结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术诊断艾滋病患者肺结核的临床应用评价

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)技术诊断艾滋病患者肺结核的应用价值。方法:回顾性分析2017年7月至2019年11月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的226例疑似肺结核的艾滋病患者的临床资料。分别进行痰涂片荧光染色显微镜下检查、BACTEC MGIT 960液体培养(或罗氏固体培养)和Xpert MTB/RIF检测,并分析在艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断MTB感染和利福平耐药的灵敏度和特异度。结果:226例疑似肺结核患者中,痰培养阳性94例(41.6%),其中MTB阳性51例(54.3%),非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria,NTM)阳性43例(45.7%)。以痰分枝杆菌培养阳性且结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原阳性为金标准,Xpert MTB/RIF技术诊断MTB的灵敏度为72.6%[95%可信区间(confidence interval,CI)66.7%~78.4%],特异度为97.1%(95%CI 95.0%~99.3%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阳性患者MTB的灵敏度为76.7%(95%CI 67.7%~85.8%),特异度为90.0%(95%CI 83.6%~96.5%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阴性患者MTB的灵敏度为50.0%(95%CI 41.8%~58.2%),特异度为99.3%(95%CI 97.9%~100.0%)。18例患者同时检测利福平表型和基因型耐药,以表型耐药为金标准,Xpert MTB/RIF技术检测利福平基因型耐药的灵敏度为75.0%,特异度为100.0%。结论:艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断肺结核的灵敏度和特异度均较高,且能快速区分MTB和NTM,具有较好的应用价值。     

Xpert MTB/RIF对结核性胸膜炎的诊断价值研究

目的探讨Xpert MTB/RIF对胸水中结核分枝杆菌的检出情况,评价其在结核性胸膜炎早期诊断中的应用价值。方法对102例结核性胸膜炎患者和50例恶性胸水患者的胸水进行Xpert MTB/RIF检测,同时行胸水抗酸染色及结核分枝杆菌快速培养和药敏试验(BACTECT MGIT 960),比较Xpert MTB/RIF与抗酸染色、结核分枝杆菌快速培养在敏感性及特异性上的差异,评价Xpert MTB/RIF在结核性胸膜炎诊断中的应用价值。结果 102例结核性胸水标本中,4例抗酸染色阳性,阳性率为3.92%(4/102);18例BACTECT MGIT 960培养阳性,阳性率为17.65%(18/102);24例Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌阳性,阳性率为23.53%(24/102),其中,3例存在利福平耐药突变基因,耐药突变率为12.50%(3/24)。Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的阳性率高于抗酸染色法,差异有统计学意义(P0.05),与结核分枝杆菌快速培养阳性率及利福平药敏结果差异无统计学意义(P0.05)。50例恶性胸水标本抗酸染色及结核分枝杆菌快速培养均为阴性,特异性均为100%,1例Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌阳性,特异性为98.00%,其特异性与抗酸染色及结核分枝杆菌快速培养差异无统计学意义(P0.05)。结论 Xpert MTB/RIF系统在结核性胸膜炎的快速诊断中具有较高的诊断能力,是一种省时、敏感性和特异性均高的结核分枝杆菌检测方法。     

Xpert MTB/RIF技术在诊断肺结核及利福平耐药的临床价值

目的评估Xpert MTB/RIF技术在快速诊断肺结核及利福平耐药的临床应用价值。方法收集肺结核患者痰标本420例,同时进行涂片法、MGIT液体培养法(简称"液培法")+微孔板比例法药敏试验((简称"药敏法")及Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌(Mtb)和利福平耐药。分别以液培法和药敏法为金标准,分析Xpert MTB/RIF检测Mtb和利福平耐药的效能,比较不同方法检测Mtb和利福平耐药的阳性检出率。结果 Xpert MTB/RIF和涂片法检测Mtb的灵敏度为84. 80%、30. 40%(P 0. 05),特异度为78. 82%、98. 82%((P 0. 05)。Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的灵敏度为100. 00%,特异度为97. 65%。Xpert MTB/RIF检测Mtb阳性检出率为59. 05%,涂片法为18. 57%(P 0. 05),液培法为59. 52%(P 0. 05)。Xpert MTB/RIF检测利福平耐药阳性检出率为21. 70%,药敏法为19. 81%(P 0. 05)。结论与传统涂片法和液培法及药敏试验比,痰标本中Xpert MTB/RIF技术检测Mtb尤其是检测利福平耐药具有较高的敏感度、特异度,时间短,准确性高,一致性较好,对肺结核早期诊断与治疗有重要意义。     

MGIT960与罗氏培养法在结核分枝杆菌培养及药敏试验中的比对分析

目的 比对全自动Bactec MGIT960（MGIT960）系统与改良罗氏（L-J）培养方法 2者在结核分枝杆菌培养、鉴定及药敏试验中的优越性。 方法 按国家疾病预防控制中心（CDC）-碧迪项目辽宁工作方案要求和国际标准WS288-2009《肺结核诊断标准》纳入临床病例。本实验共纳入病例435例,其中男性319例,女性116例,平均年龄52.3岁（10～86岁）。上述每份病例标本均分别进行痰液涂片抗酸染色（萋-尼法）镜检,L-J固体培养和MGIT960系统液体培养。培养阳性者分别进行一线药物异烟肼（INH）、利福平（RIF）、链霉素（STR）和乙胺丁醇（EMB）的L-J法药敏试验（比例法）和MGIT960药敏试验;分别计算出抗酸染色镜检与MGIT960和L-J培养的符合率; L-J培养和MGIT960培养阳性检出率;L-J和MGIT960两种培养方法药敏试验所需的培养时间及符合率等。 结果MGIT960培养法和L-J培养法与痰涂片镜检的阳性符合率分别为90.8%（187/206）和89.3%（184/206）;MGIT960与L-J结果符合率92.8%（219/236）;MGIT960和L-J平均培养时间分别为9.5 d和31.5 d;MGIT960和L-J一线药物INH、RIF、STR和EMB敏感性试验的符合率分别为92.7%、95.9%、91.8%和97.3%。 结论 全自动MGIT960系统培养方法的敏感度和特异度高于L-J培养法,报告时间平均缩短至9.5-d,该系统是目前最为理想的快速结核分枝杆菌培养、鉴定和药敏试验检测系统。     

Application value of GeneXpert MTB/RIF system in diagnosis of pulmonary tuberculosis

为了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)在初诊肺结核患者诊断中的应用价值,作者收集了2015年1月至2016年12月浙江省嘉兴市第一医院就诊的初诊疑似肺结核患者361例,留取痰液标本分别进行涂片荧光金胺O染色镜检(简称“涂片镜检”)、结核分枝杆菌MGIT 320液体培养(简称“液体培养”)、GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)和固体比例法药物敏感性试验。最终临床诊断为:肺结核184例(50.97%),肺部感染162例(44.88%),非典型分枝杆菌肺部感染15例(4.15%)。361例疑似肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[32.41%(117/361)]明显高于涂片镜检[22.71%(82/361)](χ ²=8.49,P<0.05),与液体培养[26.32%(95/361)]比较不存在明显差异(χ ²=3.23,P=0.072),涂片镜检法与液体培养法比较差异无统计学意义(χ ²=1.26,P=0.261)。184例肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[63.59%(117/184)]高于涂片镜检[36.41%(67/184)]和液体培养[48.91%(90/184)](χ ²=27.17,P<0.01;χ ²=8.05,P<0.05);117例涂阴肺结核患者的Xpert检测阳性率[42.74%(50/117)]高于液体培养[24.79%(29/117)](χ ²=8.43,P=0.004)。以临床诊断为标准,Xpert检测初诊疑似肺结核患者的敏感度为63.59%(117/184),特异度为100.00%(177/177),正确指数为0.64。以固体比例法药物敏感性试验结果为金标准,Xpert 检测利福平耐药的敏感度为4/5,特异度为97.70%(85/87),正确指数为0.97。说明GeneXpert MTB/RIF在初诊疑似肺结核患者,尤其是涂阴肺结核患者中,检测结核分枝杆菌感染及对利福平耐药具有较高的效能。     

三种实验室技术在涂阳患者中诊断肺结核及其耐药性的效能分析

目的 探讨BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和荧光PCR熔解曲线技术在涂阳肺结核患者中的检测效能和应用意义。方法 回顾性分析2016年10月至2018年2月沈阳市胸科医院收治的所有涂片阳性患者411例,经结核分枝杆菌抗原检测(MPB64检测)阳性并符合临床诊断标准,确诊肺结核患者392例,MPB64检测阴性且经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌感染患者19例,比较MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对涂阳肺结核患者的检测效能;以比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为参考标准,分别比较三种方法对耐药表型和耐药基因的检测效能。结果 在临床确诊的392例涂阳肺结核患者中,MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对痰标本检测的敏感度分别为96.17%(377/392)、99.74%(391/392)和92.09%(361/392),特异度均为100.00%(19/19)。以比例法药敏试验为参考标准,GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对利福平(RFP)耐药检测的敏感度相同,均为94.44%(119/126);荧光PCR熔解曲线技术在异烟肼(INH)、左氧氟沙星(Lfx)和阿米卡星(Am)耐药检测上的敏感度分别为74.84%(116/155)、83.33%(75/90)、44.00%(22/50);MGIT 960培养对RFP、INH、Lfx和Am耐药检测的敏感度分别为96.03%(121/126)、98.06%(152/155)、100.00%(50/50)、96.67%(87/90)。结论 GeneXpert法简便、快捷、安全,能够快速诊断肺结核及检测RFP是否耐药。荧光PCR熔解曲线技术可检测4种药物耐药情况,检测时间短,临床快速诊断耐多药肺结核/广泛耐药结核病,对指导临床用药具有重要意义。MGIT 960培养与比例法药敏试验耐药检测的一致性极高,是目前快速诊断结核病及一线药耐药检测的常用方法,可以缩短表型药敏试验时间。     

三种检测技术诊断老年肺结核效能的比较研究

探讨结核分枝杆菌及利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(GeneXpert MTB/RIF)技术,发光二极管(light emitting diode,LED)荧光染色法和BACTEC MGIT 960系统液体培养(简称“MGIT液体培养”)诊断老年肺结核的价值。     

支气管肺泡灌洗液GeneXpert-MTB/RIF检测在活动性肺结核诊断中的效能

目的探讨支气管肺泡灌洗液Xpert-MTB/RIF检测对肺结核早期诊断的价值。方法选择2017年9月～2018年9月在苏州大学附属传染病医院肺科住院,临床诊断肺结核患者共158例,分别对其支气管肺泡灌洗液及痰标本行GeneXpert-MTB/RIF法(简称"Xpert法")检测,同时对其支气管肺泡灌洗液行涂片抗酸染色镜检、MGIT 960培养、荧光定量PCR,并对Xpert法检测法结果进行分析。结果 Xpert法检测支气管肺泡灌洗液阳性率明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液培养阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05)。Xpert法检测阳性率明显高于PCR检测结核分枝杆菌DNA,差异有统计学意义(P0.05);上述四项联合检测阳性率明显高于Xpert法、结核培养等,差异有统计学意义(P0.05)。而Xpert法检测阳性率与痰培养阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。以支气管肺泡灌洗液结核培养为金标准,Xpert法检测敏感度78.75%,特异度为65.38%。支气管镜BALF Xpert法检测阳性率57.0%,痰Xpert法检测阳性率32.3%,支气管肺泡灌洗液Xpert法检测阳性率明显高于痰标本,差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管肺泡灌洗液Xpert法检测相比痰检及其他传统检测方法快捷、安全、高敏感性,能很大程度提高结核病及耐药结核的早期诊断率,有极大的临床应用前景。     

支气管肺泡灌洗液XpertMTB/RIF检测在HIV感染者肺结核诊断中的应用价值

目的评估支气管肺泡灌洗液(BALF)结核分枝杆菌rpoB基因和突变检测(XpertMTB/RIF),在诊断艾滋病病毒(HIV)感染合并肺结核中的应用价值。方法对499例HIV感染者BALF标本进行XpertMTB/RIF检测,配对标本同时进行结核分枝杆菌快速培养和药敏试验(BACTEC MGIT 960)、抗酸染色涂片法、实时荧光定量法(PCR-荧光法)检测;同时采用结核分枝杆菌抗原特异性γ-干扰素酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测患者对应外周血标本,比较各种检测方法的阳性率、灵敏度和特异性。结果 BACTEC MGIT 960培养、XpertMTB/RIF、抗酸染色涂片法、PCR-荧光法及ELISPOT检测的阳性率分别为20.4%、13.4%、5.0%、6.6%、22.4%,5种检测方法阳性率差异有统计学意义(χ2=101.03,P0.001)。以传统BACTEC MGIT 960培养阳性并经过菌种鉴定为结核分枝杆菌的79例标本为金标准:XpertMTB/RIF、抗酸染色涂片法、PCR-荧光法、ELISPOT的灵敏度依次为:77.2%、26.3%、38.0%、60.3%;特异性依次为:98.8%、99.2%、99.5%、85.1%;阳性预测值依次为:92.4%、87.0%、93.8%、44.4%;阴性预测值依次为:95.7%、87.5%、89.2%、91.5%。对XpertMTB/RIF、抗酸染色涂片法、PCR-荧光法及ELISPOT四种方法与BACTEC MGIT 960培养进行一致性检验发现,XpertMTB/RIF与BACTEC MGIT 960培养具有最强一致性(Kappa值为0.814),PCR-荧光法一般(Kappa=0.493),而抗酸染色涂片法和ELISPOT法最差(Kappa值分别为0.356、0.397)。结论与其他4种常见结核诊断方法相比,支气管肺泡灌洗液XpertMTB/RIF检测技术在HIV感染合并肺结核患者的诊断中具有较高的应用价值,是一种快速省时、敏感性和特异性均高的结核分枝杆菌快速检测方法。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药基因的结果分析

目的 分析和探讨荧光PCR熔解曲线法对结核病的诊断和耐药检测的应用价值。方法 收集2015年9月至2016年12月新疆维吾尔自治区胸科医院的976例疑似结核病患者的痰标本,运用探针荧光PCR熔解曲线法来检测结核分枝杆菌及其对利福平、异烟肼的耐药突变情况。以BACTEC MGIT 960液体培养法及液体药敏试验检测结果为标准,评价探针荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌及其耐药突变检测的敏感度、特异度、一致率、Kappa值等。结果 以MGIT 960液体培养结果为标准,荧光PCR熔解曲线法鉴定结核DNA的敏感度为85.44%(135/158),特异度为94.01%(769/818),Kappa值为0.75,诊断符合率为92.62%(904/976)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法对异烟肼耐药突变检测的敏感度为83.33%(20/24),特异度为94.59%(105/111),Kappa值为0.76,诊断符合率为92.59%(125/135);荧光PCR熔解曲线法对利福平耐药突变检测的敏感度为95.83%(23/24),特异度为95.50%(106/111),Kappa值为0.86,诊断符合率为95.56%(129/135)。结论 荧光PCR熔解曲线法检测速度快,对利福平和异烟肼耐药突变检测结果具有良好的敏感度和特异度,可用于临床上对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药情况的快速筛查。     

MTBDRplus 2.0技术对疑似肺结核和耐多药结核病患者的诊断价值

目的评价二代线性探针(GenoType MTBDRplus VER 2.0,简称"MTBDRplus 2.0")技术快速检测疑似肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对利福平和异烟肼耐药性的诊断价值。方法回顾性分析2018年1 12月就诊于西安市胸科医院的1065例疑似肺结核患者的实验室检测结果,剔除耐药不确定及痰标本污染者96例,最后纳入969例疑似患者作为研究对象。每例患者用同一份痰标本分别进行GeneXpert MTB/RIF(简称"GeneXpert")检测、MTBDRplus 2.0检测、BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")液体培养,对培养阳性且鉴定为MTB的菌株进行MGIT 960药物敏感性试验(简称"MGIT 960药敏试验"),以MGIT 960液体培养结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测痰标本中MTB的检测效能;以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测利福平和异烟肼耐药性的检测效能。结果969例疑似肺结核患者中.MGIT 960液体培养检测MTB阳性409例,阴性560例。以MGIT 960液体培养检测结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测疑似肺结核患者痰标本MTB的敏感度、特异度、Kappa值分别为91.0%(372/409)、93.8%(525/560)、0.848和92.9%(380/409)、92.5%(518/560)、0.850。以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.8%(53/59)、95.8%(295/308)、0.817和91.5%(54/59)、95.8%(295/308)、0.828;MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药性的敏感度、特异度和Kappa值分别为80.4%(82/102)、96.3%(260/270)和0.791。结论 MTBDRplus 2.0技术对检出疑似肺结核患者痰标本中的MTB,以及对利福平和异烟肼的耐药性均具有较好的检测效能。     

Xpert MTB/RIF 检测系统对肺结核临床诊断病例的应用价值

目的 评价Xpert MTB/RIF检测系统对肺结核临床诊断病例的应用价值。方法 对296例肺结核临床诊断病例的同一痰标本分别进行BACTEC MGIT 960液体培养和Xpert MTB/RIF检测,以BACTEC MGIT 960液体培养病原学检测和药敏结果为金标准计算Xpert MTB/RIF检测系统的检验效能指标。结果 Xpert MTB/RIF检测系统与金标准存在的差异具有统计学意义 (P<0.005),其病原学诊断灵敏度为84.9%(118/139),特异度为97.5%(153/157),筛查利福平耐药的灵敏度为85.2%(23/27),特异度为100.0%(91/91),一致性检验发现两种方法在病原学诊断和利福平药敏筛检的kappa值分别为0.829和0.899。结论 Xpert MTB/RIF检测系统用于肺结核临床诊断病例的实验室诊断和利福平耐药的筛检都不同于BACTEC MGIT 960检测系统,Xpert MTB/RIF检测系统借助其较高的灵敏度和特异度、快速和操作方便的优势,值得在中国结核病实验室推广应用。     

结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果分析

目的 :通过分析结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果,探讨提高其阳性检出率的方法。方法 :采集267例临床诊断为结核性胸膜炎患者的胸腔积液,离心后弃上清,用氢氧化钠(Na OH)消化处理,磷酸盐缓冲液(PBS)中和离心,取沉淀涂片抗酸染色镜检,接种MGIT960系统培养管和罗氏培养基,分析培养和涂片镜检结果 ,采用χ~2检验比较抗酸杆菌涂片与分枝杆菌培养阳性率的差异,BACTEC MGIT 960系统与罗氏培养阳性率的差异。结果:267例结核性胸膜炎患者胸腔积液经消化处理后,抗酸杆菌涂片阳性者81例,阳性率为30.6%,涂片1~8条/300个视野至1+以下者占涂片阳性的97.5%。罗氏培养233例,培养阳性39例,阳性率为16.7%,培养1+以下者为97.4%。MGIT960系统培养221例,培养阳性72例,阳性率为32.6%。消化后涂片法阳性率高于罗氏培养法(χ~2=7.92,P0.05)。结论:结核性胸膜炎患者胸腔积液中抗酸杆菌菌量少。胸腔积液经消化集菌可显著提高抗酸杆菌涂片阳性率。相比罗氏培养,MGIT 960系统能显著提高分枝杆菌培养的阳性率。     

新型胶颗粒芯片技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的 评估一种新型胶颗粒芯片技术[TruArray胶颗粒芯片(Gel element arrays),简称为“TruArray芯片”]用于痰标本中结核分枝杆菌及利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的检测效能。 方法 选取2016年8月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的149例疑似肺结核患者痰标本,分别进行涂片镜检、BACTEC MGIT 960快速液体培养系统(简称“MGIT 960”)、TruArray芯片和GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测,对液体培养阳性菌株进行测序菌种鉴定、MGIT 960药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和耐药相关基因测序,分析TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的检测效能。 结果 液体培养、GeneXpert和TruArray芯片对结核分枝杆菌的检出率分别为32.2%(48/149),53.7%(80/149)和57.0%(85/149),TruArray芯片和GeneXpert两种方法检出率差异无统计学意义(χ ²=0.34,P=0.560),但TruArray芯片检测阳性率高于液体培养(χ ²=18.59,P<0.01)。以MGIT 960试验结果为标准,TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.9%(47/48)和61.4%(62/101);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.5%(78/80)和88.4%(61/69)。以MGIT 960药敏试验结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为91.7%(11/12)和96.8%(30/31);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度为85.0%(17/20)和97.9%(47/48);以耐药基因测序结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为92.3%(12/13)和100.0%(30/30)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,TruArray芯片技术检测INH耐药的敏感度和特异度分别为78.6%(11/14)和93.8%(30/32);以耐药基因测序结果为判断标准,TruArray芯片检测INH耐药的敏感度和特异度分别为100.0%(11/11)和94.3%(33/35)。 结论 TruArray芯片检测技术快速、可靠,在结核病及耐多药结核病快速诊断方面具有非常好的应用前景。     

支气管镜肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF技术诊断早期耐药肺结核的临床意义

目的分析支气管镜肺泡灌洗液(BALF)Xpert MTB/RIF技术用于早期耐药肺结核快速诊断的临床意义。 方法采集疑诊肺结核102例BALF标本,行抗酸涂片、罗氏培养、Xpert MTB/RIF检测,以罗氏培养菌种鉴定及药敏试验为金标准,分析Xpert MTB/RIF技术检出结核分枝杆菌(MTB)及早期耐药肺结核的价值。 结果102例疑诊肺结核经临床确诊为肺结核76例(74.51%);抗酸染色诊断肺结核敏感度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值分别为19.74%、88.46%、37.25%、83.33%、27.38%,罗氏培养诊断敏感度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值分别为40.79%、80.77%、50.98%、86.11%、31.82%;Xpert MTB/RIF敏感度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值分别为64.47%、100.00%、73.53%、100.00%、49.06%,与临床诊断一致性高于抗酸染色及罗氏培养(P<0.05);以罗氏培养为金标准,Xpert MTB/RIF检出MTB敏感度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值分别为96.77%、57.78%、73.68%、61.22%、96.30%,一致性Kappa值为0.500,MTB分级：高分级5例,中分级14例,低分级15例,极低15例;Xpert MTB/RIF检出早期耐药肺结核敏感度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值分别为100.00%、91.67%、93.55%、77.78%、100.0%,一致性Kappa值为0.832,MTB耐药位点以探针Probe E(529~533)为主;Xpert MTB/RIF技术检查耗时短于抗酸染色及罗氏培养(P<0.05)。 结论Xpert MTB/RIF技术(BALF标本)对涂阴肺结核及耐药肺结核综合诊断效能优于传统抗酸涂片及罗氏培养,耗时短,具有临床意义。     

术后标本行分子生物学检测对结核病患者诊疗的价值

目的 初步探讨分子生物学检测技术在结核病患者术后快速诊断中的价值。方法 回顾性分析2015年1月至2018年2月期间在上海市公共卫生临床中心胸外科接受手术治疗、临床资料齐全的170例结核病患者。170例患者中,男100例(58.82%)、女70例(41.18%); 1~18岁年龄组18例(10.59%)、19~65岁年龄组142例(83.53%)、66~82岁年龄组10例(5.88%);肺结核39例(22.94%)、肺外结核131例(77.06%)。取术后标本采用PCR膜条杂交及二代测序技术的分子生物学方法进行菌种鉴定和耐药相关基因检测。所有患者术前进行晨痰及穿刺活检,或者术中取样进行抗酸染色涂片检测。在进行痰涂片的同时,进行分枝杆菌改良罗氏固体培养、BACTEC MGIT 960快速培养及药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。结果 (1)痰液抗酸染色阳性率为9.41%(16/170),其中肺结核患者的阳性率为23.08%(9/39), 而穿刺活检或者术中取样(脓液或分泌物等)的抗酸染色阳性率为51.76%(88/170)。(2)分枝杆菌培养阳性率为27.65%(47/170),其中耐药结核病检出率为14.12%(24/170)。(3)术后标本分子生物学菌种鉴定阳性率为51.76%(88/170);PCR膜条杂交显示,7例为NTM,4例培养联合MPB64抗原检测结果显示为NTM,但未鉴定到菌种;3例培养结果为阴性,无法进行MPB64抗原检测。7例标本进行了分子生物学菌种鉴定,1例为瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌复合感染,3例为胞内分枝杆菌, 1例为海分枝杆菌, 1例为鸟分枝杆菌,1例为脓肿分枝杆菌。(4)除去7例NTM感染患者,剩余的163例进行了分子生物学耐药基因检测,对一线抗结核药物耐药基因的检出率为54.60%(89/163), 对二线抗结核药物耐药基因的检出率为49.69%(81/163);与培养后药敏试验结果相比,药敏试验阳性的标本中有29.79%(14/47)在分子生物学耐药基因检测时的结果为阴性,而分子生物学耐药基因检测与药敏试验检测结果阳性的一致性为90.00%(27/30);分子生物学耐药基因检测与BACTEC MGIT 960快速培养药敏试验联合判断对耐药结核病的检出率为63.19%(103/163)。结论 分子生物学检测技术在术后标本的快速诊断中具有重要的价值,可区分结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌及是否耐药,为结核病患者术后进一步诊治提供重要参考。     

荧光定量PCR检测24小时尿沉渣TB-DNA对临床诊断泌尿系结核价值分析

目的荧光定量PCR检测24小时尿沉渣中TB-DNA对临床诊断泌尿系统结核的价值分析。方法采集66例临床诊断泌尿系统结核病患者的24小时尿液沉渣标本,应用荧光定量PCR检测尿沉渣中的TB-DNA,同时对这些标本进行分枝杆菌培养及涂片找抗酸杆菌,各种检验方法检出率进行比对。结果 66例临床诊断为泌尿系统结核患者,24小时尿沉渣中查出TB-DNA阳性的检出率为28.78%(19/66),明显高于24小时尿沉渣涂片找抗酸杆菌的阳性检出率6.06%(4/66)(P0.05),同时高于24小时尿沉渣结核菌培养法阳性检出率12.12%(8/66)(P0.05)。结论荧光PCR定量检测24小时尿沉渣中TB-DNA的方法能明显提高泌尿系统结核病的检出率,而且敏感性和特异性均高于其他两项检验方法,优于24小时尿沉渣涂片找抗酸杆菌以及分枝杆菌培养法,对早期诊断泌尿系统结核提供了非常大的帮助。     

MGIT 960系统行二线抗结核药物敏感性试验的实用性评价

目的 评价全自动BACTEC MGIT 960系统在结核分枝杆菌二线抗结核药物（second-line anti-TB drugs,SLD）药敏试验中的实用性。 方法 本实验纳入患者435例。该纳入患者均通过痰涂片抗酸染色（萋-尼法）镜检,L-J固体和MGIT 960系统液体培养及鉴定,共筛查出阳性菌株212例。212例阳性菌株分别进行一线抗结核药物异烟肼（INH）、利福平（RFP）、链霉素（S）和乙胺丁醇（EMB）的耐药性试验,其中耐药菌株（所有耐药株）118例。以118例耐药株作为SLD药敏试验实验株,应用L-J和MGIT 960两种方法分别进行卷曲霉素（Cm）、卡那霉素（Km）、氧氟沙星（Ofx）和乙硫异烟胺（Eto）的药物敏感性试验,并计算出两方法药敏试验所需的时间和符合率;L-J和MGIT960两种培养方法的比较采用配对设计的卡方检验;两种方法检测结果的一致性用Kappa值检验判别。 结果 MGIT 960系统药敏试验所需时间平均10.0 d（1183/118）,L-J固体培养法所需时间平均28.5 d（3360/118）,两者相差18.5 d。MGIT 960与L-J培养法的SLD Cm、Km、Ofx和Eto敏感及耐药符合率和一致性检验Kappa值分别为88.1%（104/118）和0.520;95.8%（113/118）和0.815;91.5%（108/118）和0.824;71.2%（84/118）和0.375。 结论 MGIT 960系统液体培养法常用SLD药敏试验与金标准（L-J培养）比较除Eto外符合率高、一致性好;该方法检测快速、准确,具有很强的实用性,可作为结核分枝杆菌快速培养和药敏试验的新方法。     

The diagnostic value of GeneXpert MTB/RIF of the lapping suspension of the thoracoscopic biopsy tissue in tuberculous pleural effusions

目的 评价内科胸腔镜胸膜活检组织标本研磨悬液行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 选择2017年1月1日至12月31日在沈阳市胸科医院胸膜炎病房住院,行内科胸腔镜检查的不明原因胸腔积液患者51例,均未经过抗结核药物治疗。所有患者胸膜活检组织标本一部分行常规病理检查,另一部分研磨处理后制成悬液,行BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)及Xpert 检测。以MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌和胸膜组织活检病理肉芽肿性病变并抗酸染色阳性作为确诊标准,评价活检组织研磨悬液行Xpert检测在结核性胸膜炎诊断中的价值。结果 51例患者中有34例确诊为结核性胸膜炎,其中通过MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌而确诊者20例(39.2%,20/51),通过胸膜组织活检病理阳性而确诊者17例(33.3%,17/51),其中3例患者被2种检测方法同时确诊;17例(33.3%)诊断为非结核性胸腔积液。以最终诊断结果为金标准,Xpert法、MGIT 960培养法、病理检查诊断的敏感度和特异度分别为64.7%(22/34)和100.0%(17/17)、58.8%(20/34)和100.0%(17/17)、50.0%(17/34)和100.0%(17/17);Xpert 法检测的敏感度高于MGIT 960培养法和病理诊断,但差异无统计学意义(χ ²=1.53,P=0.466)。结论 内科胸腔镜直视下取胸膜组织活检标本,通过研磨后使其液化,再行结核分枝杆菌Xpert检测,敏感度及特异度均较高,对结核性胸膜炎的确诊具有一定的临床意义。     

结核病诊断T-SPOT.TB、Gene Xpert MTB/RIF技术应用价值研究北大核心CSCD

目的评估结核分枝杆菌及其利福平耐药株实时荧光定量核酸扩增(Gene Xpert MTB/RIF)和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在结核病诊断中的价值。方法分析2020年1月-2022年3月济宁市公共卫生医疗中心收治的住院及门诊病患者643病例的抗酸染色镜检、960液体培养、Gene Xpert MTB/RIF检测和结核抗体、T-SPOT.TB检测结果,评价Gene XpertMTB/RIF和T-SPOT.TB检测诊断结核病的特点和价值,以临床诊断为金标准,以检测方法的敏感度、特异度及绘制的ROC曲线等作为评价指标。结果抗酸染色、960快速培养和Gene Xpert MTB/RIF检测结核病的敏感度分别为21.57%、39.21%和59.80%,特异度分别为100.00%、97.22%和100.00%。ROC曲线分析显示,抗酸染色、960结核菌培养和Gene XpertMTB/RIF的AUC分别是0.60、0.70和0.80,差异有统计学意义(P<0.05);95%置信区间范围分别为0.50~0.70,0.61~0.78,0.73~0.87。T-SPOT.TB和结核抗体检测的敏感度分别为84.61%和70.19%,特异度分别为95.83%和79.16%。ROC曲线分析结核抗体与TSPOT检测的AUC分别为0.75和0.90,95%,置信区间范围分别为0.64~0.86和0.84~0.97。T-SPOT.TB和Gene Xpert MTB/RIF的阳性率分别为86.47%和36.60%。结论在结核病诊断中,Gene Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB检测结核病的敏感性高于痰涂片和痰培养检查及结核抗体检测,其中T-SPOT.TB检测的阳性率较高。Gene Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB均可应用于肺结核的临床诊断以提高肺结核的诊治效率。