社区糖尿病人群携带金黄色葡萄球菌的 分型与耐药谱关系研究

摘要:目的　了解社区糖尿病人群携带金黄色葡萄球菌的分型情况并分析其耐药谱。方法　随机抽取佛山市里水镇11个社区糖尿病人438名并收集其鼻拭子样本,根据传统实验室方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus,MRSA）的鉴定,利用多重聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）的方法对MRSA菌株进行葡萄球菌染色体盒（Staphyloccoccal Cassette Chromosome mec,SCCmec）的分子分型,应用K-B纸片扩散法分析金黄色葡萄球菌的耐药谱。结果　438份样本中分离出43株金黄色葡萄球菌,检出率为9.82%,其中22株（5.02%）为MRSA。22株MRSA中,医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Hospital-Acquired MRSA,HA-MRSA）7株,社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Community-Acquired MRSA,CA-MRSA）10株,SCCmec未分型5株。金黄色葡萄球菌除对替考拉宁无耐药外,对其他抗生素均有不同程度的耐药,MRSA的耐药率普遍高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（Methicillin Sensitive Staphylococcus Aureus,MSSA）的耐药率,两者对红霉素和克林霉素耐药率差异有统计学意义,36.36%（8/22）的MRSA具有多重耐药性,MSSA中未发现多重耐药菌株。结论　该地区糖尿病人群携带的金黄色葡萄球菌中MRSA比例高,所携带的MRSA中以CA-MRSA为主,MRSA对抗生素的多重耐药问题值得重视。     

应用复合PCR方法鉴定口腔菌斑标本中的耐甲氧西林葡萄球菌属

目的 建立临床上快速鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法，防止在患者之间特别是高风险患者中的流行传播。方法 建立了一种快速鉴定牙菌斑中MRSA及耐甲氧西林血浆凝固酶阴性葡萄球菌(MR—CONS)的方法，对含6mg／L甲氧西林的葡萄球菌(Staphylococcus)No．110琼脂培养基生长菌落进行多引物PCR以检测femA和mecA基因，力图同时确定目标样本的甲氧西林耐药性和葡萄球菌的表型。结果 在200例样本中检测出MRSA6例、MRCONS29例，结果与并行的常规生化细菌鉴定完全一致。结论 显示该方法是一种能特异、快速鉴定口腔菌斑MRSA和MRCONS的手段。     

显色培养基在控制耐药菌传播中的应用研究

目的评价显色培养基对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)所致医院感染的快速检测,及其在控制耐药菌在医院内传播的应用价值,为临床预防控制多药耐药菌传播提供参考。方法对2014年2月-2015年3月242份由MRSA引起医院感染的病区患者周围环境及接触患者的医务人员手采样标本进行MRSA目标菌筛查,采用显色培养基和全自动细菌鉴定仪同时检测样本,作筛选对比试验。结果共采集标本242份,检出MRSA54株;显色培养基法敏感性为81.48%、特异性为99.47%,阳性预测值为97.78%、阴性预测值为94.92%;显色培养基最早12h阳性,最晚30h阳性,中位数为18h;全自动细菌鉴定仪最早48h阳性、最晚96h阳性,中位数为72h,两种检测方法在检测时间上比较差异有统计学意义(P0.01)。结论显色培养基能缩短MRSA检测周期,在耐药菌引起疑似医院感染暴发时,有助于早期干预,从而阻断耐药菌在医院内传播。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中mecA、femA检测及其抗生素敏感性研究

目的探讨mecA、femA基因PCR聚合扩散快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法选择耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株84株用PCR聚合扩散法检测mecA、femA基因,并用纸片扩散法检测MRSA菌株的药物敏感性。结果 84株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中,mecA基因阳性率为100%femA基因阳性率为97.6%。未发现万古霉素耐药的菌株。结论 PCRmecA、femA基因聚合扩散法即可用于MRSA快速诊断,又有特异性强的有点。     

应用双重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的应用双重聚合酶链反应（PCR）技术,建立金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的快速检测方法,指导临床及时、合理使用抗菌药物,防止MRSA的扩散。方法 根据金黄色葡萄球菌血浆凝固酶基因Coag和耐药基因mecA设计引物,调整PCR扩增反应各参数,建立快速、准确扩增Coag和mecA基因的双重PCR体系;应用双重PCR对临床分离鉴定的85株金黄色葡萄球菌同时扩增Coag和mecA基因片段,并将PCR扩增结果与苯唑西林-高盐琼脂筛选试验（OSAS）的结果进行比对。结果生化常规试验分离鉴定85株金黄色葡萄球菌,通过OSAS试验,共检出MRSA 53株,MRSA检出率为62.35%。双重PCR快速检测MRSA,85株金黄色葡萄球菌均扩增出Coag基因片段,其中53株扩增出mecA基因片段。双重PCR检测MRSA的结果与生化常规试验分离鉴定MRSA结果一致。结论双重PCR法能快速、同时检测金黄色葡萄球菌血浆凝固酶Coag基因和耐药基因mecA,有助于及早检出MRSA,指导临床合理用药,控制MRSA传播。     

携带杀白细胞素基因金黄色葡萄球菌临床感染菌株的回顾性研究

目的研究临床分离的金黄色葡萄球菌携带杀白细胞素基因在社区与医院菌株分布流行的情况,及其携带mecA基因型的相关性分析。方法收集2010年1月-2014年12月医院临床分离的188株非重复金黄色葡萄球菌,进行菌株鉴定和药敏分析,用头孢西丁药敏纸片法初筛耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),用PCR法检测金黄色葡萄球菌的杀白细胞素基因(PVL)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因,并测序部分阳性基因PCR产物。结果头孢西丁药敏纸片法初筛试验与mecA基因PCR法结果差异有统计学意义;188株金黄色葡萄球菌中,76株为MRSA,阳性率为40.4%,其中64株MRSA为医院获得株,12株MRSA为社区获得株;112株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中99株为医院获得株,13株为社区获得株;共有14株PVL基因阳性,阳性率7.4%,社区检测到2株PVL(+)CA-MSSA(社区获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌),医院共检测到12株、阳性率6.4%,其中7株为PVL(+)HA-MRSA(医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)、5株为PVL(+)HA-MSSA(医院获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌),对该14株PVL基因阳性菌株进行MIC(最低抑菌浓度)分析,喹奴普汀/达福普汀、呋喃妥因、利福平、万古霉素、利奈唑胺、替加环素的耐药率为0,耐药率较低的有四环素(21.4%)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(14.3%)、左氧沙星(7.1%)、庆大霉素(7.1%),菌株大部分分离自皮肤软组织、脓等标本。结论携带PVL毒力基因的MRSA在医院的检出率比在社区的明显高,提示含PVL高毒力与多重耐药基因的医院获得株-金黄色葡萄球菌PVL(+)MRSA已经从社区转移到医院感染,应引起院感与临床部门的高度重视。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及耐药性分析

目的鉴定及分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性。方法菌株按《全国临床检验操作规程》进行培养和鉴定。药物敏感试验采用纸片扩散法。结果检出金黄色葡萄球菌206株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌110株,占53.4%。其中MRSA和MSSA对万古霉素均敏感,MRSA对阿米卡星、利福平的耐药性较低(<30%),其余均显示较高耐药性,为多重耐药。结论 MRSA的耐药性严重,临床细菌室应高度重视MRSA的检测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测

目的评价乳胶结合实验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法并检测MRSA的肠毒素.方法收集130株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和MecA基因;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肠毒素.结果65株MecA基因扩增阳性菌株中的62株PBP2a检测阳性,63株MSSA中,MecA基因扩增及PBP2a检测全部为阴性.MRSA产肠毒素为67株.MSSA肠毒素为19株.结论乳胶结合试验是一种简便、快速、准确检测MRSA的方法,实验室应重视金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.     

ChromID MRSA琼脂在筛查临床与环境微生物标本耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的准确性比较

目的 比较临床和环境两种不同标本使用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌鉴定培养基(ChromID MRSA)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的准确性.方法 用ChromID MRSA琼脂筛查SICU患者主动筛查呼吸道标本和环境物体表面标本,对出现的绿色典型菌落进行MALDI-TOF质谱仪细菌鉴定和mecA基因确认MRSA,同时将血培养中的凝固酶阴性葡萄球菌接种在ChromID MRSA琼脂,观察抗干扰情况.结果 用ChromID MRSA琼脂筛查人体标本中的MRSA,符合率高达97.0％,而在环境标本中使用符合率较低,仅为33.0％.结论 ChromIDMRSA琼脂适用临床标本的快速筛查,在环境标本中使用需要附加鉴定试验确认.     

基层医院葡萄球菌医院感染的耐药性分析

目的监测基层医院葡萄球菌的耐药现状,以指导临床医师正确选用抗生素. 方法用纸片扩散法(K-B法)对189株葡萄球菌进行药敏试验,耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的检测,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1999年版进行. 结果耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为29.9%;耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)检出率为31.3%;MRSA和MACNS对8种常用抗菌药物的耐药率均明显高于甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS). 结论 MRSA和MRCNS检出率不断升高,临床应重视耐药菌的检测与报告,及时有效地监测医院感染的发生与流行.     

临床感染金黄色葡萄球菌多药耐药的动态分析

目的分析医院金黄色葡萄球菌(SAU)耐药性的变化,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法收集2007年1月-2009年12月临床标本中分离的SAU,药敏试验及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)鉴定采用Phoenix-100型全自动细菌分析仪,诱导克林霉素耐药采用纸片法,判断标准均按CLSI 2009年规定标准判定。结果痰、脓液、血液及分泌物为SAU的主要标本来源,ICU、呼吸科、神经外科、血液科为SAU的主要病区;临床标本MRSA及诱导克林霉素耐药检出率逐年升高,MRSA感染死亡率逐年升高;214株SAU中利福平的耐药率<15.5%,除青霉素>90.0%外,对其他抗菌药物耐药率均<80.0%;阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星、克林霉素2008、2009年耐药率与2007年相比,差异均有统计学意义(P<0.05),庆大霉素、利福平2009年耐药率与2007年相比,差异均有统计学意义(P<0.05);3年MRSA对大环内酯类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药呈多药耐药,且耐药率均>80.0%。结论 3年SAU的耐药率持续保持较高的水平,并且MRSA的检出率有逐年上升的趋势,要求临床应合理使用抗菌药物,并动态监测其耐药性的变迁。     

576株血液分离病原菌的分布及耐药性分析

目的分析医院血培养分离病原菌种类和耐药性,为临床提供用药依据。方法采用BacT/ALERT120全自动血培养仪及VITEK-32全自动细菌鉴定仪进行培养与鉴定,用K-B法进行细菌药敏试验。结果 2006年1月-2009年12月共分离出病原菌576株,其中革兰阳性菌213株,革兰阴性菌330株,真菌33株,分别占总数的37.0%、57.3%、5.7%;居前3位的感染病原菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌123株、大肠埃希菌72株、肺炎克雷伯菌57株;耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)占78.0%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)占46.0%,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为52.8%和42.1%;MRCNS、MRSA及产ESBLs的耐药率较高。结论医院血培养分离的病原菌种类分布较广,耐药性差异较大,对血培养分离株进行早期监测和耐药性分析非常必要,可为临床医师合理应用抗菌药物提供重要依据,以减少抗菌药物滥用及新耐药菌株的产生。     

金黄色葡萄球菌的耐药分析

目的调查临床分离的金黄色葡萄球菌耐药现状,为临床合理使用抗生素提供依据。方法收集2007年1月-2009年5月无锡市第二人民医院连续分离的非重复金黄色葡萄球菌643株,用全自动微生物仪进行菌种鉴定和药敏实验,以K—B法测替考拉宁的药敏。结果耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）占分离总数的71．7％,所有菌株对替考拉宁、万古霉素、呋喃妥因和利奈唑胺均敏感。MRSA的耐药性显著高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）,MRSA对β-内酰胺类、红霉素、四环素、亚胺培南、克林霉素、庆大霉素、左氧氟沙星等抗菌药物的耐药率为82．6％～100％、92．7％、74．8％、92．O％、74．5％、90．5％、78．6％,说明MRSA多重耐药严重,对其他受试药的耐药率均〈10％。MSSA除对青霉素、克林霉素及红霉素耐药率高达93．0％、45．6％和45．6％,对其余抗菌药物的耐药率较低,为0～23％之间。结论MSSA对大部分抗菌药物保持较好的敏感性,MRSA较MSSA的耐药性高,MRSA多重耐药严重,必须加强金黄色葡萄球菌的监控,以最大限度降低其耐药性发生。     

实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的建立一种快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法。方法收集临床诊断或疑似为败血症患者的血标本，直接提取细菌基因组DNA，确定其敏感性；以金黄色葡萄球菌nuc基因和MRSA的mecA基因为靶序列，合成引物，采用实时荧光PCR技术对上述基因进行检测，并将其结果与细菌常规培养结果对比，分析该方法检测MRSA的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值。结果直接从血标本中提取细菌基因组DNA的灵敏度为10’CFU／mL。MRSA阳性血标本实时荧光PCR灵敏度为46．15％，特异性为100．00％，阳性预测值为100．00％，阴性预测值为56．25％。结论使用该方法快速检测临床血标本中MRSA的灵敏度不高，欲应用于临床快速诊断尚有若干问题需解决。     

金黄色葡萄球菌医院感染的临床分布及耐药性分析

目的 了解金黄色葡萄球菌(SAU)医院感染的临床分布及耐药特性.方法 回顾性调查2009年1月-2010年12月从临床各类标本中分离获得的168株SAU,统计其在各类标本和病区的分布特点,并用KB法测定常用抗菌药物的敏感性.结果 168株SAU中有117株为MRSA,占69.6％;SAU的耐药率普遍较高,除对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺全部敏感外,对青霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类药物的耐药率均＞60.0％;SAU以痰液、尿液和血液标本检出数最多,分别为24.4％、21.4％和18.5％;科室分布ICU占20.2％、呼吸内科占16.1％、肾内科占14.9％及中医科占14.3％.结论 SAU的耐药率呈上升趋势,且MRSA检出率日趋严重,已对临床抗菌药物的选择构成困难,必须加强对高危病区及高危人群的监测,做好预防和消毒隔离,防止SAU,特别是MRSA的流行播散.     

47株金黄色葡萄球菌临床血流感染分离株的基因分型研究

目的 研究金黄色葡萄球菌临床血流感染分离株的分子流行病学特征.方法 收集2006年1月至2008年12月解放军总医院分离的临床血流感染金黄色葡萄球菌菌株(共47株),标本来源均为患者静脉血.采用琼脂稀释法检测所有菌株对多种抗生素的耐药性,PCR方法 检测pvl毒素基因,DiversiLab~(TM)Rep-PCR分型系统分析菌株的同源性;对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行葡萄球菌染色体/mec(SCCmec)分型以及ST239型别的快速筛查;综合分型和药敏试验结果,挑选部分代表菌株进行多位点序列分型(MLST).结果 47株血流感染金黄色葡萄球菌中,pvl基因检出率为4.3%.MRSA占51.1%.MRSA均为SCCmec Ⅲ型菌株;Rep-PCR分为A～L共12个型,其中A型为最主要的型,共22株(46.8%),所有的MRSA均属于A、B两型.结论 47株临床血流感染金黄色葡萄球菌中的MRSA绝大部分为多重耐药克隆ST239-MRSA-SCCmecⅢ型.     

2008-2010年金黄色葡萄球菌的耐药性变迁

目的了解临床分离金黄色葡萄球菌(SAU)的感染特征及耐药性变迁,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对医院2008-2010年临床标本中分离的SAU进行回顾性分析。结果共获得1198株SAU,其中来源于呼吸道943株,占78.7%,分泌物149株,占12.4%,尿液56株,占4.7%;SAU中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌2008-2010年检出率分别84.1%、84.7%、84.0%;对β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、大环内酯类、四环素类及克林霉素的耐药率均较高,均>75.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶部分敏感,耐药率<50.0%;对利福平较敏感,耐药率8.9%～16.9%,对万古霉素、利奈唑胺无耐药。结论 SAU耐药严重,应加大监控力度,预防MRSA感染的发生、传播及流行。     

血培养病原菌分布及耐药性分析

目的 了解医院2009年1月-2010年12月血培养阳性标本的病原菌分布及耐药性,为临床合理选择抗菌药物提供依据.方法 回顾性分析2009-2010年医院血培养结果；药敏数据用WHONET 5.4软件进行分析.结果 2009-2010年共收集血培养标本12 384份,培养阳性1203份,阳性率9.71％;1203株病原菌中,革兰阴性菌706株,占58.69％,革兰阳性菌390株,占32.42％,真菌107株,占8.89％；主要以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等为主,分别占15.96％、10.56％、11.22％、12.14％、11.14％,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌检出率分别为65.67％、70.15％,未发现耐万古霉素葡萄球菌.结论 临床医师应高度重视血培养,根据药敏结果合理使用抗菌药物,减少多药耐药菌株的出现,预防控制医院感染.     

植绒转运拭子联合显色培养基对鼻腔金黄色葡萄球菌定植的快速筛查

目的采用植绒转运拭子联合显色培养基对鼻腔金黄色葡萄球菌(SA)定植进行快速筛查,了解耳鼻喉头颈外科患者SA定植情况,为预防SA感染和医院感染防控提供依据。方法采用eSwab植绒转运拭子采集某院耳鼻喉头颈外科门诊患者鼻前庭标本,以WASPLab微生物自动化系统接种于羊血琼脂培养基和MRSA/SA显色培养基,孵育培养16、40 h,自动拍摄、观察菌落,通过质谱(MALDI-TOF MS)、药敏试验和mecA基因检测对SA进行验证。结果共采集200份鼻前庭标本,检出SA菌株48株,其中MSSA23株(占47.9%),MRSA25株(占比52.1%),鼻腔SA定植率为24.0%,MRSA定植率为12.5%。SA筛查阳性报告平均时间为(17.6±6.1)h。培养与质谱鉴定、耐药表型检测的符合率为100.0%,与mecA基因检测的符合率为97.9%。结论基于植绒转运拭子联合显色培养基的快速检测方法准确度较高,报告时间较短,可以用于SA定植快速筛查。