缺氧条件下CXCL13通过MAPK信号通路促进人骨髓间充质干细胞增殖和自噬

目的探索CXC趋化因子配体13(CXCL13)对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)自噬和增殖的影响及机制。方法 hBMSC分为对照组、缺氧组、 CXCL13处理组、 CXCL13和SB203580的联合处理组。除对照组外,其余各组均在920 mL/L N_2、 30 mL/L O_2和50 mL/L CO_2建立的细胞缺氧模型下进行培养。缺氧组不进行任何处理, CXCL13处理组给予50 ng/mL CXCL13重组蛋白刺激,联合处理组则预先添加20μmol/L丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580,培养30 min后,再以50 ng/mL CXCL13刺激。分别采用噻唑蓝(MTT)法检测hBMSC增殖活性, annexinⅤ-FITC/PI双标记结合流式细胞术检测hBMSC的凋亡, Western blot法检测hBMSC的核因子κB(NF-κB)、 beclin-1蛋白水平, ELISA检测细胞裂解液自噬相关蛋白7(ATG7)的含量。结果与缺氧组及联合处理组相比, CXCL13处理组hBMSC的细胞增殖活性、 beclin-1及NF-κB蛋白水平均升高、凋亡率明显降低;细胞裂解液ATG7水平升高。结论缺氧环境下, CXCL13通过MAPK/NF-κB信号通路促进hBMSC自噬和增殖。     

白细胞介素34(IL-34)促进大鼠根尖牙乳头干细胞增殖并向成牙成骨分化

目的 探究白细胞介素34(IL-34)对大鼠根尖牙乳头干细胞(SCAP)成牙、成骨分化的影响。方法 采用酶消化法分离培养大鼠SCAP,实时荧光定量PCR检测IL-34在大鼠SCAP中的表达。采用噻唑蓝(MTT)法分析不同浓度IL-34对大鼠SCAP增殖活性的影响。茜素红染色观察矿化情况，划痕实验检测增殖能力，实时荧光定量PCR检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、 Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)的表达。应用Western blot法检测ALP、 DSPP、 RUNX2、 OSX蛋白的表达。结果 IL-34促进大鼠SCAP增殖的最大剂量为100 ng/mL,茜素红染色显示IL-34能够促进SCAP的矿化。100 ng/mL IL-34处理显著提高成骨相关基因ALP、 DSPP、 RUNX2、 OSX的表达。结论 IL-34能够促进大鼠SCAP的增殖并向成牙/成骨分化。     

盐酸小檗碱通过PI3K/Akt信号通路促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的分化

目的:研究盐酸小檗碱对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1分化与矿化的调控作用及其机制。方法:MC3T3-E1细胞给予不同浓度(0、1、5、10和20 mg/L)的盐酸小檗碱刺激3 d,CCK-8法检测细胞活性。不同浓度的盐酸小檗碱分别干预3 d和7 d,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。进一步将实验随机分为4组:对照组、盐酸小檗碱组、盐酸小檗碱+LY249002(PI3K/Akt通路抑制剂)组及LY249002组。干预2 d后,采用real-time PCR检测成骨细胞分化相关因子ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达情况,采用Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt的表达水平。将MC3TC-E1细胞用矿化培养基诱导21 d,茜素红染色检测其矿化情况。结果:与对照组相比,不同浓度的盐酸小檗碱对细胞活性的影响没有明显差异;不同浓度的盐酸小檗碱处理MC3T3-E1细胞后ALP活性有不同程度升高。Real-time PCR结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进ALP、OCN、OPN及Runx2的mRNA表达(P 0. 01),而LY294002能抑制这些分化相关因子的表达。Western blot检测结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进p-Akt蛋白的表达(P 0. 01),其作用被LY249002抑制。茜素红染色发现盐酸小檗碱组矿化明显,但LY294002能抑制盐酸小檗碱的促进作用。结论:盐酸小檗碱可以促进小鼠前成骨细胞的分化与矿化,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。     

两种斯赤列提取物促进成骨细胞的增殖与分化

背景：在骨稳态中,成骨细胞和破骨细胞通过释放多种调节因子在骨重塑中发挥重要作用,一旦两种细胞功能和活性的动态平衡被打破,则易引起骨质疏松等骨骼疾病。彝族人民常用斯赤列治疗跌打损伤、骨折创伤等,作者所在课题组前期研究发现斯赤列的水提取物(SAW-A)和二氯甲烷提取物(SAW-B)为其治疗骨折的活性部位,具有促进骨折愈合、改善骨质疏松的作用,但其活性部位对成骨细胞增殖、分化作用的影响尚不清楚。目的：探讨斯赤列改善骨质疏松的活性部位——水提取物(SAW-A)和二氯甲烷提取物(SAW-B)对成骨细胞增殖与分化的影响。方法：胶原酶消化法提取新生SD大鼠颅骨成骨细胞,CCK-8试剂盒检测SAW-A和SAW-B的细胞毒性;分别给予SAW-A(312.5 mg/L)和SAW-B(156.15 mg/L)干预大鼠第3代成骨细胞,于24,48,72 h用CCK-8试剂盒检测成骨细胞增殖活性;流式细胞仪检测SAW-A、SAW-B干预6 d后对细胞活性的影响,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色检测SAW-A、SAW-B干预后成骨细胞的增殖分化情况,实时荧光定量PCR检测成骨相关基因RUNX2、骨涎蛋白、骨钙蛋白和...     

力学刺激对MG-63成骨样细胞增殖分化的影响

为探讨力学刺激对成骨细胞增殖分化的影响,应用根据四点弯曲原理设计的加力装置对MG-63成骨样细胞进行力学刺激,观察不同大小和作用时间的机械应变对成骨细胞增殖分化的影响。本研究中蛋白表达、碱性磷酸酶(ALP)活性测定分别采用Western blot、α-磷酸奈酚法,采用茜素红染色观察矿化结节的形成。结果发现:⑴与对照组相比,加力组增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达、ALP活性均明显增加,但这种作用并不随着力刺激大小的增加而增加。⑵在适宜的力刺激(2 000μstrain)下,随着加力时间的增加,PCNA、Ⅰ型胶原(COLⅠ)蛋白表达及ALP活性逐渐增加,并且适宜的力刺激也促进了矿化结节的形成。该结果提示适宜的力学刺激能够促进成骨细胞的增殖分化。     

焦亡介导高糖引起的小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1炎症与损伤

目的:探讨细胞焦亡(pyroptosis)能否介导高糖(HG;45 mmol/L葡萄糖)引起的小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1炎症和损伤。方法:应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测成骨细胞活力;Western blot测定成骨细胞的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和胱天蛋白酶1(CASP1)的表达水平;ELISA法测定细胞培养上清液中白细胞介素18(IL-18)和IL-1β的水平;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酯染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP)水平;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定成骨细胞早期标志物ALP的活性;茜素红染色观察成骨细胞晚期标志物矿化结节的形成。结果:HG处理MC3T3-E1细胞24 h可明显促进NLRP3和CASP1的表达,引起IL-18和IL-1β的分泌增多,同时可使细胞活力降低,ROS生成和MMP丢失增加,成骨细胞分化与矿化功能下降(表现为ALP活性降低和矿化结节数量减少)。利用siRNA沉默CASP1表达可显著减轻HG引起的上述成骨细胞炎症和损伤。结论:焦亡可介导HG引起的MC3T3-E1细胞炎症和损伤。     

Asxl1在炎性微环境中对成骨细胞增殖分化的作用

背景:研究表明Asxl1的缺失可导致骨质发育不全、骨质缺损类疾病的发生,但目前在根尖周炎环境下该因子与骨破坏之间的关系暂无相关报道。目的:探讨炎性微环境下Asxl1对成骨细胞增殖分化的影响。方法:实验选用脂多糖刺激MC3T3-E1细胞建立体外炎性微环境,通过CCK-8实验筛取脂多糖最佳质量浓度和最佳作用时间,然后用20 mg/L脂多糖刺激MC3T3-E1细胞24 h,免疫荧光检测Asxl1的蛋白表达水平,Real Time-PCR检测Asxl1 mRNA的表达水平。为进一步验证Asxl1基因在炎性微环境中影响成骨细胞的增殖与分化,脂多糖刺激形成炎性微环境后转染Asxl1-SiRNA 24 h,采用CCK-8检测细胞增殖活性,RealTime-PCR检测Asxl1及成骨相关基因ALP和RUNX2 mRNA的表达水平。结果与结论:①脂多糖刺激MC3T3-E1细胞后,Asxl1蛋白和mRNA表达水平呈降低趋势;②脂多糖刺激MC3T3-E1细胞后,转染Asxl1-SiRNA 24 h,细胞增殖活性下降趋势明显,Asxl1基因及成骨相关基因ALP和RUNX2 mRNA的表达水平明显降低;③结果提示,Asxl1可能通过参与炎性反应过程,影响成骨细胞的增殖与分化,进而参与骨破坏进程。     

微振动环境调控小鼠骨髓间充质干细胞的早期力学适应性及成骨分化

本研究考察微振动刺激(MVS)对小鼠骨髓来源间充质干细胞(M-BMSCs)的早期力学适应性及成骨分化的调控作用。在体外给予M-BMSCs微振动刺激,检测细胞增殖及碱性磷酸酶(ALP)表达,荧光染色观察细胞凋亡与细胞骨架,流式检测细胞凋亡,通过RT-PCR检测早期成骨相关基因runt相关转录因子2(Runx2)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、ALP表达,Western blotting检测细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸水平。研究结果显示,微振动刺激诱导了细胞早期凋亡(受力1天后),但周期性受力3天后细胞的凋亡现象明显减少,而细胞的增殖活性并未受到明显影响;同时,微振动刺激促进了细胞骨架F-actin蛋白、ALP合成和ERK1/2的磷酸化,并上调了Runx2、Col-Ⅰ、ALP的基因表达。研究结果表明微振动刺激能对M-BMSCs的细胞活性和结构产生早期适应性改变与调节,从而促进了细胞的早期成骨分化。     

梓醇促大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化的机制研究

目的:探讨梓醇促SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)骨向分化的作用机制。方法:(1)细胞分为对照组、成骨诱导组及梓醇组。4-氨基安替吡啉测酚法检测诱导第7、14和21天各组细胞上清碱性磷酸酶(ALP)活性,ALP染色法检测诱导第14天各组细胞ALP阳性染色率,茜素红染色法检测诱导第21天各组细胞矿化结节数;(2)运用real-time PCR法检测诱导第7、14和21天各组细胞中Runx2、骨钙素(osteocalcin)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt3a、Wnt5a及Wnt11的mRNA表达水平。结果:(1)2.0 mg/L梓醇可增加BMSCs上清中ALP活性及细胞ALP的阳性染色率,同时促进BMSCs矿化结节的形成(P0.05)。(2)梓醇促BMSCs骨向分化时,Runx2的mRNA表达水平于第14天时达到峰值,随后开始下降,第21天时与对照组无统计学差异;osteocalcin的mRNA相对表达量在第7天时高于对照组,随后持续上升直至第21天。(3)与对照组相比,梓醇促BMSCs骨向分化时,β-catenin与Wnt3a的mRNA相对表达量均于第14和21天时升高并维持在较高水平,而Wnt5a及Wnt11的mRNA相对表达量在第14天达到峰值后开始下降,第21天时Wnt11 mRNA相对表达量显著低于对照组。结论:梓醇通过上调Runx2的表达,促使BMSCs向成骨细胞方向分化,同时还通过增加细胞ALP分泌及osteocalcin的表达,促进细胞矿化的发生,从而促使新生成骨细胞的成熟,此作用可能与其有序激活Wnt信号通路相关。     

骨碎补总黄酮联合纳米骨材料促进MC3T3-E1细胞的增殖分化

文题释义： 骨碎补总黄酮：是由水龙骨科植物槲蕨的干燥根茎中提取的有效成分,骨碎补总黄酮能够促进成骨细胞增殖,抑制破骨细胞成熟分化。 Wnt/β-catenin信号通路：是一类高度保守的信号通路,广泛存在于多细胞真核生物中,是皮肤发育过程中出现最早的分子信号,调控毛囊的生长发育和毛囊干细胞的迁移分化。β-catenin作为细胞内信号传导蛋白,是Wnt信号通路激活的一种重要的上皮细胞表面黏附分子,能够进入细胞核内传递Wnt信号,进一步激活靶基因开始转录,启动细胞增殖周期。 背景：前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。 目的：探究骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞发挥作用的机制。 方法：将MC3T3-E1细胞与纳米骨材料共培养,选取100 mg/L和250 mg/L骨碎补总黄酮进行药物干预,以10 μg/L转化生长因子β刺激为阳性对照组。分组如下：①正常组;②DKK1组：Wnt通路抑制剂DKK1      (0.1 mg/L)阻断Wnt/β-catenin信号通路;③DKK1+转化生长因子β组;④DKK1+100 mg/L骨碎补总黄酮组;⑤DKK1+250 mg/L骨碎补总黄酮组;⑥DKK1+纳米骨+转化生长因子β组;⑦DKK1+纳米骨+100 mg/L骨碎补总黄酮组;⑧DKK1+纳米骨+250 mg/L骨碎补总黄酮组。在干预24,48 h后收获细胞,免疫荧光双染法观察Wnt/β-catenin通路中Wnt与LRP结合情况,Real-time PCR和Western blot检测β-catenin、LRP5、Gsk-3β、Cyclin D1、RUNX2的表达。 结果与结论：①激光共聚焦扫描显微镜下显示DKK1+转化生长因子β组、DKK1+250 mg/L骨碎补总黄酮组、DKK1+纳米骨+转化生长因子β组、DKK1+纳米骨+250 mg/L骨碎补总黄酮组棕黄色染色较明显,表明Wnt与LRP结合较其他组更好;②Real-time PCR和Western blot结果显示,骨碎补总黄酮可促进β-catenin、LRP5、RUNX2的表达,下调GSK-3β的表达,说明骨碎补总黄酮通过激活经典Wnt/β-catenin 信号通路促进成骨细胞增殖分化,且骨碎补总黄酮诱导的基因活化呈剂量依赖性。 ORCID: 0000-0002-2031-8644(李晋玉) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

细菌脂多糖通过MAPK / ERK1 / 2 信号通路影响成骨细胞活性和凋亡

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)通过丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK1/2)信号通路对成骨细胞活性和凋亡的影响。方法:将小鼠前体成骨细胞MC3T3-E1随机分为对照组、LPS组、LPS+U0126组,对照组不给予LPS处理,LPS组给予10 mmol/L LPS处理,LPS+U0126组给予10 mmol/L LPS和25μmol/L ERK1/2激酶抑制剂U0126处理。采用噻唑蓝(MTT)测定细胞活性,采用流式细胞术测定细胞凋亡,采用硝基苯磷酸二钠基质动力学方法测定碱性磷酸酶(ALP),采用放射免疫法测定骨钙素(BGP)活性,采用Hochest 33258染色观察细胞核形态,采用Western blot测定活化型细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3型(C-Caspase 3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平。结果:与对照组比较,LPS组和LPS+U0126组MC3T3-E1细胞活性、ALP和BGP活性降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),C-Caspase 3、Bax、p-ERK1/2蛋白水平升高(P0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P0.05);与LPS组比较,LPS+U0126组MC3T3-E1细胞活性、ALP和BGP活性升高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),C-Caspase 3、Bax、p-ERK1/2蛋白水平降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P0.05)。对照组细胞核正常;LPS组细胞凋亡形态数量明显增多;LPS+U0126组凋亡形态细胞数量较LPS组减少。结论:LPS可通过抑制MAPK/ERK1/2信号通路抑制成骨细胞活性,诱导成骨细胞凋亡。     

免疫激活骨髓间充质干细胞的旁分泌对成骨细胞功能的影响

目的探索TNF-α免疫激活骨髓间充质干细胞(BM-MSC)后,其旁分泌作用对成骨细胞(MG63)功能的影响。方法使用TNF-α预刺激MSCs。制备MSC条件培养基(conditioned medium,MSC-CM)培养成骨细胞(MG63)。CCK8法检测MG63增殖能力变化;细胞划痕法检测MG63迁徙能力变化;Real-time PCR法检测ALP、COLI及OCN基因表达量的变化;免疫荧光法检测OPN表达量变化;茜素红染色检测矿化能力变化。结果 TNF-α预刺激干细胞后,MSC旁分泌功能发生显著变化,其中IL-6、VEGF和TGF-β的分泌量明显升高(P0.01),但HGF的分泌量无明显变化(P0.05)。在TNF-α组的MSC-CM作用下,MG63增殖速度加快,细胞划痕结果显示其迁徙能力提高,诱导第4、7天后成骨细胞分化相关基因表达量增多(P0.05),免疫荧光染色显示TNF-α组的OPN阳性率升高,茜素红染色显示MG63矿化沉积作用增强。结论免疫激活后MSC的旁分泌作用可以显著促进成骨细胞的增殖、迁徙、分化和矿化能力,从多个阶段加强成骨细胞的骨化作用,为临床应用MSC治疗骨质缺损指导了新方向。     

BMP-2和FGF-2对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的影响.方法:取3～18月雄性C57BL/6J小鼠(共50只)的骨髓细胞, 分离贴壁培养后, 用免疫磁珠法纯化, 并鉴定为MSCs后, 再进行贴壁培养24 h后, 分别在成骨细胞诱导培养液中加入100 μg/L BMP-2和0.5 nmol/L FGF-2持续诱导7、 14、 21 d后, 进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性检测, Vonkossa染色以及茜素红染色, 并用递转录荧光定量PCR法检测向成骨细胞分化的标志性基因(Runx2/cbfa1、 Alp、 collagen-1、 osteocalcin)的表达情况.结果:BMP-2刺激组的ALP活性以及钙化结节明显高于对照组, Runx2/cbfa1, ALP, collage-1, osteocalcin的mRNA呈高表达; FGF-2刺激组的ALP活性以及钙化结节也高于对照组, Runx2/cbfa1、 Alp、 collagen-1、 osteocalcin的mRNA表达量也高于对照组, 但不如BMP-2明显. 结论:BMP-2和 FGF-2在不同程度上促进体外培养的小鼠MSCs向成骨细胞方向分化.     

3种组织来源的间充质干细胞体外成骨能力的比较

目的比较成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)、人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)和人胎盘间充质干细胞(P-MSCs)的成骨能力。方法用含10%胎牛血清的DMEM/Ham's F-12培养液培养3种MSCs,CCK8法检测增殖能力,流式细胞仪鉴定3种细胞。碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色观察细胞经成骨诱导后成骨分化蛋白-ALP的分泌和矿化钙结节的沉积。实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测MSCs骨再生相关基因的表达。Western blot方法检测MSCs成骨再生相关基因的蛋白表达。结果 MSCs在第3天进入对数增殖期。3种细胞的表面标志物阳性率:CD44、CD90和CD105均高于98%。3种MSCs成骨诱导9 d时,3种MSCs的实验组均表达大量成骨分化蛋白-ALP,成骨诱导18 d时3种MSCs均呈现较好的矿化能力;3种MSCs成骨诱导9 d时,实验组RUNX2和ALP基因显著性高表达(P0.05),成骨诱导18 d时,实验组RUNX2和骨钙素(OCN)亦显著性高表达(P0.05);3种MSCs成骨诱导9 d时,实验组均检测到RUNX2和ALP的蛋白表达;成骨诱导18 d时,实验组细胞亦检测到RUNX2和OCN的蛋白表达。结论 UC-MSCs和P-MSCs具有良好的成骨分化能力,有望作为骨组织工程的种子细胞用于治疗骨缺损。     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞钙化及炎症因子表达

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对大鼠血管平滑肌A7r5细胞钙化、炎症因子表达的影响以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法分别用oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物干预刺激大鼠A7r5细胞系不同时间,采用或不采用TLR4抑制剂TAK-242处理。茜素红染色观察细胞钙化结节,实时荧光定量PCR和Western blot法检测平滑肌蛋白22α(SM22α)和RUNX家族转录因子2(RUNX2)的mRNA和蛋白水平, ELISA检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平; A7r5细胞给予TNF-α刺激后,进一步检测SM22α和RUNX2 mRNA和蛋白水平的变化。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够促进A7r5细胞钙化结节增多, SM22α表达减少而RUNX2明显上升,促进炎症因子TNF-α的表达, TLR4抑制剂能够缓解这一现象;外加不同浓度的TNF-α能够使A7r5细胞SM22α表达下降, RUNX2表达增加。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促使A7r5细胞表达炎症因子TNF-α增加,并由此促进细胞发生钙化,同时使细胞由收缩表型向成骨表型发生转变,TLR4参与这一过程。     

激活骨髓基质细胞Notch信号体外促进小鼠成骨作用

目的 探究体外激活骨髓基质细胞(BMSC)缺刻基因(Notch)信号对成骨分化的影响。方法 使用Cre重组腺病毒(Ad-Cre)以及对照腺病毒(Ad-GFP),分别感染Notch1-NICD^flox/flox小鼠BMSC,分为Ad-Cre组和Ad-GFP组。Western blot法检测Notch1-NICD蛋白表达水平;碱性磷酸酶(ALP)染色及生化定量检测早期成骨分化水平,茜素红S染色及矿化定量检测晚期钙盐沉积水平;实时荧光定量PCR检测Notch靶基因发状分裂增强子1(Hes1)、含YRPW基序的bHLH转录因子Hes相关家族1(Hey1)、 Hey2、 HeyL、成骨标志基因ALP、 Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨转化因子(Osx)、骨钙素(Ocn)以及促血管生成因子血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达。结果 Ad-Cre成功激活Notch1-NICD^flox/flox小鼠BMSC中的Notch信号;Ad-Cre组的ALP活性相较Ad-GFP组明显升高,晚期钙盐沉积水平明显升高;ALP、 RU...     

微小RNA-30d-5p通过葡萄糖调节蛋白78调控骨髓基质细胞成骨分化的机制

目的 探讨微小RNA(miR)-30d-5p对骨髓基质细胞成骨分化和凋亡的影响及其作用机制。方法 将骨髓基质细胞分为miR-30d-5p过表达阴性对照组、miR-30d-5p过表达组、miR-30d-5p抑制阴性对照组和miR-30d-5p抑制组。碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨效果，茜素红染色检测钙结节沉淀情况，TUNEL检测凋亡水平。Real-time PCR、Western blotting检测mRNA和蛋白表达水平，生物信息学分析网站Targetscan 7.1预测miR-30d-5p的潜在结合位点。结果 MiR-30d-5p过表达后，细胞成骨分化能力和矿化能力均降低(P<0.05),而细胞凋亡水平升高(P<0.05)。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和成骨特异性Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。但是，miR-30d-5p抑制剂处理细胞后，细胞成骨分化能力和矿化能力均有提升(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05)。GRP78和RUNX2蛋白水平均升高(P<0.05)。MiR-30d-5p结合位点...