提出以下几点看法:1.胸髓Ⅶ区外侧分(侧角)出现标记细胞和终支,提示脊髓节段间联系不仅与躯体运动有关,而且也和内脏活动有关。2.Ⅹ区标记细胞恒定,标记终支也较密集,提示该区在脊髓节段间的联系方面起着一定的作用。3.腰膨大发出长的上升束,直接到达颈膨大腹角的腹外侧份,起着对运动神经元直接调节的作用。4.标记细胞旁有标记终支说明脊髓节段间有着反馈联系。     

大白鼠缰核传入纤维的起源——HRP法研究

用HRP法研究18例大白鼠缰核的传入纤维起源,结果表明:内侧缰核主要接受隔伞核和隔三角核的投射;外侧缰核内侧部主要接受前脑基底部诸结构的投射,而其外侧部主要接受脚内核的投射。缰核各部分同时也接受少量来自斜角核和正中中缝核的传入纤维。     

组成猫肠系膜上丛的神经元的分布——HRP法研究

本文以HRP浸泡猫肠系膜上丛近心断端,TMB法显色。观察到参与组成此丛的交感节后神经元位于腹腔-肠系膜上神经节复合体尾侧部。副交感节前神经元位于迷走神经背核主部的中三分之二,但偏头侧。在标记段的尾侧三分之二,标记细胞集中在核的外侧部;极少量标记细胞出现在延髓网状结构内,主要位于背核与疑核之间。标记的感觉神经元分布在结状神经节和脊神经节内,后者约占两者总数的71～74％。脊神经节内的标记细胞见于T_2～L_4。较集中在T_8～L_2,占一侧标记细胞总数的87～88％。高峰节段在T_(13)和L_1,占34～36％。脊神经节的标记细胞中,约有3％大型标记细胞,分布在T_5～L_1,高峰在T_8或T_9,占一侧大型标记细胞总数的21％。上述标记神经元的分布均为双侧。有一例动物在双侧薄束核内见到少量HRP标记纤维。     

家兔Edinger—Westphal核至脊髓的投射——HRP法研究

用家兔15只,分别将不同量的30％HRP或5％WGA-HRP注入颈髓、胸髓或腰髓内,观察Edinger—Westphal核(E—W核)向脊髓的投射以及此种投射有无定位分布关系。同时,观察了家兔E—W核的正常形态学。家兔的E—W核为中线结构,位于动眼神经核头侧及背内侧,包括头侧的前正中核(AM核)及尾侧的固有E—W核两部。AM核最头端分成左右两部。两核均由中、小型梭形细胞构成,但AM核之细胞较狭长。AM核及固有E—W核的细胞向脊髓颈、胸及腰段有广泛的投射,各段投射细胞在核内分布弥散,无明显定位。但AM核头端分成左右两半处的细胞主要投射至腰髓。     

三叉神经躯体传入成分向孤束核投射的间接途径—HRP跨节和逆行追踪技术的光镜和电镜研究

用HRP跨节及逆行追踪的光镜和电镜技术探索了三叉神经(TGN)躯体性传入成分向孤束核(NTS)的间接投射通路。HRP微量注射于闩平面的NTS后,逆行标记细胞出现于与TGN尾侧亚核背外部邻接的脊束内的间质核。同时,此核又是TGN的舌神经和眶下神经初级传入的投射部位。电镜观察发现,HRP标记的舌神经和眶下神经初级传入终末与间质核内神经元的树突形成较多的突触连接。有部分标记终末与向NTS投射的神经元的逆行标记树突和树突棘在间质核内形成突触连接。另外,本文研究证明,间质核和TGN尾侧亚核浅层的细胞构筑基本相同,且有些间质核的细胞团系由尾侧亚核浅层结构向脊束内突入而形成,故可将两者视为一个统一体。据此,本文作者认为,TGN和NTS之间存在着经间质核中继的两级神经元传入通路,经此通路传入的冲动应属于躯体性质。推测由两级神经元组成的这个通路可能是针刺TGN领域体表穴位调控孤束核内脏机能的结构基础。