高胆红素血症新生大鼠脑组织Tau蛋白的变化与细胞凋亡的关系

目的 观察微管相关蛋白Tau蛋白在高胆红素血症新生大鼠脑组织中的变化与神经细胞凋亡的关系,探讨高胆红素血症中枢神经损伤的发生机制,为高胆红素血症中枢神经系统损伤提供较为特异的早期检测指标.方法 新生7日龄SD大鼠90只.随机分为正常对照组(C组,n=10)和实验组(T组,n=80),T组又根据腹腔注射胆红素剂量的不同分为T1组和 T2组,每组40只.C组大鼠腹腔注射9 g·L-1盐水1.0 mL,T1组腹腔注射胆红素100 μg·g-1,T2组腹腔注射胆红素200 μg·g-1.各实验组根据造模结束后时间点不同(4 h、8 h、12 h、24 h)分为4组,每组10只.观察各组动物不同时间点的神经行为异常如抽搐、翻滚、俯伏、对外界刺激的逃避反应减弱等,取各组动物脑组织常规苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察其脑组织病理改变,免疫组织化学法动态观察其海马区Tau蛋白及p-Tau的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测其海马区神经细胞凋亡率.结果 HE染色可见C组大鼠海马区神经元排列整齐、结构完整,未见胆红素沉积;T组大鼠脑组织内可见不等量的胆红素沉积及神经元细胞数量减少、排列紊乱等.C组大鼠造模结束后未见明显的神经行为异常,T1组大鼠于造模结束后12 h出现翻滚、震颤、俯伏及对外界刺激的逃避反应减弱等表现,T2组大鼠行为异常表现较T1组明显.T组海马区神经细胞出现Tau蛋白表达增加及其过度磷酸化,并表现出时间-剂量依赖性;神经细胞凋亡率随Tau蛋白及p-Tau表达的增加而升高.结论 高胆红素血症时神经细胞发生凋亡增加,Tau蛋白的过度表达及过度磷酸化参与胆红素诱导的神经细胞凋亡,Tau蛋白可作为高胆红素血症早期脑损伤较为特异的检测指标之一,也可将阻止Tau蛋白的过度表达及其磷酸化作为胆红素脑病的治疗靶点之一.     

外周动静脉全自动同步换血治疗新生儿重症高胆红素血症20例临床观察

目的 评价小于两倍血容量的外周动静脉全自动同步换血治疗新生儿重症高胆红索血症的效果及相关影响因素.方法 对20例高胆红素血症患儿采用外周动静脉同步换血,换血前及换血后同一动脉采血进行血清总胆红素、血糖、血气、电解质(K+、Na+、Ca2+)监测.结果 换血后血清总胆红素较换血前明显降低,换血后平均胆红素下降率为29.92%,换血前后相比较K+、Ca2+有明显下降(分别为P＜0.05和P＜0.01),血清总胆红素显著下降(P＜0.01),Na+、血糖、pH值无显著差异(P＞0.05),血红蛋白明显上升(P＜0.05).按换血时间将患儿分为＜3 h与≥3 h两组进行比较,结果≥3 h组胆红素较＜3 h组明显下降,两组比较差异有显著性(P＜0.05).结论 小于两倍血容量换血对内环境影响相对较小,外周动静脉全自动同步换血安全性高,控制换血时间(≥3 h)可得到较高效率.     

胆红素脑病仔鼠血清S-100蛋白水平及其脑组织蛋白表达的动态变化

目的探讨胆红素脑病血清S-100蛋白(S-100)水平的变化及其意义。方法7日龄Wistar大鼠腹腔注射胆红素200 mg/kg,制备胆红素脑病动物模型。应用酶联免疫法动态观察胆红素脑病仔鼠血清S-100水平及免疫组织化学的方法动态观察胆红素脑病仔鼠不同时间点脑组织S-100蛋白水平。结果与对照组比较,造模后12 h仔鼠血清S-100水平升高(P<0.001),24 h达峰值,至72 h仍高于对照组,96 h降至正常组水平;造模后仔鼠不同时间点脑组织S-100蛋白的表达阳性面积的变化随时间变化逐渐增加。结论S-100可反映胆红素脑病仔鼠神经胶质的损伤程度,是判定胆红素脑病的可靠指标。     

胆红素对神经突触膜Na^＋,K^＋—ATP酶影响的实验研究

为了研究胆红素的神经毒性作用，对５９只出生２天的ＳＤ大白鼠分别予以腹腔注射不同剂量胆红素制造高胆红素血症动物模型，不连续密度梯度法分离提取脑神经元突触膜，测定Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力。结果：随着血清胆红素浓度的逐渐增加，脑组织中胆红素沉积量也逐渐增加，神经元突触膜Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力逐渐降低，Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力与脑组织中沉积的胆红素量呈负相关（ｒ＝－０．３４，Ｐ＜０．０１）。提示：胆红素对Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶具有抑制作用。     

脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶BmRNA在胆红素神经损伤豚鼠皮质及海马表达变化的实验研究

目的探讨新生豚鼠胆红素脑神经损伤时脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B的mRNA(TrkB mRNA)在大脑皮质及海马表达特点。方法取生后2～5 d的豚鼠60只,随机分为3组,每组各20只。T1组腹腔注射晶体胆红素100μg/g;T2组腹腔注射胆红素200μg/g;C组为对照组,腹腔注射生理盐水。分别在注射后4、8 h各处死10只。作脑组织切片,电镜、光镜观察病理改变;并采用免疫组化、原位杂交和图像分析,观察不同时间点BDNF、TrkB mRNA在皮质及海马表达变化。结果胆红素脑神经元损伤模型成功建立。在腹腔注射胆红素4 h时,皮质及海马的BDNF阳性细胞数降低,而TrkB mRNA阳性细胞数增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随时间延长至8 h时,皮质及海马的BDNF和TrkB mRNA阳性细胞数均较4 h时增加,差异有统计学意义(P均<0.05)。T2组与T1组比较,皮质和海马的BDNF和TrkB mRNA的阳性细胞数变化更明显。结论胆红素脑神经元损伤时,皮质和海马的BDNF、TrkB mRNA表达变化可能在抑制神经元凋亡和神经元修复中发挥重要作用,有利于减轻神经元损伤,以及神经元的修复和再生,这可能是胆红素脑神经元损伤时机体的自我保护机制之一。     

脑源性神经营养因子mRNA及其受体酪氨酸激酶B在胆红素脑损伤新生豚鼠皮质及海马的表达

目的 探讨新生豚鼠胆红素脑神经损伤时脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及其受体酪氨酸激酶B(TrKB)在大脑皮质及海马的表达特点.方法 取出生2~5 d豚鼠60只,随机分为3组,C组为对照组;T1组:腹腔注射晶体胆红素1 mg·kg-1;T2组:腹腔注射晶体胆红素2 mg·kg-1,分别在4 h、8 h处死.做脑组织切片,电镜、光镜观察其病理改变,并采用免疫组织化学、原位杂交和图像分析,观察不同时间点BDNF mRNA、TrKB在皮质及海马的表达变化.结果 胆红素脑神经损伤模型成功建立.1.C组BDNF mRNA和TrKB在皮质及海马也有少量的表达;2.随时间延长和损伤加重,T1组和T2组皮质及海马的BDNF mRNA和TrKB表达明显上升,4 h时T1组、T2组与C组比较,BDNF mRNA表达明显上升(P<0.05),T1组和T2组4 h和8 h比较,BDNF mRNA表达降低(P<0.05);3.TrKB在皮质和海马的表达也是随时间延长和损伤加重表达增加,4 h、8 h时T1组、T2组与C组比较,表达是增加的(P<0.05),T1组4 h、8 h与T2组8 h比较,TrKB的表达是降低的(P<0.05).结论 胆红素脑神经损伤中,皮质和海马BDNF mRNA、TrKB升高可能减轻神经元损伤,在抑制神经元凋亡和神经元修复中发挥重要作用,有利于神经元修复和再生,可能是胆红素脑神经元损伤时机体的自我保护机制之一.     

胆红素脑病动物模型制作与鉴定

观察３０例新生一周豚鼠腹腔给予胆红素１００μｇ／ｇ（Ｔ１组）、２００μｇ／ｇ（Ｔ２组）后４ｈｒ（Ｔａ组）与８ｈｒ（Ｔｂ组）时刻神经行为，血清胆红素，脑组织胆红素，脑组织ＡＴＰ、脑组织形态结构。结果显示：Ｔ１组与Ｔ２组在给药后４ｈｒ血清胆红素均达峰值，并显示脑组织胆红素沉积与ＡＴＰ含量下降；Ｔ２组在给药后８ｈｒ有明显神经行为变化，并显示脑组织超微结构改变。表明新生儿一周豚鼠腹腔给予胆红素１００－２０     

脂肪间充质干细胞及非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸对食物过敏幼鼠外周血中CD4~+CD25~+Treg的影响

目的观察脂肪间充质干细胞(ADSC)、非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸(CpG-ODN)对食物过敏幼鼠外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)的表达水平及免疫干预作用。方法将40只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、过敏组、ADSC治疗组(ADSC组)和非甲基化CpG-ODN治疗组(CpG-ODN组),每组10只;通过卵清蛋白(OVA)腹腔注射基础致敏和灌胃激发致敏建立小鼠食物过敏模型;对照组给予等量生理盐水替代;ADSC组在激发致敏前后两个时间点分别给予腹腔注射ADSC(1×10~6个/只);CpG-ODN组在每次灌胃激发前1 h给予腹腔注射非甲基化CpG-ODN(40μg/只)溶液。模型成功建立后对各组小鼠进行过敏症状评分;酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中OVA-IgE水平;流式细胞仪检测小鼠外周血中CD4~+CD25~+Treg水平;取各组小鼠空肠行苏木精-伊红染色,进行病理分析。结果过敏组过敏症状评分及血清中OVA-IgE水平均高于对照组(P0.05),ADSC组、CpG-ODN组过敏症状评分及血清中OVAIg E水平比较差异均无统计学意义(P0.05),但均低于过敏组,高于对照组(P0.01)。过敏组外周血中CD4~+CD25~+Treg水平低于对照组(P0.05),ADSC组、CpG-ODN组外周血中CD4~+CD25~+Treg水平均高于过敏组(P0.05),且与对照组比较及两组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。病理结果显示过敏组空肠黏膜层绒毛结构破坏、水肿,大量的嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润;ADSC组和CpG-ODN组空肠黏膜层绒毛结构部分破坏、无明显水肿,有少量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润。结论 ADSC和非甲基化CpG-ODN干预对食物过敏均有一定的治疗效果;均可提高食物过敏幼鼠体内CD4~+CD25~+Treg水平,同时降低OVA-IgE的表达水平,与诱导免疫耐受有一定的关联作用,且两种干预效果相当,但具体作用机制仍需要进一步探究。     

胆红素诱导原代培养神经细胞内Ca2+含量的变化及MgSO4的拮抗作用

目的　探讨胆红素诱导原代培养神经细胞内Ca2 + 含量的变化 ,以及MgSO4 的拮抗作用。方法　采用胎鼠大脑皮层细胞作原代神经细胞培养 ,观察 10 0 μmol/L胆红素对不同成熟程度神经细胞内Ca2 + 含量的影响。原代培养神经细胞经Fura- 2 /AM负载 ,荧光图像分析测定细胞内Ca2 + 含量。结果　未成熟神经细胞 (培养2天 )暴露于 10 0 μmol/L胆红素 4h ,细胞内Ca2 + 从 75 .3nmol增加到 32 0 .8nmol;继续暴露 4h ,细胞内Ca2 + 增加到 40 0 .7nmol;去除胆红素暴露 ,细胞内Ca2 + 不能逆转。成熟神经细胞 (培养 8天 )暴露于 10 0 μmol/L胆红素 4h ,细胞内Ca2 + 从 70 .6nmol增加到 15 0 .8nmol;继续暴露 4h ,细胞内Ca2 + 不再增加 ;去除胆红素暴露 ,细胞内Ca2 + 浓度可显著降低。培养液中Mg2 + 加至 2mmol/L可减轻胆红素诱导的神经细胞内Ca2 + 含量变化。结论　胆红素可诱导原代培养的、未成熟的神经细胞Ca2 + 超载 ,MgSO4 可拮抗胆红素诱导的神经细胞Ca2 + 超载。     

胆红素诱导原代培养神经细胞内Ca2+含量的变化及MgSO4的拮抗作用

目的　探讨胆红素诱导原代培养神经细胞内Ca2 + 含量的变化 ,以及MgSO4 的拮抗作用。方法　采用胎鼠大脑皮层细胞作原代神经细胞培养 ,观察 10 0 μmol/L胆红素对不同成熟程度神经细胞内Ca2 + 含量的影响。原代培养神经细胞经Fura- 2 /AM负载 ,荧光图像分析测定细胞内Ca2 + 含量。结果　未成熟神经细胞 (培养2天 )暴露于 10 0 μmol/L胆红素 4h ,细胞内Ca2 + 从 75 .3nmol增加到 32 0 .8nmol;继续暴露 4h ,细胞内Ca2 + 增加到 40 0 .7nmol;去除胆红素暴露 ,细胞内Ca2 + 不能逆转。成熟神经细胞 (培养 8天 )暴露于 10 0 μmol/L胆红素 4h ,细胞内Ca2 + 从 70 .6nmol增加到 15 0 .8nmol;继续暴露 4h ,细胞内Ca2 + 不再增加 ;去除胆红素暴露 ,细胞内Ca2 + 浓度可显著降低。培养液中Mg2 + 加至 2mmol/L可减轻胆红素诱导的神经细胞内Ca2 + 含量变化。结论　胆红素可诱导原代培养的、未成熟的神经细胞Ca2 + 超载 ,MgSO4 可拮抗胆红素诱导的神经细胞Ca2 + 超载。     

头部贴敷式亚低温对HIBD新生大鼠脑组织线粒体ATP酶活性的影响

目的：研究头部贴敷式亚低温治疗对缺氧缺血脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）新生大鼠的脑组织线粒体ATP酶活性的影响,以进一步探讨亚低温对缺氧缺血脑组织的保护机制。方法：将84只Wistar新生鼠随机分为4组：假手术常温对照组、假手术亚低温对照组、HIBD模型常温恢复组、HIBD模型亚低温治疗组。各组动物在HI后不同时间点（2,6,12 h）断头取脑,提取脑组织线粒体并测定其中Na+K+ATP酶和Ca2+ATP酶活性。结果①HIBD常温恢复组及亚低温治疗组在2,6,12 h时Ca2+ATP酶活性均呈下降趋势,分别为3.17±0.81,2.26±0.53,1.31±0.78 μmol/mgPr．h及5.25±0.61,4.59±0.81,4.61±0.62 μmol/mgPr．h,但亚低温治疗各组该酶活性均明显高于相应的常温组（P<0.01）。②HIBD常温及亚低温2 h组Na+K+ATP酶活性较之假手术组无明显改变,6 h、12 h组该酶活性明显低于假手术组,分别为3.76±0.78,3.12±0.53 μmol/mgPr．h及5.25±0.66、 4.74±0.80 μmol/mg Pr．h,但亚低温治疗组明显高于相应常温组（P<0.01）。结论 贴敷式局部亚低温可增加HIBD后脑线粒体ATP酶活性,保护脑组织。［中国当代儿科杂志,2007,9（4）：305-307］     

Development of Na+-K+-ATPase in neonatal rat brain synaptosomes after perinatal protein malnutrition.

Four protein dietary groups of rats were used in this study, namely: 27% casein diet fed throughout gestation and lactation (group C-C); 27% gestation, 10% lactation (group C-D); 10% gestation, 27% lactation (group D-C); 10% throughout gestation and lactation (group D-D). Mean body weight of group D-D at warning was 19 g compared with 59 g for group C-C. The specific activity of Na+-K+-ATPase in isolated synaptosomes from cerebral and cerebellar tissues increases throughout the lactation period. At 1 and 7 days of age no differences in Na+-K+-ATPase activity are noted in the brain regions of Groups C-C and D-D. At 14 and 21 days, however, the specific Na+-K+-ATPase activity was significantly reduced in isolated synaptosomes from both brain regions of the protein-deprived group. ATPase activity in cerebellar synaptosomes from dietary exchange groups (C-D and D-C) developed to the same extent as that of the control group (C-C) after 21 days of lactation. ATPase activity in the cerebral synaptosomes of the dietary exchange group (C-D) did not develop to the same extent as that in the control group (C-C) and the other dietary exchange group (D-C).     

宫内急性缺血缺氧后胎鼠肾脏钙离子腺苷三磷酸酶动态变化的研究

目的：研究宫内急性缺血缺氧后(HI)胎鼠肾脏钙离子腺苷三磷酸酶(Ca2+-ATPase)的动态变化,探索围产期窒息后肾损伤发生细胞内钙超载的机制。方法：通过钳夹孕21 d大鼠供应子宫的动静脉血管,制成胎鼠宫内不同程度HI模型和HI后再灌注不同时间模型。采用化学方法测定胎鼠肾脏细胞膜和线粒体Ca2+-ATPase的活性变化。结果：假手术组胎肾细胞膜和线粒体Ca2+-ATPase活性分别为(7.476±0.353)和(3.470±0.270) 微摩尔磷/毫克蛋白·小时(μmol.Pi/mgprot.h),宫内HI 15 min后Ca2+-ATPase活性均明显减弱,分别为(6.411±0.210)和(2.886±0.245) μmol.Pi/mgprot.h,(P0.05),但线粒体Ca2+-ATPase活性(3.234±0.143) μmol.Pi/mgprot.h,仍低于假手术组(P<0.05)。结论：宫内HI后胎肾Ca2+-ATPase活性的降低是发生细胞内钙超载导致肾损伤的重要机制。     

核因子-κB活性在大鼠脑水肿的变化及热休克反应对其影响的研究

目的　研究核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ） 在百日咳菌液致大鼠感染性脑水肿模型中的活性变化及热休克反应对其影响。方法　动物随机分为：①正常对照组（ＮＳ） ,②感染性脑水肿组（ＰＢ）,③热休克处理组（ＨＳ＋ ＰＢ）。取左大脑半球全层脑组织分别测定脑组织含水量,干脑组织钠、钾离子含量;采用电泳迁移率改变法检测各组神经细胞核内ＮＦ－κＢＤＮＡ－ 蛋白结合物活性的变化并做密度扫描定量分析。结果　ＨＳ＋ ＰＢ各组脑组织含水量明显低于ＰＢ组（ Ｐ＜０ ．０１）,ＨＳ＋ ＰＢ 各组Ｎａ＋ 含量明显低于ＰＢ组（Ｐ＜ ０．０１ 或Ｐ＜ ０．０５） ,Ｋ＋ 含量除２４ ｈ 之外,均明显高于ＰＢ组（ Ｐ＜０ ．０１） 。与正常对照组比较,２ ｈ 感染性脑水肿组ＮＦ－κＢ活性开始增加,并逐渐增高,以２４ ｈ 为最明显。热休克处理组各时相ＮＦ－ κＢ 活性均有不同程度减低。结论　大鼠感染性脑水肿时ＮＦ－ κＢ活性增加,热休克反应对大鼠感染性脑水肿的保护作用可能与抑制ＮＦ－κＢ的活性有关。     

Regional cerebral Na+K+ ATPase activity following octanoate administration

Sodium octanoate in an 0.2 M solution was administered to rabbits by continuous slow IV infusion over 4 hr. Controls were given identical infusions of normal saline. The animals were then sacrificed, brains were removed, and specific areas were isolated and assayed for Na+K+ ATPase activity. Significant inhibition of regional Na+K+ ATPase activity was detected in cortex, thalamus, hypothalamus, pons, and medulla of rabbits given octanoate when compared to controls.     

EFFECTS OF STABILIZERS IN PREPARATIONS OF HUMAN SERUM ALBUMIN ON THE SERUM BILIRUBIN IN GUNN RATS

ABSTRACT. Commercially available preparations of human serum albumin (HSA) containing stabilizers (i.e. 16 mmol/I Na caprylate plus 16 mmol/I Na N-acetyl- dl -tryptophan) were injected either s.c., i.p. or i.v. into homozygous infant Gunn rats. 30 min and 3 hours after s.c. injection, a serum bilirubin decline which surpassed dilution by the injected volume could be ascertained. It was mainly caused by N-acetyl- dl -tryptophan since s.c. injections of appropriate amounts of this substance alone or a mixture of both components of the stabilizer without HSA brought about similar results. HSA without these stabilizers had not such an effect. It is postulated that under these conditions Na N-acetyl- dl -tryptophanate displaced bilirubin from albumin bonds. It became obvious that after s.c. injection equilibration of HSA between skin and plasma was delayed, whereas Na N-acetyl- dl -tryptophan was rapidly transported to the blood. As for Na caprylate, a displacing effect of short duration could not be excluded by the experimental arrangement used, since the metabolism of the substance in the rat is very fast. When HSA and the stabilizers entered the plasma simultaneously (i.v. injection) no effect on serum bilirubin concentration could be proved 30 min and 3 hours later. All the bilirubin and the Na N-acetyl- dl -tryptophan present in the plasma at that time can be bound to the large amount of albumin which is directly given into the circulation of the animal. 30 min after i.p. injection of HSA preparations containing stabilizers a small decrease of serum bilirubin concentration could be recognized. It was less pronounced and less persisting than after s.c. injection. Probably equilibration of HSA between peritoneum and plasma went on faster than between skin and plasma. Only for a short period a lack of albumin binding sites in the plasma of the rat pointed to a surplus of Na N-acetyl- dl -tryptophan.     

Danger of bucolome in infants with hyperbilirubinaemia. Experimental evidence.

Effects of bucolome on congenitally jaundiced Gunn rats were examined. Plasma total bilirubin level fell immediately after a single injection of bucolome and the lowered level persisted for more than 6 hours. Plasma unbound-bilirubin level and cerebellar bilirubin content increased simultaneously with the drop in total plasma bilirubin level. Kernicterus was observed in the brains of the treated rats 6 hours after the treatment. LD50 of the drug in jaundiced rats was about 37 mg/kg, about one-tenth of the value in nonjaundiced rats. It is suggested that bucolome displaces bilirubin from albumin, transferring bilirubin from blood into tissues including the brain, and resulting in kernicterus. The use of bucolome in infants with hyperbilirubinaemia is inadvisable.     

肝酶诱导剂对高危儿胆红素和脑干听觉诱发电位的影响

目的：　探讨肝酶诱导剂早期干预对高危围产期新生儿(高危儿)胆红素水平和脑干听觉诱发电位(BAEP)的影响。方法：　应用苯巴比妥、尼可刹米口服方法进行早期干预。 86例高危儿随机分为干预组(Ⅲ组,44例)和未干预组(Ⅱ组,42例),同时以37例正常新生儿作对照组(Ⅰ组)。结果：　①生后96hⅡ组总胆红素[(249.0±75.2 ) μmol/L]显著高于Ⅲ组 [(181.0±54.1)μmol/L] (t =4.829,P<0.01) ,144h此差异更加显著[(308.0±93.1) μmol/Lvs (146.0±52.7) μmol/L] (t =9.985,P<0.01)。②Ⅱ,Ⅲ组BAEP异常率分别为69.1% ,18.2%,差异有显著性意义(χ2 =22.68,P<0.01)。结论：　肝酶诱导剂早期干预可明显降低高危儿胆红素水平和BAEP异常率