中国大陆不同地域阴道毛滴虫品系的研究 Ⅱ 蛋白质组分的SDS—PAGE分析

目的 比较中国大陆不同地域(北京、唐山、承德、九江)7株阴道毛滴虫可溶性蛋白差异。方法 应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)、VDS凝胶分析仪对7株阴道毛滴虫可溶性蛋白进行分析。结果 SDS—PAGE分离出18～24条蛋白带，7虫株共同蛋白带15条。分子质量在100ku以上者有2～6条，其余在16～97ku之间。结论 各地虫体蛋白质电泳图谱基本相似，但不同虫株蛋白条带数略有不同。     

不同地域阴道毛滴虫品系的同工酶电泳分析

目的研究中国大陆不同地域(北京、河北唐山、河北承德、江西九江)阴道毛滴虫7个分离株的生物学类型。方法用聚丙烯酸胺凝胶电泳(PAGE)、同工酶染色、聚类分析方法进行分析。结果检测MDH、LDH、G-6-PD、PGI、PGM等5种酶的同工酶。在G-6-PD、PGI酶谱中,7株完全相同。在MDH、LDH酶谱中,北京1株、北京2株、九江3株完全相同,而与承德株、唐山株、九江1株、九江2株不同。在PGM酶谱中,北京1株、北京2株完全相同,而与承德株、唐山株、九江1株、九江2株、九江3株不同。并依酶谱绘制系统进化树。承德株、唐山株、九江1株、九江2株与北京1株、北京2株、九江3株大多数同工酶谱存在显著差异,九江3株与北京1株、北京2株在5个同工酶谱中存在微小差异。结论我国阴道毛滴虫虫株可能至少存在3种不同的生物学类型。     

用聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向电泳分析阴道毛滴虫滋养体抗原

目的　研究阴道毛滴虫滋养体可溶性抗原。　方法　用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)、酶联免疫电转移印迹 (EITB)和双向电泳等方法 ,对阴道毛滴虫滋养体全虫可溶性抗原进行分析。　结果　 SDS- PAGE分离出 2 6条蛋白带 ,其中主带 9条 ,分子量 8条为 15～ 6 2 k Da、1条为 97k Da。EITB显示 2 4条带 ,仅在 75 k Da和2 2 k Da处缺如 ,其中主带 8条。双向电泳分离出 43个多肽斑点 ,多分布于 PI3.6 5～ 5 .84,分子量为 2 7～ >10 0k Da,其中有 9个主要多肽斑点。　结论　阴道毛滴虫滋养体可溶性抗原 2 6条蛋白带中 ,有 8条蛋白含量较高、免疫学反应较强。在 43个多肽斑点中有 9个多肽含量明显较高。     

阴道毛滴虫分泌型抗原电泳分析

目的研究阴道毛滴虫滋养体分泌型抗原,为阴道毛滴虫免疫诊断寻找特异性抗原。方法用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫移印迹（Western blot）方法,对阴道毛滴虫分泌型抗原进行分析。结果SDS-PAGE分离出9条蛋白带,分子质量单位为15.8-91.2ku,其中主带5条;Western blot显示7条带,在17.0和37.2ku处有2条带缺失。结论阴道毛滴虫分泌型抗原9条蛋白带中,有7条蛋白带特异性免疫反应较强,有望成为阴道毛滴虫免疫诊断的候选抗原。     

不同地域阴道毛滴虫分离株的随机扩增多态DNA技术分析

目的　分析比较阴道毛滴虫 7个分离株基因组DNA的遗传多态性。　方法　应用随机扩增多态DNA技术对阴道毛滴虫北京 1株、北京 2株、承德株、唐山株、九江 1株、九江 2株与九江 3株基因组扩增 ,并对扩增产物进行聚类分析。　结果　 7虫株两两间的遗传相似指数为 77.4%～ 94.7% ,遗传关系密切。其中 :北京 1株和唐山株为 89.2 % ,九江 1株和九江 2株为 92 .1% ,北京 2株和九江 3株为 94.7% ,亲缘关系较近。而九江 1株和承德株间遗传相似指数为77.4% ,同源性相对较低。　结论　 7株阴道毛滴虫遗传关系密切 ,但在基因水平上存在种内差异性 ;地理位置对阴道毛滴虫遗传学特性影响不大。     

阴道毛滴虫遗传学特性研究

阴道毛滴虫 (Trichomonas vaginalis)是Donne于 1836年从脓性阴道分泌物和男性泌尿生殖道分泌物中首次发现 ,1916年被确认为妇女滴虫性阴道炎的病原体。 1957年发现了有效的治疗药物甲硝唑(metronidazole)。 196 2年临床首次报道阴道毛滴虫对甲硝唑具抗药性。最新资料表明 ,人体感染阴道毛滴虫可增加对其他性传播疾病病原体的易感性, 感染免疫缺损病毒 (HIV)的机率增加 2～4倍 ,促进HIV在人群中广泛流行 。阴道毛滴虫作为一种性传播疾病病原体越来越受到人们的重视。     

阴道毛滴虫的治疗现状

阴道毛滴虫 (Trichmonas vaginalsi Donne,1837)是一种主要寄居于女性阴道和泌尿道的医学原虫。虫体形态多变 ,借助鞭毛、波动膜而活动。可引起女性的滴虫性阴道炎、泌尿道炎症。感染本虫的产妇 ,在阴道分娩的过程中 ,可将滴虫传染给婴儿。婴儿的感染主要表现于呼吸道和眼结膜的炎症。本虫也可感染男性泌尿和生殖系统 ,造成相应部位的炎症病变 [1 ] 。由于阴道毛滴虫在外界生存能力很强 ,在室温中的浴盆、浴衣、内裤、坐便器等表面能存活 0 .5～ 2 3h,因此极易传播[2 ] 。国外学者估计 ,全世界阴道毛滴虫感染者约有 1.8亿人。我国有统计报…     

阴道毛滴虫的研究进展

阴道毛滴虫是寄生在人体阴道及泌尿道的鞭毛虫 ,以性传播为主 ,主要引起滴虫性阴道炎 ,呈全球性分布 ,人群感染比较普遍 ,感染率各地不同 ,以女性 2 0～ 4 0岁年龄组感染率最高 ,平均感染率为 2 8% [1 ]。性罪错妇女、受 HIV感染的妇女和临床上可疑的 STD患者 ,其患病率远高于平均值 ,最高可达4 3.32 % [1～ 3]。很多男性不育症病人的配偶滴虫阳性率也明显高于正常妇女的感染率 [4 ]。1　致病阴道毛滴虫的致病力随虫株及宿主生理状态而变化。 (1)其粘附到人阴道上皮细胞上与之平行 ,根据其外形改变自己的形状 ,然后发挥细胞毒性作用。把…     

甲硝唑不同剂型抗阴道毛滴虫的效果

甲硝唑原药、膜剂和栓剂对阴道毛滴虫有抑制和致死作用，其最低致死浓度均为２５ｍｇ／ｍｌ。阴道毛滴虫在１．２５×１０４～２×１０５个／ｍｌ范围内随着虫数增加，药物杀虫率升高，虫数少时虫体死亡率低。甲硝唑的３种剂型对阴道毛滴虫长期保存株和新分离株具有同等的杀虫效果。甲硝唑膜剂杀虫速度比甲硝唑原药和栓剂快，并具有药量少，杀虫效果高的优点。     

阴道毛滴虫病毒介导的EGFP在阴道毛滴虫细胞内的表达

目的研究阴道毛滴虫病毒(Trichomonas vaginalis virus,TVV)介导外源基因进入阴道毛滴虫体内表达的能力,探索TVV作为双链RNA病毒转染载体的可能性。方法根据TVV基因组的序列特征,用绿色荧光蛋白(EG-FP)编码基因替换TVV的全部或部分基因编码区,构建TVV与增强型EGFP编码基因的嵌合体pTVV-EGFP,其体外转录体经电穿孔方法转染携病毒阴道毛滴虫株,RT-PCR及SDS-PAGE方法检测EGFP的表达情况。结果电穿孔转染后培养的虫体在荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,且续传15代后仍然存在;RT-PCR检测到EGFP的mRNA,SDS-PAGE检测到转染后虫体及培养上清中有分子质量单位为27 ku的蛋白,与已知EGFP的分子质量相符。结论TVV能成功介导外源性EGFP编码基因在阴道毛滴虫体内表达。     

苦参对阴道毛滴虫蛋白质差异表达的影响

目的寻找阴道毛滴虫的特异蛋白质并探讨苦参对其差异蛋白质表达的影响。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离阴道毛滴虫总蛋白质,凝胶用银染显色,PDQuest7.4.0软件分析。结果同组实验重复3次以上,其中正常对照组找到蛋白质点平均（435±17）个,匹配率为92.5%;苦参组找到蛋白质点平均（336±26）个,匹配率为85.6%。正常组和苦参组共有96个表达差异点,其中苦参组和正常组比较,只在正常组中表达的点有46个,只在苦参组中表达的点有27个,表达增加〉2倍的点有9个,表达降低〉0.5倍的点有14个。结论建立了阴道毛滴虫正常组和苦参组的双向凝胶电泳图谱,识别了96个差异表达的蛋白质。苦参杀灭阴道毛滴虫的作用可能与上述蛋白质的改变有关。     

阴道毛滴虫超微结构的进一步观察

透射电镜观察虫体纵切面呈圆形或卵圆形。体前1/3有一椭圆形细胞核,在核与副基纤维的背侧有高尔基复合体。体前的毛基体复合体由鞭毛周管、管壁内“C”形盾结构及5个毛基体三部分组成。由毛基体分别发出4根前鞭毛及1根后鞭毛,同时还发出1根肋和2根副基纤维。轴柱分头、干、尾三部分,匙形轴头来自盾-轴连合处,围绕细胞核一侧向虫体后端延伸,至核末端扭转成筒状轴干,最后成针状伸出体外。     

阴道毛滴虫标本染色方法的改进

作者在制作阴道毛滴虫染色标本中， 采用盖玻片推片， 在染液的配制、比例、 浓度、 pH值上作了适当的调整， 使虫体各部位着色清晰。此法简便、 快速、 染色效果好， 保存时间长。     

阴道毛滴虫AP65基因克隆与序列分析

目的对阴道毛滴虫黏附蛋白AP65基因的克隆与序列分析。方法提取阴道毛滴虫总RNA为模板，根据GenBank中发表的阴道毛滴虫黏附蛋白AP65序列设计一对引物，经RT-PCR得到与预计大小相一致的PCR特异性产物，将其克隆到pMD-18T载体后测序，并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析。结果目的基因片段长度为1704bp，其序列与阴道毛滴虫黏附蛋白AP65-3、阴道毛滴虫黏附蛋白AP65-2、阴道毛滴虫黏附蛋白AP65-1的同源性分别为97．2％、94．4％和86．7％。结论成功克隆出阴道毛滴虫AP65基因，与已发表的AP65-3序列的同源性最高，本研究为进一步研究阴道毛滴虫的致病机理，寻求更好的阴道毛滴虫病防治方法奠定基础。     

阴可净体外抗阴道毛滴虫的作用

阴道毛滴虫是致人体生殖泌尿系统感染的常见病原体，用甲硝唑治疗因有致癌性而受到了一定限制［１］。开发与发现新的抗阴道毛滴虫药物实属必要。祖国医学记载，阴道毛滴虫感染属下焦疾病中的阴蚀症，治疗宜清热利湿或养血祛风。阴可净是以上述辩证原则开发出的中药泡腾栓剂, 采用了芙蓉叶、白矾和艾叶等, 抗菌实验证明对各类厌氧菌、革兰氏阳性菌和阴性菌均有较强的作用, 临床上也有较好的疗效。泡腾栓采用聚氯乙烯硬脂酸等发泡剂为辅料,是一种作用迅速的新剂型。本文对其抗阴道毛滴虫的作用进行了探讨。     

有关阴道毛滴虫黏附过程的研究进展

滴虫病是常见的性传播疾病 ,世界每年约有12亿患者。我国近年来男性及女性感染率均有上升趋势 ,分别约占性疾病患者的1/ 4 。关于阴道毛滴虫的致病机制 ,目前研究较多的是有关虫体黏附宿主上皮细胞过程。这也是阴道毛滴虫能够感染并寄生于宿主细胞的关键性环节 。