DNA环介导恒温扩增试验检测结核分枝杆菌的研究

目的探讨建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法采用涂片抗酸染色法、罗氏培养法和DNA环介导恒温扩增(LAMP)试验对结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较。结果 LAMP试验检出率最高,罗氏培养法次之且检测时间长,抗酸染色法的检出率最低。结论 LAMP试验检测痰结核分枝杆菌具有快速、敏感、简便、特异等优点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测痰结核分枝杆菌异烟肼耐药效果的评价

目的评价通过检测结核分枝杆菌katG基因突变以诊断异烟肼耐药并检测结核分枝杆菌的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。方法收集临床诊断为肺结核病的患者痰样本,用已建立的荧光PCR方法进行检测,与常规痰涂片抗酸染色、分枝杆菌培养和传统比例法药敏试验比较,评价检测结核分枝杆菌敏感性和特异性及异烟肼耐药的特异性和敏感性。统计学分析采用χ2检验,P值<0.05为差异有统计学意义。结果荧光定量PCR共检测186份痰液样本,敏感性为84.47%,特异性为100.00%。在确诊病人的痰液中阳性检出率84.47%,明显高于痰涂片40.99%(χ2=46.44,P<0.01),痰培养40.37%(χ2=47.89,P<0.01),且差异有统计学意义。其中荧光PCR在菌阳痰液中检出率94.44%,涂阴培阴的痰液中检出率75.28%。与常规药敏试验结果比较,培养阳性的61份痰样本的药敏符合率96.72%(59/61),敏感性33.33%(1/3),特异性100.00%(58/58)。结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速诊断痰液中的结核分枝杆菌及其异烟肼耐药性。     

荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用

目的 比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术与痰涂片抗酸染色、改良罗氏培养法在检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值.方法 对240例临床确诊的肺结核病患者和107例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;另用FQ-PCR法检测14例非结核分枝杆菌DNA以评价该方法对非结核分枝杆菌检测的特异性.结果 FQ-PCR检测结核分枝杆菌的敏感性分别为52.1％ (125/240),明显高于抗酸染色法的24.2％ (58/240)和改良罗氏培养法的35.4％ (85/240),x2=39.36,P＜0.01;FQ-PCR法对14例非结核分枝杆菌检测结果全部为阴性,特异性为100％.结论 FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,并且可以有效地鉴别非结核分枝杆菌感染,在肺结核的临床实验室诊断上有重要的应用价值.     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

应用噬菌体生物扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌

目的探讨噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法应用涂片镜检法、L-J罗氏培养法、Bactec-960快速培养法及PhaB法共同检测151例痰标本。结果痰标本四种方法检测结果比较:151份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片镜检、L-J罗氏培养、Bactec-960快速培养和PhaB法检查结果分别是20.5%、38.4%、59.6%和60.9%;比较PhaB与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法(χ2=51.04,P<0.05),差异有统计学意义,Phab检出率高于罗氏法检出率(χ2=15.31,P<0.05),差异有统计学意义。结论PhaB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法。     

TB-LAMP法检测阳性痰标本再培养增加耐药肺结核发现率

目的 评价结核分枝杆菌环介导等温扩增法(TB-LAMP)在检测肺结核患者痰标本LAMP阳性后再培养及表型药物敏感试验对耐药结核分枝杆菌的检出效果。方法 随机收集2017年5月至2019年2月于遵义医科大学附属医院结核病专科门诊就诊和结核病区住院的疑诊肺结核患者7823例,每例留取4份痰标本,随机分别进行1份痰涂片镜检、2份传统罗氏培养和1份TB-LAMP核酸检测,将TB-LAMP阳性标本进一步行传统罗氏培养及表型药物敏感试验,分析TB-LAMP阳性标本再培养对耐药结核病的诊断价值,提高对耐药结核病的防治意识。采用graphpad prism6.0软件进行分析,χ2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 所纳入的可疑肺结核患者7823例,TB-LAMP法、传统罗氏培养和涂片镜检的阳性检出率分别为16.6%、7.8%和4.6%,痰TB-LAMP法阳性检出率与痰涂片抗酸染色、传统L-J培养检查相比,差异具有统计学意义(分别为χ2＝593.57,P＜0 .01;χ2＝283.49,P＜0 .01)。TB-LAMP阳性痰标本再培养阳性率为44%(574/1298),其中52.8%(303/574)与传统结核分枝杆菌培养共同阳性,另外47.2%(271/574)为传统结核分枝杆菌培养阴性,而TB-LAMP阳性标本再培养阳性;228株结核分枝杆菌临床分离株进行结核分枝杆菌药物敏感试验,敏感结核分枝杆菌占75%(171/228),耐药结核分枝杆菌25%(57/228),其中RR-/MDR-TB为12.72%(29/228)。结论 TB-LAMP阳性标本再培养可提高RR-/MDR-TB发现率,为耐药结核病的早诊断、早治疗、减少传播提供了检测思路,值得推广应用。     

BACTEC MicroMGIT系统在结核菌快速培养中的应用评价

目的对BACTEC MicroMGIT系统在结核菌快速培养法中的应用进行相关评价。方法选择2011年10月—2011年12月于本院住院以及门诊治疗的结核患者200例,对其结核杆菌进行培养。应用BBL MGITTM分枝杆菌快速培养管及其配套的BACTEC MicroMGIT荧光判读器检测结核杆菌,并与涂片以阳性率进行比较,与罗氏培养法的培养阳性率进行比较。计数资料采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 200份临床标本抗酸染色镜检法阳性率为15.50%,快速培养法阳性率为37.50%,罗氏培养法阳性率为24.00%。快速培养法、罗氏培养法与抗酸染色镜检结果进行比较,抗酸染色镜检法阳性检出率低于快速培养法与罗氏培养法,差异具有统计学意义(P0.05)。快速培养法阳性检出率显著高于罗氏培养法,差异有统计学意义(P0.05)。结论BACTEC快速培养法和罗氏培养法及抗酸染色镜检法相比,其具有阳性率高,且高效、简单以及易于操作等特点,成为目前较为理想的一种快速检测结核分枝杆菌的方式。     

金胺O荧光染色法用于痰液结核杆菌检测的效果评价

目的分析金胺O荧光染色法在痰涂片检测结核分枝杆菌中的应用效果。方法收集平阳县中医院及平阳县人民医院2016年1月-2017年9月150例疑似肺结核患者的痰标本,进行痰涂片结核杆菌检测,分别采用金胺O荧光染色法和传统抗酸染色法对痰涂片进行染色镜检,并对镜检结果进行统计分析。结果金胺O荧光染色组有26例阳性,阳性率为17. 33%,抗酸染色组有14例阳性,阳性率为9. 33%,前者阳性率明显高于后者,差异有统计学意义(χ2=4. 154,P 0. 05)。结论金胺O荧光染色法结果判读简便快捷有效,在痰标本含菌量较少时比抗酸染色法检出率更高,金胺O荧光染色法比抗酸染色法具有更高的临床应用价值,更适合在基层医院推广使用。     

三种不同涂片法对分枝杆菌涂片阳性率的影响

目的探讨液基夹层杯法、荧光染色法和抗酸染色法检测痰液分枝杆菌的应用价值。方法应用液基夹层杯法、荧光染色法和抗酸染色法分别检测311例临床痰液标本,统计分析3种不同方法的分枝杆菌阳性检出率。结果夹层杯法、荧光染色法和抗酸染色法的阳性检出率分别为15.8%、20.9%、11.9%,其中荧光染色法阳性检出率最高,且操作简单快速,夹层杯法次之,抗酸染色法阳性检出率最低。结论总体来说,荧光染色法操作简单、快速、阳性率较高,是直接检测痰液分枝杆菌比较理想的方法。     

三种方法检测涂阴肺结核患者痰液和灌洗液结核分枝杆菌结果分析

目的比较三种不同检测方法对涂阴肺结核患者痰液和支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌检测结果,探讨如何提高涂阴患者的病原学阳性率。方法选取2015年7月至2017年6月,衢州市人民医院住院患者117例,分别采用浓缩涂片抗酸染色、液体培养和Xpert MTB/RIF法检测痰液和肺泡灌洗液结核分枝杆菌,比较同种样本不同检测方法的阳性率。结果 117例涂阴患者痰液样本Xpert MTB/RIF检测、浓缩涂片抗酸染色、分枝杆菌液体培养阳性率分别为23.08%(27/117)、4.27%(5/117)、21.37%(25/117),117例涂阴患者肺泡灌洗液样本Xpert MTB/RIF检测、浓缩涂片抗酸染色、分枝杆菌液体培养阳性率分别为45.30%(53/117)、17.09%(20/117)、44.44%(52/117)。同种样本比较Xpert MTB/RIF和液体培养法阳性率高于浓缩涂片法,差异有统计学意义(χ~2=5.96,P0.05)。不同种类样本比较,肺泡灌洗液3种方法阳性检出率均高于痰液同种方法,差异有统计学意义(χ~2=5.13,P0.05)。结论对涂阴患者的样本进行液体培养和Xpert MTB/RIF检测可提高病原学阳性率。肺泡灌洗液检测能进一步提高阳性检出率。     

环介导等温扩增法诊断初诊肺结核病研究

目的:初步评价环介导等温扩增法(Lamp)检测痰中结核分枝杆菌的准确性,探讨临床诊断初诊肺结核病人的应用价值。方法:选取249例初诊疑似肺结核病人的痰标本,同时进行Lamp、直接涂片抗酸染色法和改良罗氏培养基培养法检测。结果:剔除培养失败和非结核杆菌的标本,共检测了739份痰标本,其中直接涂片抗酸染色法检出阳性标本70份,阳性率9.47%;培养检出阳性标本118份,阳性率15.97%;Lamp检出阳性标本99份,阳性率13.40%。以培养法为标准,涂片法的灵敏度57.63%,特异度99.68%,符合率为94.30%;Lamp的灵敏度77.12%,特异度98.71%,符合率为96.61%。结论:Lamp在检测初诊疑似肺结核病人中有较高的灵敏度和特异性,适用于基层结核病工作中初诊肺结核病人的诊断。     

支气管肺泡灌洗液应用TB-LAMP对菌阴肺结核的诊断价值

 目的 评估支气管肺泡灌洗液（BALF）应用结核分枝杆菌环介导等温扩增技术（TB-LAMP）对菌阴肺结核诊断中的应用价值。方法 收集某院2017年12月—2018年11月临床确诊为菌阴肺结核（3次痰涂片阴性且痰培养阴性）的254例患者的资料,所有患者行支气管检查取支气管镜刷检物或BALF标本,同时分为LAMP组（进行涂片抗酸染色、罗氏培养、TB-LAMP检测）、GeneXpert组（进行涂片抗酸染色、罗氏培养、GeneXpert MTB/RIF检测）。结果 LAMP组和GeneXpert组分别纳入96例、158例菌阴肺结核患者,两组患者性别及年龄比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。LAMP组涂片抗酸染色、罗氏培养、TB-LAMP检测阳性率分别为4.17%（4例）、18.75%（18例）、52.08%（50例）;GeneXpert组涂片抗酸染色、罗氏培养、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为3.80%（6例）、12.66%（20例）、54.43%（86例）。TB-LAMP、GeneXpert MTB/RIF分别与涂片抗酸染色、罗氏培养阳性率比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）。TB-LAMP与GeneXpert MTB/RIF对结核分枝杆菌检测阳性率比较,差异无统计学意义。结论 BALF应用TB-LAMP对菌阴肺结核具有良好的诊断效能,且具有快速、简单、准确及经济等特点,值得在临床进一步推广应用。     

核酸扩增检测结核杆菌DNA方法在肺结核诊断中的临床价值

目的确定核酸扩增结核杆菌DNh检测与抗酸杆菌涂片镜检两种方法在临床诊断上的应用价值。方法选取2009年11月至2011年5月肺结核病例208例为结核组,同期36例非结核病患者作为非结核组,对两组患者晨起痰液进行核酸扩增荧光定量聚合酶链反应（polyerasechainreaction,PCR）和涂片抗酸杆菌镜检,对痰检结果阳性率进行,检验。结果208例结核病患者的痰液中,FQ—PCR法和涂片抗酸染色法检出的阳性率分别为51．92％和25．96％,FQ—PCR法痰检患者结核杆菌DNA的阳性率明显高于涂片法,两种方法相比差异有统计学意义（x2=29．48,p〈0．01）：对两组方法的特异性及敏感性进行分析,两种方法特异性无统计学差异（x2=2．35,p〉0．05）,敏感性有统计学差异（J2=9．447,p〈0．01）。结论荧光定量PCR检测技术对临床上肺结核病的诊断和鉴别诊断有较高的应用价值。     

发光二极管荧光显微镜在基层实验室诊断结核分枝杆菌的应用评价

目的 评价发光二极管荧光显微镜(LED)在基层实验室诊断结核分枝杆菌的应用情况. 方法 收集中国卫生部-盖茨基金会结核病防治项目结核病新诊断工具可行性子项目(即发光二极管荧光显微镜应用评估项目)湖南省宁乡县项目点的相关数据,运用回顾性的研究对萋尔-尼尔逊(Z-N)和LED在痰涂片直接镜检结核分枝杆菌阳性检出能力、报告结果的差异及两种方法受痰标本性状的影响等方面进行分析. 结果 初诊病例通过不同的染色和镜检方法阅片,Z-N阳性检出率为21.38％(388/1815),LED阳性检出率为22.42％ (407/1815),LED比Z-N提高1.05％(19/1815);随访患者Z-N、LED及LED比Z-N提高的阳性检出率分别为2.62％ (48/1831)、3.66％ (67/1831)和1.04％(19/1831);Z-N和LED在初诊病例和随访患者两部分人群检查结果差异有统计学意义(x2=1678.990、1214.956,P＜0.001);两种方法在阳性结果分级报告上差异有统计学意义,尤其表现在涂片结果以实际观察到细菌条数进行描述的和阳性等级为4+以上的痰涂片上,但两种镜检方法所评定的阳性分级报告结果一致性尚可(McNemar-Bowker检验,x2=103.145,P＜0.001,kappa=0.777);痰标本性状在一定程度上影响着Z-N和LED两种检查方法在初诊病例涂阳患者的发现,Pearsonx2=56.707、57.549,P＜0.001,但在随访患者中表现出的差异无统计学意义;初诊病例和随访患者留取痰标本的性状差异有统计学意义(Pearson x2=59.614,P＜0.001). 结论 Z-N和LED两种检查方法一致性较好,且LED在一定程度上优于Z-N,在基层肺结核患者的发现和治疗检测上有一定的应用价值.     

Detection of Mycobacterium tuberculosis by polymerase chain reaction in a selected population in northwestern Mexico]

This study compares the detection of Mycobacterium tuberculosis through bacilloscopy (Ziehl-Neelsen stain), growth in Lowenstein-Jensen medium, and polymerase chain reaction (PCR) carried out with DNA taken directly from various types of samples. A total of 252 samples were analyzed (114 sputum, 96 urine, 15 cerebrospinal fluid, and 27 of other types) from 160 patients with any form of suspected tuberculosis who came to the Clinical Pathology Laboratory of the Specialties Hospital of the Western National Medical Center of the Mexican Social Security Institute. In all cases Ziehl-Neelsen stains were done, as were also cultures with Lowenstein-Jensen medium and PCR amplification of a segment of 285 base pairs specific to the M. tuberculosis complex. Of the 252 samples, with the culture, 18 were positive for nontuberculous mycobacteria. Of the 234 others, 12 (5.1%) were positive with the PCR and the culture, 174 (74.4%) negative in both tests, 47 (20.1%) positive with the PCR and negative with the culture, and 1 (0.4%) negative with the PCR and positive with the culture. Using the culture as the reference test, the PCR provided a sensitivity of 92.3%, a specificity of 78.7%, a positive predictive value of 20.3%, and a negative predictive value of 99.4%. The PCR detection limit with DNA taken from culture was 10 fg, equivalent to four or five mycobacteria. Also in comparison with the culture, the PCR correctly identified the totality of the mycobacteria of the M. tuberculosis complex. Taking the culture as the reference test, when analyzing just the sputum samples, the direct PCR provided a sensitivity of 90.9%, a specificity of 89.5%, a positive predictive value of 52.6%, and a negative predictive value of 98.7%. The PCR is a sensitive and specific technique for detecting the M. tuberculosis complex in both positive and negative bacilloscopy samples. A controlled PCR procedure makes it possible to establish or to exclude the diagnosis of tuberculosis in a time that is reduced from more than three weeks to just 24 to 48 hours. This is particularly useful when an early diagnosis is needed to establish a patient's prognosis or in organ transplant cases.     

显微镜观察药物敏感度检测技术在结核病早期诊断中的应用

目的 利用显微镜观察药物敏感度检测技术(MODS)直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTU),评价其在结核病快速诊断中的应用价值.方法 收集264份肺结核临床疑似患者的痰标本和20份非结核病患者痰标本,分别采用抗酸染色法、罗氏培养基(L-J)培养法和MODS技术进行MTU检测,观察3种方法对痰标本中MTU的检出情况;对抗酸染色法和L-J培养法检测均为阴性的肺结核临床疑似患者进行为期90 d的临床随访,由专科医师在此基础上作出临床诊断,再以临床诊断为标准,对比分析3种方法的检测性能,评价MODS技术的临床应用价值.结果 3种方法检测20份非结核病患者痰标本结果均阴性;在264份肺结核临床疑似患者的痰标本中,抗酸染色法、L-J培养法和MODS技术的阳性检出率分别为28.8％、36.0％、42.8％,其中在102份抗酸染色和(或)L-J培养阳性的痰标本中,MODS检出97份(95.1％),在162份抗酸染色和L-J培养均为阴性的标本中,MODS阳性16份;若以临床诊断为标准,MODS、L-J培养法及抗酸染色法的敏感度和特异度分别为63.4％和97.8％、54.3％和100.0％、43.3％和100.0％,三者敏感性差异有统计学意义(P＜0.01);MODS的阳性检出中位时间为10d,明显短于L-J培养的25 d.结论 MODS技术与传统病原学检测方法相比,具有敏感性好、检出时间短的优势,适用于结核病的临床快速诊断.     

MODS法在结核分枝杆菌检测和药物敏感性实验中的临床应用评价

目的:评价MODS(显微观察药敏分析)技术在痰中结核分枝杆菌检测以及药物敏感性实验中的临床应用价值。方法:分别应用MODS法、L-J培养基培养和比例法(MOP)对涂阳肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌进行检测和药敏实验,并对实验结果进行比较分析。结果:128份涂阳痰标本培养,MODS法与L-J培养的结核分枝杆菌阳性检出率分别为92.8%和84.13%(χ2=4.62,P<0.05);不同药物浓度(INH0.4μg/ml,INH0.1μg/ml;RIF1μg/ml,RIF0.5μg/ml)MODS法药敏实验结果与比例法(INH0.2μg/ml,RIF40μg/ml)的一致率分别为96.8%、95.2%、98.4%、96.8%,一致性程度Kappa值分别为0.91、0.87、0.94、0.90,两法在不同药物浓度下差异均无统计学意义(McNemar’sχ2分别为2、0.33、1和0,P值均大于0.1)。MODS法中分枝杆菌检测和药敏实验结果平均所需时间最短(9 d和9.5 d)。结论:MODS是一项符合发展中国家的廉价、快速、简便、高效的结核病培养诊断和药敏检测新技术。