内皮型一氧化氮合酶的激活机制

内皮型一氧化氮合酶 (e NOS)通常归为 Ca2 + /钙调素 (Ca M)依赖性酶 ,它的活性受细胞内 [Ca2 + ]及Ca2 + /Ca M- e NOS复合物影响。但目前有证据表明切应力、雌激素、胰岛素可通过非 Ca2 + 依赖方式激活 e NOS。除此之外 ,神经鞘脂 (SIP)信号通路以及 e NOS与囊泡蛋白 - 1(caveolin- 1)、热休克蛋白 90 (HSP90 )之间的相互作用也可影响 e NOS活性。以上提示 e NOS激活途径是复杂的     

血流切应力调控内皮型一氧化氮合酶的分子机制

血流切应力（flowshear stress，rss）是生理或病理条件下调节血管内皮细胞产生一氧化氮的最重要的刺激因素。FSS对内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）的调控包括基因转录的调节、转录后的调节和翻译后的调节。eNOS基因转录以及转录后mRNA的稳定性能被FSS诱导加强。FSS通过游离钙离子浓度、磷酸化、eNOS相关蛋白以及细胞内易位等途径调节eNOS的催化活性。此外，FSS还能调控eNOS催化反应的辅助因子。     

一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶与妊娠高血压综合征

妊娠高血压综合征是产科严重的并发症,是引起孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一,其病因及发病机理目前尚不十分清楚.近年,越来越多的研究表明,一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶表达异常与妊娠高血压的发病有着密切的关系.国内外学者对此领域进行了一些大量研究,但仍存在着争议.现就一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶与妊高征的发病关系作一综述.     

内皮型一氧化氮合酶和神经型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾发育过程中的表达

目的:观察内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)在胚胎小鼠肾发育过程中的时空性表达,探讨它们在小鼠发育早期肾组织中的作用.方法:选取胚龄(E)13、14、15、16、18d及新生组(P)0d小鼠,应用免疫组织化学方法显色进行图像分析;用免疫印迹法测定各组小鼠肾组织中的eNOS以及nNOS的含量.结果:免疫组织化学显色显示,eNOS阳性表达最早出现于E14d的生肾区;E16d时在生肾区表达减弱,近端小管呈强阳性;P0d时远端小管可见弱表达,集合管也有一定程度表达,致密斑无表达.nNOS在E13d时即表达于皮质输尿管芽;E16d时近端小管弱表达,远端小管强表达;P0d时在远端小管和致密斑强表达,近端小管弱表达,集合管无表达.图像分析和免疫印迹法结果显示,eNOS和nNOS在E14d含量较少,随后逐渐增多,至P0d达到高峰.结论:在胚胎小鼠肾发育过程中,eNOS和nNOS的表达有一定的时空顺序,它们对肾组织的发育及形成起一定的作用.     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与临床疾病

内皮型一氧化氮合酶（eNOS)催化生成的一氧化氮（NO）具有舒张血管、抑制血管平滑肌细胞增殖、抑制血小板和白细胞粘附等功能，因此eNOS基因多态性可能与心血管等疾病的发生发展密切相关。     

内皮型一氧化氮合酶基因与冠心病的研究进展

由血管内皮产生的一氧化氮（NO）是心血管系统中抗冠状动脉粥样硬化、血栓形成，维持正常血管舒缩反应必不可少的保护因子。一氧化氮合酶作为合成NO的关键酶，其基因发生变异，对NO的生成具有重要的影响。本文将对内皮型一氧化氮合酶基因多态性与冠心病的研究进展作一综述。     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与临床疾病

内皮型一氧化氮合酶 (e NOS)催化生成的一氧化氮 (NO)具有舒张血管、抑制血管平滑肌细胞增殖、抑制血小板和白细胞粘附等功能 ,因此 e NOS基因多态性可能与心血管等疾病的发生发展密切相关。     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与原发性高血压

原发性高血压是我国发病率最高的心血管疾病，是一种多基因，多因子病。一氧化氮是重要的内皮衍化的舒张因子，很多生理性的以及药物引起的血管舒张都是通过一氧化氮途径实现的。但内皮型一氧化氮合酶基因的突变与原发性高血压的关系仍有待明确。     

内皮型一氧化氮合酶基因与冠心病的研究进展

由血管内皮产生的一氧化氮(NO)是心血管系统中抗冠状动脉粥样硬化、血栓形成,维持正常血管舒缩反应必不可少的保护因子。一氧化氮合酶作为合成NO的关键酶,其基因发生变异,对NO的生成具有重要的影响。本文将对内皮型一氧化氮合酶基因多态性与冠心病的研究进展作一综述。     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与原发性高血压

原发性高血压是我国发病率最高的心血管疾病,是一种多基因,多因子病。一氧化氮是重要的内皮衍化的舒张因子,很多生理性的以及药物引起的血管舒张都是通过一氧化氮途径实现的。但内皮型一氧化氮合酶基因的突变与原发性高血压的关系仍有待明确。     

内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中的表达

目的 :研究内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在乳癌中表达及与淋巴结转移的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 60例乳癌中eNOS和iNOS的表达。结果 :eNOS和iNOS阳性在乳癌中表达率分别为 75 0 %和71 7%。在淋巴结转移组和无淋巴结转移组中eNOS阳性表达率分别为 66 7%和 83 3 % ,两组间差异无统计学意义 (χ2 =2 2 2 ,P >0 0 5) ,而iNOS在淋巴结转移和无转移组中阳性表达率分别为 53 3 %和 90 0 % ,两组间差异有统计学意义 (χ2 =9 93 ,P <0 0 1 )。结论 :内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中高表达 ;iNOS的表达与乳腺癌的淋巴转移相关     

姜黄素对急性肺损伤大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨姜黄素对内毒素(LPS)致急性肺损伤(ALI)模型大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法:雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、急性肺损伤模型组及姜黄素治疗组。采用一次性气管内滴注内毒素4 mg/kg制备急性肺损伤模型大鼠,治疗组于造模前15 min腹腔注射姜黄素200 mg/kg,于造模后3、6、12 h及24 h取肺组织,观察并比较各组肺组织形态学改变,并检测肺湿/干重比、肺含水量和肺组织中NO的含量,real-time PCR及免疫印迹法检测iNOS和eNOS的mRNA和蛋白表达。结果:模型组大鼠肺湿/干重比、肺组织含水量及NO含量均较对照组明显升高,iNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著上调,而eNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著下调。与模型组相比,姜黄素治疗组肺湿/干重比、肺含水量、NO含量均明显降低,iNOS的mRNA和蛋白表达量明显下调,eNOS的mRNA和蛋白表达量明显上调。结论:姜黄素可下调内毒素致急性肺损伤模型大鼠肺组织iNOS表达,并匕调eNOS表达。     

肿瘤坏死因子α致HUVECs内皮型一氧化氮合酶降解

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白量减少。方法建立原代HUVECs培养,选取TNF-α不同浓度(0.01、0.1、1和10 ng/m L)、不同时间(24、48和72 h)处理HUVECs;溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)、caspase抑制剂(caspase inhibitor)和泛素-蛋白酶体抑制剂(MG-132)预处理HUVECs 1.5 h后加入TNF-α(1 ng/m L)共处理24 h,Western blot方法检测HUVECs中eNOS蛋白表达。结果与对照组比较,1 ng/m L TNF-α处理细胞24 h,eNOS蛋白量明显减少(P0.01);MG-132与TNF-α共处理组,eNOS蛋白量明显增加(P0.01)。结论 TNF-α可以通过泛素-蛋白酶体途径引起eNOS蛋白降解。     

人内皮型一氧化氮合酶基因在小鼠肺内的表达

目的 观察人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)重组腺病毒感染小鼠肺组织后heNOS基因在小鼠肺组织内的表达.方法 采用反转录PCR(RT-PCR)法克隆heNOS基因,利用体外连接法构建复制缺陷型heNOS重组腺病毒表达载体;免疫组织化学分析heNOS在小鼠肺组织内的表达情况.结果 (1)序列分析表明,克隆所得heNOS基因片段含有完整开放阅读框架,与GenBank中heNOS DNA序列(*163729)同源性达99.93%.(2)该基因在转染细胞中能表达具有生物活性功能的NOS蛋白.(3)体外连接法成功构建出复制缺陷型heNOS重组腺病毒转移载体.(4)滴入heNOS重组腺病毒后,小鼠肺血管内皮细胞、平滑肌细胞、细支气管上皮细胞内heNOS阳性表达明显增加.结论 本实验成功构建的复制缺陷型heNOS重组腺病毒转移载体,能经呼吸道转移至肺组织,并在小鼠肺血管、支气管和肺泡上皮细胞表达所需的目的 蛋白heNOS.     

人内皮型一氧化氮合酶cDNA在COS-7细胞中的表达

本研究从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA，采用逆转录PCR(RT-PCR)方法，扩增出人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)cDNA，总长度为3731bp。将其克隆入pUCm—T载体质粒，序列分析表明，克隆所得片段含有完整开放阅读框架，与GenBank中heNOScDNA序列同源性达99．93％，在此基础上发现有若干核酸多态性。将该基因片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3．0上，用脂质体转染法将pcDNA3．0／heNOS转染到COS-7细胞株，RT—PCR、Western blot分别检测到外源性eNOS基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达，分析表明所表达的heNOS蛋白质分子量为145ku；L-^14C-精氨酸掺入同位素法检测证实所表达的eNOS蛋白具有生物学活性，能将精氨酸氧化为瓜氨酸。     

AngⅡ/AT_1R通路下调内皮型一氧化氮合酶磷酸化的机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT_1R)通路通过激活蛋白磷酸酶2 A(protein phosphatase 2 A,PP2 A)导致大鼠肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)磷酸化水平下调的机制。方法:采用体重160~180 g成年雄性SD大鼠90只,在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉。首先明确AngⅡ下调大鼠肠系膜动脉中e NOS(Ser1177)磷酸化的效应,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组和AngⅡ组,AngⅡ组用浓度为1×10~(-7)mol/L、1×10~(-6)mol/L和1×10~(-5)mol/L AngⅡ分别孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h;然后进一步探讨AngⅡ使eNOS(Ser1177)发生磷酸化下调的分子机制,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组、AngⅡ组和坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性抑制剂)+AngⅡ组(用1×10~(-5)mol/L CAN预处理大鼠肠系膜动脉血管1 h后,再用1×10~(-7)mol/L AngⅡ继续孵育12 h)。采用Western blot法检测肠系膜动脉中eNOS蛋白表达和eNOS(Ser1177)磷酸化水平,以及PP2Ac的蛋白表达、PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I~2~(PP2A)的表达水平,并用PP2A活性检测试剂盒测定大鼠肠系膜动脉PP2A活性变化。结果:(1)与control组比较,AngⅡ孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平均明显降低(P0.05),且12 h组和24 h组eNOS(Ser1177)磷酸化水平下降均出现明显浓度依赖性,但不同浓度组间eNOS蛋白表达水平差异均无统计学显著性;(2)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平降低(P0.05);CAN预处理可明显上调eNOS(Ser1177)磷酸化水平(P0.05),且各组间eNOS蛋白表达水平差异无统计学显著性;(3)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和I_2~(PP2A)蛋白表达均降低(P0.05);CAN预处理可使PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和IPP2A2蛋白表达均增加(P0.05),但各组间PP2Ac蛋白表达的差异无统计学显著性;(4)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2A活性增高(P0.05);CAN预处理可明显抑制AngⅡ对PP2A的激活作用(P0.05)。结论:AngⅡ可通过AT1R通路激活PP2A,从而介导大鼠肠系膜动脉eNOS(Ser1177)磷酸化水平下调,其分子机制可能与PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2~(PP2A)表达降低有关。     

一氧化氮及其合酶

对生物体内ＮＯ的研究，已成为当今医学界最为活跃的研究领域。目前已知有三类ＮＯ合酶，分别由内皮细胞、神经细胞及巨噬细胞产生。但新的研究结果显示这三种酶并非仅仅局限于这些部位。在其它部位亦可存在。如骨骼肌中的神经性ＮＯ合酶，它产生的ＮＯ以两种不同方式分别调节骨骼肌的收缩和舒张。     

婴儿巨细胞病毒性肝炎患儿体内一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶水平的研究CSCD

目的 探讨婴儿巨细胞病毒性肝炎（ICH）患者体内一氧化氮（N0）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的水平及其临床意义.方法 ELISA方法检测56例ICH患儿和50例健康对照组血清NO和eNOS的水平,统计学方法分析其与患儿肝功能、人巨细胞病毒（HCMV）DNA拷贝数的关联.结果 ICH组NO和eNOS的水平显著高于健康对照组（P〈0.01）.ICH组中ALT异常组NO和eNOS水平显著高于ALT正常组（P〈0.05）.ICH组中NO和eNOS的水平与ALT呈明显正相关（r=0.682,r=0.746,P〈0.05）,但与HCMV-DNA拷贝数无显著相关性（r=-0.087,r=-0.134,P〉0.05）.结论 ICH患儿体内NO以及eNOS水平显著升高,与患儿肝脏功能损伤呈正相关.     

内皮型一氧化氮合酶基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达

根据大鼠内应型一氧化氮合酶（eNOS）和3-磷酸甘油醛脱氨酶（GAPDH）的cDNA序列分别设计特异引物,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测eNOS基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达,并以GAPDH为内标,用内参比法作RT-PCR定量。结果表明：eNOS基因在新生大鼠心、肾、脑等组织皆有表达,脑中最多、肾脏次之、心脏较少;在培养的新生大鼠心肌细胞和非心肌细胞中,检测到eNOS基因的表达,其中在心肌细胞的表达高于非心肌细胞;培养基中不同的血清浓度对心肌细胞和非心肌细胞的oNOS基因表达无明显影响。     

Caveolae在剪切应激诱导的内皮型一氧化氮合酶活化中的作用

探讨不同水平剪切应激对内皮细胞型一氧化氮合酶(Endothelial nitric-oxide synthase,eNOS)活化的影响及Caveolae在其中的作用。通过硝酸还原法测定细胞灌流液中的一氧化氮(NO)水平,检测不同水平剪切应激对培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)NO合成水平及胆固醇结合剂Filipin(10μg/ml)作用对剪切应激诱导细胞eNOS活化的影响。同时用透射电镜观察细胞内Caveolae的形态。实验发现随着剪切应激水平的升高,内皮细胞中NO的合成增高;Filipin作用细胞后,剪切应激诱导的NO合成显著降低,而去除Filipin后,同一水平剪切应激诱导的细胞NO合成部分恢复。因此,剪切应激能诱导eNOS活化,且Caveolae在其中起关键作用。