miR-195-5p表达上调抑制肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨miR-195-5p对肺癌细胞系A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测肺癌组织及肺癌细胞系中miR-195-5p的表达;通过脂质体介导将miR-195-5p模拟物作用于A549细胞,用Transwell法检测细胞迁移和侵袭; Western blot检测细胞内上皮间质转化标志物及ZEB1的表达。结果相对于癌旁组织及人正常肺上皮细胞,miR-195-5p在肺癌组织及肺癌细胞系中低表达(P0. 001);过表达miR-195-5p可显著抑制A549细胞的迁移和侵袭(P0. 001),伴随E-cadherin蛋白表达的上调,N-cadherin和vimentin蛋白表达的下调(P0. 01);过表达miR-195-5p可抑制A549细胞ZEB1的表达(P0. 001)。结论 miR-195-5p可能通过下调ZEB1的表达,抑制肺癌细胞迁移和侵袭。     

miR-140-3p通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭

目的:探究微小RNA-140-3p(mi R-140-3p)对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的靶向关系以及对非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭的影响。方法:使用RT-qPCR检测HLF-1、A549和H1299不同细胞株中mi R-140-3p的表达水平,选择差异最显著的A549细胞用作后续研究对象; Target Scan软件预测和双萤光素酶报告基因实验验证mi R-140-3p和PD-L1之间的靶向关系; RT-qPCR和Western blot检测转染mi R-140-3p模拟物和抑制剂对PD-L1表达水平的影响; MTT法检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞活力的影响; Transwell实验检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:mi R-140-3p在人肺癌A549和H1299细胞的表达中显著下调(P 0. 05); mi R-140-3p高表达能够使PD-L1表达下调,对A549细胞的活力、迁移和侵袭具有抑制作用;转染pc DNA3. 0-PD-L1能够阻断mi R-140-3p对A549细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:mi R-140-3p可通过靶向负调控PD-L1抑制A549细胞的活力、迁移和侵袭。     

虾青素通过阻断JAK1/STAT3通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨虾青素对A549肺癌细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制。方法实验分为对照组、DMSO溶剂对照组、(20、40、60、80、100)μmol/L虾青素组;CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、信号转导子和转录激活子3(STAT3)和Janus激酶1(JAK1)蛋白水平。结果虾青素能够抑制A549细胞增殖,使A549细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加;虾青素上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、STAT3、JAK1蛋白水平。结论虾青素通过抑制JAK1-STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡。     

miR-454-3p靶向BPTF表达调控肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-454-3p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法采用RT-PCR技术检测miR-454-3p在肺癌组织以及肺癌细胞株中的表达,以表达量最低的肺癌细胞A549为后续分析对象,将miR-454-3p mimic转入A549细胞,RT-PCR验证miR-454-3p的过表达效率;采用CCK-8、迁移、侵袭等实验,观察转染组与对照组肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭情况;生物信息学预测BPTF是miR-454-3p的靶标,构建BPTF 3′UTR荧光素酶载体,通过双荧光素酶报告基因验证miR-454-3p和BPTF的靶向关系;应用Western blot法检测BPTF的表达及迁移、侵袭相关蛋白的变化。结果RT-PCR实验表明miR-454-3p在肺癌组织和细胞中表达下调,且在A549细胞中表达最低(P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-454-3p的肺癌细胞A549增殖能力明显降低,迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。生物信息学软件分析BPTF为miR-454-3p的潜在靶基因,过表达miR-454-3p后BPTF的表达水平明显受到抑制。同时,迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下调,E-cadhern表达明显上调,而E-cadherin的负性调控N-cadherin表达下降。结论miR-454-3p可能通过靶向下调BPTF的表达,抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为肺癌的靶向治疗提供潜在靶标。     

miR-708-5p通过靶向URGCP抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、转移的研究

目的 探讨miR-708-5p对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与上调基因-4(upregulated gene-4/upregulator of cell proliferation,URG4/URGCP)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据...     

miR-655-3p靶向KIF20A抑制人肺腺癌细胞系A549迁移及侵袭

目的 探讨miR-655-3p靶向驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 RT-qPCR检测人肺腺癌细胞系H460、A549、HCC-2935、H1299细胞中miR-655-3p的表达;取对数增殖期的A549细胞,分为:空白组、miR-NC组、miR-655-3p mimics...     

千金藤素通过调节miR-150和miR-182促进A549细胞凋亡

目的:探讨千金藤素对人肺癌A549细胞生长的影响及可能机制。方法:千金藤素处理A549细胞后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;real-time PCR检测微小RNA(miR)-150、miR-182、p53 mRNA和FOXO1 mRNA的表达变化;通过软件预测miR-150和miR-182的下游靶基因;采用Western blot法分析细胞中p53和FOXO1蛋白表达的变化。结果:在千金藤素作用下,A549细胞生长受到抑制,凋亡率明显增加;千金藤素作用后,细胞内miR-150和miR-182的表达水平显著下降;在10μmol/L的千金藤素作用后,细胞内p53和FOXO1的表达水平升高,而在30μmol/L时,细胞内p53和FOXO1的表达水平降低;在细胞内转染miR-150后,p53表达明显减少,而转染miR-182后,FOXO1表达显著降低。结论:千金藤素能够抑制A549细胞生长,促进A549细胞凋亡,可能是通过抑制miR-150和miR-182表达发挥作用;而miR-150和miR-182可能分别通过下调p53和FOXO1的表达发挥作用。     

miR-34b抑制非小细胞肺癌A549的侵袭和迁移

目的：本研究旨在探索miR-34b对非小细胞肺癌A549侵袭和迁移的影响及HIF1α在其中所起的作用。方法：A549细胞转染miR-34b mimic和pc-HIF1α过表达载体以过表达miR-34b和缺氧诱导因子-1α (HIF1α)。A549细胞分为4组：A549(空对照)组,miR-34b mimic组,pc-HIF1α组和miR-34b mimic+pc-HIF1α组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-34b表达和HIF1α的mRNA水平。荧光素酶分析验证miR-34b和HIF1α的靶向关系。蛋白印迹检测HIF1α、基质金属蛋白酶2 (MMP-2),Snail和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的蛋白水平。Transwell分析细胞侵袭。划痕实验检测细胞迁移。结果：转染miR-34b mimic可提高A549细胞miR-34b的表达水平,降低HIF1α的mRNA水平(P<0.001)。miR-34b可直接靶向HIF1α。miR-34b 过表达可抑制 pc-HIF1α诱导的HIF1α蛋白水平升高(P<0.01)。与对照组相比,miR-34b 过表达可显著降低细胞侵袭数目和愈合率(P<0.01)。此外,miR-34b 过表达可显著抑制 HIF1α过表达导致的细胞侵袭和愈合率增加(P<0.01)。miR-34b mimic组MMP-2、Snail和VEGF相对蛋白水平低于对照组(P<0.01)。pc-HIF1α组MMP-2、Snail和VEGF相对蛋白水平高于对照组(P<0.01)。与pc-HIF1α组相比,miR-34b mimic+pc-HIF1α组MMP-2、Snail和VEGF相对蛋白水平下降(P<0.01)。结论：miR-34b-5p过表达通过靶向HIF1α抑制非小细胞肺癌A549的侵袭和迁移。     

下调miR-18a和miR-328抑制肺腺癌A549细胞的侵袭和迁移

目的分析miR-18a和miR-328在肺腺癌A549细胞中的表达,并探讨下调miR-18a或miR-328的表达对其侵袭和迁移能力的影响。方法用荧光定量PCR检测A549细胞中miR-18a和miR-328的表达;通过转染miR-18a抑制物(miR-18a inhibitor)或miR-328 inhibitor,下调miR-18a或miR-328的表达,采用TranswellTM侵袭、迁移实验分析A549细胞侵袭和迁移能力的变化。结果 A549细胞中miR-18a和miR-328均呈高表达;而转染相应抑制物后miR-18a、miR-328表达下降,A549细胞的侵袭、迁移能力均明显降低。结论下调A549细胞miR-18a或miR-328水平可有效抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移。     

miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力

目的研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响。方法运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性。过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P0.01)。结论miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。     

miR-129-5p通过靶向Wnt5a抑制膀胱癌细胞的增殖和促进细胞凋亡

目的 检测miR-129-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达及其对膀胱癌细胞的作用.方法 RT-qPCR法检测miR-129-5p在膀胱癌、癌旁组织以及膀胱癌细胞株中的表达.细胞中过表达miR-129-5p后,CCK-8实验检测细胞增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;生物信息学网站预测miR-129-5p的靶点,并用...     

LncRNA HEIH通过miR-98-5p调节肺癌细胞增殖和凋亡

目的探讨lncRNA HEIH对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1,RT-qPCR检测细胞中HEIH表达水平;分别转染si-HEIH和miR-98-5p mimics至A549细胞,沉默A549细胞中HEIH表达或过表达miR-98-5p;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测CCND1、caspase-3、SHH、GLI-1、PTCH和SUFU蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HEIH与miR-98-5p之间的关系。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1中HEIH表达水平显著升高(P<0.05).其中A549细胞中的HEIH表达最高。因此,后续实验选择A549细胞为研究对象。沉默HEIH表达或过表达miR-98-5p均可降低A549细胞培养12、48和72 h后吸光度值(A值)(P<0.05)(MTT法);升高凋亡率(P<0.05);抑制CCND1蛋白表达(P<0.05),促进caspase-3蛋白表达(P<0.05)。并且过表达miR-98-5p还抑制了A549细胞中SHH和GLI-1的mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进了PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。过表达HEIH逆转了过表达miR-98-5p对A549细胞增殖、凋亡以及SHH、GLI-1、PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达的影响。结论沉默HEIH表达可能通过靶向miR-98-5p经Hedgehog信号通路抑制肺癌细胞的增殖,并促进其凋亡。     

冬凌草甲素通过上调miR-204-5p抑制PC-3细胞迁移与侵袭的作用机制研究

目的 探索冬凌草甲素影响PC-3细胞迁移及侵袭的作用及机制,为冬凌草甲素治疗前列腺癌骨转移提供前期体外实验参考。 方法 通过CCK8检测冬凌草甲素对PC-3细胞增殖的影响,Transwell检测冬凌草甲素对PC-3细胞迁移和侵袭的影响,qRT-PCR分析冬凌草甲素溶液处理PC-3细胞后miR-204-5p及NF-κB信号通路表达情况,Western blotting分析冬凌草甲素溶液处理PC-3细胞后NF-κB信号通路蛋白表达情况。 结果 冬凌草甲素溶液以浓度依赖性和时间依赖性方式抑制PC-3细胞的增殖,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）,冬凌草甲素IC50值为10 μmol/L;冬凌草甲素溶液呈浓度依赖性抑制PC-3细胞的迁移和侵袭,差异较对照组有统计学意义（P<0.01）;冬凌草甲素溶液能促进PC-3细胞表达miR-204-5p并阻断NF-κB信号通路下游基因表达;过表达miR-204-5p和冬凌草甲素均能抑制PC-3细胞NF-κB信号通路下游基因表达。 结论 冬凌草甲素能抑制PC-3细胞的增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与其能上调miR-204-5p阻断NF-κB信号通路有关。     

3-溴丙酮酸通过抑制糖酵解阻止A549肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探究3-溴丙酮酸(3-BP)对人肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡的影响及机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测(10、20、40、80、160) μmol/L 3-BP处理24、48 h,对肺腺癌A549细胞存活率的影响;采用(0、50、100、150) μmol/L 3-BP处理肺腺癌A549细胞24 h,异硫氰...     

雷公藤红素通过miR-17-5p和miR-155-5p靶向抑制cyclin D1阻滞A549细胞周期的研究

目的:研究雷公藤红素对人肺腺癌A549细胞周期的影响,并探讨其机制。方法:梯度浓度的雷公藤红素作用于人肺腺癌A549细胞后,MTT法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,筛选出雷公藤红素的半数致死浓度;而后用半数致死浓度的雷公藤红素作用于A549细胞,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达水平; real-time PCR检测微小RNA(miR)-17-5p和miR-155-5p表达的变化;生物学信息软件预测miR-17-5p和miR-155-5p与cyclin D1的相关性;将miR-17-5p mimics和miR-155-5p mimics以及各自的突变体mutant-miR-17-5p和mutant-miR-155-5p分别与pcDNA-GFP-cyclin D1-3'UTR共转染至A549细胞后荧光显微镜和流式细胞术检测GFP表达;最后将miR-17-5p mimics和miR-155-5p mimics转染至A549细胞后,real-time PCR检测miR-17-5p和miR-155-5p表达水平的变化,Western blot检测cyclin D1的表达水平。结果:随雷公藤红素作用浓度的增大,A549细胞的活力抑制率逐渐增高,细胞凋亡率逐渐增加(P0.01),提示雷公藤红素可以有效抑制A549细胞的生长,诱导其凋亡,其中3μmol/L最接近半数致死浓度;应用该浓度雷公藤红素作用于A549细胞后,细胞被阻滞在G_1期,cyclin D1表达水平显著降低(P0.01),miR-17-5p和miR-155-5p的表达水平显著升高(P0.01)。生物学信息软件预测提示cyclin D1的3'UTR存在miR-17-5p和miR-155-5p的结合位点。GFP检测结果显示,miR-17-5p mimics/miR-155-5p mimics和pcDNA-GFP-cyclin D1-3'UTR共转染至A549细胞后,GFP的表达水平降低(P0.05),提示miR-17-5p和miR-155-5p能直接靶向cyclin D1的3'UTR发挥作用;将miR-17-5pmimics/miR-155-5pmimics转染A549细胞后,miR-17-5p/miR-155-5p的表达水平显著升高(P0.01),cyclin D1表达水平均显著降低(P0.01)。结论:雷公藤红素可阻滞A549细胞于G_1期,进一步导致了细胞生长抑制和凋亡增加,其机制可能是通过上调miR-17-5p和miR-155-5p的表达而导致了cyclin D1的靶向抑制。本研究为雷公藤红素作为临床非小细胞肺癌的治疗药物提供新的理论依据。     

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论 miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

葡萄籽原花青素抑制肺癌A549细胞侵袭和迁移

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)对肺癌A549细胞侵袭、迁移能力的影响。方法用台盼蓝法检测不同剂量GSP对BEAS-2B人正常肺上皮细胞的毒性作用;用(0、10、20、40、80)μg/m L GSP处理A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平;TranswellTM实验检测A549细胞的侵袭力;细胞划痕实验检测A549细胞迁移力;Western blot法测定A549细胞中表皮生长因子受体(EGFR)、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)的蛋白水平。结果 (0~40)μg/m L GSP对BEAS-2B正常肺上皮细胞无明显毒性作用,80μg/m L GSP毒性作用明显。GSP以剂量依赖的方式抑制A549细胞的增殖;细胞侵袭和迁移能力均显著下降;与对照组相比,Western blot结果显示GSP作用A549细胞后,EGFR和N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高。结论 GSP可通过抑制A549细胞EGFR、N-cadherin的表达并增强E-cadherin的表达,抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-3619-5p靶向PFKFB3抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

为研究miR-3619-5p和6磷酸果糖2激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,采用qRT-PCR检测35例结肠癌组织和癌旁组织中miR-3619-5p和PFKFB3 ...     

去甲斑蝥素通过调控miR-182-5p 抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的:研究去甲斑蝥素(ND)对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制。方法:CCK-8和Transwell检测不同浓度的ND给药后SKOV3细胞增殖和侵袭能力变化;qRT-PCR和Western blot检测给药前后LKB1/AMPK信号通路蛋白和上皮间充质转化(EMT)相关蛋白表达;加入LKB1/AMPK通路激动剂GSK621后,CCK-8和Transwell分别检测SKOV3细胞增殖和侵袭能力变化;qRT-PCR和Western blot检测给药前后EMT相关蛋白和LKB1/AMPK信号通路蛋白变化;si-miR-182-5p转染SKOV3细胞后CCK-8和Transwell检测miR-182-5p对SKOV3细胞增殖和侵袭能力影响;qRT-PCR和Western blot检测转染前后LKB1/AMPK信号通路蛋白和EMT相关蛋白表达。结果:30μmol/L ND对SKOV3细胞增殖抑制效果最明显;ND显著抑制SKOV3细胞侵袭同时显著激活LKB/AMPK信号通路和EMT。加入GSK621可以部分消除ND对SKOV3细胞增殖和侵袭影响,ND抑制miR-182-5p表达而激活LKB1/AMPK磷酸化和EMT。结论:ND可能通过抑制miR-182-5p阻滞LKB1/AMPK信号通路和EMT发生抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭。