青藤碱对THP-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察中药单体青藤碱(SIN)对脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞增殖、凋亡的影响。方法:培养的THP-1细胞经LPS1mg/L刺激2h后,分为SIN高(0.3mmol/L)、中(0.15mmol/L)、低(0.075mmol/L)剂量组及空白对照组,干预24h。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖情况,碘化丙啶染色流式细胞检测凋亡指数,吖啶橙(AO)/溴乙锭(EB)荧光显微镜观察细胞凋亡水平。结果:与空白对照组相比,SIN高(P<0.01)、中(P<0.05)剂量组细胞增殖明显降低,流式细胞检测SIN3个剂量组细胞凋亡率增高,AO/EB染色示SIN处理的细胞出现不同程度的核裂解和胞膜受损等凋亡现象。结论:SIN可能通过抑制单核细胞的增殖,促进其凋亡来达到免疫抑制和治疗类风湿关节炎的作用。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:观察青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC)凋亡的影响。方法:用不同浓度的青蒿琥酯刺激脂多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,HE染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:青蒿琥酯对系膜细胞凋亡有明显诱导作用,呈一定剂量依赖性。结论:青蒿琥酯能够剂量依赖性地诱导大鼠系膜细胞凋亡。     

Bcl-Xl基因反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的探讨BclXl基因反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌细胞株EC9706增殖和凋亡的影响。方法用阳离子脂质体介导bclxL基因ASODN转染EC9706细胞后,采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)检测EC9706细胞的增殖抑制率;逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹杂交检测BclXlmRNA和蛋白表达水平;吖啶橙荧光染色和流式细胞术定量检测EC9706细胞的凋亡率。结果MTT检测显示,BclXlASODN可显著抑制EC9706细胞的增殖(P<0.01),而且其对细胞增殖的抑制作用具有剂量依赖性;BclXlASODN对BclXlmRNA表达抑制率为57.29%。用吖啶橙荧光染色法和流式细胞检测ASODN组凋亡率(分别为31.13%±5.75%和30.5%,与细胞对照组、空白对照组及无关序列寡核苷酸组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论BclXl基因ASODN可有效抑制EC9706细胞的增殖,通过ASODN作用可下调BclXl基因表达,并显著促进EC9706细胞凋亡;BclXl基因有望成为食管癌基因治疗的新靶点。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的研究青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型(CIA)滑膜细胞凋亡的影响。方法原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平。结果青藤碱组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加。结论青藤碱治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

1,25（OH）2D3对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的探讨1,25一二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠系膜细胞增殖与凋亡及其相关基因Fas表达的影响。方法体外培养的大鼠系膜细胞,分为正常对照组(0 mol/L)和不同浓度1,25(OH)2D3干预组(10-10mol/L;10-8mol/L;10-6mol/L),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪,检测不同作用时间(24 h、48 h)下,系膜细胞增殖及凋亡情况,免疫荧光染色法观察干预24 h后,凋亡相关基因Fas的表达情况并测定各组荧光强度。结果与正常对照组相比,1,25(OH)2D3干预组,可明显抑制系膜细胞增殖,促进凋亡,并呈作用时间依赖性。同时免疫荧光染色证实干预浓度越大,系膜细胞内Fas表达增多,荧光强度增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 1,25(OH)2D3干预大鼠肾小球系膜细胞,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,Fas的表达增多,呈浓度和时间依赖性。     

大黄素干预高糖培养大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景:前期工作已经证实中药复方消可宁(制大黄、制附子、生黄芪)能有效防治早期糖尿病肾病并获得国家专利(专利号:200410064899X)。目的:观察大黄主要活性成分大黄素对高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法:用20,40,80μmol/L大黄素刺激高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果与结论:苏木精-伊红染色及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果显示大黄素对高糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡有影响,且与浓度与时间成正相关,细胞凋亡率组间差异有显著性意义(P<0.05)。提示大黄素可诱导肾小球系膜细胞凋亡,且与药物浓度及时间成正相关。     

大黄酸可影响高糖培养SD大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：含有大黄的复方中药消可宁能有效防治早期糖尿病肾病。目的：观察大黄酸对髙糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法：以20,40,80μmol/L浓度的大黄酸刺激髙糖培养的肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果与结论：苏木精-伊红染色及DAPI染色结果显示大黄酸可促进髙糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡,且与浓度与时间成正相关。各组肾小球系膜细胞的细胞凋亡率差异有显著性意义（P〈0.05）,表明大黄酸对髙糖培养的肾小球系膜细胞凋亡产生影响且与浓度及时间成正相关。     

大黄酸及大黄素诱导高糖大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：课题组前期实验证实中药复方消可宁能有效防治早期糖尿病肾病。目的：比较大黄酸与大黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响程度。方法：分别用不同浓度20,40,80μmol/L的大黄酸和大黄素刺激高糖培养的肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果与结论：苏木精-伊红染色及 DAPI 染色结果显示大黄酸对髙糖培养的肾小球系膜细胞凋亡的影响程度强于大黄素的影响程度。细胞凋亡率的对比显示大黄酸对髙糖培养的肾小球系膜细胞的早期凋亡率与晚期凋亡率均强于大黄素。说明低中高浓度的大黄酸、大黄素均可诱导肾小球系膜细胞凋亡,但大黄酸的药效强于大黄素。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的 研究青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型（CIA）滑膜细胞凋亡的影响。方法 原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平。结果 青藤碱组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加。结论 青藤碱治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

川芎嗪诱导肺癌细胞凋亡及其机制研究

目的探究川芎嗪对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养肺癌A549细胞,将细胞分为空白对照组(NC组)以及用不同浓度(200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)的川芎嗪处理人肺癌A549细胞实验组,用吖啶橙/嗅化乙锭(AO/EB)双荧光染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测A549细胞凋亡相关蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western Blot检测Fox M1的表达水平。转染过表达Fox M1质粒,用800μg/ml川芎嗪干预,分别用AO/EB双荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果相对于NC组,AO/EB双荧光染色结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,可见橘红色荧光的凋亡细胞,并且随着川芎嗪的浓度增加而增加,呈浓度依赖性。流式细胞仪检测结果显示川芎嗪干预的A549细胞凋亡数显著增加。WB结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,Bcl-2蛋白的表达水平下调,Bax蛋白的表达水平上调,呈浓度依赖。qPCR结果显示Fox M1 mRNA显著下降,WB结果同样显示Fox M1蛋白表达水平降低,并随着川芎嗪的干预浓度增加而下降,具有浓度依赖性。过表达Fox M1蛋白后,相对于阴性对照组,AO/EB双荧光染色结果显示肺癌A549细胞橘红色荧光减少,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率降低。结论川芎嗪能有效地诱导肺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与下调Fox M1蛋白表达有关。     

慢性肾衰大鼠肾小球细胞增殖凋亡的研究

目的:探讨肾小球细胞凋亡在肾小球硬化进程中的可能作用。方法:建立阿霉素肾硬化大鼠模型,检测其肾小球有核细胞计数。用RT-PCR方法和免疫组化法检测增殖细胞核抗原的表达,原位检测肾小球细胞凋亡指数。结果:疾病组各时间点增殖指数和凋亡指数明显升高(P<0.01),且均于12周达高峰,但疾病组4周和8周前者明显高于后者,而12周时,后者则明显高于前者。疾病组肾小球中凋亡指数与增殖指数呈密切正相关(P<0.05),有核细胞与肾小球细胞凋亡指数之间存在明显负相关,相关系数为0.7456。结论:实验性肾小球硬化大鼠中肾小球细胞凋亡是清除过度增殖细胞的一种机制,但过度的细胞凋亡又可能导致肾小球内固有细胞减少,加重肾小球硬化进展。     

氯沙坦阻断血小板源生长因子诱导的系膜细胞增殖活性的研究

目的探讨氯沙坦对系膜细胞增殖的影响以及对血小板源生长因子(PDGF)所诱导的细胞增殖作用。方法取传代培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的PDGF、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氯沙坦,用BrdU掺入法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的情况。结果PDGF和AngⅡ明显促进系膜细胞的生长(P<0.01);氯沙坦(10-7~10-5mol/L)有抑制系膜细胞增殖的作用(P<0.01),与维拉帕米联合使用则抑制作用更为明显;PDGF组加入氯沙坦后,系膜细胞增殖明显减弱,与单纯PDGF组比较,有显著差异(P<0.01)。结论PDGF具有明确的促进大鼠肾小球系膜细胞增殖作用。氯沙坦则抑制系膜细胞增殖活性,可能是通过阻断PDGF的诱导增殖作用而介导的。     

环孢素A对大鼠肾小球系膜细胞增生水平的影响

目的探讨环孢霉素A(CsA)对大鼠肾小球系膜细胞(MC)增生作用的影响.方法在体外培养的大鼠肾小球MC株中加入脂多糖(LPS)后,再分别加入不同浓度的CsA,设实验组1组:MC+LPS+CsA,设对照组2组:MC+LPS组和MC组,分别将上述3组命名为:CsA组,LPS组,MC组.采用MTT掺入方法,于24 h、48h,观察3组中MC增生水平.结果CsA组于48 h MC增生的抑制最为显著,CsA组MC增生水平明显低于LPS组(P<0.05)和MC组(P<0.05).结论CsA能抑制大鼠肾小球MC增生.     

环孢素A对大鼠肾小球系膜细胞增生水平的影响

〖目的〗探讨环孢霉素A(CsA)对大鼠肾小球系膜细胞(MC)增生作用的影响.〖方法〗在体外培养的大鼠肾小球MC株中加入脂多糖(LPS)后,再分别加入不同浓度的CsA,设实验组1组MC+LPS+CsA,设对照组2组MC+LPS组和MC组,分别将上述3组命名为CsA组,LPS组,MC组.采用MTT掺入方法,于24 h、48h,观察3组中MC增生水平.〖结果〗CsA组于48 h MC增生的抑制最为显著,CsA组MC增生水平明显低于LPS组(P＜0.05)和MC组(P＜0.05).〖结论〗CsA能抑制大鼠肾小球MC增生.     

青藤碱对人外周血单个核细胞的抑制作用及机制探讨

目的:探讨青藤碱对人外周血单个核细胞(PBMC)的作用,进而研究其抑制作用与凋亡的关系.方法采用MTT比色及磷脂酰丝氨酸外翻分析法.结果:青藤碱能够显著地抑制植物血凝素(PHA)和混合淋巴细胞激活的PBMC增殖,随着浓度的增加其抑制作用加强,环孢素A能够显著的抑制PHA激活PBMC增殖,加入低剂量的青藤碱后其抑制作用明显增加,青藤碱不能诱导PBMC的凋亡.结论:青藤碱通过抑制PBMC增殖来发挥免疫抑制作用,且与环孢素A有协同作用,但其作用途径不是通过促进淋巴细胞凋亡.     

盐酸青藤碱对Jeko-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨盐酸青藤碱对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡及AKT信号通路的影响。方法:应用四甲基偶氮唑盐方法(MTT)绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Caspase-3及Akt信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化。结果:盐酸青藤碱能明显抑制Jeko-1细胞株的增殖,Jeko-1细胞经终浓度为0、1、2和4 mmol/L盐酸青藤碱作用24 h后,凋亡率分别为(2.21±1.05)%、(11.29±2.42)%、(18.79±2.84)%和(31.05±3.52)%,其差异有统计学意义(P0.01);Western blot检测发现,细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、Caspase-3蛋白表达上调,Akt信号通路相关蛋白中Akt表达无变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K蛋白磷酸化水平降低。结论:盐酸青藤碱可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制有可能通过下调Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,从而抑制Akt信号通路,促进细胞凋亡。     

环孢素A对大鼠肾小球系膜细胞增生水平的影响

目的探讨环孢霉素A(CsA)对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)增生作用的影响。方法在体外培养的大鼠肾小球MC株中加入脂多糖 (LPS)后 ,再分别加入不同浓度的CsA ,设实验组 1组 :MC +LPS +CsA ,设对照组 2组 :MC +LPS组和MC组 ,分别将上述 3组命名为 :CsA组 ,LPS组 ,MC组。采用MTT掺入方法 ,于2 4h、48h ,观察 3组中MC增生水平。结果CsA组于48hMC增生的抑制最为显著 ,CsA组MC增生水平明显低于LPS组 (P <0 .0 5 )和MC组 (P <0 .0 5 )。结论CsA能抑制大鼠肾小球MC增生。     

RNAi-chk1在抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长作用的实验研究

目的观察chk1-RNAi联合放疗对Lewis肺癌细胞的抑制及凋亡情况。方法以脂质体Lipofectimine-2000介导,将chk1-536的siRNA表达载体转染小鼠Lewis肺癌细胞株,将其分为空白对照组、错义序列组、siRNA组,2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组。应用MTT法检测转染细胞抑制率、流式细胞术分析转染siRNA后细胞的凋亡,并应用RT-PCR检测转染细胞chk1-mRNA表达水平。结果 chk1-siRNA转染联合辐射组的Lewis肺癌细胞,与对照组相比较生长增殖受抑制、细胞凋亡增加;MTT法检测和流式细胞术分析示:chk1-siRNA转染联合辐射组的Lewis肺癌细胞生长增殖受抑制,细胞凋亡增加(P<0.05);同时,RT-PCR法检测该组细胞中chk1mRNA表达量下降(P<0.05)。并且siRNA转染可增加2Gy照射引起的Lewis肺癌细胞凋亡。结论针对chk-1的RNAi可以提高Lewis肺癌细胞的抑制率及放疗引起的肿瘤细胞的凋亡,对肿瘤有治疗作用,与放疗有协同作用。     

黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响

目的:从细胞水平观察黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响,拟验证黄芪皂甙对系膜细胞增殖影响与其浓度的相关性.方法:实验于2006-12/2007-07在辽宁医学院生理实验室完成.取高糖培养的第4～7代大鼠肾小球系膜细胞,随机分为对照组,黄芪皂甙50,100,200mg/L组4组,分别给予等量的高糖培养液及50,100,200mg/L黄芪皂甙,在给药后培养48 h,用MTT比色法检测细胞增殖程度,流式细胞仪检测细胞周期.结果:①MTT法显示培养48 h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的吸光度值A490nm低于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递减.②流式细胞仪检测显示培养48h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的G0/G1值高于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递增.结论:在一定质量浓度范围(50～200 mg/L)内,黄芪皂甙可抑制肾小球系膜细胞增殖,阻止细胞周期进程.     

柚皮素对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡的作用研究

目的探究柚皮素对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞株(HMCL)凋亡的影响。方法将HMCL细胞随机分为HMCL组、脂多糖组、脂多糖+柚皮素低浓度组、脂多糖+柚皮素中浓度组和脂多糖+柚皮素高浓度组。除HMCL组外,其余各组均用脂多糖诱导HMCL细胞凋亡,并分别予不同浓度的柚皮素处理细胞。采用CCK8检测细胞增殖情况,Hoeschet染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫印迹检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达水平。结果与HMCL组比较,脂多糖组细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率及Caspase-3和Caspase-9的表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);与脂多糖组比较,不同浓度的脂多糖+柚皮素组细胞增殖倍数显著升高,细胞凋亡率及Caspase-3和Caspase-9的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论柚皮素通过降低凋亡相关蛋白的表达抑制脂多糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡。