制备抗原肽所用宫颈癌细胞培养方法的建立及HLA表达的检测

目的 探讨制备抗原肽所用宫颈癌细胞的培养方法及检测其HLA的表达。方法 先利用CO2孵箱和普通培养瓶进行培养，测定其生长状况，然后流式细胞仪检测HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达，再用免疫荧光法检测不同浓度IFN-γ对Hela细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达和IFN-γ对不同培养时间Hela细胞HLA分子的表达。结果 IFN-γ能够明显提高对数生长期的Hela细胞HLA-Ⅰ类分子的表达，而IFN-γ刺激前后Hela细胞HLA-Ⅱ类分子的表达均为阴性。结论 本方法可缩短细胞培养时间，利用IFN-γ诱导细胞提高HLA-Ⅰ类分子的表达，为提供制备抗原肽所用宫颈癌细胞奠定了基础。     

苯乙酸钠增强肿瘤细胞表面HLA分子的表达

以分化绣导剂苯乙酸钠处理肿瘤细胞,以ELISA检测肿瘤细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子表达的变化。结果发现MCF-7、MDA-453、MKN-45以及Hela细胞表面HLA Ⅰ类分子表达较低,而MKN-28和3AO细胞表面HLA Ⅰ类分子高表达。MDA-453、MKN-28、MKN-45、Hela以及3AO细胞表面亦表达HLA Ⅱ类分子,而MCF-7细胞表面缺乏HLA Ⅱ类分子。苯乙酸钠能够诱导MCF-7细胞表面表达HLA Ⅱ类分子;增强MCF-7细胞表面HLA Ⅰ类分子,MDA-453、MKN-28、MKN-45、Hela以及3AO细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达。并且肿瘤细胞表面HLA Ⅰ类分子的表达与苯乙酸钠的作用时间和剂量呈正相关。     

卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子表达异常和TAP,LMP基因表达的关系

目的:肿瘤细胞表达MHCⅠ类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL进行肿瘤免疫治疗的关键,肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达异常是肿瘤逃脱免疫监视的重要机制.我们探讨了卵巢癌细胞HLAⅠ类分子表达异常的分子基础.方法:本文以West-ern blot、免疫组化和流式细胞术检测卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子的表达,以RT-PCR检测TAP,IMP基因的表达,探讨肿瘤细胞HLA Ⅰ类分子表达异常的分子基础.结果:卵巢癌中HLA Ⅰ类分子表达异常相当普遍(5/8),并涉及抗原加工相关基因TAP,LMP基因表达异常.25℃培养肿瘤细胞可部分诱导Ⅰ类分子的表达;结论:卵巢癌HLA Ⅰ类分子表达异常与其Ⅰ类抗原加工途径异常有关.     

重组hDCN对肝癌细胞株HepG2表面HLA分子表达的影响

目的研究peDNA3．1（＋）-核心蛋白聚糖（DCN）重组质粒对体外培养的HepG2细胞株表面HLAⅠ、Ⅱ类分子表达的影响,探讨DCN增强抗肿瘤免疫应答的作用。方法重组质粒pcDNA3．1（＋）-DCN转染HepG2细胞,用流式细胞术（FCM）检测转染前后HepG2细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达。结果HepG2细胞低表达HLAⅠ、Ⅱ类分子,经转染重组质粒作用后,HLAⅠ、Ⅱ类分子的荧光强度明显增强。结论rhDCN核心蛋白能上调肿瘤细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达,这一作用可能参与其抗肿瘤效应机制。     

γ-干扰素基因转染对宫颈癌细胞株细胞周期及表面抗原的影响

目的 :研究IFN γ基因转染对宫颈癌细胞表面抗原、细胞周期的影响 ,初步探讨IFN γ基因治疗抗肿瘤作用的机制。方法 :制备含人IFN γ基因的真核表达质粒pcDNA 3 IFN γ ,脂质体包浆后转染人宫颈癌HeLa细胞株 ,流式细胞仪检测基因转染后HeLa细胞表面HLA DR抗原表达、细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 :IFN γ基因转染后 ,HeLa细胞表面的HLA DR的表达量明显增强 (P <0 .0 1)。转染IFN γ基因促进了HeLa细胞的凋亡 (P <0 .0 5 ) ,细胞的S期比例随作用时间延长而呈逐渐降低趋势 ,显示了基因转染后DNA的合成代谢受到抑制。结论 :IFN γ基因转染可有效增强宫颈癌细胞表面抗原的表达 ,诱导机体产生抗肿瘤免疫应答 ;并可能通过抑制细胞DNA的合成 ,促进细胞的凋亡 ,抑制肿瘤细胞的增殖等机制发挥抗肿瘤作用     

肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达对NK抗性的影响及IFN-γ的调节作用

目的 探讨肿瘤细胞表面HLAⅠ类分子的表达与NK杀伤的关系及IFN－γ的调节作用。方法 用间接免疫荧光法检测7种肿瘤细胞表面HLA－ABC分子的表达;用鼠抗人HLA－ABC单抗封闭靶细胞后,观察NK杀伤的变化;用IFN-γ处理靶细胞后,观察瘤细胞表面HLA分子表达的变化及NK杀伤的变化。结果 不同肿瘤细胞株表达HLA－ABC分子的比例及荧光强度均不相同,除Karpas外,均表现为不同程度的下降。HLA－ABC表达阴性的K562细胞对NK杀伤最敏感,其他细胞的敏感性均有下降。肿瘤细胞表达HLA－ABC分子的表达多有不同程度的下降。用抗HLA单抗封闭相应位 点后,可使NK杀伤明显增强。用IFN－γ500U／ml处理48h后,白血病细胞K562、黑色素瘤细胞M21和高转移肺癌细胞PG表面HLAⅠ类分子表达明显增加,对NK杀伤的敏感性降低;而人T细胞淋巴瘤Karpas、髓样白血病细胞HL60和结直肠癌细胞HT29经处理后,HLAⅠ类分子表达无明显变化,对NK杀伤的敏感性反而明显增强。IFN－γ促进HL60和HT29细胞的凋亡。结论 NK细胞能识别HLA－ABC分子表达下降或缺陷的肿瘤细胞并发挥杀伤作用;INF－γ能恢复部分肿瘤细胞HLA－ABC分子的丢失,并能促进部分肿瘤细胞的凋亡,提高肿瘤对机体抗瘤机制的敏感性。     

肝细胞癌患者外周血性激素受体和糖皮质激素受体的含量

动物实验证实协同刺激分子CD80(B7-1)是促进抗肿瘤免疫应答的重要分子.本文应用RT-PCR,FACS技术检测了人肿瘤细胞系及EBV转化的B细胞CD80的表达,结果表明除Raji细胞、EBV转化的B细胞CD80阳性外,3AO、MCF-7、MDA-453、MKN-45、Hela细胞均为阴性.用我室建立的CD80逆转录病毒载体转染包装细胞PA317,筛选高滴度病毒上情感染人肿瘤细胞,得到CD80阳性表达的肿瘤细胞克隆.利用转染前后的人乳腺癌细胞系MDA-453作ICAM-I、HLA class Ⅰ、classⅡ分子表达的分析,结果表明转染有CD80基因的MDA-453细胞ICAM-Ⅰ、HLA classⅠ分子表达上调,class Ⅱ分子的表达未见改变.     

大肠癌与人类白细胞抗原表达

大肠癌在欧美国家发病率很高，在我国是十大常见恶性肿瘤之一，许多资料表明我国大肠癌发病率有逐年增高的趋势。人类白细胞抗原(human leucocyte antigen)是细胞表面标志之一，参与抗原递呈和T细胞激活的关键分子，在免疫应答和免疫调节中具有重要的作用。越来越多的资料表明肿瘤细胞表面的HLA-Ⅰ类抗原分子表达下降而HLA-Ⅱ类抗原表达上升。但是不同类型的肿瘤其HLA表达的情况和机制并不相同。     

流式细胞术检测肺癌组织HLA-ABC的意义

检测HLA—ABC（经典人类白细胞抗原Ⅰ类抗原）在肺癌组织的表达可为肺癌的免疫治疗提供指导。恶性转化的肿瘤细胞可通过不同的机制使其表面的HLA—ABC的表达缺失或下降，从而逃避机体的免疫监视。针对不同的缺失类型，其免疫治疗方案不同。如TAP缺陷造成的HLA—ABC整个分子缺失，可选择性使用某些细胞因子；而HLA单倍型缺失，染色体异常，则用基因治疗。非小细胞肺癌HLA—ABC表达低下在大多数研究中得到证实，但多采用免疫组化方法进行检测，费时费力且检测结果不一，同时对HLA—ABC表达低下的临床意义也存在着争议。针对以上问题，本实验采用流式细胞术（FCM）检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织HLA—ABC的表达，评价其对肺癌免疫治疗方案选择的意义。     

OVA66抗原肽与HLA-A2分子结合性和结合稳定性的研究

目的：建立利用T2细胞体外筛选肿瘤相关抗原OVA66中HLAA2限制性抗原肽表位的实验方法。方法：应用计算机预测获得OVA66抗原中多个不同分值的九肽分子，在不同浓度(0.2 μg/ml,2 μg/ml,5 μg/ml和20 μg/ml)下与T2细胞共同孵育4 h，并分别在其后的0，2,4 h测定T2细胞表面HLAA2分子的平均表达强度，抗原肽与HLAA2的亲和力以20％MFImax时的抗原肽作用浓度表示；抗原肽与HLAA2分子结合稳定性以MFI(4 h)/MFI(0 h)的百分比表示。结果：经计算机预测所获得的分值不同的4种候选OVA66抗原肽表位与T2细胞表面HLAA*0201的结合能力和结合稳定性显示出差别，并且与预测的分值不尽符合，其中L235和L238与HLAA *0201的结合力优于L236和L237。 结论：利用T2细胞可以在体外初步筛选获得与HLAA *0201具有高亲和力的抗原肽。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。