β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机理。方法用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果10mmol/L谷氨酸作用PC12细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mLβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少乳酸脱氢酶渗漏;15、30μg/mLβ-细辛醚能明显降低谷氨酸引起的PC12细胞内钙离子浓度和细胞凋亡率。结论β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

石菖蒲有效成分配伍对Aβ损伤PC12细胞的保护作用

目的观察石菖蒲有效成分β-细辛醚和丁香酚组合对β-淀粉样蛋白毒性损伤PC12细胞的保护作用,探讨中药有效成分配伍的优越性。方法观察给药后PC12细胞形态、细胞存活率、细胞内Ca2 浓度和NO的变化。结果β-细辛醚10μmol/L 丁香酚3μmol/L组合能有效减少细胞内Ca2 浓度,抑制NO的产生,提高细胞存活率。结论石菖蒲有效成分的配伍,能更好地发挥保护PC12细胞免受β淀粉样蛋白毒性损伤的作用。     

β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响

目的:探讨β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响。方法:(1)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)3.3μM、Aβ_(1-42)10μM、Aβ_(1-42)30μM。采用实时无标记动态细胞分析技术(Real Time Cell Analusis,RTCA)和MTT法检测各组PC12细胞存活率;Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。(2)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)模型组、β-细辛醚18.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚55.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚166.7μg·mL~(-1)。采用Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。结果:(1)3.3μM Aβ_(1-42)能显著增加PC12细胞IL-1β和TNF-α的蛋白表达(P<0.05),对PC12细胞的存活率无显著影响(P>0.05)。(2)与正常对照组相比,Aβ_(1-42)模型组细胞的IL-1β和TNF-α的表达明显增加(P<0.01)。与Aβ_(1-42)模型组相比,β-细辛醚(55.5μg·mL~(-1)、166.7μg·m L~-1)能显著降低PC12细胞IL-1β、TNF-α的表达(P<0.01),β-细辛醚(18.5μg·mL~(-1))能降低PC12细胞IL-1β的表达(P<0.05),但对TNF-α的表达无显著影响(P>0.05)。结论:β-细辛醚可以有效地抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞分泌IL-1β、TNF-α的蛋白表达。     

β-细辛醚对小鼠脑组织基因表达谱的影响

目的：应用基因芯片技术，观察β-细辛醚对βALβ／c小鼠脑组织基因表达谱的影响。方法：将β-细辛醚用药组与空白对照组小鼠脑组织的mRNA分别用cy5、cy3荧光标记，混合后与4000条基因杂交于MGEC-40S小鼠表达谱芯片上，重复制作二张片,Genepix400B扫描仪扫描杂交信号荧光强度，GenepixPro3．0图象处理软件分析扫描结果。结果：在4000条基因中，二张片中两组都出现差异表达且比值大于1．9或小于0．59的基因共15条。β-细辛醚组有4条基因表达上调，11条基因表达下调。表达上调的4条基因主要与离子通道、细胞的跨膜物质变换、钙依赖性蛋白激酶调节、减少细胞凋亡等功能有关。而表达下调的11条基因主要与脑内兴奋性氨基酸的代谢、T淋巴细胞的趋化作用、细胞基因表达调控、药物代谢等功能有关。结论：β-细辛醚对脑组织多个靶基因有作用。     

β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35神经细胞毒性的保护作用

目的:优选β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35诱导的海马神经细胞的保护作用,确定三者最佳配比。方法:采用体外细胞培养的方法,通过NF染色鉴定,建立大鼠海马神经细胞Aβ25-35损伤模型。利用正交实验设计,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,确定最佳三种药物最佳配比;通过观察细胞形态,利用Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况。结果:L9(34)正交设计实验结果表明β-细辛醚(20,40,80μmol/L),丁香酚(2,4,8μmol/L),远志皂苷(10,20,40μmol/L)合用的最佳优化配比剂量分别为40μmol/L,2μmol/L,20μmol/L,可显著降低Aβ25-35(1μmol/L)诱导的神经细胞凋亡率(P<0.01)和LDH活性,提高细胞相对生存率。结论:三种药物联用可有效保护海马神经细胞免受β淀粉样蛋白的毒性损伤。     

RP-HPLC测定石菖蒲、水菖蒲药材中β-细辛醚、α-细辛醚的含量

石菖蒲具有开窍豁痰、化湿和胃、醒神益智等多种功效。其主要活性成分为β细辛醚、α细辛醚,具有解痉、抗惊厥和对戊巴比妥钠有协同等作用[1]。关于石菖蒲β细辛醚、α细辛醚成分的测定已有报道[2 ],本研究在此基础上,采用RP HPLC法测定石菖蒲、水菖蒲药材中β细辛醚、α细辛醚的含量。1　仪器与药品美国惠普公司HP10 50 -高效液相色谱仪;瑞士梅特勒公司AE -2 0 0型电子分析天平。β细辛醚对照品,自制(采用面积归一化法测定,其     

β、α细辛醚及石菖蒲挥发油对支气管哮喘的药效对比观察

目的对比研究β、α细辛醚及石菖蒲挥发油对支气管哮喘的药效作用。方法用卵蛋白(OA)雾化吸入致敏法复制豚鼠哮喘模型,造模7 d,再喷雾给药7 d后,喷入OA引喘,记录豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期;利用豚鼠离体气管片,观察记录药物对气管平滑肌的张力的影响。结果β-细辛醚、α-细辛醚及挥发油都有延长模型豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期的作用;均能拮抗组胺和乙酰胆碱松驰豚鼠气管平滑肌。结论β、α细辛醚及挥发油都有一定的抑制模型豚鼠哮喘发作的作用,三者都有对抗组胺或乙酰胆碱所致气管平滑肌收缩的作用。提示β、α细辛醚及石菖蒲挥发油都有一定的平喘作用。     

β-细辛醚灌胃和喷雾给药对哮喘模型豚鼠的平喘作用研究

目的:通过灌胃和喷雾两种给药方法,研究β-细辛醚对哮喘模型豚鼠的平喘作用。方法:通过卵蛋白雾化吸入致敏法复制豚鼠哮喘模型,造模7天后,各药物组分别以喷雾和灌胃两种方式给药,连续给药7天后引喘,记录豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期。结果:β-细辛醚采用喷雾和灌胃给药都有延长模型豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期的作用。虽喷雾剂量只是灌胃剂量的1/2,但喷雾给药时β-细辛醚的作用效果好于灌胃给药,其延长哮喘潜伏期能力和抗跌倒能力强于灌胃给药。结论:β细辛醚喷雾给药和灌胃给药都有一定的拮抗模型豚鼠哮喘发作的作用,喷雾给药比灌胃给药的效果更显著。     

β-细辛醚对阿霉素诱导乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的:探讨β-细辛醚对阿霉素(ADR)所致心肌细胞损伤的保护作用及机制.方法:分离培养出生1～3d大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、ADR(2.0 mg·L-1)模型组、β-细辛醚(10,20,40 mg·L-1)剂量组.72 h后,观察心肌细胞形态及搏动频率,MTT比色法检测细胞存活率,试剂盒检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,免疫组织化学法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bel-2相关蛋白(Bax)表达.结果:与正常对照组比较,ADR模型组心肌细胞皱缩变形,不规则,细胞间隙变大,搏动节律不齐,频率明显减慢;心肌细胞存活率明显减少;LDH漏出量增加;SOD活力降低;MDA含量增高;Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增高(P＜0.01或P＜0.05).与ADR模型组比较,β-细辛醚各剂量组心肌细胞形态较规则,细胞搏动频率规则、增高,呈现向心性同步化搏动;心肌细胞存活率明显增高;LDH漏出量降低;SOD活力增高;MDA含量降低;Bcl-2蛋白表达增高、Bax蛋白表达降低(P＜0.01或P＜0.05).结论:β-细辛醚对阿霉素诱导心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化及抑制细胞凋亡有关.     

石菖蒲的薄层鉴别及β-细辛醚的含量测定

目的 建立石菖蒲药材鉴定方法及质量控制标准.方法 以来源、薄层色谱鉴别石菖蒲药材,用HPLC法测定其有效成分β-细辛醚含量.结果 薄层鉴别中,石菖蒲供试品在与对照品相对保留时间相同的位置上,显相同颜色的斑点;HPLC法测得β-细辛醚在0.1～0.6 μg范围内线性关系良好,其回归方程为y=37158.2X-589.5,r=0.9997,平均回收率为96.78%(RSD=0.95%).结论 该方法简便可行、重复性好,可用于石菖蒲的质量控制.     

高效液相色谱法同时检测石菖蒲中β-细辛醚、α-细辛醚的含量

目的:建立石菖蒲药材中β-细辛醚、α-细辛醚的HPLC含量测定方法,并对石菖蒲药材进行质量评价。方法:采用岛津高效液相色谱仪,对样品的前处理方法、色谱柱、检测波长、流动相等分析条件进行了优化筛选,并对分析方法的线性范围、精密度、重复性、稳定性、准确度进行考察,建立同时检测β-细辛醚、α-细辛醚的石菖蒲药材质量控制方法。结果:采用Kromasil C18色谱柱,柱温35℃,流动相甲醇-水(含0.1%甲酸)(70∶30)等度洗脱,检测波长257 nm。回归方程β-细辛醚为Y=2×106X+205.93(r=0.999 9,0.026 96~0.539 2μg),α-细辛醚Y=6×106X-117.6(r=0.999 9,0.016 04~0.320 8μg);方法精密度β-细辛醚RSD 0.119%,α-细辛醚RSD 0.116%;重复性试验β-细辛醚RSD 0.877%,α-细辛醚RSD 0.815%;稳定性试验室温下20 h内样品中β-细辛醚RSD 0.42%,α-细辛醚RSD 0.25%;准确度β-细辛醚平均回收率为97.7%(RSD1.9%),α-细辛醚平均回收率为102.3%(RSD 1.5%)。所收集的石菖蒲样品中β-细辛醚含量1.12%~3.51%,α-细辛醚含量0.03%~1.01%。结论:该方法快速、准确、重复性好,可用于石菖蒲药材的质量评价。     

石菖蒲挥发油及β-细辛醚对心血管的保护作用

目的研究石菖蒲挥发油、β-细辛醚对心血管的保护作用.方法采用动脉粥样硬化试验、高粘血症试验以及心肌缺血试验,观察石菖蒲挥发油、β-细辛醚对动脉粥样硬化大鼠血脂、高粘血症大鼠血液流变学、异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠内皮素(ET)、一氧化氮(NO)及心肌组织坏死的影响.结果石菖蒲挥发油、β-细辛醚能明显降低动脉粥样硬化大鼠血脂(CHOL及LDL-C);能改善高粘血症大鼠的血液流变性;能降低心肌缺血大鼠ET水平、提高NO的含量,降低心肌组织损伤程度和坏死率.结论石菖蒲挥发油、β-细辛醚对心血管有明显的保护作用.     

β-细辛醚灌胃和喷雾给药对哮喘模型豚鼠的平喘作用研究

目的：通过灌胃和喷雾两种给药方法，研究β-细辛醚对哮喘模型豚鼠的平喘作用。方法：通过卵蛋白雾化吸入致敏法复制豚鼠哮喘模型，追模7天后，各药物组分别以喷雾和灌胃两种方式给药，连续给药7天后引喘，记录豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期。结果：β-细辛醚采用喷雾和灌胃给药都有延长模型豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期的作用。虽喷雾剂量只是灌胃荆量的1／2，但喷雾给药时β-细辛醚的作用效果好于灌胃给药，其延长哮喘潜伏期能力和抗跌倒能力强于灌胃给药。结论：β细辛醚喷雾给药和灌胃给药都有一定的拮抗模型豚鼠哮喘发作的作用，喷雾给药比灌胃给药的效果更显著。     

β-细辛醚对谷氨酸所致脑皮层神经元损伤的保护作用

目的:研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的离体培养皮层神经细胞损伤的保护作用。方法:运用新生乳鼠皮层神经细胞体外原代培养技术建立神经细胞谷氨酸损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、细胞内钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果:40 mmol/L谷氨酸作用皮层神经细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mlβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的神经细胞形态改变,提高细胞存活力、减少LDH渗漏、降低细胞凋亡率;15、30μg/mlβ-细辛醚能降低由谷氨酸引起的细胞内钙离子含量。结论:β-细辛醚对谷氨酸所致的皮层神经细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

β-细辛醚平喘作用的药效学研究

目的探讨β-细辛醚的平喘作用。方法豚鼠随机分成β-细辛醚高、中、低剂量组、阳性药物组(离体实验为氨茶碱,整体实验为地塞米松)和模型空白对照组,以豚鼠离体气管片实验和卵蛋白喷雾致喘整体实验,研究β-细辛醚的平喘作用。结果β-细辛醚可直接舒张豚鼠离体气管平滑肌;对整体哮喘模型,β-细辛醚能延长哮喘发作的潜伏时间,减轻症状发作的严重程度。结论β-细辛醚有平喘作用。     

含石菖蒲复方煎剂中β-细辛醚的含量测定研究

目的 通过测定治疗老年性痴呆症的含石菖蒲临床复方煎剂中β-细辛醚的含量范围,为石菖蒲的安全使用提供初步数据参考.方法 从文献中选用指迷汤、还少丹、黄连解毒汤3个复方,参照临床的实际煎法进行陶瓷保健壶、圆底烧瓶、陶瓷药煲3种煎煮工具进行煎煮,采用HPLC测定复方中β-细辛醚的含量.以Agilent ZORBAX ODS为色谱柱;甲醇-水(60∶40)为流动相;检测波长为253 nm;流速为1 mL·min-1;柱温为室温.结果 在日服临床用量中,指迷汤中β-细辛醚含量为33.30～57.53 mg,还少丹中β-细辛醚的含量为26.61～64.84 mg,黄连解毒汤中β-细辛醚的含量为25.18～50.51 mg.结论 治疗老年性痴呆中含有石菖蒲的临床复方中β-细辛醚含量范围约为25～65 mg,远低于报道的大鼠口服β-细辛醚LD50 1010 mg·kg-1,为石菖蒲的安全使用提供初步数据参考.     

β-细辛醚对肠癌细胞HT-29生物行为学的影响及机制

目的观察β-细辛醚对肠癌细胞株体外增殖抑制作用及其机制。方法①MTT法观察β-细辛醚对多种肿瘤细胞株的增殖的影响。②Transwell小室法,观察β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29侵袭的影响;③粘附实验观察β-细辛醚对HT-29粘附能力的影响;④AnnexinV/PI双染法研究β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29凋亡的诱导作用;⑤流式细胞仪检测β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29细胞周期的影响;⑥JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位水平的改变;⑦流式细胞仪检测β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29活性氧水平的改变。结果①β-细辛醚对多种肿瘤细胞株有不同程度的抑制作用(P0.05)。②β-细辛醚作用肠癌细胞HT-29后,细胞的侵袭和粘附能力明显降低(P0.05)。③β-细辛醚作用肠癌细胞株HT-29后出现明显的早期凋亡及细胞周期明显改变。④β-细辛醚作用肠癌细胞株HT-29后线粒体膜电位降低及内活性氧水平升高。结论①β-细辛醚对肠癌细胞有明显的增殖抑制作用,能降低肠癌细胞HT-29的粘附和侵袭能力。②β-细辛醚可诱导肠癌细胞凋亡,改变细胞周期,其机制可能与线粒体凋亡途径有关。     

石菖蒲挥发油中β-细辛醚在小鼠体内的吸收、分布和排泄研究

 目的 研究石菖蒲挥发油中β-细辛醚在小鼠体内的药动学。方法 采用气相色谱法测定β-细辛醚的血药浓度,色谱柱:HP-35毛细管气相色谱柱;程序升温:起始温度为30℃,6℃·min^-1升至220℃,保持5 min;进样口温度:250℃;检测器温度:320℃;进样量:2.0μL;无分流进样;溶剂:甲醇;载气:氦气;柱头压:5.5×10⁴ Pa;内标物:α-萘酚。结果 β-细辛醚与内标物的峰面积之比(y)与浓度(c)之间的回归方程为:y=0.018 89c+1.755×10^-3(n=6,r=0.999 9)。线性范围:0.04～40.0μg·mL^-1。小鼠全血中最低检测浓度为:0.04μg·mL<^-1。结论 小鼠灌胃石菖蒲挥发油后,β-细辛醚在体内的药-时过程为线性动力学过程,符合一级吸收二室模型,t_1／2(α)为6.5min,t_1／2(β)为93.6 min。     

β-细辛醚对于AD细胞模型的作用及对神经元突触功能可塑性的影响

目的 探索β-细辛醚对于阿尔茨海默病（AD）细胞模型的作用及其可能机制。方法 选用Aβ1-42的浓度为10umol/L作为建模条件,以NG108-15细胞为研究对象,建立体外AD细胞模型,并给予不同剂量的β-细辛醚进行干预,通过四唑盐（MTT）法检测细胞活力、并探讨β-细辛醚对细胞形态学的影响以及细胞突触的相关功能蛋白突触前蛋白(SYP) 、以及AMPA受体亚单位(GluR2)的表达。结果 MTT结果显示：β-细辛醚25umol/L干预24h后能显著减轻Aβ1-42的毒性损伤(p<0.05)。从细胞形态上看,细辛醚三个剂量组跟模型组差异显著,跟正常组没有明显差别。SYP相对表达量比较,正常组、β-细辛醚12.5 umol/L组以及β-细辛醚25umol/L组与模型组有显著性差异(p<0.05)。β-细辛醚12.5 umol/L组以及高剂量浓度25umol/L组的SYP表达量显著上调。GluR2相对表达量比较,实验各组两两比较都没有显著性差异(p>0.05)。结论β-细辛醚25umol/L组能显著改善细胞形态以及提高细胞活力,具有一定的神经保护作用,可能是通过上调SYP的表达,从而影响突触功能,改善认知。