胰腺癌外周血mdr1及其转录区域结合位点甲基化的检测和临床意义

目的：研究胰腺癌肿瘤组织及外周血有核细胞多药耐药基因1（mdr1）及其转录区域结合位点甲基化的表达及其相关性,探索适用于临床观察多药耐药性变化的有效手段。方法：应用免疫组织化学法和FQ-PCR技术、MSP方法分别检测胰腺癌肿瘤组织及其对应外周血标本中的mdr1的表达和转录区域结合位点甲基化程度,并通过Pearson统计学方法分析两者的相关性。结果：胰腺癌P-gp的表达与mdr1mRNA表达明显相关,并与mdr1基因转录区域结合位点甲基化程度显著相关。外周血中mdr1及其转录区域结合位点甲基化的表达与肿瘤组织中的表达存在显著相关性（P〈0.01）。结论：mdr1转录区域结合位点的甲基化与胰腺癌的多药耐药性密切相关;检测外周血mdr1及其甲基化的表达可动态监察胰腺癌病人化疗前后多药耐药性的变化,为临床治疗方案的决择提供依据。     

θ����P-gp��K-Ras����ϵ���о�

多药耐药基因mdrl产物P-糖蛋白(P-gp)在正常胃、大肠组织及其肿瘤中表达水平均较高，表现为原发性耐药。通过肿瘤细胞个体的遗传背景预测肿瘤化疗敏感性是恶性肿瘤个体化治疗的基础。本文研究P-gp表达与K-ras基因表达的关系，为从基因水平逆转胃肠癌多药耐药提供理论依据。     

逆转肝癌MDR的研究

多药耐药(multidrug resistance，MDR)是影响肝癌疗效的首要因素。其机制非常复杂，mdr1／Pgp的高表达是肝癌MDR产生的主要原因，故目前逆转MDR的研究也集中于mdr1／Pgp，主要有CSA的研究、抑制mdr1的转录和翻译、提高机体正常组织的耐药性，使其耐受较高浓度的化疗药物及多药耐药细胞株的建立等。     

膀胱癌多药耐药基因产物的表达及临床意义

目的探讨膀胱癌组织的多药耐药基因（mdr－1）产物P-糖蛋白（P-GP）的表达情况。方法应用LSAB免疫组化技术研究25例初发膀胱癌及16例复发膀胱癌的P－GP阳性表达。结果初发膀胱癌P－GP阳性表达率48％,复发膀胱癌P-GP阳性表达率87.5％,复发性膀胱癌P－GP阳性表达率明显高于初发肿瘤（P＜0.05）。不同病理分级、临床分期间的P－GP阳性表达率无显著性差异（P＞005）。结论膀胱癌的P－GP阳性表达水平与肿瘤病理分级及临床分期无关。复发性膀胱癌有较高的P－GP表达是由于肿瘤接触化疗药物后,mdr－1基因扩增所致。P－GP的过度表达可能是膀胱癌腔内化疗失败的重要原因之一。     

肿瘤坏死因子α逆转人肝癌多药耐药性的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）作为多药耐药（MDR）逆转剂,特别是作为多重MDR逆转剂的作用及其机制。方法用本单位建立的肝癌SMMC7721MDR亚系作为MDR模型,用MTT法观察TNFα对MDR的逆转作用,用RT－PCR、流式细胞术观察TNFα对MDR基因表达的影响。结果TNFα对mdr1、LRP、GSTP1和TopoⅡα基因介导的耐药性逆转率为87．52％～100％,对MRP基因介导的耐药性无逆转作用,对多重MDR细胞耐药性的逆转率为76．28％～100％。TNFα对mdr1、LRP、和GSTP1基因的表达有下调作用,对TopoⅡα基因的表达有上调作用,对MRP基因的表达无影响。结论体外细胞实验证实TNFα为多重MDR逆转剂。     

泌尿系肿瘤的多药耐药与逆转

肿瘤对化疗药物耐药是肿瘤难以治愈的主要原因，本文概述了泌尿系肿瘤多药耐药的机制，Ｐ－糖蛋白在正常组织，泌尿系肿瘤中的表达，并对多药耐药逆转研究的现状做了介绍。     

尿系肿瘤的多药耐药与逆转

肿瘤对化疗药物耐药是肿瘤难以治愈的主要原因，本文概述了泌尿系肿瘤多药耐药的机制，Ｐ－糖蛋白在正常组织、泌尿系肿瘤中的表达，并对多药耐药逆转研究的现状做了介绍。     

体内基因转移建立多药耐药性人膀胱癌裸鼠荷瘤模型

目的 建立人膀胱癌多药耐药性裸鼠荷瘤模型。方法 应用逆转录病毒上清液裸鼠皮下移植瘤内及瘤周注射法转移ｍｄｒ１基因,腹腔注射化疗药物观察肿瘤模型的耐药性,免疫组化检测肿瘤细胞Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）的表达,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤内ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量。结果 携带ｍｄｒ１基因的逆转录病毒上清液注射后肿瘤模型产生多药耐药性,经过滤和离心浓缩的病毒上清液６０％细胞表达Ｐ－ＧＰ,是病毒原液基因转移率的２倍     

低浓度活性氧逆转肾癌先天性多药耐药的实验研究

目的探讨低浓度活性氧对肾癌786-O细胞先天性多药耐药的逆转作用及相关机制。方法采用WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒确定活性氧H2O2的非细胞毒性剂量,以及对786-O细胞药物敏感性的影响。罗丹明123实验检测细胞P糖蛋白(P-gp)功能,Western blot方法检测经典多药耐药基因(mdr1)产物P-gp的表达。结果在0.00001～0.1mmol/L浓度范围内,H2O2具有明显的促细胞生长作用,且显著增加了阿霉素及长春新碱的细胞毒性,0.02mmol/LH2O2孵育786-O细胞72h后其对阿霉素及长春新碱的药物敏感性分别增加至对照组的5.43及4.47倍,荧光染料罗丹明123的蓄积量显著增加,Western blot检测结果显示0.02mmol/LH2O2可抑制肾癌786-O细胞P-gp的表达。结论低浓度活性氧H2O2可部分逆转人肾癌786-O细胞先天性多药耐药对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内化疗药物浓度、抑制P-gp的表达有关。     

缺氧诱导因子1a依赖性缺氧诱导人肝癌细胞多药耐药相关基因的表达及意义

目的探讨缺氧环境下人肝癌细胞中多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1a(HIF-1a)的表达和意义，从而部分阐明肝细胞癌发生多药耐药的机制，为逆转肝癌耐药提供新的分子靶点。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分别行不同时间低氧培养和转染HIF-1a/PCDNA3质粒；应用荧光定量聚合酶链反应技术和蛋白免疫印迹技术分别检测每组HepG2细胞中多药耐药相关基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药相关蛋白(LRP)在mRNA和蛋白水平的表达。结果在缺氧组，随着缺氧时间的延长HepG2细胞中多药耐药相关基因mdr1、MRP1和LRP的表达均逐渐增高，且以MRP1变化更为显著；而且这些多药耐药相关基因的表达升高与缺氧诱导因子-1a的表达呈同步化改变。在HIF-1a/PCDNA3质粒转染细胞中这些多药耐药相关基因的表达亦明显升高。结论缺氧可通过核转录因子HIF-1a上调肝癌细胞内mdr1，LRP、MRP1等多药耐药相关基因的表达，从而使肝细胞癌获得多药耐药性。生长局部微环境的缺氧是诱导肝癌产生多药耐药性的重要原因之一。核转录因子HIF-1a和这些多药耐药相关基因将可能成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

Absence of structural alterations of the multidrug resistance genes in transitional cell carcinoma

Summary Tumor DNA from 27 patients with treated or untreated transitional cell carcinomas of the urinary tract was screened for genomic alterations of the multidrug resistance genes in order to determine whether structural changes of these genes are important in primary urothelial tumors. None of the tumors showed evidence of amplification or rearrangements of either mdr1 or mdr2. The lack of amplification or rearrangements observed in these tumors suggests that structural alterations of the mdr1 and mdr2 genes are not important mediators of drug resistance in TCC.Supported in part by grant CA-34775 from the National Institutes of Health and by a grant from the Heckscher Foundation for ChildrenDr. Klein is a fellow of the American Cancer Society     

反义核酸对膀胱癌细胞系多药耐药性的逆转效应

目的 探讨多药耐药性逆转的新方法。方法 应用基因重组方法构建能转录出ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ反义ＲＮＡ的逆转录病毒质粒,然后将该质粒导入膀胱癌耐药细胞系中,测定转染细胞对不同药物的耐药性,观察反义核酸对ＭＤＲ的逆转效应。结果 耐药细胞经导入反义核酸逆转录病毒质粒后,对阿霉素（ＡＤＭ）、秋水仙素（ＣＯＬ）的ＩＣ５０显著降低（Ｐ〈０．０１）;细胞膜上Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）染色信号显著减弱。结论 反义核酸是逆     

Circumvention of Multidrug Resistance in Genitourinary Tumors

Chemotherapy is the principal strategy to systemically challenge metastasized cancers of genitourinary origin. Unfortunately, the efficacy of chemotherapy is often hampered by multidrug resistance, the resistance to a variety of structurally and functionally distinct cytotoxic agents. Multidrug resistance can be either intrinsic or acquired, and can be caused by several mechanisms. The so-called classical multidrug resistance, mediated by the MDR1 gene product P-glycoprotein, has been held mainly responsible for inferring the multidrug resistance phenotype on urologic malignancies. However, several other multidrug resistance pathways have been identified. Multidrug resistance can be caused by the membrane-bound multidrug-resistance-associated protein, the detoxifying glutathione metabolism, the antiapoptotic protein BCL2, and changes in levels or activity of the topoisomerase enzymes. Strategies to overcome multidrug resistance of genitourinary tumors have arisen from the better understanding of the biologic and molecular mechanisms of multidrug resistance, and have been studied in experimental and clinical settings. However, attempts to modulate multidrug resistance in clinical renal cell, bladder, prostate, and testicular cancer have not been very rewarding so far, despite the optimism that had arisen from experimental data. Nevertheless, application of novel therapies to reverse multidrug resistance and to increase efficacy of chemotherapy for urologic cancers should be further pursued, within the setting of controlled clinical trials, to improve on current strategies.     

裸鼠人肝癌原位移植多药耐药模型的建立及其耐药机制的探讨

目的　在体内建立人肝癌裸小鼠原位移植多药耐药模型,并研究其耐药机理。方法采用人肝癌（BEL-7402）裸小鼠（4～6周龄）原位移植,给予阿霉素(1.5mg/kg体重,每周1次)腹腔注射诱导耐药（共8周）,经四唑蓝(MTT)快速比色法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性,以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P-糖蛋白（P-gp）的表达,并用罗丹明试验观察该蛋白功能。结果　移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征,实验组肝癌细胞表面P-gp表达为(75.45±5.67)%,而对照组表达仅(4.25±1.28)%,差异有非常显著性（P＜0.01）,对阿霉素的耐药倍数提高了16.67倍,对羟基喜树碱具有交叉耐受性（13.67倍）。耐药细胞表面P-gp有较强的药物外排功能。结论　阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生,其耐药倍数与临床肝细胞癌相似。该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生机制以及逆转其多药耐药性具有重要价值。     

MBD1甲基化调控胰腺癌BxPC-3细胞株mdr1转录及其表达的研究

目的 观察MBD1通过对mdr1转录区域结合位点甲基化影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.方法 应用RNA干扰技术对人胰腺癌细胞株BxPC-3中MBD1基因进行抑制;应用定量荧光聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术、MSP(甲基化专用聚合酶链式反应)方法分别检测转染前后细胞株中的mdr1 mRNA的表达差异和转录区域结合位点甲基化变化.结果 成功构建并转染MBDI siRNAs至人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3(BxPC-3)细胞中,证实MBDI mRNA水平明显下调(下调幅度为93.19%).MBD1下调后,mdr1 DNA转录区域(-110GC和-50GC)甲基化分别上调(上调幅度分别为181.98%和409.57%);mdr1 mRNA表达明显下调(下调幅度为97.79%).结论 MBD1可通过对mdr1转录区域结合位点甲基化的影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.     

胰腺癌阿霉素耐药细胞株SW1990/ADM的建立及其耐药机理研究

目的　建立人胰腺癌阿霉素 (ADM )耐药细胞株SW 1990 /ADM ,探讨其耐药机理。方法　采用ADM体外浓度梯度倍增法诱导培养人胰腺癌细胞株SW 1990 10个月 ,获得耐药细胞株SW 1990 /ADM ,脱药培养 2个月后检测其生物学性状、药物敏感性及多药耐药基因mdr1的功能及表达情况。结果　与亲本细胞株SW 1990相比 ,SW1990 /ADM在形态学上发生了一系列变化 ;对包括ADM在内的多种化疗药物均表现出一定的耐药性 ,其对ADM、丝裂霉素、氟尿嘧啶和健择的耐药指数分别达到 4 9.6 0、7.2 5、3.80和 1.2 5 ;其mdr1mRNA的表达亦明显高于亲本细胞株SW 1990 (P<0 .0 1)。结论　体外浓度梯度倍增法可建立稳定传代的人胰腺癌耐药细胞株SW1990 /ADM。其耐药性与mdr1的表达呈正相关。     

肾癌细胞的耐药性及其机制的研究

为探讨肾癌的耐药性及其机制,作者应用四唑蓝快速比色法测定了肾癌细胞系（ＧＲＣ－１）的耐药谱,并应用免疫细胞化学、流式荧光法研究了其耐药的机制。结果显示ＧＲＣ－１对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙、卡铂交叉耐受。此细胞表达多药耐药基因产物Ｐ－糖蛋白和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ－π）,流式荧光法显示细胞内药物积累减少,药物外排增加。研究表明ＧＲＣ－１为原发性多药耐药细胞系,Ｐ－糖蛋白介导的多药耐药机制和ＧＳＴ－π介导的谷胱甘肽硫转移酶解毒机制均参与了细胞的耐药。ＧＲＣ－１细胞是研究耐药的理想靶细胞。