旋毛虫感染期幼虫抗原的特异性分析

旋毛虫病的免疫诊断假阳性率高，与其它寄生虫病存在交叉反应。国内外学者发现旋毛虫幼虫可溶性抗原与线虫、吸虫、绦虫以及原虫等寄生虫病患者血清发生交叉反应［１］。为了阐明交叉反应的机理，提高诊断的特异性和敏感性，本实验用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了旋毛虫感染期幼...     

旋毛虫成虫三种抗原SDS-PAGE及Western-blot比较研究

目的研究大理猪源旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫虫体可溶性抗原、表面抗原和排泄分泌抗原3种抗原的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹对成虫3种抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:虫体可溶性抗原显示29条蛋白带,分子量范围在112kDa~10kDa之间,其中主带13条;表面抗原显示4条主要蛋白带,分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示17条蛋白带,分子量范围在120~14kDa之间,其中主带6条,分子量分别为120、64、43、40、35、33kDa。蛋白印迹结果:虫体可溶性抗原出现13条反应条带,其中分子量为81、40、37、33、30kDa的条带着色明显;表面抗原出现4条反应条带,其分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示7条反应带,其中43、40、27、18kDa着色明显。结论旋毛虫成虫虫体可溶性抗原与排泄分泌抗原较表面抗原蛋白组分复杂,3者主带部分属低分子量区;免疫反应性的强度表面抗原和排泄分泌抗原高于虫体可溶性抗原,说明前两种抗原是旋毛虫成虫刺激机体产生免疫应答的主要靶抗原。     

旋毛虫抗原的保护性免疫

本综述了旋毛虫的成虫、新生幼虫和肌肉幼虫街头一期的抗原及其诱导宿主产生的保护性免疫。     

旋毛虫抗原的保护性免疫

本文综述了旋毛虫的成虫、新生幼虫和肌肉幼虫等三期的抗原及其诱导宿主产生的保护性免疫。     

旋毛虫抗原的国际分类和种间的抗原变异

对旋毛虫抗原的分类 ,传统上是按照抗原的来源将其分为虫体抗原、表面抗原、排泄 -分泌 (ES)抗原及杆细胞颗粒相关抗原 ,但以前报道的多种旋毛虫抗原是相似的或相同的 ,在多数情况下是因分析技术的不同而导致了抗原分子量的细小差异 ,故一些学者曾试图根据旋毛虫抗原产生的免疫反应将其进行分组或分类 ,但需要制定统一的分类和命名标准〔1,2〕。鉴于此 ,国际旋毛虫病委员会 (InternationalCom missiononTrichinellosis ,ICT)于 1990年在荷兰的Bilthoven组织了旋毛虫抗原国际讨论会。由不同研究小组提供针对旋毛虫成虫、新生幼虫和肌幼虫…     

旋毛虫保护性抗原的研究进展

本介绍了旋毛虫保护性抗原的研究进展情况,并对旋毛虫DNA疫苗的研制提出展望。     

旋毛虫4种保虫宿主的实验研究

旋毛虫４种保虫宿主的实验研究易薇明旋毛虫病是危害严重的人兽共患寄生虫病之一。保虫宿主种类多。我国大多数人肉食以猪肉为主，因而本病的流行与猪的关系最为密切［１］。随着市场肉食品种的增多，人们的肉食结构也发生变化，作为旋毛虫其它种保虫宿主不容忽视。我们特...     

旋毛虫肌幼虫三种抗原的免疫印迹分析

应用酶联免疫印迹分析旋毛虫肌幼虫的表面抗原、S_3 抗原和虫体粗抗原,结果显示上述三种抗原的多肽组成存在一定的差异。与同源感染兔血清反应,显示表面抗原有4个免疫反应区带,分子量范围在 102～44KD之间。S_3 抗原和虫体粗抗原分别有 8和10个主要区带,分子量范围在 73～16 KD之间。与异源感染兔血清反应,显示上述抗原的低分子量多肽有较强的特异性。家兔感染旋毛虫后,血清抗体对表面抗原的识别,在不同感染时期具有相同的反应图谱,而对其他两种抗原的识别则具有阶段性的改变。     

旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用的研究

目的 探讨旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用。 方法 应用旋毛虫Ts21重组蛋白ELISA（Ts21-LISA）与肌幼虫ES抗原ELISA（ES-LISA）对旋毛虫病与其他寄生虫病患者血清及5种旋毛虫（T1、T2、T3、T4和T7）感染小鼠血清进行检测,并观察不同剂量旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体水平。将Ts21重组蛋白皮下注射免疫小鼠（20 μg/只,免疫3次,每次间隔10 d）,末次免疫后10 d,每只小鼠用300条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染,3.5 d和42 d 后剖杀,观察肠道成虫与肌幼虫数并计算减虫率。 结果 Ts21-LISA检测旋毛虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的抗体阳性率分别为94.7%（18/19）、15.8%（3/19）、9.1%（1/11）和7.7%（1/13）,与血吸虫病、华支睾吸虫病患者血清及健康人血清无交叉反应;Ts21重组蛋白与ES抗原ELISA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性与特异性差异均无统计学意义（χ²=0,P＞0.05;χ²=0.358,P＞0.05）。Ts21重组蛋白与ES抗原检测T1感染小鼠血清的敏感性差异无统计学意义（χ²=0.104,P＞0.05）,与T2、T3、T4、T7感染小鼠血清的交叉反应率明显低于ES抗原（χ²=17.069,P＜0.05）。小鼠感染300条旋毛虫后4 周,应用Ts21-LISA检测的血清抗体阳性率为100%（10/10）;小鼠感染5条旋毛虫后6周,血清抗体阳性率为100%（10/10）。Ts21重组蛋白免疫小鼠用旋毛虫攻击感染后3.5 d和42 d,肠道成虫与肌幼虫减虫率分别为42.71%和49.8%。 结论 Ts21重组蛋白可用于旋毛虫病的血清学检测,但不能忽视与并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的交叉反应。     

旋毛虫重组35.5ku蛋白免疫诊断价值的研究

目的研究旋毛虫重组35.5ku蛋白的免疫诊断价值。方法通过RT-PCR扩增旋毛虫35.5ku蛋白基因TspSP-1.2,构建重组质粒pUC18-TspSP-1.2,测序正确后亚克隆至表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达载体pET-30a(+)-TspSP-1.2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的抗原性。结果构建的重组表达载体pET-30a(+)-TspSP-1.2能够表达旋毛虫35.5ku蛋白,该重组蛋白可被旋毛虫感染小鼠血清、旋毛虫ES抗原免疫鼠血清及旋毛虫患者血清识别,与日本血吸虫、并殖吸虫、华支睾吸虫患者及正常人血清均无交叉反应,但与猪囊尾蚴患者血清有交叉反应。结论旋毛虫重组35.5ku蛋白可作为旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。     

抗旋毛虫鸡卵黄抗体的活性检测

目的制备特异性抗旋毛虫的鸡卵黄免疫球蛋白,研究其免疫应答规律及其稳定性。方法用纯化的旋毛虫幼虫免疫育龄种鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后获得卵黄抗体。应用酶联免疫吸附试验检测卵黄抗体的效价及其敏感性和稳定性。结果通过免疫可成功诱导出高效价的抗旋毛虫抗体,效价可达1∶106以上,免疫应答持续时间可达34周以上。免疫后卵黄抗体敏感性和血清抗体敏感性无显著性差异(P>0.05)。稳定性试验表明IgY敏感性高,在pH4～10及温度不超过60℃条件下活性稳定。结论成功制备出高效价的特异性抗旋毛虫卵黄抗体,其敏感性高,有一定的耐热、耐酸碱性,可进一步用于旋毛虫感染的研究。     

旋毛虫成虫排泄分泌抗原检测唾液中抗旋毛虫IgG抗体的研究

目的 评价旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫排泄分泌抗原(adult worm excretory-secretory antigen,AWESA)作为诊断抗原检测旋毛虫感染日本大耳兔唾液中抗旋毛虫IgG抗体的可行性. 方法 建立旋毛虫感染日本大耳兔和对照组兔动物模型,采集感染前和感染后1～6周兔唾液和血清以及对照组兔唾液和血清.制备AWESA,建立AWESA作为诊断抗原的间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),以市售旋毛虫IgG抗体检测试剂盒作为对照,测定感染前和感染后1～6周兔唾液和血清以及对照组兔唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体.AWESA和试剂盒测得的唾液A值和血清A值进行线性相关分析,AWESA和试剂盒测得的唾液阳性率和血清阳性率分别进行x2检验.结果 AWESA检测唾液和血清特异性IgG抗体阳性率依次为0、5%、20%、40%、60%、85%、90%,0、30%、60%、85%、95%、100%、100%,除感染后0、1、2周外其余各周唾液A值与血清A值呈显著线性相关(P＞0.05、P＞0.05、P＞0.05、P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05).市售旋毛虫IgG抗体检测试剂盒检测旋毛虫感染前和感染后兔唾液和血清中特异性IgG抗体阳性率依次为0、15%、20%、40%、55%、75%、90%,0、35%、60%、95%、95%、100%、100%,除0、1、3周外其余各周唾液A值与血清A值呈线性相关(P＞0.05、P＞0.05、P＜0.05、P＞0.05、P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05). 结论 AWESA与市售试剂盒检测唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体的阳性率具有一致性.     

大鼠对旋毛虫再感染的抵抗力实验观察

目的 研究实验感染旋毛虫（韩国分离株）的大鼠对成虫和肌期幼虫阶段感染的保护性免疫和IgG，IgG1，IgG2a抗体反应。 方法 46只大鼠随机分为7组，其中2组（A1、A2组， 共10只）用于观察成虫阶段引起的保护性免疫，B组（B1、B2组， 共14只）用于观察肌期幼虫阶段引起的保护性免疫，C组（C1、C2组，共17只）为感染对照组，D组（5只）为正常对照组。A、B和C组分别每鼠感染1 000条旋毛虫肌幼虫，分别于感染后第7天（A1、 A2组）和第30天（B1、B2组），用氟苯咪唑治疗（20 mg/kg，10 d）。治疗后第10天，A和B组每鼠再次感染500条旋毛虫肌幼虫，于感染后第7天剖杀A1和B1组大鼠，检测肠道内成虫数，于感染后第30天剖杀A2和B2组大鼠，检测横膈膜内肌期幼虫数，同时分别剖杀感染对照组和正常对照组大鼠。每组同期取血，ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。结果 旋毛虫成虫阶段对成虫和肌幼虫的保护性免疫分别为100%和99.96%，肌幼虫阶段对成虫和肌幼虫的保护性免疫分别为99.92%和99.89%。肌幼虫感染阶段抗肌幼虫分泌排泄抗原的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体与正常对照组（分别为0.5、 0.1和0.1）和成虫感染阶段（分别为0.5、 0.09和0.09）比较，抗体反应均显著增高（分别为3.0、2.2和0.8）（P<0.01）。且幼虫期抗肌幼虫分泌排泄抗原特异性IgG1抗体（2.2）显著高于特异性IgG2a抗体（0.8）（P<0.01）。 结论 旋毛虫的成虫和肌幼虫阶段的感染均对成虫和幼虫的再感染产生保护性免疫。     

Ts21重组蛋白斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫抗体的研究

目的应用旋毛虫Ts21基因重组蛋白建立诊断人体旋毛虫病及动物旋毛虫感染的快速血清学方法。方法以胶体金标SPA、旋毛虫Ts21重组蛋白与肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原包被硝酸纤维素膜(NCM),分别建立Ts21重组蛋白-斑点免疫金渗滤法(Ts21-dot immunogold-filtration assay,Ts21-DIGFA)与ES-DIGFA,对旋毛虫病及其他寄生虫病患者血清和感染动物血清进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。结果Ts21-DIGFA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性和特异性分别为94.73%和86.96%,ES-DIGFA的敏感性和特异性分别为89.47%和86.96%,差异无统计学意义(χ2敏感=0.368,χ2特异=0,P>0.05);Ts21-ELISA的敏感性和特异性分别为94.73%和94.20%,与Ts21-DIGFA相比差异无统计学意义(χ2敏感=0,χ2特异=1.272,P>0.05)。Ts21-DIGFA检测旋毛虫感染猪血清的敏感性和特异性分别为88.89%和100%,ES-DIGFA的敏感性和特异性分别为94.44%和95.00%,差异均无统计学意义(χ2敏感=0,χ2特异=0,P>0.05)。小鼠感染300条旋毛虫后4周Ts21-DIGFA的血清抗体检出率为100%(10/10);感染10条及5条旋毛虫后6周血清抗体检出率均为100%(10/10)。DIGFA可在3 min内肉眼观察结果,抗原包被后的NCM和金标SPA在4℃至少保存6个月。结论Ts21-DIGFA检测旋毛虫抗体具有较高的敏感性和特异性及良好的稳定性和重复性,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。     

以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体

目的 寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。 方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原，分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗，建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法，并以旋毛虫肌幼虫排泄?鄄分泌（ES）抗原作为检测对照。 结果 以T668重组蛋白为抗原，对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测，阳性检出率为100 ％，且敏感性高（0.016 μg / 孔），与ES抗原检测结果完全一致。 结论 T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。     

三苯双脒对小鼠感染3个旋毛虫分离株的疗效观察

目的观察三苯双脒对感染3个分离株旋毛虫小鼠的疗效。方法将144只昆明小鼠随机均分为A组和B组,每组72只。A组小鼠再随机均分为12组,即河南分离株(以下简称河南株)、云南分离株(以下简称云南株)和黑龙江分离株(以下简称黑龙江株)旋毛虫感染组各4组,每组小鼠各感染旋毛虫分离株幼虫200条/只,感染后5 d(即成虫期)分别顿服三苯双脒10、20和30mg/kg,同时设未服药对照组。B组的分组和感染同A组,感染后53 d(即幼虫成囊期)分别灌胃三苯双脒100、200和300mg/(kg.d),1次/d×7d。A组治疗后2d处死,计数小肠内成虫数。B组治疗后10d处死,剖取全部膈肌,经消化液消化后计数幼虫。计算各组平均虫数和减虫率。结果A组中,河南株和云南株各治疗组平均虫数均低于对照组(P<0.01),河南株3个治疗组的减虫率分别为39.0%、57.9%和86.0%,云南株的减虫率分别为34.9%、69.3%和92.2%,分别随服用三苯双脒剂量的增加,减虫率呈增高的趋势,其中30 mg/kg组各有2只鼠被治愈。黑龙江株10 mg/kg组的平均虫数与对照组的差异无统计学意义(P>0.05),其他2个剂量组平均虫数均显著少于对照组(P<0.01),3组的减虫率分别为27.9%、57.4%和60.7%,亦随服用三苯双脒剂量的增加,减虫率呈增高的趋势。B组各治疗组小鼠的平均虫数均低于对照组(P<0.05),河南株的减虫率分别为57.8%、75.4%和87.5%,云南株的分别为74.5%、92.4%和99.1%,黑龙江株的分别为50.5%、53.3%和61.6%。可见3个旋毛虫感染组均随服药剂量的增加,减虫率相应增高。30 mg/kg剂量组中,云南株的减虫率与河南株的和黑龙江株的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三苯双脒对小鼠体内3个地域分离株旋毛虫成虫和成囊期幼虫均有一定的疗效,对云南株旋毛虫疗效更明显。