选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

三氧化二砷增强TRAIL杀伤人A549细胞的作用及机制研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Survivin、Caspase-3 mRNA表达变化。结果 As2O3有抗肿瘤活性,IC50值为(42.44±0.66)μmol.L-1;As2O3与TRAIL联用时IC50值为(7.04±0.19)μmol.L-1;As2O3协同增强TRAIL的抗肿瘤活性,CDI值为0.94。联合药物组作用48h后,随As2O3浓度增高Survivin mRNA的表达降低,Caspase-3mRNA的表达增强。结论 As2O3是有效的化疗药物,通过下调Survivin mRNA的表达,上调Caspase-3 mRNA的表达,逆转A549的耐药性,协同TRAIL增强对肺癌细胞的杀伤作用。     

三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用。方法用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与BEL-7402细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb)mRNA表达;ELISA法测定细胞α-FP含量;免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达;Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达;可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力;荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Annexin-Ⅴ和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数。结果LH-37在10μmol·L-1~1mmol·L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P<0·05或P<0·01),10μmol·L-1和1·0μmol·L-1的LH-37使细胞Alb mRNA表达量增高,α-FP mRNA和蛋白质表达量明显下降,Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加,Caspase-3阳性细胞明显增加;药物浓度达100μmol·L-1作用48h后,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率高于对照组(P<0·05)。结论三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

硒-甲基硒代半胱氨酸对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,探讨其分子机制.方法用不同浓度的MSC处理培养的HepG2细胞,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法和流式细胞仪分别检测其对细胞生长和细胞周期的影响,软琼脂生长试验观察瘤细胞恶性表型的变化,并检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性.结果25 μmol·L-1的MSC处理HepG2细胞24 h后,细胞生长受到明显抑制,出现S期阻滞和细胞凋亡,呈现浓度和时间依赖关系.软琼脂生长试验显示MSC抑制HepG2细胞在软琼脂上的生长能力.RT-PCR和Caspase-3的活性检测显示,25 μmol·L-1 MSC处理HepG2细胞24、48 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了38%和47%,而Caspase-3活性分别升高(39.61±6.65)%和(118.73±6.48)%;50 μmol·L-1 MSC处理HepG2细胞24、48 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了53%和82%, 而Caspase-3活性分别升高(80.66±9.31)%和(152.67±7.95)%.结论MSC抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡,瘤细胞的恶性程度减弱,这种表型变化与Cyclin D1的表达减弱和Caspase-3的活性增强有关.     

紫草素衍生物Z7对Burkitts淋巴瘤CA-46细胞的作用

目的 本研究探讨紫草素衍生物Z7对Burkitts淋巴瘤细胞株CA-46增殖及凋亡的作用.方法 运用MTT比色法检测紫草素衍生物Z7对细胞增殖的抑制作用,DNA片段化、Caspase-3酶活性检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase家族蛋白表达变化.结果 紫草素衍生物Z7能明显抑制CA-46细胞株的增殖,作用48 h后的IC50为(0.835±0.086 3)μmol/L;高浓度组可见到典型的DNA凋亡梯带;药物组的Caspase-3活性显著升高;Western blot可见Caspase-9、Caspase-3蛋白表达下调,PARP蛋白上调.结论 紫草素衍生物Z7对CA-46具有抑制增殖及诱导凋亡的作用,其作用机制可能与激活线粒体通路有关.     

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)方法检测PESV对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞术观察PESV对细胞周期的影响,免疫组织化学方法(IHC)检测PESV干预后,Survivin,Capase-12及p27蛋白水平表达的变化,Westernblot检测survivin蛋白含量水平。结果:MTT结果显示,PESV在40 mg.L-1以上对卵巢癌SKOV3细胞增殖有抑制作用(浓度为40 mg.L-1时,增殖抑制率为34.66%),且随剂量加大作用增大,呈现剂量效应关系;流式细胞术检测细胞周期显示,PESV干预后,处于S期的细胞减少,处于G0/G1期的细胞增多;免疫组织化学检测显示:PESV干预后,SKOV3细胞p27表达上调,表达Survivin的肿瘤细胞减少,而表达Caspase-12的细胞显著增加。DDP干预后,仅发现Caspase-12的细胞表达增加。Western blot检测结果显示,PESV组survivin蛋白表达量下降。结论:PESV对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有抑制作用,其机制是通过抑制细胞增殖周期进行及促进细胞凋亡。     

存活素蛋白表达下调对卵巢癌细胞侵袭能力影响的实验研究

目的通过存活素(Survivin)反义寡核苷酸(ASODN)转染下调人卵巢癌细胞株SKOV3中Survivin蛋白表达,观察细胞侵袭能力的改变,探讨Survivin蛋白表达可能在调节卵巢癌细胞侵袭能力中的作用。方法用脂质体(LipofectamineTM2000)介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,流式细胞学技术检测细胞转染率及其Survivin蛋白表达,Transwell小室检测细胞侵袭能力的改变。结果LipofectamineTM2000介导ASODN人卵巢癌细胞株SKOV3转染,FCM检测转染率>95%。用600 nm/L ASODN转染48 h后,细胞中Survivin蛋白表达明显下调(t=7.8146,P<0.01),侵袭细胞数也明显下降(t=27.416,P<0.01)。结论卵巢癌细胞中Survivin蛋白表达下调,可降低卵巢癌细胞侵袭能力,提示Survivin蛋白可能是影响卵巢癌侵袭能力的重要分子,在卵巢癌转移机制中起关键性作用。     

鱼藤素上调 Kruppel样因子 15表达影响卵巢癌 SKOV细胞的增殖和凋亡

目的探讨鱼藤素对卵巢癌 SKOV细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法本研究于 2019年 3月至 2020年 3月进行,鱼藤素作用 SKOV细胞后,细胞计数试剂盒 -8(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别对细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1(P21)、细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)及 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、 Kruppel样因子 15(KLF15)蛋白表达水平进行检测,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 KLF15 mRNA表达水平。转染 KLF15过表达载体上调 SKOV细胞中 KLF15表达后,上述相同方法观察上调 KLF15表达对 SKOV细胞增殖、凋亡及 CyclinD1、P21、Bcl-2和 Bax蛋白表达的影响。结果鱼藤素作用 SKOV3细胞后,细胞活性( 0.49±0.04、0.39±0.03、0.30±0.02)、 CyclinD1(0.53±0.05、0.45±0.05、0.21±0.03)及 Bcl-2(0.40±0.04、0.24±0.02、0.16±0.01)蛋白表达水平降低( P<0.05),细胞凋亡率［(6.63±0.69)%、(12.71±1.06)%、(20.27±2.25)%］、 P21(0.23±0.02、0.46±0.04、0.74±0.03)、 Bax(0.20±0.02、0.36±0.02、0.55±0.05)蛋白表达水平升高, KLF15 mRNA和蛋白表达水平升高( P<0.05)。上调 KLF15表达后, SKOV3细胞活性、 CyclinD1及 Bcl-2蛋白表达水平降低( P<0.05)细胞凋亡率、 P21及 Bax蛋白表达水平升高( P<0.05)。下调 KLF15表达后,鱼藤素作用的 SKOV3细胞活性、 CyclinD1及 Bcl-2蛋白表达水平升高( P<0.05)细胞凋亡率、 P21及 Bax蛋白表达水平降低( P<0.05)。结论鱼藤素可抑制卵巢癌 SKOV3细胞增殖,并诱导 SKOV3细胞凋亡作用机制与上调细胞中 KLF15表达有关。     

普伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞P38促分裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞(MC)p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路的影响。方法大鼠MC分别培养在正常糖5.5mmol·L-1(正常对照组),高糖25mmol·L-1(高糖组),葡萄糖25mmo.lL-1+p38MAPK特异性抑制剂SB203580(SB)10μmol.L-1,及葡萄糖25mmol·L-1+普伐他汀(PV)100μmol·L-1。ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤连蛋白(FN)含量;Phospho-ELISA法检测胞浆及胞核内p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达;以及RT-PCR法检测p38MAPK mRNA的表达。结果与正常对照组比较,高糖组MC合成基质蛋白Col-Ⅳ,FN增多;胞浆及胞核内p-p38MAPK的表达增加。SB或PV干预能部分或完全逆转这一变化。与高糖组比较,SB干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(16.75±1.93)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.47±1.27)vs(12.01±0.85)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞浆及胞核内p-p38MAPK表达显著下调。PV干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(14.97±3.04)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.57±1.27)vs(11.99±0.98)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞核内p-p38MAPK表达显著下调,但对胞浆内p-p38MAPK的表达则无显著影响。各组总p38MAPK蛋白水平及p38MAPK mRNA表达则没有明显改变。结论PV能够显著下调高糖培养的MC胞核内p38MAPK信号传导通路的活化,进而减少胞外基质合成,达到对糖尿病肾病的治疗作用。     

雷公藤甲素诱导人肝细胞凋亡的机制

目的 探讨雷公藤甲素诱导人肝细胞L-02凋亡的机制.方法 将L-02细胞分为对照组和雷公藤甲素50 nM实验组,处理48 h后,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)的荧光强度,试剂盒检测细胞色素C的浓度以及半胱天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)和Caspase-3的活性,Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)的表达.结果 与对照组相比,实验组细胞存活率下降,细胞凋亡率上升,Bcl-2表达下调,Bax表达、细胞色素C浓度、ROS荧光强度、Caspase-9和Caspase-3活性均明显上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 雷公藤甲素可以抑制L-02细胞的存活,通过激活线粒体凋亡途径促进L-02细胞凋亡,下调Bcl-2与Bax比率,促进细胞色素C释放,诱导ROS生成,进一步破坏线粒体膜,增加细胞色素C的释放,激活Caspase-9和Caspase-3介导的细胞凋亡通路,最终诱导细胞凋亡.     

衣霉素联合奥沙利铂对人口腔癌KB细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨衣霉素(tunicamycin,TM)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OPH)对人口腔癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制。方法 MTT法检测药物对KB细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对KB细胞增殖的影响;碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染流式细胞仪检测KB细胞凋亡;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性变化;Western blot检测:Caspase-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达。结果不同浓度衣霉素和(或)奥沙利铂对人口腔癌KB细胞具有增殖抑制作用,0.125μmol.L-1衣霉素处理人口腔癌KB细胞的24、48、72 h后细胞的存活率分别为90.37%、89.44%、88.91%。0.125μmol.L-1衣霉素与1μmol.L-1奥沙利铂联合使用对人口腔癌KB细胞24、48、72 h的存活率低于单用衣霉素、奥沙利铂组,分别为50.78%、37.77%、23.24%;0.25μmol.L-1衣霉素可增强奥沙利铂抑制人口腔癌细胞KB的集落克隆形成的作用。0.5μmol.L-1衣霉素诱导KB细胞48 h的凋亡率为8.3%。0.5μmol.L-1衣霉素与1μmol.L-1奥沙利铂联合刺激人口腔癌细胞KB 48h的凋亡率为50.3%,高于奥沙利铂本身诱导的凋亡率24.6%。衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组Caspase-3的活性及表达。结论衣霉素具有增强L-OPH抑制人口腔癌细胞增殖的作用,并增强奥沙利铂诱导人口腔癌细胞的凋亡,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加Caspase-3的活性。     

氧化苦参碱诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用的实验研究

目的　探讨氧化苦参碱对卵巢癌细胞SKOV3诱导凋亡作用。方法　采用MTT法、DNA凝胶电泳、生长曲线、荧光染色等实验技术研究氧化苦参碱在体外对SKOV3细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。结果　氧化苦参碱对SKOV3细胞生长有明显的抑制作用 ,且这种抑制作用呈浓度依赖性。细胞经 0 189mmol·L-1和 0 3 78mmol·L-1的氧化苦参碱作用 48h后 ,即呈现典型的细胞凋亡形态学变化和DNA片段的梯形条带。结论　氧化苦参碱在一定浓度下能诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡     

戊地昔布对人胃癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨选择性环氧化酶 2 (COX 2 )抑制剂戊地昔布对人胃癌BGC 82 3细胞的作用及其作用机制。方法　用MTT法检测戊地昔布对人胃癌BGC 82 3细胞生长的作用 ,用流氏细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,用激光共聚焦显微镜、透射电镜和DNA片段进一步检测细胞凋亡 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)试剂盒测定BGC 82 3细胞的LDH含量。结果　戊地昔布 (2 5～ 4 0 0 μmol·L-1 )可时间和浓度依赖性抑制人胃癌BGC 82 3细胞的生长 ,作用 72h后 ,对细胞生长抑制率可达 2 4 0 %～ 92 0 % ,凋亡率由 (2 6± 0 7) %增加到 (7 6±1 5 ) %～ (1 6 5± 1 5 ) %。 1 0 0～ 4 0 0 μmol·L-1 也降低增殖指数 ,减少细胞周期S期细胞 ,增加G0 /G1 期细胞。随浓度增加 ,戊地昔布引起的LDH释放率有增加趋势 ,但只有 4 0 0μmol·L-1 戊地昔布可显著增加LDH释放率。结论　戊地昔布可通过诱导凋亡和细胞周期停滞而抑制人胃癌BGC 82 3细胞生长 ,4 0 0 μmol·L-1 戊地昔布抑制BGC 82 3细胞生长作用与细胞坏死有关     

苦参碱对U251胶质瘤细胞的增殖抑制和原癌基因表达的影响

目的　探讨苦参碱对胶质瘤细胞株 (U2 5 1细胞株 )的抑制作用及其作用机制。方法　用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对U2 5 1细胞的增殖抑制 ,流式细胞仪观察苦参碱对U2 5 1细胞周期的影响 ,RT PCR观察原癌基因C myc表达的变化。结果　苦参碱对U2 5 1细胞增殖抑制作用成剂量依赖性 ,当浓度为 0 10g·L-1时 ,对U2 5 1细胞增殖的抑制率达到 5 3 7%± 6 0 %。流式细胞仪分析显示 ,用 0 10g·L-1苦参碱培养 3d ,细胞周期中G0 /G1期所占比例增高 ,S期占细胞周期的比例减低。RT PCR结果显示 ,随着苦参碱作用剂量的增加 ,C myc基因的表达被明显抑制。结论　苦参碱对人胶质瘤细胞系U2 5 1的增殖具有明显的抑制作用 ,并对原癌基因C myc的表达具有抑制作用     

高三尖杉酯碱对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的　探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法　采用MTT法检测增殖抑制率和IC50 ,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和Hoechst 3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡。结果　不同浓度的HHT分别处理CNE 2Z细胞 2 4、48和 72h ,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增高 ,其IC50 分别为(0 62 9± 0 0 3 9)、(0 483± 0 0 2 7)、(0 3 89± 0 0 2 7)mg·L-1,各IC50 间差异有统计学意义 (P <0 0 1)。 1、0 5mg·L-1HHT处理细胞 8h ,流式细胞术观察到凋亡峰 ,荧光染色可见凋亡形态学改变 ,流式细胞术和荧光染色检出的凋亡率均高于对照组 (P <0 0 1) ;1mg·L-1HHT处理细胞 8h ,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论　HHT对CNE 2Z细胞具有增殖抑制作用 ,此抑制作用具有剂量和时间依赖性 ;HHT可诱导CNE 2Z细胞凋亡     

丹皮酚对人肝癌BEL-7402细胞凋亡和COX-2、Survivin、XIAP、c-IAP1表达的影响

目的研究丹皮酚(paenonal,Pae)对COX-2及凋亡抑制蛋白Survivin、XIAP、c-IAP1表达的影响,探讨其诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的作用机制。方法应用MTT法检测不同浓度的Pae对体外培养的人肝癌BEL-7402细胞增殖抑制作用,流式细胞术和原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫细胞化学技术检测COX-2、Survivin、XIAP、c-IAP1的表达情况。结果 Pae可以明显抑制BEL-7402细胞的增殖,并随着剂量的增加和时间的延长,该抑制作用增强,经7.81、15.63、31.25、62.5mg·L-1Pae作用72h后,其抑制率分别为20.54%、25.74%、33.04%、57.97%(P<0.01或P<0.05);TUNEL染色可见典型的凋亡形态学特征包括染色质凝集、边集化,呈新月形聚集于核膜下;流式细胞仪检测用药组凋亡率明显高于对照组,Pae浓度为7.81、15.63、31.25、62.5mg·L-1时,其凋亡率分别为(1.75±0.32)%、(8.26±0.95)%、(12.46±1.37)%、(25.07±1.87)%、(37.52±2.56)%。与对照组相比,免疫细胞化学分析显示,COX-2、Survivin、XIAP、c-IAP1表达明显下调(P<0.01)。结论 Pae对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与通过下调COX-2的表达并与抑制survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关。     

泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:将泛素蛋白酶体抑制剂MG-132加入胃癌细胞SGC7901,用四氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测生存素的表达。结果:MG-132对胃癌细胞有显著的抑制作用,24,48h的IC50分别为80.9,9.1μmol·L-1;MG1325.0μmol·L-1作用胃癌细胞24,48,72,96h后,细胞凋亡率分别为(4.2±s0.6)%,(30±4)%,(47±6)%,(53±6)%,生存素在胃癌细胞中呈高表达,经MG132作用后,表达明显降低。结论:MG132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并下调生存素的表达。     

泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素表达的影响

目的:研究泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素(survivin)表达的影响。方法:将泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132加入食管癌细胞Eca9706中,采用MTT法测定细胞生长抑制率,经流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测survivin的表达。结果:MG-132对食管癌细胞生长具有显著抑制作用,作用24、48、72、96h后的IC50分别为120.2、18.1、—12.2、—16.9μmol/L;5.0μmol/L的MG-132作用于食管癌细胞24、48、72、96h后,细胞凋亡率分别为(3.1±0.4)%、(31.7±3.5)%、(50.4±4.8)%、(66.6±6.2)%;Survivin在食管癌细胞中呈高表达,经MG-132作用后,表达明显降低。结论:MG-132能显著抑制食管癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin表达有关。     

RNAi抑制MCF-7细胞survivin基因及对多西他赛敏感性影响

目的利用RNAi技术抑制乳腺癌细胞株MCF-7sur-vivin基因,观察MCF-7细胞株的细胞凋亡率、survivin蛋白表达及对多西他赛(docetaxel)药物敏感性的变化。方法以培养的乳腺癌MCF-7细胞株为体外研究模型,设对照组、空载体组及RNAi组进行实验。(1)半定量RT-PCR、Western blot法检测survivin mRNA、蛋白在各组细胞中的表达;(2)用流式细胞术分析各组细胞周期及细胞凋亡率的影响;(3)用MTT法分析多西他赛对各组细胞存活率作用的浓度。结果(1)RT-PCR检测结果显示,RNAi组survivin扩增条带(134bp)明显弱于空载体组及对照组,mRNA相对含量较空载体组明显下降(75.4%),差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测空载体组与对照组survivin蛋白条带明显存在,且基本一致,而RNAi组同样位置的条带基本消失(79.8%);(2)RNAi组细胞阻滞在G0/G1期,与空载体组和对照组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05);(3)MTT比色法检测结果显示,不同浓度多西他赛处理后对照组、空载体组、RNAi组的IC50分别为(124.7±0.21)、(116.9±0.25)、(15.2±2.8)μg.L-1,RNAi组MCF-7细胞对多西他赛的药物敏感性增高(P=0.000)。结论RNAi明显抑制了survivin在转录及翻译水平的表达;RNAi抑制survivin基因表达,能明显提高乳腺癌MCF-7细胞对多西他赛的药物敏感性。