慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Fas基因、FasL（Fas蛋白配体）的变化

目的　本实验将探讨腹主动脉缩窄所致慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体 (FasLigand ,FasL)基因表达的变化 ,揭示二者与心力衰竭发展过程的关系。方法　以腹主动脉缩窄法建立大鼠慢性心力衰竭模型。 3 0只大鼠随机分成假手术组、手术左室代偿性肥厚组 (简称肥厚组 )及手术心衰组。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)观察发生心衰的大鼠和同期仅左室肥厚而未发生心衰的大鼠的心肌细胞凋亡情况 ,同时以免疫组化ABC显色法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化 ,以逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变 ,从而探讨心肌组织中Fas基因的蛋白与mRNA表达水平与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用。结果　假手术组心肌中仅有少许心肌细胞凋亡 ,实施手术的代偿性肥厚组与心衰组大鼠均有心肌细胞凋亡发生 ,但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组。大鼠经腹主动脉缩窄术后 4周 ,左室肥厚而未发生心衰的大鼠其心肌组织Fas蛋白阳性染色指数明显高于假手术组 ,但Fas配体蛋白阳性染色指数与假手术组间无显著性差异 ;而发生心衰的大鼠其心肌组织Fas及Fas配体蛋白阳性染色指数明显高于肥厚组 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5)。与假手术组和肥厚组相比     

氟美松对急性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡及Fas/Fas配体表达的影响

近来的研究表明,氟美松不仅可以抑制肿瘤坏死因子(ＴＮＦ)α等前炎症细胞因子的表达,而且还可以抑制肺泡上皮细胞凋亡及Ｆａｓ/Ｆａｓ配体(ＦａｓＬ)的表达[1]。本实验通过观察氟美松对急性肺损伤(ＡＬＩ)大鼠肺组织细胞凋亡及Ｆａｓ、ＦａｓＬ表达的影响,探讨其在全身炎症反应及ＡＬＩ中的作用机制及意义。一、材料与方法1.模型复制与分组:雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠78只,体重150～250ｇ。大鼠经1%戊巴比妥钠麻醉后,随机分成3组:(1)ＡＬＩ组:静脉注射脂多糖(ＬＰＳ)5ｍｇ/ｋｇ,注射ＬＰＳ后1、2、4、6、12和24小时活杀。(2)氟美松治疗组:在注射…     

移植胰腺再灌注后细胞凋亡及Fas表达的实验研究

目的 探讨胰腺移植再灌注后胰腺细胞凋亡发生的过程及凋亡相关基因Fas的表达。方法 将60只SD大鼠随机分成7组:假手术组(5只),冷缺血2小时组(I组,5只),冷缺血2小时再灌注1、3、6、9、12小时组(I/R1组、I/R3组、I/R6组、I/R9组、I/R12组,各10只)。HE染色后光镜及电镜观察各组胰腺组织的病理变化;流式细胞仪检测各组胰腺细胞的凋亡百分比;采用免疫组织化学方法检测各组胰腺组织中Fas蛋白的表达。结果胰腺移植后早期即可观察到细胞凋亡的典型改变,胰腺冷缺血再灌注后发生凋亡的高峰期为再灌注后3小时[凋亡率(AR)为(12.61％±2.94％),P<0.01],再灌注6小时较3小时细胞凋亡有所减少[AR为(6.35％±2.19％),P<0.01),再灌注9小时及12小时细胞凋亡进一步减少[AR分别为(3.67％±1.44％)及(3.33％±1.03％),P<0.05]。假手术组与I/R3组均未见Fas蛋白表达,I/R1组Fas(+);至I/R3组Fas表达增强为(++),以后各组表达有所下降。结论 细胞凋亡是胰腺移植后的早期事件,移植胰腺冷缺血再灌注后的凋亡高峰发生在再灌注后3小时;移植胰腺的细胞凋亡受基因调控,Fas基因可促进胰腺细胞的凋亡。     

卡维地洛对心衰大鼠心肌细胞凋亡和Fas/Fas L基因表达的影响

目的 探讨卡维地洛对心力衰竭大鼠心肌凋亡的发生及Fas/Fas L基因及蛋白表达的影响.方法 取SD雄性大鼠,采用结扎前降支方法建立慢性心力衰竭模型,将存活动物随机分为假手术组、心力衰竭组、卡维地洛组.观察血流动力学变化、心肌细胞凋亡、Fas/Fas L基因表达情况.结果 较心力衰竭组相比较,卡维地洛可显著降低心率、LVEDP、±dp/dt(P<0.05);同假手术组相比较心力衰竭组凋亡指数、Fas/Fas L蛋白表达明显升高,Fas/GAPDH明显增加(P<0.05).而卡维地具有降低凋亡和Fas/Fas L基因及蛋白表达的作用(P>0.05).结论 慢性心力衰竭大鼠的心肌中Fas/Fas L有蛋白和基因水平上调,心肌凋亡指数升高;而卡维地洛可有效抑制有Fas/Fas L蛋白和基因水平的上调而降低心肌细胞凋亡的发生,卡维地洛可能通过抑制心肌细胞凋亡途径而起到保护心功能的作用.     

白藜芦醇对砷中毒诱发乳腺上皮细胞凋亡的影响及机制分析

目的 探讨白藜芦醇对砷中毒诱发乳腺上皮细胞凋亡的影响及机制。方法 将小鼠乳腺上皮细胞NMuMG随机分为四组,对照组予常规的含10μg/mL胰岛素+10%胎牛血清的DMEM培养基培养,砷暴露组细胞先予常规培养基进行培养,待细胞长至75%融合后更换30μM的亚砷酸钠溶液,继续培养24 h;低浓度治疗组、高浓度治疗组细胞先在常规培养基时分别加入25μM、50μM的白藜芦醇进行预处理,其余操作同砷暴露组。通过共聚焦显微镜观察各组细胞的形态,采用TUNEL法检测各组细胞的凋亡水平,采用Western blot法检测各组细胞T-ERK、p-ERK、T-Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果 对照组NMuMG细胞均贴壁生长,细胞之间呈紧密连接,状态良好,而砷暴露组NMuMG细胞的间隙明显变宽,形状不规则,部分细胞已死亡、漂浮。低浓度治疗组和高浓度治疗组NMuMG细胞的状态介于对照组与砷暴露组之间,且高浓度治疗组细胞状态优于低浓度治疗组,呈剂量依赖性改变。四组NMuMG细胞的凋亡率、p-ERK、p-Akt蛋白的相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05),具体而言,砷暴露组>低浓度治...     

白血病NB4细胞凋亡过程中Fas蛋白和基因的表达及意义

目的探讨Fas蛋白及基因表达在三氧化二砷（As2O3）体外诱导急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞NIM凋亡过程中的作用。方法采用MTT法检测As2O3作用后NB4细胞增殖情况,流式细胞仪检测Fas蛋白表达,RT—PCR法检测Fas基因表达。结果经As2O3作用后,细胞增殖受抑,细胞凋亡明显,Fas蛋白及基因表达均升高。结论Fas蛋白及基因高表达在As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中起关键作用。     

慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Fas基因、FasL(Fas蛋白配体)的变化

目的本实验将探讨腹主动脉缩窄所致慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体(Fas Ligand, FasL)基因表达的变化,揭示二者与心力衰竭发展过程的关系.方法以腹主动脉缩窄法建立大鼠慢性心力衰竭模型.30只大鼠随机分成假手术组、手术左室代偿性肥厚组(简称肥厚组)及手术心衰组.采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察发生心衰的大鼠和同期仅左室肥厚而未发生心衰的大鼠的心肌细胞凋亡情况,同时以免疫组化ABC显色法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化,以逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变,从而探讨心肌组织中Fas基因的蛋白与mRNA表达水平与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用.结果假手术组心肌中仅有少许心肌细胞凋亡,实施手术的代偿性肥厚组与心衰组大鼠均有心肌细胞凋亡发生,但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组.大鼠经腹主动脉缩窄术后4周,左室肥厚而未发生心衰的大鼠其心肌组织Fas蛋白阳性染色指数明显高于假手术组,但Fas配体蛋白阳性染色指数与假手术组间无显著性差异;而发生心衰的大鼠其心肌组织Fas及Fas配体蛋白阳性染色指数明显高于肥厚组,差异有显著性意义(P＜0.05).与假手术组和肥厚组相比较,心衰组心肌组织Fas基因的mRNA表达也上调(P＜0.05).结论实验性心衰大鼠心肌细胞凋亡、Fas基因的蛋白与mRNA表达水平及FasL蛋白表达均增加,心肌细胞出现凋亡可能是心脏由代偿性心肌肥厚向心衰转变过程中的重要机制,心肌组织Fas水平的升高可能与这一改变有关,并可能是其促进因素;心肌细胞凋亡与Fas/FasL系统参与了慢性心力衰竭的发生、发展过程.     

大鼠胸主动脉球囊损伤对细胞凋亡及凋亡相关基因Fas、Bcl-2表达的影响

目的探讨大鼠胸主动脉球囊损伤后细胞凋亡和凋亡相关基因表达的变化规律。方法将30只400~500 g的雄性SD大鼠随机分为2组,手术组(n=24)行球囊扩张损伤大鼠胸主动脉术;对照组(n=6)不行球囊损伤,作为正常对照。分别于术后2、7、14、28 d取胸主动脉应用HE染色、TUNEL法、免疫组化和计算机图像分析仪进行形态学、细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡基因Fas;抗凋亡基因Bcl-2表达水平检测。结果对照组管壁处于非增殖状态;手术组球囊损伤后7 d形成新生内膜,血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活跃;14 d内膜明显增厚,但VSMC增殖已减弱;28 d内膜继续缓慢增厚,管腔明显狭窄。动脉损伤后Fas表达和TUNEL法测定的凋亡规律一致,两周内凋亡较明显,但细胞凋亡高峰时间(中膜7 d、内膜14 d)迟于增殖高峰(中膜2 d、内膜7 d),两周后凋亡与增殖均明显下降。动脉损伤后抗凋亡基因Bcl-2表达下调,在中膜和内膜分别在7 d1、4 d达最低水平,后回升,与凋亡基因Fas表达呈明显负相关(r=-0.878,P<0.001)。结论动脉球囊损伤后,平滑肌细胞的凋亡呈现规律性变化,可能在管腔狭窄的病理过程中具有重要作用。     

愈肾合剂对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及Fas、Fas-L表达的影响

目的探讨愈肾合剂对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响。方法诱发糖尿病肾病模型大鼠，每日灌喂愈肾合剂。8W后检测肾脏细胞凋亡情况。结果愈肾合剂能够明显干预细胞周期G0／G1期和S期的进程。降低PI，抑制细胞的过度增殖。下调Fas及Fas—L表达。减少肾脏细胞凋亡的数目。结论愈肾合剂能够有效的抑制肾脏细胞的凋亡。     

玉米苞叶对动脉粥样硬化家兔平滑肌细胞凋亡及p53和Fas蛋白表达的影响

目的：探讨玉米苞叶防治动脉粥样硬化（AS）的机制。方法：选用大耳白家兔，复制家兔AS模型，随机分为动脉粥样硬化模型组，玉米苞叶组和正常对照组，成模后给予玉米苞叶煎剂治疗，8w后处死家兔，采用流氏细胞术检测平滑肌细胞的凋亡率以及凋亡相关基因p53和Fas蛋白表达。结果：模型组血管平滑肌细胞的凋亡率明显高于对照组（P＜0．05），p53和Fas蛋白的表达增强（P＜0．05），主动脉壁肉眼观测出现典型斑块。玉米苞叶组平滑肌细胞的凋亡率明显低于模型组（P＜0．05），p53和Fas蛋白表达下调（P＜0．05）；主动脉斑块面积较模型组明显减小，结论：玉米苞叶通过调节p53和Fas蛋白表达而调节AS家兔平滑肌细胞凋亡。     

凋亡相关基因Fas/Fasl在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨Fas/FasL在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达与临床意义。方法采用免疫组化(S-P法)检测Fas、FasL在60例NSCLC和20例癌旁正常组织中的表达。采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 Fas在NSCLC中阳性率为46.7%(28/60),在正常肺组织阳性率为100%(20/20),差异性有统计学意义(χ2=14.359,P=0.000);高分化组中的阳性率为78.6%,在中、低分化组阳性率为37.0%,差异有统计学意义(χ2=7.468,P=0.006);TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的阳性率为57.5%,Ⅲ、Ⅳ期的阳性率为25%,差异有统计学意义(χ2=5.658,P=0.017);FasL在NSCLC中阳性率为68.23%(41/60),在正常肺组织中阳性率为15%(3/20),差异有统计学意义(χ2=17.239,P=0.000);伴有淋巴结转移者表达的阳性率为85.3%,不伴淋巴结转移者中的表达阳性率为53.8%,差异有统计学意义(χ2=10.431,P=0.001)。FasL与凋亡指数(AI)呈负相关(r=-0.702,P=0.000),Fas与AI呈正相关(r=0.732,P=0.000)。结论 Fas及FasL的表达与NSCLC的发生、发展关系密切;监测Fas/FasL可能有助于NSCLC分化程度、TNM分期及淋巴结转移的判断。     

TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡与磷脂酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶通路的研究

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸激酶(serine thre-onine kinase,AKT)通路在基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMC)凋亡中的作用和机制。方法(1)脂质体法将正、反义人TIMP-1(hTIMP-1)及空载体转染到大鼠肾小球系膜细胞。(2)Annexin V/PI双染法流式检测系膜细胞凋亡率。(3)Caspase9/Mch6Colorimetric Assay试剂盒检测Caspase9活性。(4)Western blot检测BAD、phospho-BAD、AKT、phospho-AKT蛋白水平。结果与对照组(1·06±0·08)%相比,正义转染组细胞凋亡率降低[(4·51±0·50)%,P<0·05],反义转染组凋亡率显著提高[(24·97±3·64)%,P<0·05],LY294002的加入可部分抵消TIMP-1的抗凋亡作用。TIMP-1的高表达可下调Caspase9活性(0·111±0·064,P<0·05),低表达可上调Caspase9活性(0·461±0·012,P<0·05)。正义TIMP-1能提高细胞phos-pho-BAD、phospho-AKT的蛋白水平,而反义TIMP-1的两种蛋白水平明显减少,且该作用可被LY294002阻断。结论(1)PI3K/AKT通路参与TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程。(2)BAD在其中起重要作用。(3)AKT对Caspase9的抑制亦起主要作用。     

Fas/Fasl表达与肺癌细胞凋亡关系的研究进展

Fas又名APO-1,现命名为CD95分子。Fas蛋白属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）及神经生长因子受体（NGFR）家族成员,是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,由胞外区、跨膜区、胞质区三部分组成。Fas胞质区介导细胞死亡,又称为死亡区（DD）。胞外段含有两个功能域：一个是N端的配体结合前聚集域（PLAD）,具有在结合配体前即促使Fas自身三聚化作用;另一个是紧接配体的结合域（LBD）,具有亲和结合Fasl的作用。Fas主要以膜受体形成存在,还可通过转录水平不同拼接产生可溶性Fas（sFas）分子,它可阻断膜Fas与Fasl结合而抑制细胞凋亡。     

Fas配体表达对甲状旁腺细胞移植的影响

目的探究睾丸细胞Fas配体(FasL)表达对联合移植的甲状旁腺细胞的影响。方法将不同数量的大鼠睾丸Sertoli细胞与同种的甲状旁腺细胞联合移植,观察移植物的存活情况;并对移植物进行细胞成分、淋巴细胞凋亡及甲状旁腺功能检查。结果单纯甲状旁腺细胞移植组,存活期为(17±4)天。睾丸Sertoli细胞与甲状旁腺细胞联合移植组存活时间延长,存活期可超过60天。当Sertoli细胞数增加到4×106时,在60天观察期内,8只鼠中的6只血清钙及PTH值维持在正常范围内(P<0.01)。移植物内可见甲状旁腺细胞、表达FasL的睾丸细胞及凋亡的淋巴细胞,甲状旁腺细胞仍具有旺盛的分泌能力。结论睾丸Sertoli细胞FasL的表达诱导了活化的淋巴细胞凋亡,对联合移植的甲状旁腺细胞起到了保护作用。     

参麦注射液和氨茶碱对慢性缺氧大鼠膈肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的　探讨参麦注射液和氨茶碱对慢性缺氧大鼠膈肌细胞凋亡及Fas/FasL基因蛋白系统表达的影响。方法　雄性Wistar大鼠 75只 ,随机分为空白组 (A组 )、参麦组 (B组 )和氨茶碱组 (C组 ) ,每组 2 5只 ,根据实验要求 ,3组再各分为缺氧前、缺氧 1周、2周、3周及 4周组 ,每组 5只。各组缺氧浓度均为 ( 10± 3 ) % ,7d/w ,8h/d ;B、C组在缺氧前分别注射参麦 ( 2ml/只 )、氨茶碱 ( 10mg/kg)。采用免疫组织化学及末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记 (TUNEL)法 ,检测各实验组Fas/FasL系统的表达及膈肌细胞凋亡 ,比较参麦和氨茶碱干预后对上述指标的影响。结果　 ( 1)A组膈肌细胞缺氧前Fas、FasL的表达阳性率分别为 ( 2 77± 0 45) %、( 2 3 2± 0 61) % ,缺氧后其表达随缺氧时间的延长而增加 ;经参麦干预后 ,B组在缺氧 1周、2周、3周、4周的Fas表达 [( 6 3 6±4 17) %、( 9 77± 4 12 ) %、( 18 0 2± 6 91) %、( 2 1 0 9± 8 0 9) % ]、FasL表达 [( 5 3 2± 6 16) %、( 9 58±3 79) %、( 12 0 1± 8 71) %、( 19 43± 10 3 1) % ]与A组同期比较差异有显著性 (P均 <0 0 5)。而氨茶碱对其表达的作用不明显 ,C组Fas表达 [( 10 87± 3 62 ) %、( 2 4 13± 3 79) %、( 3 5 3 9± 9 0     

强心合剂对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：阐述强心合剂治疗充血性心力衰竭大鼠可能的作用机制。方法：建立腹主动脉缩窄所致后负荷过重的模型。实验疗程结束后，分别用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数。RT—PCR法检测心肌细胞凋亡基因Bcl-2和Bax mRNA的表达，同时测量CHF大鼠左室重量指数(LVMI)，并分别以地高辛、卡托普利作为对照组进行比较。结果：强心合剂可降低左室重量指数(LVMI)。能调控心肌细胞凋亡基因Bcl-2和Bax mRNA表达，即促进Bcl-2mRNA表达，抑制Bax mRNA表达，明显抑制心肌细胞凋亡(心肌细胞凋亡指数显著下降)。其疗效与卡托普利组相当，且与地高辛对照组比较无统计学意义。结论：强心合剂可能通过调控凋亡基因而抑制心肌细胞凋亡，从而延缓或部分逆转心脏重构的发生、发展。     

慢性HBV感染时影响肝细胞Fas表达的因素

继往的研究显示Ｆａｓ分子是介导肝细胞凋亡与损伤的关键分子,肝细胞Ｆａｓ分子的表达强度与其组织学损伤程度相一致,因此,调节Ｆａｓ分子的表达必然有助于肝病的治疗,但是哪些因素影响肝细胞Ｆａｓ分子的表达至今仍不明确,本研究旨在阐述慢性ＨＢＶ感染时影响肝细胞...     

安心颗粒对心力衰竭大鼠细胞凋亡基因Bcl-2及Fas表达的影响

目的探讨安心颗粒防治心力衰竭的作用机制。方法将50只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、安心颗粒小剂量组、安心颗粒大剂量组,每组10只。采用阿霉素腹腔注射造模,各用药组同时灌胃给药。连续给药6周后,分别用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,用免疫组化法检测大鼠心肌Bcl-2,Fas蛋白的表达。结果安心颗粒能减少心肌细胞凋亡指数,促进Bcl-2蛋白表达,抑制Fas蛋白的过渡表达,其抑制细胞凋亡的作用与卡托普利相当。结论安心颗粒能够上调心肌细胞Bcl-2蛋白、下调Fas蛋白的表达,抑制心肌细胞凋亡,这可能是安心颗粒防治心力衰竭的作用机制之一。     

慢性阻塞性肺疾病患者血清Fas／Apo-1及TNF-α与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清可溶性（Fas）及（TNF-α）的变化及相关性。方法30例急性加重期和稳定期COPD患者、25例健康体检者，分别查血常规、测定肺功能，用EHSA法检测血清sFas及TNF-α浓度。结果发现COPD急性加重期组患者外周血中性粒细胞占白细胞总数百分比Neu／Leu％、sFas、TNF-α明显高于COPD稳定期组（P〈0．01，P〈0．05，P〈0．01）；COPD急性加重期组患者血清sFas、TNF-α明显高于健康对照组（P〈0．05，P〈0．01），且在急性加重期组中TNF-α与Neu／Leu％呈正相关（r=0．586，P〈0．05）。结论COPD急性加重期及稳定期sFas和TNF-α水平显著升高，提示凋亡参与了COPD的发病，可能是引起肺内炎症细胞浸润及肺实质破坏的主要原因之一。     

Fas在膀胱移行细胞癌外周血淋巴细胞的表达及意义

目的探讨Fas在膀胱移行细胞癌（TCC）外周血淋巴细胞中的表达及临床意义。方法采用流式细胞术检测TCC外周血淋巴细胞CD4^＋、CD8^＋亚群及NK细胞（CD56^＋）上Fas的表达。结果CD4^＋、CD8^＋亚群Fas表达升高,CD8^＋、Fas双阳性细胞在浸润性TCC患者较表浅性TCC增多,NK细胞（CD56^＋）上Fas表达无明显统计学意义。结论Fas在TCC外周血淋巴细胞CD4^＋、CD8^＋亚群中表达升高,可能对肿瘤细胞逃避自身免疫攻击起一定作用,同时可能影响了全身免疫系统。