铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因存在状况。方法自临床分离的39株铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因(TEM、SHV、OXA-1群、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、OprD、DHA和OprD2)。结果39株PAE中TEM阳性1株(2.6%)、CARB阳性12株(30.8%)、VIM阳性9株(23.0%)、DHA阳性3株(7.7%),39株oprD2基因均为缺失(100.0%),其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌VIM及CARB基因携带率高,oprD基因缺失突变是对亚胺培南耐药的重要原因,检出CARB基因为国内首次报道。     

耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因及I型整合酶基因研究

目的研究耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌的相关耐药基因及Ⅰ型整合酶基因。方法采用聚合酶链反应（PCR）法对铜绿假单胞菌碳青酶烯类耐药相关的金属β-内酰胺酶IMP、VIM、SPM、GIM基因和外膜蛋白oprD2基因及Ⅰ型整合酶基因等6种主要耐药基因进行检测与分析。结果51株耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌SPM、GIM金属酶基因检测均阴性,16株IMP和5株VIM型金属酶基因阳性,14株耐亚胺培南铜绿假单胞菌oprD2基因阳性,其余37株铜绿假单胞菌oprD2基因阴性,7株产金属酶并同时伴有膜孔蛋白oprD2基因缺失,49株Ⅰ型整合酶基因intⅠ1阳性。结论膜孔蛋白oprD2基因缺失是铜绿假单胞菌对碳青酶烯类抗菌药物耐药的主要原因,其次是产生金属酶,Ⅰ型整合酶基因广泛存在于铜绿假单胞菌中,提示要加强对耐药基因在病原菌种属间传播和扩散的监测工作。     

铜绿假单胞菌临床分离株β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究

目的 了解临床分离的铜绿假单胞菌（PAE）中β-内酰胺类药物耐药相关基因存在状况.方法 对33株铜绿假单胞菌,采用PCR检测β-内酰胺类药物耐药相关基因（TEM、SHV、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA、FOX、MOX和OprD2）.结果 33株PAE中TEM阳性33株（100.0%）、SHV阳性2株（6.1%）、GES阳性2株（6.1%）、CARB阳性3株（9.1%）、VIM阳性4株（12.1%）,oprD2基因缺失22株（66.7%）,其余基因均阴性;2株CARB基因扩增产物经测序、BLASTn比对分析为CARB-3型;2株VIM基因为VIM-2型.结论 临床分离的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶基因,oprD2基因缺失率高.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌亲缘性分析

目的了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌菌株的亲缘性。方法聚合酶链反应（PCR）法对耐亚胺培南铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、消毒剂耐药基因（qacE△1-sul1）、膜微孔蛋白基因（oprD2）及整合酶基因（intⅠ1）的检测,并以耐药基因为分子标记作聚类分析。结果β-内酰胺类耐药相关基因TEM、CARB、DHA、IMP阳性率分别为5.9%、32.4%、14.7%、17.6%,而SHV、OXA-10、PER、VEB、GES、VIM、GIM、SPM均为阴性;oprD2缺失率为2.9%;aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和ant（2″）-Ⅰ阳性率分别为21.2%、33.3%、48.5%;qacE△1-sull基因为41.2%;IntⅠ1阳性率为3.0%,试验菌株存在克隆传播和近缘关系现象。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌可导致克隆传播,遗传标志物聚类分析方法可快速了解试验菌株间的亲缘关系。     

临床分离多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究

目的 了解安徽淮北地区临床分离多药耐药铜绿假单胞菌(PAE)中β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因存在情况.方法 对36株临床分离多药耐药PAE采用全自动微生物系统进行药物敏感性试验,用改良三维试验法检测各种β-内酰胺酶,用聚合酶链反应(PCR)检测14种β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因和外膜通道蛋白oprD2编码基因.结果 36株PAE中TEM、DHA、CTX-Ge和CARB的检出率分别为77.8%、69.2%、27.8%和25.0%,OXA-1、OXA-10的检出率均为16.7%,VIM-2的检出率为13.9%,IMP-1的检出率为2.8%,未检出VEB、SHV、GES、PER、GIM和SPM-2基因,有58.3%的菌株存在外膜通道蛋白oprD2基因缺失.结论 淮北地区临床分离的多药耐药PAE携带多种β-内酰胺酶基因,oprD2基因缺失率较高.     

多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药基因研究

目的 进行多药耐药铜绿假单胞菌株中β-内酰胺酶耐药相关基因存在情况及耐药机制研究.方法 用聚合酶链反应检测临床分离的22株多药耐药铜绿假单胞菌中的12种β-内酰胺酶基因(IMP、GIM、SPM、VIM、TEM、GES、VEB、PER、DHA、CARB、OXA-10、SHV).结果 22株菌中CARB基因全部阳性(100.0%),IMP基因阳性21株(阳性率95.5%),TEM基因阳性17株(阳性率77.3%),VEB基因仅3株阳性(13.6%),VIM基因1株阳性(4.5%),其余基因无阳性检出.结论 铜绿假单胞菌中CARB及IMP基因携带率高,常常同时携带其他耐药基因,导致菌株出现多药耐药性,给临床诊治和医院感染监控带来极大的困难.     

新疆地区铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶分布及耐药分析

目的 研究新疆地区铜绿假单胞菌临床分离株中产金属β-内酰胺酶流行株基因型的分布和耐药性.方法 收集铜绿假单胞菌95株,分别用金属酶IMP、VIM、SIM、GIM、SPM引物进行聚合酶链反应(PCR),对扩增产物阳性进行序列分析.结果 共检出8株金属酶阳性菌株,经基因测序确认4株产IMP-6型金属酶,4株产VIM-2型金属酶,其余基因均阴性;产金属酶菌株均耐美罗培南和亚胺培南,且产酶株对头孢吡肟、头孢他啶、哌拉西林等抗菌药物均不敏感,而对氨曲南较敏感.结论 新疆地区铜绿假单胞菌的流行株金属酶基因型主要为IMP-6型和VIM-2型;其耐药性强,临床应根据药敏结果选择用药,以达到最佳抗菌效果.     

国内首次从泛耐药铜绿假单胞菌中检出KPC型β-内酰胺酶基因

目的 调查一组泛耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白基因的存在情况.方法 收集2010年1-12月浙江绍兴第二医院住院患者痰液标本中分离到的泛耐药铜绿假单胞菌共20株,用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析15种A类β-内酰胺酶基因、10种B类β-内酰胺酶基因、2种C类β-内酰胺酶基因、4种D类β-内酰胺酶基因检测以及膜孔蛋白oprD2基因.结果 20株泛耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因检出率,TEM为90.0％、CARB为100.0％、KPC为5.0％(经测序和BLASTn比对,确认为KPC-2型)、OXA-10群为10.0％,膜孔蛋白oprD2基因均为缺失.结论 20株泛耐药铜绿假单胞菌均存在产β-内酰胺酶和膜孔蛋白缺失是对β-内酰胺类药物耐药的重要原因;从泛耐药铜绿假单胞菌中查出KPC型β-内酰胺酶基因是国内外首次报道.     

铜绿假单胞菌β-内酰胺酶及其相关耐药基因的检测分析

目的 了解医院临床分离的多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶产生情况,以及β-内酰胺类相关耐药基因的存在状况.方法 采用K-B法测定临床分离铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的敏感性,筛选出135株多药耐药菌株;采用改良三维试验检测各种β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶编码基因及oprD2基因.结果 135株多药耐药铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶按检出率依次为AmpC酶占36.3％,ESBLs+ AmpC酶占14.8％,金属β-内酰胺酶占13.3％,ESBLs+ AmpC酶变异子占11.9％,AmpC酶变异子占5.2％,ESBLs占4.4％;β-内酰胺酶编码基因的检出率CTX-M-1群为45.9％、TEM为25.9％、CARB为12.6％、DHA为10.4％、IMP为3.7％,未检出SHV、OXA- 10群、PER、GES、VEB和VIM基因;oprD2基因的缺失率为69.6％.结论 多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶以AmpC酶为主,β-内酰胺类对抗菌药物的耐药主要与CTX-M-1群、TEM、CARB、DHA、IMP型耐药基因有关,对碳青霉烯类抗菌药物耐药主要与oprD2基因缺失有关.     

ICU分离铜绿假单胞菌耐药特征及菌株聚类分析研究

目的了解自重症监护病房(ICU)患者分离到的铜绿假单胞菌(PAE)中β-内酰胺类药物耐药相关基因、氨基糖苷类修饰酶基因存在状况和菌株的亲缘性。方法对21株PAE,采用PCR检测β-内酰胺类药物耐药相关基因(TEM、SHV、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA、FOX、MOX和oprD2),氨基糖苷类修饰酶基因(aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ)。结果21株PAEβ-内酰胺类药物耐药相关基因中TEM阳性21株(100.0%)、SHV阳性2株(9.5%)、GES阳性1株(4.8%)、CARB阳性2株(9.5%)、VIM阳性4株(19.0%),oprD2基因缺失14株(66.7%),其余基因均阴性;氨基糖苷类修饰酶基因中aac(3)-Ⅱ阳性4株(19.0%)、aac(6′)-Ⅰ阳性5株(23.8%)、aac(6′)-Ⅱ阳性2株(9.5%)、ant(3″)-Ⅰ阳性1株(4.8%)和ant(2″)-Ⅰ阳性4株(19.0%),aac(3)-Ⅰ为阴性。结论ICU患者分离到的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,聚类分析显示存在克隆传播医院感染。     

长沙地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的分子流行病学特征

目的了解长沙地区多重耐药铜绿假单胞菌（PA）产金属β-内酰胺酶(MBL)菌株基因型和流行情况。方法收集该地区7所综合医院临床分离的PA,对菌株进行鉴定和药敏试验,采用EDTA协同试验、E-test MBL进行MBL表型筛选,聚合酶连反应（PCR）明确其基因型,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行同源性分析。结果经EDTA协同和E-test MBL初步筛查,81株PA中仅10株为强阳性;PCR结果显示,18株 PA MBL基因阳性,其中IMP-9型11株,IMP-1型1株和VIM-2型6株,未检测出SIM、SPM、GIM和NDM-1基因型。ERIC-PCR分型结果显示,12株产IMP-PA存在多个型别,而6株产VIM-2菌株为同一型别。结论长沙地区多重耐药PA以IMP-9和VIM-2基因型最常见。     

69株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因检测分析

目的了解耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌耐药基因的携带情况。方法收集69株浙江省人民医院住院病人耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌株,改良Hodge试验进行KPC型碳青霉烯酶初筛检测,PCR法进行HSV、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、GES、VEB、IMP、VIM、SME、KPC、IMI/NMC、NDM基因检测,并对部分阳性基因进行测序。结果 69株肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阳性48株,阳性率63.8%。PCR检测结果为56株(81.2%)携带KPC基因,60株(87%)携带HSV,20株(29.0%)携带OXA-3基因;3株(4.35%)肺炎克雷伯菌携带OXA-1基因。对KPC基因测序结果为KPC-2亚型。结论本次检测的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌携带KPC-2基因为主,应加强院感监测和预防。     

多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶与膜孔蛋白基因的研究

目的 调查多药耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白oprD2基因的存在情况.方法 收集柳州市三级医院2011年1-12月标本中分离的MDRPA共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A～D 4类33种β内酰胺酶基因和oprD2膜孔蛋白基因.结果 20株MDRPA中A类β-内酰胺酶基因检出TEM(100.0％),B类β-内酰胺酶基因检出IMP(75.0％),C类β-内酰胺酶基因检出PDC(100.0％)和DHA (30.0％),D类β内酰胺酶基因无检出;oprD2膜孔蛋白基因均未检出,提示膜孔蛋白基因编码缺失;1号株TEM基因PCR产物经测序证实为TEM-1基因,IMP基因PCR产物经测序证实为IMP-1基因;9号株DHA基因PCR产物经测序证实为DHA-1基因.结论 产TEM、PDC、IMP型基因少数并产DHA型β-内酰胺酶和膜孔蛋白基因编码缺失,是该组MDR-PAE对β-内酰胺类药物产生耐药的主要原因.     

Carbapenemasen bei gramnegativen Erregern in Deutschland

The spread of carbapenemase-producing gram-negative bacteria is one of the major challenges of the present. Since 2009, the National Reference Laboratory for gram-negative nosocomial pathogens has observed the molecular epidemiology of carbapenemases in Germany. In 2011, 1,454 referred bacterial isolates were tested for the presence of carbapenemases. Carbapenemase was found in 34.4% of Enterobacteriaceae isolates, in 19.9% of Pseudomonas aeruginosa isolates and in 96.3% of Acinetobacter baumannii isolates. The most frequent carbapenemases in Enterobacteriaceae were OXA-48, KPC and VIM-1; in P. aeruginosa it was VIM-2 and in A. baumannii OXA-23.     

铜绿假单胞菌中OXA基因的分布与耐药性研究

目的调查医院铜绿假单胞菌临床分离株苯唑西林酶(OXA)基因的分布以及与铜绿假单胞菌耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用。方法收集临床2010年1-9月分离的铜绿假单胞菌75株进行OXA基因检测,采用PCR法检测OXA和整合酶基因,通过DNA直接测序确定OXA;统计铜绿假单胞菌的药敏结果,并分析基因型和耐药性之间的关。结果根据PCR产物片段大小及测序分析,75株铜绿假单胞菌中共有OXA-10基因阳性菌株35株,阳性率为46.7%;含有OXA-10基因的铜绿假单胞菌菌株整合酶基因阳性率为71.4%。结论 OXA-10基因广泛存在于铜绿假单胞菌临床分离株中,并可能通过整合子和其他基因同时定位于传递性质粒上造成传播,导致细菌多药耐药。     

一株多药耐药铜绿假单胞菌整合子基因结构分析

目的 检测临床分离的72株多药耐药铜绿假单胞菌(PAE)整合子分布情况,并对其中一株vim2基因阳性菌株整合子结构及定位进行分析.方法 通过药敏试验检测铜绿假单胞菌的MIC,以PCR扩增多药耐药PAE的vim2耐药基因和Ⅰ类整合子,电泳胶回收DNA片段并测序,将测序结果以Pubmed在线软件BLAST进行序列比对分析.结果 72株非重复多药耐药铜绿假单胞菌的intI基因阳性率高达99.0％,在一株多药耐药铜绿假单胞菌(命名为PAE vim2)中检测到双整合酶,两整合酶及其相连的不同基因盒均位于细菌染色体上.其中一个结构为int Ⅰ -sul1,位于Tn21样转座子中,另一个为Tn402样的Ⅰ类整合子,后者携带vim2等基因盒.结论 多药耐药PAE整合子的携带率高,且在一株多药耐药铜绿假单胞菌中发现双整合酶耐药结构,可能是引起耐药基因水平转移的遗传物质基础.     

An in silico approach for understanding the molecular evolution of clinically important metallo-beta-lactamases

Resistance to carbapenem, considered to be the drug of last resort for treating serious enterobacterial infections, is a growing problem. Metallo-beta-lactamase (MBL) mediated carbapenem resistance is considered to be clinically most important, since no traditional inhibitors work against them. Hence, we have investigated the changes in drug profile, affinity and binding stability of meropenem with clinically important MBLs viz., IMP, VIM and NDM during the course of molecular evolution. Phylogenetic trees were constructed and amino acids positions, presumed to be exposed to positive selection pressure were analyzed. Based on sequence diversity and selection pressure, IMP-1, IMP-8, IMP-9, IMP-21, IMP-27, IMP-20 and IMP-26 among IMP genes; VIM-1, VIM-2, VIM-13, VIM-29, VIM-18 and VIM-7 among VIM genes and NDM-1 had been selected for in silico analysis. Mode of interaction of selected MBL variants with meropenem were analyzed by Autodock4.0 and LIGPLOT analysis. In all the trajectories, we had found an increase in mouth opening/solvent accessible volume/area of the catalytic pocket and decrease in Gibbs’ free energy (ΔG°) for binding with meropenem and Michealis–Menten constant (K_m) – indicating an increase in choice of drugs, binding stability and meropenem affinity from primitive to advanced MBL variants, with exceptions of IMP-20, IMP-26, VIM-13 and VIM-18 which might be due to sign epistasis. Intergenic comparison revealed NDM-1 might have greater drug profile and catalytic efficiency than IMP-1 and VIM-2 due to largest pocket opening and least distance between the Zn-I ion and β-lactam oxygen of meropenem.     

铜绿假单胞菌耐药表型与基因型相关性研究

目的 分析铜绿假单胞菌(PAE)对不同抗菌药物的耐药性及其耐药基因的流行状况,探讨不同种类抗菌药物的耐药表型与基因型的相关性.方法 采用琼脂稀释法测定14种抗菌药物对40株铜绿假单胞菌的MIC,同时采用PCR方法检测16种耐药基因.结果 铜绿假单胞菌对氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率＜30.0％;对碳青霉烯类耐药率＞50.0％,对氨基糖苷类抗菌药物耐药率约40.0％,对环丙沙星耐药率为95.0％,喹诺酮类抗菌药左氧氟沙星与环丙沙星耐药率相比,差异有统计学意义(P＜0.01);40株PAE耐药编码基因Tem、OXA-2、Ant(2')-Ⅰ、oprD2、IPM、Ant(3")-Ⅰ、CTX-M-1、Aac(3)-Ⅱ、OXA-10、CTX-M-9、VIM的检出率分别为:15.0％、10.0％、42.5％、7.5％、7.5％、15.0％、2.5％、7.5％、7.5％、7.5％、12.5％,其余耐药基因(SHV、DHA、Aac(6')-Ⅱ、Aac(6')-Ⅰ、VIM-2)未检出;亚胺培南/西司他丁耐药株与敏感株的金属酶编码基因IPM的检出率,差异有统计学意义(P＜0.01),其余金属酶编码基因的检出率差异无统计学意义.结论 铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药率高,耐药机制复杂多样,对氨基糖苷类抗菌药物的耐药机制,主要与其携带氨基糖苷类修饰酶编码基因有关,对亚胺培南/西司他丁耐药的主要原因是产生金属酶IPM、oprD2缺失与铜绿假单胞菌多药耐药有一定的相关性.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶与Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶和Ⅰ类整合酶(intⅠ1)基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、GES、PER、VEB、OXA-10、ACT-1、LEN、DHAi、ntⅠ1基因。结果35株肺炎克雷伯菌中检出β-内酰胺酶基因22株,阳性率62.9%;intⅠ1阳性21株,阳性率60.0%。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因和intⅠ1基因携带率高。