桑叶生物碱类成分研究概况

桑叶是我国的传统中药之一。现已分离出的8种生物碱单体,其中已知1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)具有高效的糖苷酶抑制作用,fagomine能够促进胰岛素分泌和降低胰岛素抵抗,同时,桑叶总生物碱还具有抑制糖原分解的活性。本文主要对其单体结构、生物活性、提取纯化工艺和检测方法的研究进行归纳讨论,对近几年的桑叶生物碱研究现状进行综述。通过研究桑叶生物碱的化学结构和性质,并且总结分析其含量检测的各种方法和原理及适用范围,从而为生物碱检测方法的进一步改进提供参考。另外,桑叶生物碱在结构上以吡咯烷型生物碱、去甲莨菪烷型生物碱、亚氨型生物碱为主,分子中均具有2~5个羟基的多羟基生物碱,某些羟基与葡萄糖、半乳糖形成α,β糖苷。但是,目前桑叶生物碱的含量测定方法主要集中在对其中1-脱氧野尻霉素的研究上,对于总生物碱含量的测定方法研究相对较少。因此,在1-DNJ含量测定的方法基础上,建立合适的桑叶总生物碱含量测定方法很有必要,也为充分开发桑叶药用价值提供了铺垫。     

HPLC-MS/MS法分析桑叶总生物碱成分及总生物碱含量

目的:利用HPLC-MS/MS法,对桑叶总生物碱部位中的各生物碱成分进行分析和鉴别,并采用柱前衍生化HPLC-UV法测定生物碱部位中总生物碱的含量。方法:采用HiQSiL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)为柱前衍生化试剂,流动相为乙腈-0.1%醋酸(50:50,V/V),流速0.8 mL.min_-1,检测波长为254 nm;电喷雾离子源(ESI);正离子检测模式;以1-脱氧野尻霉素(DNJ)为对照,外标法计算桑叶总生物碱含量。结果:鉴定了6个生物碱类成分分别为DNJ,fagomine,3-epi-fagomine,DAB,Calystegine B₂和2-O-β-Glc-DAB;测定3批供试品中总生物碱含量均达到75%以上。结论:本法简便、准确、灵敏,可用于桑叶总生物碱及其制剂的定性定量分析。     

高效液相色谱-串联四极杆质谱法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素

目的:建立高效液相色谱-串联四级杆质谱联用测定桑叶中1-脱氧野尻霉素含量的方法.方法:以乙腈0.1%甲酸水溶液(12:88,v/v)为流动相,SHIMADZU HRC-NH2柱分离,采用大气压化学电离源(APCI),164.1/146.1,164.1/110.2两对离子,多反应监测(MRM).结果:1-脱氧野尻霉素保留时间为2.87 min,标准曲线在482～2 410μg/L范围内线性关系良好(r=0.9993),平均加样回收率为95.8%,最低检测限为53.6μg/L.结论:该方法选择性强、灵敏度高,可为桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量测定提供参考.     

不同产地桑叶的1-脱氧野尻霉素含量比较

目的比较不同产地桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量.方法采用HPLC法,色谱柱HiQSiLC18(5 μm, 250 mm×4.6 mm);流动相乙腈-0.1%醋酸(55∶ 45,V/V);流速1.0 ml/min;柱温25℃;荧光检测器激发波长254 nm,发射波长322 nm.结果不同产地桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量有较大差异,且同一产地不同品种相差也较大.结论本测定结果可为开发利用桑叶资源提供依据.     

桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素的含量考察

 目的建立桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的测定方法,并考察不同采摘时间、不同种植基地及药用部位的桑叶药材中总生物碱和DNJ含量。方法采用雷氏盐比色法测定总生物碱含量;应用HPLC-ELSD测定DNJ含量。流动相为乙腈-水(80:20);流速:1.0mL·min^-1;柱温30℃;进样量:20μL。漂移管温度55℃;载气(N₂)压力:0.15MPa。结果本实验所建立的方法准确、重复性好。不同采摘时间、采摘部位的桑叶中二者含量差异较大,不同种植基地的桑叶中二者含量变化相对较小。结论测定结果表明,桑叶中DNJ和总生物碱的含量与采摘时间、种植基地及药用部位等密切相关,其中采摘季节、部位影响较大。     

HPLC-MS-MS分析桑叶总生物碱组成及含量

目的： 采用HPLC-MS-MS法,对桑叶总生物碱部位中的各生物碱成分进行分析和鉴别,采用柱前衍生化HPLC-UV测定生物碱部位中总生物碱的含量。 方法： 采用HiQSiL C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以9-氯甲酸芴甲酯（FMOC-Cl）为柱前衍生化试剂,流动相乙腈-0.1%醋酸（50：50）,流速0.8 mL·min^-1,检测波长254 nm,电喷雾离子源（ESI）,正离子检测模式,以1-脱氧野尻霉素（DNJ）为对照,外标法计算桑叶总生物碱含量。 结果： 鉴定了6个生物碱类成分分别为DNJ,fagomine,3-epi-fagomine,DAB,calystegine B₂和2-O-β-Glc-DAB;测定3批供试品中总生物碱含量均达到75%以上。 结论： 该法简便、准确、灵敏,可用于桑叶总生物碱及其制剂的定性定量分析。     

桑不同药用部位总生物碱对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用

目的:比较桑不同药用部位(桑叶、桑枝、桑白皮)总生物碱对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。方法:采用采用蒸发光散射检测器(ELSD)-高效液相色谱法(HPLC)测定桑不同药用部位总生物碱中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量;以半数抑制浓度(IC 50)为评价指标,以阿卡波糖为阳性对照,以对-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,采用体外抑制模型评价桑不同部位总生物碱对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。结果:桑不同药用部位总生物碱中DNJ质量分数为桑白皮生物碱(30.1%)>桑枝生物碱(25.8%)>桑叶生物碱(21.4%)。桑不同药用部位总生物碱对α-葡萄糖苷酶抑制作用强度为桑枝生物碱>桑叶生物碱>桑白皮生物碱>阿卡波糖。结论:在桑枝、桑叶、桑白皮总生物碱中,以桑枝总生物碱对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用最强,为桑资源开发辅助降血糖的药品和保健食品提供依据。     

蚕沙中生物碱成分研究

目的:对蚕沙中生物碱成分进行分离纯化和结构鉴定。方法:应用大孔树脂、离子交换树脂、葡聚糖凝胶等多种柱层析手段分离纯化生物碱成分,用质谱和核磁等光谱方法确定化合物的结构。结果:从蚕沙总生物碱部位中分离得到3个生物碱化合物,根据ESIMS、氢谱和碳谱数据鉴定为1-脱氧野尻霉素(1)、fagomine(2)和3-epi-fagomine(3)。结论:1-脱氧野尻霉素、fagomine和3-epifagomine均为首次从蚕沙中分离得到。     

桑叶总生物碱中1-脱氧野尻霉素在大鼠体内的药物动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中1-脱氧野尻霉素(DNT)含量的柱前衍生-高效液相色谱荧光法,初步研究桑叶总生物碱中DNJ在大鼠体内的药动学过程。方法大鼠灌胃桑叶总生物碱(给药剂量按DNJ计约为80 mg·kg-1)后不同时间点采集血样,采用柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定,色谱条件为HiQSiL C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%醋酸水溶液(40∶60,V/V)为流动相,荧光检测器激发波长254 nm,发射波长322 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温25℃。DNJ血药浓度-时间数据用药动学软件3P97处理。结果 DNJ血浆浓度在1.4～22.4 mg·L-1线性关系良好,血浆中1-脱氧野尻霉素定量下限为1.4 mg·L-1。日内、日间精密度(RSD)分别为3.7%～5.8%和4.6%～6.0%,方法回收率为97.6%～101.5%,提取回收率为76.3%～81.6%。DNJ在大鼠体内的血药浓度-时间过程符合二房室模型,Ka=(4.85±0.95)h-1,AUC=(19.22±1.37)mg·h·L-1,Cmax=(12.98±1.92)mg·L-1,Tmax=(0.50±0.00)h。结论该法准确可靠,专属性强,适用于DNJ在大鼠体内的血药浓度测定及药代动力学研究。     

RP-HPLC测定不同地区、不同采集期桑叶中1-脱氧野尻霉素

桑叶异名铁扇子,为桑科植物桑Morus alba L.的干燥叶[1],始载于《神农本草经》,味苦、甘,性寒,归肺、肝经,具有祛风清热、凉血、明目等功效,用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头疼、目赤昏花等症;历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症,近代医家也常将桑叶用于糖尿病,且取得满意疗效。现代医学研究证明桑叶有效成分之一多羟基生物碱具有降低血糖等作用[2,3]。1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)是桑叶中的一种生物碱,其作为α-葡萄糖苷酶的抑制剂,具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤转移等作用[4~6]。目前,1-DNJ主要是采用硅烷衍生化后用GC-MS法鉴定其结构[7…     

正交试验设计优化桑叶总生物碱提取工艺

目的:利用正交试验设计研究桑叶总生物碱的最佳提取工艺。方法:以煎煮时间和加水量为考察因素,以总生物碱含量为评价指标,采用正交试验优选最佳水煎煮提取工艺条件。结果:优选的最佳提取工艺为用12倍量水煎煮1h。结论:优选得到的工艺稳定、可行,提取得到桑叶总生物碱含量高。     

亚麻仔油联合桑叶茶调治脂代谢异常64例

[目的]观察亚麻仔油联合桑叶茶调治脂代谢异常疗效。[方法]对64例脂代谢异常患者使用冷榨亚麻仔油,40mL/d。食用方法:在炒熟的菜肴、粥、汤、面条中滴入或直接服用亚麻仔油,每次20mL,早晚各服1次。每日泡饮桑叶茶30g,于早、中、晚餐后以桑叶茶10～15g沸水冲泡数分钟后温饮。连续治疗4周为1疗程。观测临床症状、血压、舌质、舌苔、脉象,生化指标(血脂四项、血糖)、心电图、不良反应。连续治疗2疗程,判定疗效。[结果]显效42例,有效21例,无效1例,总有效率98.40%。[结论]亚麻仔油联合桑叶茶调治脂代谢异常疗效满意。     

正交试验优选桑籽中总生物碱、总黄酮及粗多糖的提取工艺

目的： 优选桑籽中总生物碱、总黄酮及粗多糖的提取工艺。 方法： 将桑籽脱脂后,以总生物碱、总黄酮及粗多糖提取量的综合评分为指标,在单因素试验基础上,通过正交试验考察提取时间、乙醇体积分数及盐酸摩尔浓度对提取工艺的影响。总黄酮、总生物碱及粗多糖的含量测定依次采用Al（NO₃）₃法、雷氏盐比色法及蒽酮-硫酸法。 结果： 最佳提取工艺为提取时间2 h,乙醇体积分数50%,盐酸摩尔浓度0.03 mol·L^-1;总生物碱、总黄酮及粗多糖平均提取量分别为23.15,0.57,0.51 mg·g^-1。 结论： 该工艺稳定可行,提取效率高,适用于工业化生产,为桑籽资源的开发利用提供参考。     

桑叶提取物对MSG肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响

[目的]研究桑叶提取物改善L-谷氨酸钠诱导的MSG大鼠胰岛素抵抗的影响。[方法]选取桑叶中总多糖、总黄酮和总生物碱提取物作为受试药物。复制MSG大鼠模型,随机分为模型对照组、罗格列酮组、非诺贝特组、桑叶总多糖高、低剂量组,桑叶总黄酮高、低剂量组,桑叶总生物碱高、低剂量组;另选健康SD大鼠作为正常对照组。连续给药8周,实验期间进行蔗糖耐量和胰岛素耐量实验。给药8周后腹主动脉取血,检测空腹葡萄糖和血清胰岛素含量,并计算胰岛素敏感指数。[结果]桑叶提取物各给药组对MSG大鼠空腹血糖和血清胰岛素有明显的抑制作用,并具有一定的改善糖耐量和胰岛素耐量,升高胰岛素敏感指数的作用。[结论]桑叶总多糖、总黄酮和总生物碱能够明显改善MSG大鼠胰岛素抵抗,为桑叶改善糖尿病前期糖脂代谢异常的药效基础提供实验依据。     

基于UPLC-DAD指纹图谱结合化学计量学及6种成分含量测定的桑叶质量研究

[目的]建立超高效液相色谱法(UPLC)-DAD指纹图谱方法,结合化学计量学与多指标含量测定综合评价桑叶质量.[方法]采用Agilent EC-C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),柱温35℃;检测波长分别为290 nm(检测没食子酸甲酯、隐绿原酸)和360 nm(检测芦丁、异槲皮苷、山奈酚-3-O-芸香糖...     

正交设计优选桑葚籽总生物碱提取工艺的研究

目的:探讨桑葚籽中总生物碱提取的最佳工艺.方法:将桑葚籽粉碎,用正己烷对桑葚籽进行脱脂.以桑葚籽总生物碱提取率为指标,考察盐酸浓度、乙醇浓度、浸提时间、溶剂倍量、浸提温度、浸提次数等因素对桑葚籽总生物碱提取率的影响,选取浸提温度、乙醇浓度、盐酸浓度进行工艺优化的正交设计,得出桑葚籽总生物碱提取的最佳工艺.结果:对提取率...     

不同品种不同生长期桑叶中生物碱类与黄酮类化学成分的积累动态分析评价

对不同品种、不同生长期的11个品种88个桑叶样品中生物碱类、黄酮类资源性化学成分的积累动态进行分析评价, 以期探讨桑叶的适宜采收期及桑叶的资源化利用途径。采用UPLC-TQ/MS联用技术对桑叶中的生物碱类、黄酮类成分进行分析评价。结果表明, 不同品种、不同生长期桑叶中的生物碱类、黄酮类成分含量差异较大, 随着物候期的顺延, 生物碱类成分的含量呈总体下降趋势, 10月份后大幅下降;黄酮类成分的含量变化较小, 10月份之后亦呈下降趋势。广东桑中黄酮类成分远高于生物碱类成分, 而鸡桑则相反;华桑和蒙桑中生物碱类成分在7-8月间迅速下降;白桑中的生物碱类、黄酮类成分含量均处于中等水平。综合分析, 药用桑叶的适宜采收期在9月底10月初。研究结果为桑叶的合理采收及资源化利用提供了科学依据。     

基于解离度控制的桑枝生物碱树脂分离工艺优化

[目的]基于生物碱解离常数(pKa)与氨基酸等电点(pI)的差异,筛选树脂处理的活化剂种类,优化桑枝生物碱分离纯化工艺。[方法]分别采用常规的盐酸及不同p H值的缓冲液为活化剂对732阳离子树脂进行处理,柱前衍生化-高效液相色谱(HPLC)法对生物碱及氨基酸进行分析,比较桑枝水提液经吸附交换后的生物碱与氨基酸泄漏曲线,测定1-脱氧野尻霉素(DNJ)吸附量,考察氨水洗脱后产物中生物碱的色谱纯度。[结果]常规的盐酸活化剂处理树脂,生物碱及总氨基酸均未泄漏,而采用pH 5.6及4.6的缓冲液作为活化剂,总氨基酸提前泄漏;与pH 5.6缓冲液相比,p H降至4.6时,生物碱吸附量由1.84 mg/g(DNJ质量/树脂质量)提高至2.23 mg/g;缓冲液处理后的生物碱提取物,色谱纯度由23.6%提高至79.6%。[结论]通过调节树脂的pH值环境,可使生物碱和氨基酸以不同的解离状态存在,减少氨基酸吸附,提高阳离子树脂吸附选择性,提高生物碱分离纯化效果。