CD34在大肠癌中的表达及其意义

目的:检测大肠癌中CD34的表达,探讨其在大肠癌发生、发展及转移中的作用.方法:应用流式细胞术检测80例大肠癌标本中CD34的表达.结果:CD34在大肠癌组织中的表达量明显高于正常大肠粘膜(P＜0.01);不同Dukes分期之间、不同分化程度大肠癌组织之间CD34的表达差异有统计学意义(P＜0.05-0.01).结论:大肠癌中有血管形成,CD34可能是判断病人预后的指标.     

白血病c-FLIP mRNA表达的初步研究

目的:探讨c-FLIPmRNA在白血病中的表达及其意义.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测37例白血病骨髓单个核细胞c-FLIP mRNA的表达.包括急性白血病(AL)27例,其中初治21例及复发和完全缓解(CR)后AL各3例、慢性粒细胞性白血病(CML)5例、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)1例和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)4例.结果:在初治和复发AL、初治CML、CNL、CLL中c-FLIP mRNA均呈异常增高表达,初治AL中c-FLIP mRNA的表达与复发AL比较差异无统计学意义(P＞0.05),其FAB各亚型之间的表达差异亦无统计学意义(P＞0.05).初治AL与CLL c-FLIP mRNA的表达显著高于初治CML(P＜0.001),但初治AL与初治CLL比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组和CR后AL均为阴性表达.c-FLIPmRNA的表达与初治AL患者年龄、性别、初诊白细胞数、LDH以及核型、免疫表型无关.初治未达CR的AL患者其c-FLIPmRNA表达高于CR者,但并无统计学意义(P＞0.05).结论:白血病c-FLIP mRNA的表达异常增高.c-FLIP mRNA能反映白血病细胞的凋亡抑制情况,并与白血病的类型、疾病状态、临床疗效和预后密切相关.     

c-FLIP在恶性血液病中的表达及其临床相关性研究

目的：探讨c-FLIP基因在血液肿瘤中的表达以及临床意义。方法以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测22例血液肿瘤骨髓中的c-FLIP mRNA表达,Western-Blot蛋白质印迹(WB)方法检测其c-FLIP蛋白的表达。病例包括急性白血病(AL)12例(其中初治11例及反复复发1例)、完全缓解(CR)后AL 2例、慢性粒细胞性白血病(CML)2例、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)2例、多发性骨髓瘤(MM)2例和骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多2型(MDS-RAEB-2)2例。结果初治和复发AL,初治CML、CLL、MDS-RAEB-2、MM患者c-FLIP mRNA和蛋白均表达异常增高。初治AL c-FLIP mRNA及43 kD蛋白的表达显著高于慢性白血病(CL)(P<0.05)。MDS-RAEB-2、MM与ALc-FLIP mRNA的表达差异均无统计学差异(P>0.05),但MDS 55 KD、43 KD蛋白表达明显低于AL(P<0.05),而MM无明显差异。对照组mRNA及其蛋白均阴性表达,CR后AL mRNA阴性表达,但其蛋白均有表达,低表达于AL,尤其43 kD明显低于AL(P<0.05)。c-FLIP表达在初治AL患者与其年龄、性别、初诊白细胞数、LDH以及核型、免疫表型无关。AL患者c-FLIP mRNA及其蛋白表达与初治疗效无明显相关性(P>0.05)。结论血液肿瘤患者c-FLIP mRNA及其蛋白表达异常增高,能够反映出恶性血液病患者骨髓造血细胞的凋亡抑制情况,与恶性血液病的类型、疾病的状态以及病程中的临床疗效、预后等都密切相关。     

CD147在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：研究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（CD147）在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌临床病理因素问的关系。探讨其与大肠癌侵袭和转移的相关性。方法：应用免疫组织化学方法检测88例大肠癌患者癌组织、癌旁组织和正常对照组织中CD147的表达，以图象分析软件进行半定量分析。结果：大肠癌组织、癌旁组织和正常对照组织中CD147表达阳性率呈递减改变。CD147的表达与大肠癌患者年龄、肿瘤分型、肿瘤分化程度未见相关性（P〈0．05），而在大肠癌患者伴转移组显著高于无转移组（P〈0．05）。结论：CD147在大肠癌患者组织中的表达增高与大肠癌侵袭转移密切相关。     

急性白血病细胞CD34的表达与系列相关性抗原表达关系的初步分析

目的探讨CD34在急性白血病细胞的表达,比较CD34与其他系列相关性抗原的关系。方法采用三色流式细胞术对41例急性髓性白血病(acutemyeloidleukemia,AML)和15例急性前体B细胞性淋巴细胞白血病(precursorb-acutelymphoblasticleukemia,PreB-ALL)患者进行表面抗原分析,确定各抗原的表达情况,比较CD34阳性与CD34阴性时,CD34与CD13,MPO,CD10和HLA-DR的共同表达情况。结果CD34在AML和ALL中的抗原表达阳性率分别为70.7%和53.3%。在AML中,51.5%的患者表现为CD34/CD13阳性,61.5%的患者表现为CD34/MPO阳性,50.3%的患者表现为CD34/HLA-DR阳性。仅有10.7%的AML患者表现为CD34/CD10阳性。结论与PreB-ALL相比,CD34在AML中表达阳性率更高,CD34结合CD13,MPO或者HLA-DR可以显示大多数AML细胞特征。对于急性髓性白血病,以CD34设门来选择AML细胞群,有助于诊断预后的评估以及AML微小残留病的检测。     

大肠癌细胞标志物CD44V6对大肠癌预后评估作用的研究

目的:使用流式细胞术检测大肠癌细胞CD44V6抗原表达、并对其分选后测定癌细胞增殖活性,评估临床大肠癌预后。方法:使用流式细胞术测定30例大肠癌组织(T)、癌旁2 cm(P2)、癌旁5 cm(P5)、远癌切端正常组织(N)单细胞悬液CD44V6阳性细胞百分率,并与免疫组化方法比较;使用流式细胞术测定CD44V6分选前后大肠癌细胞DNA指数(DI),S期细胞百分比(SPF)、细胞分裂增殖指数(PI)。结果:(1)大肠癌组织中CD44V6阳性细胞百分率明显升高,且在淋巴结转移组中升高更为明显。(2)流式细胞计检测效率明显高于传统的免疫组化方法。(3)流式细胞术分选CD44V6前后检测大肠癌细胞DI、PI值有明显差异。结论:流式细胞术检测大肠癌细胞CD44V6、并于分选后测定其DI、PI值,可作为临床评估大肠癌预后的有效检测指标。     

类风湿关节炎患者B细胞上Fas受体表达与疾病活动度相关性研究

目的 测定类风湿关节炎（RA）患者B淋巴细胞表面Fas及可溶性Fas/FasL（sFas/sFasL）的表达,研究B淋巴细胞Fas受体在RA发病中的作用。方法 流式细胞术检测CD20⁺标记的B淋巴细胞及Fas的表达,酶联免疫吸附试验检测sFas/sFasL的水平。结果 RA组血清及关节液sFas/sFasL水平均高于对照组（P<0.01）,RA组外周血Fas表达率高于对照组（P<0.01）,CD20⁺B淋巴细胞表面受体Fas表达率低于对照组（P<0.01）。结论 RA中sFas、sFasL表达升高,可能通过抑制致病淋巴细胞凋亡,促进RA发病;RA发病中T/B淋巴细胞比例紊乱,外周血淋巴细胞Fas升高而B淋巴细胞Fas表达降低,可能是由sFas/sFasL升高引起。     

干扰素对肿瘤细胞Fas表达的上调作用及与细胞凋亡的关系

OBJECTIVE: To investigate effect of interferon-gamma (IFN-gamma) on Fas expression and Fas-mediated apoptosis in tumor cell lines. METHODS: Fas expression was detected by flow cytometry, and the tumor cell apoptosis evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay and AnnexinV staining assay. RESULTS: All the 4 tumor cell lines used in this study, e.g. gastric cancer cell lines Kato-III AGS, lung cancer cell line A549 and laryngeal cancer cell line Hep-2, expressed Fas protein to varied degrees. Fas expression was up-regulated by IFN-gamma (P<0.05), which alone was enough to induce apoptosis in tumor cells and increase the susceptibility of them to anti-Fas antibodies. IFN-gamma induced Fas expression up-regulation and tumor cell apoptosis in a time-dependent manner. CONCLUSION: Fas-mediated apoptosis is one of the mechanisms for IFN-gamma to exercise its anti-tumor effect.     

非小细胞肺癌DNA含量与CD44和Fas表达的相关性研究

目的　观察转移相关基因CD44和Fas蛋白在肺癌中的表达及与DNA含量的关系。方法　应用流式细胞术对 40例肺癌患者手术新鲜标本中CD44和Fas蛋白表达及DNA含量进行检则 ,并与正常对照组 (n =2 5 )和肺部良性病变组 (n =2 0 )进行对比研究。结果　肺癌组Fas表达低于正常对照组和肺部良性组 ,CD44表达和DI值高于正常对照组和肺部良性组 ,正常对照组中CD44和Fas表达及DI值与良性病变组相比差异均无显著性。Ⅰ +Ⅱ期肺癌组织中Fas的表达高于Ⅲ +Ⅳ期 ,Ⅰ +Ⅱ期CD44表达水平和DI值则低于Ⅲ +Ⅳ期 ,中高分化与低分化之间CD44、Fas表达和DI值差异有显著性 ,肺癌伴淋巴结转移者其CD44表达高于不伴淋巴结转移者 ,Fas表达和DI值与有无淋巴结转移无明显的相关性。随着肺癌细胞DI值不断升高 ,Fas表达逐渐降低 ,与DI值呈负相关 (r =-0 44 3 ,P <0 0 1) ;CD44表达则逐渐升高 ,呈正相关 (r =0 64 6,P <0 0 1)。在CD44、Fas ;表达及DI值与肺癌临床参数的研究中 ,发现CD44、Fas表达和DI值与患者的年龄、性别、肿瘤大小和病理类型均无明显的相关性。结论CD44、Fas表达及DNA含量在肺癌发生、发展和转移过程中起着共同调节作用 ,可作为预测肿瘤转移潜能的指标     

增殖细胞核抗原在大肠癌中的表达及其临床意义

增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）作为δ-DNA多聚酶的辅助蛋白，是一项反映细胞增殖活性的良好指标，对细胞由G1期向S期过渡起着重要的调节作用。本研究从细胞增殖状态的角度．应用免疫组化技术（SABC法）对大肠癌中PCNA的含量进行半定量检测，探讨PCNA的过度表达与肿瘤的组织学类型、Dukes’分期、淋巴结转移等临床病理特征的关系．以期为大肠癌的诊断、治疗和在临床上的应用价值提供客观的依据。     

增殖细胞核抗原和CD44 mRNA在伴有静脉侵袭的结直肠癌中的表达及其与肝转移的关系

目的研究伴有静脉侵袭的结直肠癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)和CD44 mRNA的表达及其与肝转移的关系. 方法采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测31例伴有静脉侵袭的结直肠癌组织中PCNA和CD44 mRNA的表达状况. 结果 PCNA和CD44 mRNA在结直肠癌组织中阳性表达率分别为100%和64.5%. 在有肝转移的结直肠癌组织中,PCNA和CD44 mRNA的强表达率分别为94.1%和70.6%,表达强度明显高于无肝转移者(P<0.05和P<0.01). PCNA和CD44的表达存在正相关(r=0.67, P<0.05). 结论结直肠癌组织中PCNA和CD44的联合检测对判断癌细胞的肝转移具有一定的参考价值.     

SYBR荧光实时定量PCR检测肝移植受者CD95和CD95L mRNA表达

目的 检测肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达,并探讨其在移植肝急性排斥反应中的意义。方法 采用SYBR荧光实时定量PCR法检测56例肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达。结果 CD95和CD95L mRNA在移植肝急性排斥患者外周血中的表达均显著升高（P〈0．011,时间上平均早于血肝功能酶谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高2d。结论 CD95和CD95L与移植肝急性排斥反应密切相关,CD95和CD95LmRNA可作为移植肝急性排斥反应发生的预测和诊断指标之一。     

Altered CD28 and CD95 mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells from elderly patients with primary non-small cell lung cancer

Background The expression of the co-stimulatory molecule CD28 and death receptor CD95 on T cells, which change with age, are considered as important immunological parameters of immunosenescence. It is well established that CD28 and CD95 are associated with tumorgenesis and tumor progression, but the relationship between the age-related changes of these two immunological markers and cancer in the elderly is largely unknown. Methods The levels of CD28 and CD95 mRNA in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） from sixty-three elderly patients （aged 〉60 years） with primary non-small cell lung cancer （NSCLC） were analyzed by real-time fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR）. In addition, twenty young patients （aged 〈60 years） with NSCLC, thirty elderly healthy donors and thirty young healthy donors were enrolled as controls. Results CD28 mRNA levels were significantly lower and CD95 mRNA levels were significantly higher in elderly patients with NSCLC than in the other groups. Similar results were found in elderly healthy donors comparing with young healthy donors. By Logistic regression analysis an increased risk of NSCLC was markedly associated with aging, down-regulation of CD28 mRNA and up-regulation of CD95 mRNA, and CD28 mRNA had an obvious negative correlation with the CD95 mRNA. In addition, the mRNA levels of CD28 and CD95 in the peripheral blood of the elderly patients was closely associated with the tumor node metastasis （TNM） stages, grade of cell differentiation and lymph node metastasis status, but not related to pathological types. Conclusions The results suggest a close relationship between T cell senescence and NSCLC tumour progress in the elderly, and that up-regulation of CD28 mRNA or down-regulation of CD95 mRNA in peripheral blood T cells may play an important role in inhibiting oncogenesis and development of primary NSCLC in the elderly.     

CD4+ CD25+调节性T细胞在肺癌中的表达及其临床意义

目的：：探讨CD4+ CD25+调节性T细胞在晚期肺癌中的表达及其临床意义。方法：应用流式细胞术分析42例肺癌患者(肺癌组)外周血CD4+ CD25+调节性T细胞表达水平,与15名健康志愿者作对照。结果：肺癌组患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量为(7.17±3.63)%,明显高于对照组的(4.25±2.11)%(P<0.01)。肺癌组患者外周血中调节性T细胞数量在病理类型间差异无统计学意义(P>0.05),晚期肺癌患者外周调节性T细胞数量高于早期患者(P<0.05)。结论：调节性T细胞在肺癌患者中比率明显升高,并与临床进展有关。     

Functional expression of CD95/Fas Antigen and Bcl-2 on Cord bloodHematopoietic Progenitor Cell

The cell-surface expression and functional status of the CD95/Fas antigen on primitive hematopoietic progenitors isolated from human cord blood (CB) were studied. The CD34 cells freshly isolated from CB displayed low CD95 expression. The combinations of cytokines such as SCF FL could up-regulate the expression of CD95 in vitro culture and tumor necrosis factor-e (TNF-α) and interon-γ (IFN-γ) further increased the CD95 expression induced by positive cytokines. The functional status of CD95-mediated apoptosis were analyzed by incubation of CD34 CB cells in the presence of anti-CD95 monoclonal antibodies (McAbs). The effects of anti-CD95 McAbs were measured by viable cell counting, flow cytometry, LTIC and CFU-C assays. A decrease of viable cells, CFUC and LTIC numbers were observed in the presence of anti-CD95 McAbs and TNF-α or IFN-γ.However, growth factor deprivation or the early-acting cytokine such as SCF and FL cross-linking to CD95 caused low apoptosis of CD34 cells. The correlation of increased intracytoplasmic levels of bcl2 and the presence of CD95 on fresh CB CD34 cells suggested that bcl-2 might be involved in protecting against CD95-mediated apoptosis of CB CD34 cells.     

腺病毒载体RNA干扰抑制Fas(CD95)表达作用

目的:观察串联表达Fas-shRNA的腺病毒载体pAdeno-X-siFas 1 siFas 2对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导BALB/c鼠肝细胞Fas过表达的影响.方法:20只雄性BALB/c鼠随机分为:RNA干扰组(RNAi组)、腺病毒通用阴性对照组(HK组)、模型组(M组)和正常对照组(N组).RNAi组于0 h、24 h经尾静脉注射腺病毒载体pAdeno-X-siFas 1 siFas 2两次,HK组尾静脉注射阴性腺病毒载体;M组尾静脉注射生理盐水;24 h后上述3组腹腔注射LPS/D-GalN;N组尾静脉和腹腔均注射生理盐水.注射LPS/D-GalN 8 h后,麻醉并处死鼠取肝脏,冰冻切片荧光显微镜检测腺病毒转染率;Western Blot检测各组肝细胞Fas 表达;RT-PCR检查Fas mRNA表达.结果:RNAi组和HK组腺病毒对肝细胞的转染率差异没有显著性(P=0.935);RNAi组与M组和HK组相比肝细胞Fas表达水平显著减少(P＜0.01),其Fas mRNA水平也明显降低(P＜0.01).结论:串联重组腺病毒载体能有效转染肝细胞并抑制LPS/D-GalN诱导的BALB/c鼠肝细胞Fas基因的过表达.     

再生障碍性贫血患者骨髓CD34~+和Fas~+细胞Fas抗原的表达

采用流式细胞术检测再生障碍性贫血 (AA ,以下简称再障 )患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas抗原的表达 ,采用体外短期液体培养的方法研究干扰素γ(IFN γ)对AA患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas抗原表达的影响 ,以探讨Fas介导的凋亡在AA发病中的作用。正常对照骨髓CD34 + 细胞表面Fas抗原的表达率为 ( 1 0 .0 2± 2 .33) % ,重型再障组(SAA)和慢性再障组 (CAA)分别为 ( 38.2 8± 9.0 1 ) %和 ( 2 6 .6 6± 4 .2 7) % ,SAA组和CAA组与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 ) ;SAA组与CAA组比较也有显著性差异 (P <0 .0 5 )。正常骨髓单个核细胞在含SCF、IL 3、GM SCF和EPO细胞因子组合的液体培养体系中培养 ,加入IFN γ时 ,CD34 + 细胞表面Fas抗原表达稍增高 ,AA患者骨髓在上述相同的条件下 ,CD34 + 细胞表面Fas抗原表达与正常对照骨髓比较显著增高 (P <0 .0 5 ) ,且SAA组明显高于CAA组 (P <0 .0 5 )。实验结果表明 ,AA患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas的表达明显高于正常对照 ;AA患者骨髓单个核细胞体外培养时 ,IFN γ促使骨髓CD34 + 细胞表面Fas的表达作用较正常对照明显增强。结果提示 ,AA患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas的异常表达可能与AA的发病有关。     

骨髓增生异常综合征患者Fas抗原的表达及临床意义

目的:探讨Fas(CD95)在骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制中的作用及临床意义。方法:用酶联免疫夹心法检测25例MDS患者血浆可溶性Fas(sFas),用流式细胞术检测骨髓(BM)CD34+细胞、CD34-细胞、外周血单个核细胞(PBMNCs)Fas抗原的表达。结果:MDS难治性贫血伴有原始细胞增多(RAEB)/转变中的RAEB(RAEB-t)组患者骨髓CD34+细胞百分率显著高于对照组及难治性贫血(RA)组(均为P<0.01);RA组及RAEB/RAEB-t组骨髓CD34+细胞Fas表达显著高于对照组(分别为P<0.01,P<0.05),其中RA组高于RAEB/RAEB-t组,有统计学意义(P<0.05);RA组患者骨髓CD34-细胞Fas表达高于对照组及RAEB/RAEB-t组患者(均为P<0.05)。两患者组血浆sFas显著低于正常对照(均为P<0.01),sFas水平与患者血红蛋白(Hb)浓度呈正相关(r=0.67,P<0.01)。结论:MDS患者骨髓、外周血细胞Fas抗原广泛表达,Fas表达异常与MDS的发生、发展密切相关。     

胃癌组织中CD133 mRNA表达及与临床病理特征的关系

目的 探讨CD133 mRNA在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的关系.方法 选取31例手术切除的胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织标本,半定量RT-PCR检测CD133 mRNA的表达,分析胃癌组织CD133 mRNA表达与性别、年龄、肿瘤直径、浸润深度、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移和Ki-67增殖指数等临床病理特征的关系.结果 胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织CD133 mRNA的相对灰度值分别为0.378 3±0.141 1和0.038 1±0.091 9(P=0.000);肿瘤直径>5 cm者胃癌组织CD133mRNA相对灰度值显著高于肿瘤直径≤5 cm者[(0.439 3±0.148 4)vs(0.334 3±0.121 2)](P=0.041);有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者[(0.426 6±0.132 0)vs(0.239 5±0.030 9)](P=0.004),淋巴结转移率和转移淋巴结数与CD133 mRNA相对灰度值呈正相关(r=0.466,P=0.008;r=0.464,P=0.009);Ki-67低表达者CD133 mRNA相对灰度值显著高于Ki-67高表达者[(0.436 4±0.139 8)vs(0.316 4±0.117 4)](P=0.02),Ki-67表达与CD133 mRNA相对灰度值呈负相关(r=-0.461,P=0.009).结论 胃癌组织CD133 mRNA的表达与反映淋巴转移的淋巴结转移率和转移淋巴结数及反映肿瘤增殖状态的Ki-67表达相关.     

Fas基因转导大肠癌细胞株的表达

目的建立表达外源性Fas基因的大肠癌细胞株,观察Fas基因在转导前后的表达。方法采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆位点之间,以脂质体介导法将Fas基因导入受体细胞LoVo,用G418筛选克隆细胞。以dot blotting,Western blotting检测转导细胞Fas基因的表达。结果成功建立了Fas基因表达株。转导株在RNA及其蛋白水平表达均明显高于非转导株,转导细胞增殖速度、倍增时间、对数生长期等均比非转导株更为缓慢,但无显著性差异,在Fas抗体作用下,转导株细胞生长明显受到抑制,有非常显著性差异。结论Fas基因在大肠癌细胞中处于低表达状态;通过真核表达载体介导,Fas基因在RNA及其蛋白水平能有效表达。Fas表达株在Fas抗体作用下可明显抑制体外培养的大肠癌细胞的生长增殖。