抗人IgM（μ链）单克隆抗体的制备

本实验用可溶性抗原人 IgM 免疫 BALB/C 小鼠,按常规方法取免疫鼠脾细胞,分别与 NS-1、SP2/0细胞进行融合,ELISA 法筛选只与 IgM 反应阳性的抗体分泌杂交细胞,建立了6株杂交瘤株。经鉴定,此6株细胞分泌的抗体与 IgM 产生特异性反应,而不与其它免疫球蛋白重、轻链及 J 链交叉反应。经免疫电转印的硝酸纤维膜染色只显示分子量为72kD 的电泳带。放射免疫方法检测6个单克隆抗体,可分别识别4个不同的抗原决定簇。此组抗体识别 B 细胞胞浆内及膜表面μ链并可检测乙型病毒性肝炎患者血清中 HB_C-IgM 复合物。本组抗体间彼此加合可提高检测的灵敏性。抗 IgM(μ链)单克隆抗体对研究人 B 细胞的分化、成熟及功能提供了重要途径。     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体的研究

用人血清IgM球蛋白重链——μ链免疫的BALB/C小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤SP2/0细胞在聚乙二醇(PEG)作用下融合,用改进的免疫荧光技术筛选出6株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,其中5株分泌物确定为抗人μ链McAb,1株未定.杂交瘤细胞经4次克隆,半年多传代,接种BALB/C鼠可稳定地产生腹水抗体.     

分泌抗人IgA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

利用常规杂交瘤技术制备了一株抗人IgA杂交瘤PA_(229) ELISA结果表明,它分泌的抗体与人IgA有特异性反应,而与其它免疫球蛋白重、轻链无交叉反应,为小鼠IgG_1亚类。免疫转印结果只显示针对IgAα链的一条电泳带。用改良ELISA法测得PA_(229)的亲和常数为1.33×10~8L/mol。     

抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定

目的探讨绿脓杆菌外毒素A(PEA)中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用.方法以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选细胞培养上清,采用有限稀释法对阳性孔进行克隆,3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C4,1D4,2E12和3C6.结果细胞培养上清ELISA效价为4000～8000,腹水ELISA效价可达25600～51200,其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价,其亲和常数为8.93×108.结论获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用.     

抗内甲基转移酶单克隆抗体的制备及临床应用研究

目的：建立抗人甲基转移酶单克隆抗体细胞株并建立相应的蛋白测定方法,观察脑瘤组织中O^6-甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）表达水平与亚硝脲药物疗效的关系,方法：采用细胞融合技术建立抗人甲基转移酶单克隆抗体细胞胞株,采用免疫组织化染色方法,检测60例脑瘤组织中MGMT表达水平,结果：得到了7株分泌抗人甲基转移酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并建立了测定MGMT免疫组化方法,观察的60例脑瘤组织中有27例MGMT阴性,经亚硝脲药物治疗,其中24例好转,3例复发,另3例MGMT可疑阳性的患者,经亚硝脲药物治疗,其中2例好转,1例复发,25例MGMT阳性患者,经亚硝脲药物治疗,5例好转,12例复发,8例死亡,5例MGMT为强阳性患者,使用亚硝脲药物治疗无效,全部死亡,结论：建立了7株稳定分泌抗人甲基转移酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株及MGMT蛋白测定方法,为临床开展亚硝脲预见性化疗提供了必要手段,初步结果显示,脑瘤组织中MGTM表达水平与亚硝脲药物疗效及预后有关,是肿瘤细胞对亚硝脲药物产生耐药性的基础。     

老年多原发癌免疫球蛋白轻链Igκ和Igλ的表达

目的　研究分析老年多原发癌患者首癌和次癌肿瘤组织Igκ和Igλ表达及特点。方法　 2 1例长期随访的多原发癌病人 ,首癌为消化道癌的多原发癌者 2 0例 ,首癌与次癌均为消化道癌者 1 7例。应用鼠抗人κ轻链单克隆抗体和鼠抗人λ轻链抗体对肿瘤组织行免疫组化染色。结果　首癌或次癌有Igκ和 (或 )Igλ阳性表达者共 1 6例 ,占 76 2 %。统计学分析表明 ,多原发癌首癌与次癌肿瘤组织的Igκ、Igλ表达关系密切 ,具有明显的相关性(P <0 0 1 )。首癌与次癌Igκ、Igλ表达情况与多原发癌生存率统计分析提示 ,首癌与次癌Igλ同时阴性组与首癌Igλ阴性次癌Igλ阳性组比较 ,后者的次癌生存时间明显缩短 (P <0 0 5 )。结论　Ig样蛋白表达是多原发癌的癌变过程中较为普遍的现象 ,Igκ和Igλ表达在多原发癌的发生发展中可能起重要作用。与首癌、次癌Igλ表达均阴性的多原发癌病人比较 ,如在次癌肿瘤组织中出现Igλ表达阳性 ,预示此类多原发癌患者的生存时间短 ,预后差     

抗人IgG（Fc特异性）单克隆抗体的制备、鉴定及应用

在整个免疫球蛋白中含量最多的是IgG,约占3/4及4/5,且血清中80％的抗细菌、抗病毒、抗毒素抗体属IgG。在许多病理情况下,IgG参与其发病机制,有时可在外周血中相应地增加与减少。在临床上已普遍开展了免疫球蛋白的测定及某些免疫疾病特异性IgG的检测。但目前国内检测所用抗人IgG抗体均为多克隆抗血清。为此,我们制备了抗人IgG单克隆抗体,为进一步深入研究及临床检测提供了一切实可用的工具。     

抗人乳腺癌单克隆抗体3M1的制备

抗人乳腺癌单克隆抗体３Ｍ１的制备李卫平赵林普军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０李红芬李维华解放军总医院北京１００８５３在我国，妇女恶性肿瘤发病率中乳腺癌占首位，因而区别其良性还是恶性是临床上的重要课题。国内外相继用单克隆抗体作为乳腺良、恶性...     

蛙皮素制备的抗人小细胞肺癌单克隆抗体

蛙皮素制备的抗人小细胞肺癌单克隆抗体付生法张朝山赵林普郭文君＊军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０文献报道肺癌的发生率有逐年增高的趋势，尤其是小细胞肺癌，其瘤细胞增殖快、易转移，因而对其早期诊断十分重要〔１〕。瘤细胞单克隆抗体是肿瘤的标志物，...     

肾综合征出血热病毒的人单克隆抗体的产生和初步鉴定

取恢复期肾综合征出血热病人外周血,分离淋巴细胞、经EB病毒转化得到的类淋巴母细胞与小鼠骨髓瘤细胞系X63-Ag8.653或种间骨髓瘤细胞系SHM-D33融合得到了两株分泌肾综合征出血热病毒人单克隆抗体的杂交瘤细胞系86-1和86-2。上清液人单抗的浓度分别达到30μg/ml与50μg/ml。这两株杂交瘤已传代7个月以上仍稳定地分泌抗体,培基中小牛血清量降至2％,抗体分泌量不变。并可用裸鼠制备腹水。     

抗人红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗人红细胞膜血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）的特异单克隆抗体,对研究ＧＰＡ基因突变和ＧＰＡ蛋白糖基化变异有重要意义。方法;分别用ＯＭ和纯化Ｍ－ＧＰＡ蛋白以及ＯＮ红细胞和纯化Ｎ－ＧＰＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓细胞Ｓｐ２／０融合,经正常和酶处理人细胞凝集筛选,间接免疫荧光,酶联免疫分析及蛋白质印迹鉴定。制备了鼠抗人ＧＰＡ的单克隆抗体。结果;获得抗ＧＰＡ蛋白１～３９位肽投入及相关糖链     

抗α2巨球蛋白单克隆抗体的制备及临床初步应用

α_2巨球蛋白(α_2M)大多由单核细胞产生,它是一种在血液中具有生物学活性的大分子糖蛋白,分子量80万左右,除具有抗放射损伤作用外,尚可参与免疫调控作用。业已证实α_2M在体内外能抑制多种免疫反应,与慢性肝、肾疾病的关系较为密切。我们用细胞融合技术,建立了分泌抗α_2M的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并初步应用于临床标本的检测,现将结果报告如下。 材料和方法 一、动物免疫:有关α_2M提取,按文献方法进行。     

抗河流弧菌单克隆抗体的建立及初步鉴定

目的 制备高效、特异的抗河流弧菌单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),为海洋致病细菌的快速免疫诊断提供技术支持.方法 选用雌性BALB/c小鼠(8周龄)制备成为灭活河流弧菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗河流弧菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选其与河流弧菌及其他重要海洋细菌的交叉反应特异性.结果 共获得4株抗河流弧菌mAb,均符合杂交瘤细胞染色体特点,具有良好的特异性和免疫反应性,分别命名为01H10,02F12,05F3和03G10.结论 本研究制备、筛选出抗河流弧菌的mAb,有助于建立抗河流弧菌快速免疫检测试剂盒.     

抗hBMP单抗的制备及在临床中的初步应用

本研究以１１．８ＫＤｈＢＭＰ为抗原，通过脾内直接免疫法对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠进行免疫。用３０％ＰＥＧ１５００对ＳＰ２／０骨髓瘤细胞：免疫脾细胞（１∶５）的混合细胞悬液进行融合。融合后将２４孔板中每孔种植含１×１０６个细胞的混合细胞悬液，可使融合率达１００％。通过筛选，从２５００株杂交瘤中选出５株杂交瘤，它们能产生特异性较好的抗１１．８ＫＤｈＢＭＰ的单克隆抗体。用抗１１．８ＫＤｈＢＭＰ单抗对颈椎骨赘、项韧带异位骨化标本、滑膜软骨瘤病的瘤结节进行ＡＢＣ免疫组化染色。结果显示，颈椎项韧带异位骨化、颈椎椎体骨赘形成及滑膜软骨瘤病的发病与ＢＭＰ的异常表达有关。     

抗支原体单克隆抗体试剂盒的研制和应用

从20株抗支原体MAb中筛选出1株能够对各种支原体起反应的MAb(3D1)组成试剂盒,用间接免疫荧光法(IFA) 检查了35株传代细胞和6份动物标本,支原体检出率为83%,为了验证此方法的准确性,将其中部分细胞同时做常规培养检查,符合率为90%。结果证明,MAb试剂盒具有特异性高,敏感性强,速度快等优点。