鼠伤寒沙门菌耐药株拓扑异构酶基因突变分析

目的　探讨鼠伤寒沙门菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与拓扑异构酶基因突变之间的关系。方法　三株鼠伤寒沙门菌分离株X2 ,X7,X11对氟喹诺酮类药物环丙沙星的MIC分别为 32、0 38和 0 0 2 3μg ml,X2为耐药株。利用聚合酶链反应 (PCR)对其拓扑异构酶四个耐药基因gyrA ,gyrB ,parC ,和parE进行扩增和序列分析。结果　发现分离株X2的gyrA基因同时在 2 4 8、2 5 9位点发生点突变 (Ser83→Phe ,Asp87→Asn)。分离株X7gyrA基因在 2 4 8位点发生点突变 (Ser83→Tyr)。分离株X11的gyrA基因没有发生突变。X2parC基因QRDR在 2 38位点发生点突变 (Ser80→Arg)。而分离株X7、X11的parC基因没有发生突变。三株鼠伤寒沙门菌分离株的gyrB和parE基因都没有发现突变。结论　gyrA和parC上同时发生突变会导致鼠伤寒沙门菌对环丙沙星的高耐药性     

76株沙门菌耐药谱及耐药基因分析

目的研究76株沙门菌的耐药谱和耐药基因携带情况,为沙门菌引起的腹泻病治疗提供依据。方法采用琼脂扩散法测定76株沙门菌对23种抗生素药物的敏感性。采用PCR方法检测耐药菌株的耐药基因携带情况。结果18株(23.7%)沙门菌有不同耐药表型。9株携带blaTEM-1,5株携带blaOXA-1,1株携带blaCMY-2;5株携带acc(6')-Ib-cr,各有1株分别携带rmt B和arm A1;3株耐喹诺酮类药物的沙门菌发现gyr A和par C存在点突变。结论 2010年-2013年北京市沙门菌对青霉素类药物的耐药率最高,β-内酰胺类药物耐药株主要携带blaTEM-1和blaOXA-1基因,氨基糖苷类药物耐药株主要携带acc(6')-Ib-cr基因,喹诺酮耐药主要由gyr A和par C点突变及acc(6')-Ib-cr引起。     

甲型副伤寒沙门菌超广谱β-内酰胺酶和喹诺酮类耐药基因检测

目的探讨甲型副伤寒沙门菌(SAA)对喹诺酮类药物的耐药性变异产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的机制。方法对2007-2008年67株萘啶酸耐药菌株进行喹诺酮类药物耐药分析和耐药基因检测,药敏检测采用VITEK32、Etest和纸片扩散法进行;耐药基因采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增含有喹诺酮类耐药基因决定区(QRDR)gyrA、gyrB、parC、parE基因片段;ESBL包括SHV、TEM、CTX-M和AmpC型β-内酰胺酶。结果 67株萘啶酸耐药菌株58株发生gyrA基因在Ser83位或Asp87位发生突变,gyrB、parC和parE未发现突变,突变株SHV、TEM、CTX-M阳性率分别为7.5%、4.8%、1.5%,未检出AmpC耐药基因;萘啶酸耐药率由0上升至100.0%。结论 SAA对喹诺酮类耐药严重,主要机制是QRDR gyrA基因的第Ser83位或Asp87位表现出高频突变,其耐药表型和基因突变有较高的一致性。     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制研究

目的:研究铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制,为临床抗感染治疗提供依据。方法:用PCR法检测染色体介导的喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB、parC、parE和质粒介导的喹诺酮类耐药基因qn-rA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB,并对gyrA和parC阳性结果进行测序分析。结果:98株耐环丙沙星的铜绿假单胞菌中未检出parE、qnrC和qnrS基因。gyrA、gyrB和parC的阳性率分别为96.9%、87.8%和75.5%。测序证实84株菌(85.7%)发生gyrA或parC基因突变。90株菌(91.8%)携带质粒介导的耐药基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB的阳性率分别为31.6%、86.7%、15.3%、11.2%、53.1%、8.2%和26.5%,其中qnrB和aac(6’)-Ib-cr具有高携带率。结论:染色体介导的喹诺酮类耐药基因突变以及质粒携带qnr、qepA、aac(6’)-Ib-cr和oqxAB耐药基因是铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的主要机制。首次在铜绿假单胞菌中发现qnrB基因和qnrD基因。     

重症监护病房铜绿假单胞菌的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

目的 了解重症监护病房铜绿假单胞菌的耐药情况以及对氟喹诺酮类耐药的分子机制,为临床合理用药提供依据.方法 用E试验法测定83株铜绿假单胞菌对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),从中筛选28株氟喹诺酮类耐药菌,以标准敏感菌株ATCC 27853作为质控菌株,PCR扩增gyrA及parC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),扩增产物片段进行直接测序分析.结果 83株铜绿假单胞菌在痰标本的阳性率最高71.08%;28株氟喹诺酮耐药菌株的gyrA基因在83位(ACC-ATC)有突变,导致氨基酸Thr-Ile的改变;有11株高耐药菌gyrA基因同时在87位(GAC-GGC)有突变,导致氨基酸Asp-Gly的改变;有14株耐药菌株的parC基因在87位有TCG-TTG突变,导致氨基酸由Ser-Leu的改变,未发现parC突变单独存在.结论 重症监护病房铜绿假单胞菌对美罗培南保持较高的抑菌活性;而亚胺培南和氟喹诺酮类药物的滥用,已造成细菌对其耐药率急剧升高,gyrA和parC基因突变与铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物密切相关.     

大肠埃希菌耐喹诺酮类药物回旋酶基因突变的研究

目的 研究导致大肠埃希菌DNA回旋酶A亚单位的基因变异耐喹诺酮类药物的机制。方法 收集3株大肠埃希菌耐药菌株及1株敏感株，用PCR方法扩增其回旋酶(gyraseA)基因，对扩增片段进行单链构象多态性分析(PCR--SSCP)及DNA序列分析。结果 PCR—SSCP发现3株耐药株其DNA单链与标准株及临床敏感株迁移率不同，3株耐药菌株存在Ser—83→Leu，Asp—87→Asn及His—184→Asn突变，Ser—83→Leu及Asp—87→Asn突变位于氟喳诺酮类药物耐药决定区，gyrA基因碱基552位点C→A碱基突变致组氨酸突变为天冬酰胺。结论 大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性与gyrA基因点的突变有关。     

志贺菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性及耐药机制研究

目的检测志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ基因突变存在与志贺菌喹诺酮类药物耐药性的相关性。方法用琼脂稀释法对60株志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关基因gyrA、gyrB、parC、parE,并对其中20株PCR扩增所得的阳性产物进行测序分析;分析志贺菌gyrA、gyrB、parC基因突变与喹诺酮类药物耐药性的关系。结果 60株志贺菌对萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率分别为90.0%、35.0%、28.3%和15.0%;测序结果显示gyrA、gyrB、parC基因突变率分别为85%、30%和100%,parE基因未发现突变。结论志贺菌对喹诺酮类耐药严重;靶基因突变是喹诺酮类药物耐药的主要机制之一,以DNA旋转酶GyrA基因突变为主,DNA拓扑异构酶IVparC基因突变次之。     

生殖支原体耐药现状及机制

生殖支原体对四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类药物均已出现耐药,且耐药率逐年增加,甚至出现了多重耐药的现象。大环内酯类药物的耐药主要由23S rRNA单碱基突变所致,氟喹诺酮类耐药与 parC、 gyrA、 gyrB、 parE突变相关,四环素类药物的耐药机制尚不明确。生殖支原体耐...     

耐喹诺酮类大肠埃希菌耐药机制的研究

目的探讨耐喹诺酮类大肠埃希菌的耐药机制。方法收集天津市第一中心医院2004年3月-2005年10月临床分离的大肠埃希菌,并随机选取40株作为研究对象,通过K-B药片试纸法和微量稀释法测40株目的菌株的耐药性;PCR扩增耐药株的gyrA QRDR区和parC基因,进行PCR-SSCP分析;同时,PCR扩增marOR基因,在耐药株中随机选取进行测序,检测marOR基因突变情况。结果37株对耐喹诺酮类菌株均出现了gyrA基因突变,除常见氨基酸改变外,还发现Asp87→Asn、Ala84→Pro;36株耐喹诺酮菌株发生了parC基因突变,只对萘啶酸耐药,对环丙沙星中介、氧氟沙星、加替沙星敏感的ECO24未出现parC基因突变;只对氟喹诺酮类耐药的ECO11未出现marOR区突变;存在多重耐药的ECO5 marOR区发现6处突变,且1 879 bp处的突变改变了marOR的终止密码子。结论gyrA和parC基因突变引起大肠埃希菌产生耐药,gyrA基因突变是产生对氟喹诺酮类耐药的主要原因,parC基因突变可引起菌株对氟喹诺酮类药物的高水平耐药,marOR的多位点突变在多重耐药机制中有一定的作用。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的耐药性及其机制研究

目的 探讨大肠埃希菌(ECO)对氟喹诺酮类药物的耐药率及耐药机制.方法 K-B法测定100株ECO对5种氟喹诺酮抗菌药物的耐药性,试管稀释法测定耐环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);错配PCR技术检测耐环丙沙星ECO gyrA基因和parC基因的突变.结果 100株ECO中耐环丙沙星有65株;环丙沙星MIC50、MIC90分别是32、128 μg/ml,左氧氟沙星MIC50、MIC90是16、64 μg/ml;基因位点结果显示,耐环丙沙星的65株中,有60株发生gyrA、parC一个或多个基因位点的突变,有5株未发生突变.结论 gyrA、parC基因突变是该地区ECO,对氟喹诺酮类药物耐药的重要机制,且基因突变位点越多其耐药程度越高.     

广东省2007年度非伤寒沙门菌监测及病原学特征分析

目的 了解广东省腹泻病患者中非伤寒沙门菌感染情况和菌株的血清型别、分布、耐药性变化.方法 对纳入研究的腹泻病患者进行非伤寒沙门菌检测,对分离到的菌株进行血清分型、药物敏感性试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 2007年度共检测1128份腹泻粪便标本,分离到71株沙门菌,阳性检出率为6.29%;共分得29种血清型,肠炎和鼠伤寒沙门菌居多;大多数沙门菌对常用的头孢类和喹诺酮类抗生素敏感,鼠伤寒沙门菌的耐药率普遍较肠炎和斯坦利沙门菌高;除肠炎沙门菌外,其余的血清型没有同一PFGE型别的菌株;用Xba Ⅰ酶切17株肠炎沙门菌可分为PFGE-XbaⅠ 1～8型,其中PFGE-XbaⅠ 4型为优势型别.用Sfi Ⅰ和Not Ⅰ酶对12株肠炎沙门菌进行再分型,综合用Xba Ⅰ/Sfi Ⅰ/Not Ⅰ三种酶的结果 发现仍有三组菌的PFGE图谱是完全一致的.结论 2007年度广东省非伤寒沙门菌的感染多数为散发病例,头孢类和喹诺酮类抗生素是治疗非伤寒沙门菌感染的首选药物.     

Correlation of fluoroquinolone resistance with expression of qnrA gene in Kluyvera spp

The objective of the present study was to examine whether the expression of qnrA may contribute to a high level of resistance among parent and induced strains of Kluyvera spp. Two clinical isolates of ciprofloxacin-resistant Kluyvera spp. were obtained from livers of diseased chickens, and upon induction with ciprofloxacin, six strains with increased resistance were produced. Point mutations in qnrA, aac(6')-Ib-cr, gyrA, gyrB, parC, and parE were investigated by polymerase chain reaction (PCR) amplification and DNA sequencing, and expression levels of acrAB and qnrA in all strains were investigated by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). The induced strains contained the same mutations in quinolone resistance-determining region as those of the parent strains. qRT-PCR showed that the expression of the acrA gene was not detected in any strain and acrB gene expression was unchanged between induced and parental strains. However, difference in expression of qnrA was observed, which correlated well with the level of quinolone resistance in the parent and induced strains. The induced high resistance was not affected by mutations in qnrA and aac(6')-Ib-cr, by new mutations in the quinolone resistance-determining region of gyrA, gyrB, parC, and parE, or by the expression level of acrAB. These data suggest that the expression of qnrA may be a factor contributing to the high level of resistance among parent and induced strains of Kluyvera spp.     

Plasmid-mediated quinolone resistance by genes qnrA1 and qnrB19 in Salmonella strains isolated in Brazil

Considering the importance of the mechanisms involved in quinolone resistance, this study evaluate the presence of PMQR in 126 epidemic and not epidemic strains of Salmonella spp. It was noted that presence of PMQR, by itself, did not generate resistance to ciprofloxacin; but detection of qnr genes in Salmonella spp. and the identification of the qnrB19 variant in a strain of poultry origin alert for the indiscriminate use of quinolones in poultry production, that can result in a pressure for mutant selection of resistant strains with a clinical limitation use of FQs in the near future. And last but not least, is the need to continued study of resistance mechanisms and to monitor the microbial resistance profile of epidemiological strains.     

环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究

目的探讨环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药的分子机制。方法10株临床分离的肺炎链球菌体外用不同浓度梯度环丙沙星逐级诱导成为耐药株,检测诱导前后菌株对环丙沙星的MICs,PCR扩增诱导前后菌株parC/parE和gyrA/gyrB基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)、测序并与GenBank公布序列比对。结果8株临床菌株成功诱导为耐药株,诱导后MICs是诱导前16倍以上,诱导后2株只发现parC/parE基因的QRDR有突变其耐药水平较低MICs分别为8μg/ml和16μg/ml,6株parC/parE和gyrA/gyrB基因的QRDR同时存在点突变耐药水平较高,MICs分别为64μg/ml和128μg/ml。结论逐步增加药物浓度可以诱导肺炎链球菌parC/parE和/或gyrA/gyrB基因的QRDR点突变导致对环丙沙星耐药。     

绍兴地区肠道外气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制

目的了解浙江绍兴市人民医院肠道外分离气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药现状,及其主要耐药机制。方法对临床分离的50株肠道外气单胞菌菌株进行喹诺酮类药物敏感性测试,用PCR扩增喹诺酮类耐药基因gyrA、parC、qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6')-Ib-cr,基因序列比对分析该地区gyrA和parC基因的突变情况,分析肠道外气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药表型和耐药基因的关联性。结果绍兴地区肠道外气单胞菌对萘啶酸(NA)的耐药率已高达82.0%(41/50),对环丙沙星(CIP)和左氧氟沙星(LVX)的耐药率都在50.0%左右。27株(54.0%)菌株对两种以上喹诺酮类药物耐药。qnrS和aac(6')-Ib-cr的阳性率分别为52.0%和18.0%。qnrS基因阳性菌株对NA、CIP、LXV耐药率均显著高于阴性菌株(P<0.05);aac(6′)-Ib-cr基因阳性菌株对CIP和LVX的耐药率显著高于阴性菌株(P<0.05),但对萘啶酸耐药性无明显差异。未检测出qnrA、qnrB和qepA基因。gyrA中主要存在Ser83→Ile,parC中主要存在Ser80→Ile变异。结论绍兴地区分离的肠道外气单胞菌对喹诺酮类药物表现高耐药性,染色体介导的靶位基因突变为其主要耐药机制,目前突变较单一。     

鲍氏不动杆菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药性分析

目的 分析临床分离的鲍氏不动杆菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药特点及耐药机制.方法 采用K-B纸片法测定33株鲍氏不动杆菌对喹诺酮类等21种抗菌药物的耐药性;用PCR技术扩增33株鲍氏不动杆菌的gyrA基因的耐药决定区,PCR产物经纯化后测序与GenBank中的标准序列比较,分析其突变情况.结果 33株鲍氏不动杆菌中,8株对环丙沙星耐药,占24.2％,4株对左氧氟沙星耐药占12.1％;对环丙沙星耐药的8个菌株均有gyrA基因突变,导致氨基酸变异为Ser-83→Leu,其中包括对左氧氟沙星耐药的4个菌株;所有对环丙沙星敏感的菌株未出现gyrA基因突变.结论 gyrA基因突变决定鲍氏不动杆菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药.     

2018—2021年北京市沙门菌血清型及喹诺酮类耐药表型和基因型分析

目的 分析2018—2021年北京市肠道门诊哨点医院分离到的沙门菌血清型及喹诺酮类药物耐药表型和耐药基因的流行情况。方法 采用玻片凝集法鉴定血清型;微量肉汤稀释法测定药物敏感性;全基因组测序数据通过与MLST和ResFinder数据库比对,查询ST型别和耐药基因。结果 228株沙门菌共检出42种血清型,51种ST型。其中肯塔基沙门菌、肠炎沙门菌和黄金海岸沙门菌等9种血清型比较常见。77株沙门菌（33.8%）对萘啶酸耐药;40株（17.5%）对环丙沙星和左氧氟沙星耐药;38株（16.7%）对吉米沙星耐药。不同血清型对喹诺酮类药物的耐药性不同。228株沙门菌共筛选出5种喹诺酮耐药基因:qnrS（23.7%）、aac(6’)-Ib-cr（8.3%）、qnrB（6.6%）、OqxAB（1.3%）和qepA（0.4%）;喹诺酮耐药决定区存在gyrA和parC的7种氨基酸突变:以parC:T57S（70.2%）最常见,其次是gyrA:D87N（14.9%）、parC:S80I（14.5%）、gyrA:S83F（14.5%）、gyrA:D87Y（7.9%）、gyrA:D87G（5.3%）和gyrA:S83Y（1.8%）。在组合突变中,以parC:S80I-gyrA:D87N-gyrA:S83F三突变,并伴随parC:T57S最多。耐药基因和突变位点在9种常见血清型中的检出率存在差异。结论 北京市沙门菌血清型及ST型种类繁多,携带喹诺酮耐药基因以qnrS、aac(6’)-Ib-cr和 qnrB为主,存在gyrA和parC多个位点突变并协同作用。应持续监测血清型和耐药性,以指导临床有针对性合理用药。