3种方法检验结核分枝杆菌的比较

目的比较直接涂片抗酸染色法、罗氏培养基培养法、环介导等温扩增法(lamp)检测痰结核分枝杆菌的准确度和特异性,及在临床诊断中的应用价值。方法用3种方法对送检的845个痰标本进行检验,并对检验结果进行分析。结果 845个痰标本中,涂片阳性81个,阳性率9.6%;培养阳性136个,阳性率16.1%;lamp阳性124个,阳性率14.7%。结论培养法是检测结核分支杆菌的金方法,检出率高,其次是环介导等温扩增法,其灵敏度较高与培养法检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05);涂片法检出率较低,与另外两种方法相比差异有统计学意义(P<0.05)。     

两种结核分枝杆菌快速检测方法的比较

目的比较荧光定量PCR检测和直接扩增检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性,及在国境口岸卫生检疫工作中的应用前景。方法应用结核分枝杆菌荧光定量PCR和直接扩增检测47份疑似或确诊活动性肺结核空腹痰标本,并与液体培养结果进行比较。结果荧光定量PCR法与直接扩增法对结核分枝杆菌检测敏感性分别为46.7%和100%,特异性分别为81.2%和84.4%。结论结核分枝杆菌直接扩增检测是一种较为敏感而特异的快速检测方法,在国境口岸卫生检疫部门具有重要的应用价值。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

高特异性基因芯片法检测结核分枝杆菌的临床应用评价

目的探讨结核分枝杆菌基因芯片法直接检测在结核病临床诊断中的应用价值。方法应用基因芯片法检测76例结核病临床确诊病例和96例非结核病患者痰液、骨脓、胸腹水、脑脊液等标本中的结核分枝杆菌DNA,并对基因芯片的影响因素如标本的液化和样本浓度等进行探讨。结果标本液化对基因芯片法的检测结果影响较大,而样本浓度对检测结果影响不大。结论基因芯片法直接检测结核分枝杆菌具有简便快速,灵敏度高,特异性好等特点,可以作为临床结核病诊断的重要检测手段。     

四种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的评价痰抗酸染色、荧光染色、荧光抗酸联染法和细菌培养四种方法检测结核分枝杆菌的临床诊断价值。方法本院860例临床痰标本,用同一痰标本直接厚涂片并分别用三种染色方法镜检,再用相隔时间不长的同一份标本进行细菌培养共四种方法的检测结果比较。结果荧光法、联染法、抗酸法和培养法检测痰标本阳性检出率依次为20.4%、15.7%、18.0%和31.0%,培养与荧光法差异有显著性(2=24.7,p<0.05),培养和联染法差异有显著性(2=54.0,p<0.05),荧光法与联染法也有显著性差异(2=5.89,p<0.05),荧光法与抗酸法差异无显著意义(2=2.79,p>0.05)。结论以培养法为金标准,荧光法与其总和一致率达85%,说明荧光法较准确。并且快速、省时,敏感,实验方法简便,是目前诊断结核病的一种较为理想的检测方法。     

DNA环介导恒温扩增试验检测结核分枝杆菌的研究

目的探讨建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法采用涂片抗酸染色法、罗氏培养法和DNA环介导恒温扩增(LAMP)试验对结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较。结果 LAMP试验检出率最高,罗氏培养法次之且检测时间长,抗酸染色法的检出率最低。结论 LAMP试验检测痰结核分枝杆菌具有快速、敏感、简便、特异等优点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

结核分枝杆菌DNA分子生物学检测

目的探讨利用结核分枝杆菌的核酸扩增(PCR)技术,检测结核杆菌DNA在临床诊断中的价值。方法采用病例对照研究方法,各组诊断采用双盲法,对健康对照组血标本,胸膜炎的胸水标本、腹膜炎的腹水标本、脑膜炎的脑脊液标本和有泌尿系症状的尿液标本,咳痰患者的痰标本进行PCR扩增及ABI-7300仪器荧光检测结核分枝杆菌DNA定量。应用统计学分析阳性率、敏感性、特异性及各组间的统计学意义。结果共检测427例,其中初治涂阳肺结核100例,初治涂阴肺结核100例,肺外结核100例,肺部其他疾病77例,健康对照50例。结核杆菌DNA检测初治涂阳肺结核的阳性率86.0%、敏感性86.0%、特异性96.0%;阳性预测值97.7%、阴性预测值77.4%。初治涂阴肺结核的阳性率42.0%、敏感性42.0%、特异性96.0%;阳性预测值95.5%、阴性预测值45.3%。肺外结核的阳性率34.0%、敏感性34.0%、特异性96.0%。阳性预测值94.4%、阴性预测值42.1%。结论结核分枝杆菌DNA分子生物学检测技术是对传统诊断活动性结核病实验室诊断方法的补充,具有较高的敏感性和特异性,对结核病的诊断有重要的诊断价值,成为结核病诊断和研究的重要手段。     

抗酸染色与PCR-荧光探针法在石蜡包埋组织结核分枝杆菌检测的比较

目的 比较抗酸染色与PCR-荧光探针法检测在福尔马林固定、石蜡包埋组织中结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)检测的应用.方法 收集西京医院2018年1月至2019年10月共543例疑似结核患者,所有组织标本均经10％中性福尔马林固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色,行抗酸染色及PC...     

4种方法检验结核分枝杆菌的比较

目的评价直接涂片法、沉淀集菌法、罗氏培养法、Bactec法检查痰结核分枝杆菌对肺结核的诊疗价值。方法对临床送检的531例肺结核病人痰标本 ,用此4种方法进行平行检查。结果4种方法综合阳性257例中 ,各方法检出率分别为 :直接涂片65.4 %、沉淀集菌77.4 %、罗氏培养78.2 %、Bactec91.4 %。Bactec法高于其它3种方法(P<0.01) ,罗氏培养法与沉淀集菌法相同(P>0.05) ,均高于直接涂片法(P<0.01)。Bactec法平均阳性时间为12.5天 ,罗氏培养法为24.2天 ,Bactec法比罗氏培养法提前11.7天。在涂片阳性病例中 ,罗氏培养法有46例阴性、Bactec法有22例阴性 ,总的涂阳培阴率为10.68 %。结论Bactec法具有敏感性高 ,快速省时等特点 ,如与沉淀集菌法联用可进一步提高结核分枝杆菌的检出率 ,对结核病的快速诊断和治疗具有重要意义。     

绍兴地区结核分枝杆菌临床分离株Rep-PCR基因分型研究

目的 应用Diversilab系统对结核分枝杆菌进行基因分型,初步探讨绍兴市定点诊治医院结核患者的分型及特征.方法 对医院的100例结核患者临床分离株应用以重复序列PCR (Rep-PCR)为原理的Diversilab基因分型系统进行分型.结果 共91例结核患者的临床分离株获得了基因分型的结果,分型显示了高度的多态性,可分5个基因群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ群),分别为Ⅰ群占34.1％、Ⅱ群占3.3％、Ⅲ群占29.7％、Ⅳ群占29.7％、Ⅴ群占3.3％,以Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ群为主,不同类型的病例与基因群之间存在统计学上的关联性.结论 医院结核病就诊患者存在主要的基因群,初步建立了绍兴地区结核病就诊患者的基因分型库,为今后医院感染的控制及绍兴市结核病控制提供了积极的意义.     

四种结核抗原用于结核病血清学诊断的初步评价

目的对MPT63、Ag85A、RV2031c和融合蛋白CFP10-ESAT6四种结核分枝杆菌抗原进行诊断效能评价,优选出最佳的抗原组合,分析其应用价值。方法基于酶联免疫吸附试验,分别用MPT63、Ag85A、RV2031c和融合蛋白CFP10-ESAT6四种重组结核抗原,对199份血清(含94份结核病患者血清和105份健康者血清)进行检测。结合受试者工作特征曲线法计算不同抗原的最佳临界值(cut-off value)并以此确立各抗原组合的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率,对它们的诊断效能和应用价值进行综合评价。结果 11种组合中Rv2031c与CFP10-ESAT6的组合诊断效能最好,灵敏度为63.8%,特异度为82.9%,阳性预测值为76.9%,阴性预测值为71.9%,诊断效率为73.9%。其余组合的灵敏度的范围30.9%~66%,特异度范围76.2%~90.5%。结论 Rv2031c和CFP10-ESAT6组合后的诊断效能最佳,有一定的临床应用价值。     

Global distribution of Mycobacterium tuberculosis spoligotypes

We present a short summary of recent observations on the global distribution of the major clades of the Mycobacterium tuberculosis complex, the causative agent of tuberculosis. This global distribution was defined by data-mining of an international spoligotyping database, SpolDB3. This database contains 11708 patterns from as many clinical isolates originating from more than 90 countries. The 11708 spoligotypes were clustered into 813 shared types. A total of 1300 orphan patterns (clinical isolates showing a unique spoligotype) were also detected.     

结核分枝杆菌高特异性MB-PCR体系优化及荧光检测研究

目的设计结核分枝杆菌高特异性分子信标探针及优化TB-MB-PCR体系,尝试运用荧光分光光度计观测反应后的荧光信号。方法运用软件Beacon designer设计分子信标探针,优化TB-MB-PCR反应体系各组份浓度,运用荧光分光光度计观测反应后的荧光信号。结果优化后的MgCl2、引物、dNTP以及MB在PCR反应体系中的最佳终浓度分别为4mmol/L、0.04μmol/L、0.2mmol/L以及0.04～0.05μmol/L;3种稀释标本TB-MB-PCR阳性产物、TB-MB-PCR阴性产物;TB-PCR阴性产物（空白对照）的荧光信号差异明显。结论高特异性分子信标探针设计较理想、优化后的TB-MB-PCR反应体系灵敏性、特异性好;荧光分光光度仪可直接检测反应产物,有简单、灵敏、准确等优点。     

环介导等温扩增法诊断初诊肺结核病研究

目的:初步评价环介导等温扩增法(Lamp)检测痰中结核分枝杆菌的准确性,探讨临床诊断初诊肺结核病人的应用价值。方法:选取249例初诊疑似肺结核病人的痰标本,同时进行Lamp、直接涂片抗酸染色法和改良罗氏培养基培养法检测。结果:剔除培养失败和非结核杆菌的标本,共检测了739份痰标本,其中直接涂片抗酸染色法检出阳性标本70份,阳性率9.47%;培养检出阳性标本118份,阳性率15.97%;Lamp检出阳性标本99份,阳性率13.40%。以培养法为标准,涂片法的灵敏度57.63%,特异度99.68%,符合率为94.30%;Lamp的灵敏度77.12%,特异度98.71%,符合率为96.61%。结论:Lamp在检测初诊疑似肺结核病人中有较高的灵敏度和特异性,适用于基层结核病工作中初诊肺结核病人的诊断。     

结核分枝杆菌的复苏因子

1998年Mukamolova等在细菌因子一文中首先提出了复苏因子(resuscitation promoting factor,Rpf)的新概念,并证实复苏因子是由有活性的微球菌分泌的一种蛋白质,它在皮摩尔级浓度就能有效地促进休眠的非生长同源菌的复苏和生长。同时也证实微球菌复苏因子类似基因广泛地存在     

石蜡包埋组织中结核杆菌DNA不同提取方法比较

目的探讨结核患者石蜡包埋组织中简易有效的结核杆菌DNA提取方法并进行验证。方法 20份4%甲醛固定石蜡包埋的肺或淋巴结结核组织标本,分别以氯化钠盐析法、酚-氯仿抽提法、一步法、试剂盒法提取其DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、聚合酶链反应(PCR)及膜芯片法分析所提取DNA的质量。结果氯化钠盐析法提取的DNA〔(19.338±6.270)μg〕和一步法提取的DNA〔(20.050±5.591)μg〕最多(P<0.001),一步法的A260/A280比值(1.044±0.137)明显低于其他3种方法(P<0.001);电泳结果显示4种提取方法均得到了基因组DNA;PCR与膜芯片验证显示除一步法外其余3种方法提取的DNA中均检测到结核杆菌DNA。结论氯化钠盐析法提取石蜡包埋组织结核杆菌DNA具有高效简便的特点,是较为理想的方法。     

Novel Mycobacterium tuberculosis Complex Genotype Related to M. caprae

We report the unusual genotypic characterization of a bacterium isolated from a clinical sample of a patient who grew up in Bangladesh and lives in the United States. Using whole-genome sequencing, we identified the bacterium as a member of the Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC). Phylogenetic placement of this strain suggests a new MTBC genotype. Even though it had the same spoligotype as M. caprae strains, single-nucleotide polymorphism–based phylogenetic analysis placed the isolate as a sister lineage distinct from M. caprae, most closely related to 5 previously sequenced genomes isolated from primates and elephants in Asia. We propose a new animal-associated lineage, La4, within MTBC.