白藜芦醇对裸鼠U87细胞移植瘤生长及血管生成的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对人脑胶质瘤系U87细胞的体内抗癌活性及血管生成的影响. 方法 BALB/c裸鼠20只,背部皮下接种胶质瘤细胞U87建立皮下移植瘤模型.随机数字表法分为10、100mg/kgRes治疗组,溶剂对照组,空白对照组,每组5只.观察4组裸鼠移植瘤的生长曲线并应用免疫组织化学法检测瘤组织中微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达:采用原位末端标记法(TUNEL)检测瘤组织细胞的凋亡. 结果与空白对照组及溶剂对照组相比,100 mg/kg Res治疗组裸鼠移植瘤的体积、重量降低;100 mg/kg Res治疗组瘤组织中MVD、VEGF的表达明显降低,凋亡细胞数增高,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 Res对U87人脑胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用,这可能与Res导致U87移植瘤细胞凋亡及血管生成减少有关.     

雷公藤红素对荷瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的：探讨雷公藤红素对荷SHG44胶质瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法34只SHG －44胶质瘤裸鼠随机分为空白对照组、顺铂组、4 mg／kg雷公藤红素组、2 mg／kg雷公藤红素组和1 mg／kg雷公藤红素组,每周两次,共给药4周。定期观察肿瘤生长情况测量肿瘤体积,计算抑瘤率。免疫组化染色检测移植瘤组织中的MVD、bFGF、VEGF、VEG‐FR1、VEGFR2的蛋白表达。结果4 mg／kg和2 mg／kg的雷公藤红素能抑制肿瘤生长,下调移植瘤组织中VEGFR1、VEG‐FR2的蛋白表达和降低微血管计数（MVD）,4 mg／kg的雷公藤红素还能下调荷瘤裸鼠移植瘤组织中bFGF的蛋白表达。结论雷公藤红素能明显抑制荷SHG44胶质瘤裸鼠的移植瘤生长和血管生成,其机制可能与雷公藤红素下调肿瘤组织中bF‐GF、VEGFR1、VEGFR2的蛋白表达有关。     

白藜芦醇对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨白藜芦醇（RES）不同途径给药对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制效果。方法 取80只雄性无胸腺裸鼠（BALB/c-nu;21~27日龄,体重10~12 g）,采用U87细胞建立人裸鼠脑胶质瘤原位移植模型,采用随机数字表法分为RES干预组（造模后10 d,开始给药,1次/d,40 mg/kg）和溶剂对照组（造模后10 d,开始给药,1次/d,10 mg/kg;溶剂为0.5%羧甲基纤维素钠）,根据给药途径,RES干预组又分为RES灌胃组和RES经鼻组,溶剂对照组又分为溶剂灌胃组和溶剂经鼻组,每组20只。经鼻给药采用经鼻滴入法。采用Kaplan-Meier法分析生存曲线;造模后14、21、28、35 d测定肿瘤体积;采用CD31标记胶质瘤血管内皮细胞并计算微血管密度（MVD）,采用免疫组化方法检测胶质瘤血管内皮生长因子（VEGF）以及Ki-67表达,采用TUNEL法检测胶质瘤细胞凋亡。结果 与溶剂对照组相比,RES干预组裸鼠生存时间明显延长（P<0.05）,造模后28、35 d肿瘤体积明显缩小（P<0.05）,肿瘤组织MVD明显减小（P<0.05）,肿瘤组织VEGF和Ki-67表达水平明显降低（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,而且,RES经鼻给药较灌胃给药作用更明显（P<0.05）。结论 RES可有效抑制裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长,机制可能与抑制肿瘤血管生成和促进肿瘤细胞凋亡有关。与灌胃给药相比,经鼻给药肿瘤抑制效果更好。     

白藜芦醇诱导U87胶质瘤细胞凋亡及caspase-3的激活

目的探讨白藜芦醇(Res)抑制体外脑胶质瘤细胞系U87生长并诱导其凋亡,激活 caspase-3的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制不同浓度Res作用6 h、24 h、48 h后的细胞生长曲线,流式细胞仪Annexin V—FITC和PI双染检测凋亡率,Hoechst 33342荧光染色及透射电镜 (TEM)观察细胞增殖改变:Western-blot分析caspase-3酶原的变化,半定量RT—PCR检测caspase-3 mRNA水平的改变,比色法测定caspase-3的相对活性。结果 Res明显抑制U87细胞的增殖 (P<0．01),呈浓度及时问依赖性反应;Res可诱导U87胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。用不同浓度 Res处理U87细胞24 h,随药物浓度增加,caspase-3酶原的蛋白水平减少,caspase-3 mRNA水平增加 (P<0．01)。用200 μmol／L Res分别处理细胞0．5、2、6、12、24 h,caspase-3活性于2 h开始升高,12 h达高峰(P<0．01);用不同浓度的Res处理细胞12 h,caspase-3活性呈浓度依赖性的升高(P<0．01)。结论 Res明显抑制U87细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有caspase-3的激活。     

pEGFP-ING4抑制裸鼠皮下人U87移植瘤生长及肿瘤血管生成

目的 探讨pEGFP-ING4对裸鼠体内人U87细胞移植瘤生长及对肿瘤血管生成的影响.方法 将成功构建的18只人U87细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为pEGFP-ING4和pEGFP-C2转染组及PBS空白对照组3组,测量各组肿瘤的体积变化,荧光显微镜观察转染瘤体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达情况,免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD).结果 荧光显微镜下pEGFP-ING4 组和pEGFP-C2组均观察到GFP表达,接种后第21d、28d、35d各组皮下肿瘤体积(mm3)为:PBS 组(201.8±19.3,418.9±26.4,622.1±51.3),pEGFP-C2 组(197.6±18.9,398.4±20.4,593.7±48.7),pEGFP-ING4 组(138.9±8.4,198.7±21.5,293.2±31.6),肿瘤接种后在同一时间点内,pEGFP-ING4 组肿瘤体积明显小于另外两组(P<0.05);MVD检测(个/mm2):PBS 组(15.83±0.98),pEGFP-C2 组(15.83±1.62),pEGFP-ING4 组(4.17±1.17),与另外两组比较,pEGFP-ING4 组MVD明显降低(P<0.01).结论 ING4基因能够明显抑制人U87细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制胶质瘤血管的生成可能是其抗肿瘤的重要机理之一.     

血管内皮生长因子抗体对胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)抗体对大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的影响及对肿瘤生长的抑制作用。方法 皮下接种建立异位大鼠C6胶质瘤模型，实验组每3d局部应用VEGF抗体，对照组局部应用PBS溶液，每5d量取肿瘤的长径和宽径，15d后处死动物，称取肿瘤湿重，肿瘤组织行H—E及TUNEL法原位凋亡检测。结果 实验组动物肿瘤生长速度明显减慢，光镜下观察实验组肿瘤标本见到较多的坏死灶，TUNEL法原位凋亡检测发现实验组肿瘤组织内肿瘤细胞凋亡。结论 应用VEGF抗体后大鼠C6胶质瘤生长速度减慢，肿瘤细胞发生凋亡。抗血管形成疗法不仅能使肿瘤坏死增加，而且可以诱导肿瘤细胞凋亡。     

白藜芦醇对胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨白藜芦醇对胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响和作用机制。方法采用四唑盐(MTT)比色实验检测胶质瘤U87细胞经不同浓度白藜芦醇作用24 h、48 h、72 h后生存率的变化;细胞划痕试验和transwell侵袭试验检测白藜芦醇对胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响;明胶酶谱法分析白藜芦醇对细胞基质金属蛋白酶(MMP)活性的改变。结果 MTT法显示一定浓度的白藜芦醇可抑制U87细胞生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强(P<0.05);与对照组比较,经白藜芦醇作用后U87细胞迁移和侵袭能力明显降低,MMP-2分泌减少。结论白藜芦醇可有效抑制胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与白藜芦醇降低细胞MMP-2活性相关。     

白藜芦醇对C6鼠胶质瘤细胞抑制生长和诱导凋亡的作用

白藜芦醇（resveratrol，Res）是一种广泛存在于植物中的植物补体，Res不但可以作为一种抗氧化剂，有防治心血管疾病的功效。而且具有抗炎和抗癌的作用，它可以在肿瘤的起始、发生、进展等各个阶段通过多种途径起到抑制肿瘤的作用。近年来有关胶质瘤的大量研究证实，表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的基因扩增和过表达是恶性胶质瘤发生、发展的重要始动事件之一，其介导的信号转导通路发挥着关键的作用旧J。本实验进一步就Res对C6鼠脑胶质瘤细胞生长增殖的抑制、诱导细胞凋亡及其与胶质瘤增殖、凋亡相关的EGFR等重要基因变化进行了探讨。     

血管内皮生长因子基因表达与胶质瘤血管生成和瘤周水肿的研究进展

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)又名血管渗透因子,主要由包括胶质瘤细胞在内的多种细胞分泌产生,其来源广泛,结构多样,近来研究表明,VEGF在胶质瘤新生血管形成和肿瘤周围水肿方面有着特异性的作用,各种因子对胶质瘤细胞或其他产生VECF细胞的调节,致VEGF的异常表达,是胶质瘤异常血管生成加强的主要原因,而肿瘤异常血管的形成和加强,导致血管渗透性的改变则是胶质瘤瘤周水肿的主要机制。因此,对VEGF表达的调控,可能为抗胶质瘤血管生成和瘤周水肿提供新的治疗方法。     

microRNA-34a靶向调控血管内皮生长因子对U87脑胶质瘤细胞侵袭、增殖的影响

目的探究microRNA-34a靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)对U87脑胶质瘤细胞侵袭、增殖的影响。方法将microRNA-34a NC、microRNA-34a inhibtor、microRNA-34a mimic分别转染至U87脑胶质瘤细胞,依次设为NC组、miR-34a inhibtor组、miR-34a mimic组,比较三组脑胶质瘤细胞U87增殖、侵袭、迁移情况,荧光素活性,VEGF mRNA与蛋白表达情况。结果转染后,miR-34a mimic组细胞增值抑制率高于NC组和miR-34a inhibtor组(P0.05);转染48 h后,miR-34a mimic组细胞侵袭、迁移能力低于NC组和miR-34a inhibtor组(P0.05),miR-34a inhibtor组高于NC组(P0.05);转染48 h后,miR-34a inhibtor组、miR-34a mimic组VEGF mRNA、蛋白相对水平分别高于、低于NC组[mRNA:(2.34±0.32)、(0.49±0.03)vs(1.00±0.06);蛋白:(2.42±0.16)、(0.43±0.06)vs(1.00±0.10)](F=256.230、83.750,均P0.05)。结论 microRNA-34a可以抑制脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制VEGF基因表达有关。[国际神经病学神经外科学杂志, 2021, 48(2):143-148]     

多聚凝胶介导IGF-IR反义寡核苷酸治疗体内胶质瘤的实验研究

目的探讨反义寡核苷酸阻断IGF-IR基因表达对裸鼠移植胶质瘤的抑制作用。方法首先建立胶质瘤裸鼠移植模型,随机分为4组:空白对照组、多聚凝胶组、正义核酸组和反义核酸组,反义核酸组在瘤内注射多聚凝胶包裹的反义寡核苷酸,其他每组均作相应的瘤内注射处理。利用多聚凝胶缓释反义寡核苷酸的作用,观察肿瘤的抑制情况、肿瘤病理和IGF-IR表达结果。结果反义核酸组用反义核苷酸开始治疗后的第1周、第2周和第3周,肿瘤的生长速度明显减慢,与空白对照组相比,抑制率分别为65.2%、76.38%和69.6%;而多聚凝胶组和正义核酸组肿瘤生长速度与空白对照组相比无明显差异,其抑制率在各时间点均低于10%。肿瘤的组织病理发现多聚凝胶组、正义核酸组如同空白对照组(野生型),肿瘤细胞密集分布,呈明显的恶性增殖表现,而反义核酸组肿瘤细胞稀疏,可见部分细胞呈凋亡改变,细胞染色质浓聚边缘化。在空白对照组(野生型)、多聚凝胶组和正义核酸组IGF-IR蛋白均呈高表达,而反义核酸组IGF-IR的表达明显减弱。结论IGF-IR的反义寡核苷酸对体内胶质瘤的生长具有明显的抑制作用,并能诱导部分肿瘤细胞凋亡。因此,IGF-IR可作为胶质瘤基因治疗的靶。     

蛇毒解聚素在裸鼠胶质瘤模型中的干预治疗作用研究

目的研究蛇毒解聚素（CN）对裸鼠人脑胶质瘤动物模型的治疗可行性,探讨蛇毒解聚素抑制U87胶质瘤裸鼠移植瘤生长的作用机制。方法建立BALB／c裸鼠U87胶质瘤移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为2组,采用间质内注射给药方法。蛇毒解聚素按40μg每次给药。定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。全部BALB／c裸鼠移植瘤石蜡标本用SP法免疫组化染色,检测移植瘤组织中的微血管计数（MVD）,Ki-67标记指数以及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。结果与溶媒对照组相比,蛇毒解聚素组均能抑制肿瘤生长（P〈0．01）,其体积抑瘤率为50％,并能明显降低肿瘤微血管密度、能下调移植瘤组织中bFGF的蛋白表达及Ki-67标记指数。结论蛇毒解聚素能明显抑制U87裸鼠移植瘤生长。     

白藜芦醇抑制SHG-44胶质瘤细胞生长实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)在体外诱导脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡并抑制其生长的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测量不同剂量的Res作用6h、24h和48h后对SHG-44胶质瘤细胞增殖的影响。HE染色、Hoechst33342荧光染色观察细胞形态改变,DNAladder检测细胞DNA裂解情况,流式细胞仪用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(AnnexinV-FITC)和碘化丙啶(PI)双染检测凋亡率,并测定细胞周期的改变。结果Res明显抑制SHG-44细胞的生长和增殖(P<0.01),呈浓度及时间依赖性反应;Res所致的SHG-44胶质瘤细胞凋亡为浓度依赖关系,随着浓度的增高,凋亡更明显。此凋亡细胞周期主要发生G1期比例升高,S、G2期比例降低。结论Res明显抑制SHG-44细胞生长并诱导其发生凋亡和细胞周期改变,为Res用于治疗脑胶质细胞瘤提供了实验依据。     

MSP58基因RNA干涉后对人脑胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的影响

目的观察RNA干涉法（RNA interference,RNAi）抑制人脑胶质瘤U251细胞的MSP58基因表达后,对其在裸鼠体内成瘤性及增殖、侵袭性的影响。方法将特异性的MSP58干涉表达载体pSilencer3．1．MSP58转染人脑胶质瘤细胞系U251（U251．S）,同时构建相应的阴性对照组U251-NC,以及空载体组U251-H1neo。运用逆转录酶-多聚酶链反应（RT—PCR）及蛋白质印迹法（Westernblot）检测各组细胞的MSP58mRNA和蛋白表达水平。用各组U251细胞建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型。结果成功建立了具有稳定下调MSP58基因表达的U251-S细胞。U251-S细胞MSP58的表达无论在mRNA水平还是在蛋白质水平均较U251组、U251-H1neo组及U251-NC组细胞显著降低（P〈0．01）。与接种U251、U251-H1neo和U251-NC细胞的裸鼠相比,接种U251-S细胞的裸鼠肿瘤形成时间延迟,肿瘤生长缓慢,肿瘤体积及瘤重均明显减小（P〈0．01）。结论MSP58基因RNAi后抑制了移植瘤细胞MSP58mRNA及蛋白的表达,进而明显抑制移植瘤的增殖和侵袭能力。     

白藜芦醇对脑胶质瘤U87细胞及干细胞凋亡诱导作用

目的比较研究白黎芦醇(Res)对人脑胶质瘤U87细胞及其胶质瘤干细胞(GSC)的作用。方法膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)和碘化丙啶(PI)染色法测定细胞凋亡;CD133标记、CD133与AnnexinⅤ/PI共标记检测GSC相对含量及GSC的凋亡;实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mdr1基因mRNA表达,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)的表达;集落形成法(CFU)检测细胞的自我更新和增殖能力。结果不同浓度的Res显著诱导U87细胞凋亡,抑制U87细胞集落的形成。40～160μmol/L Res作用后U87细胞群体中CD133+GSC相对含量显著增高、GSC凋亡细胞数量增加,但GSC对Res的敏感性低于U87群体细胞。Res诱导后U87细胞群体中高表达mdr1/P-gp的细胞显著增高,并与GSC含量的增高基本相一致。结论白黎芦醇可诱导脑恶性胶质瘤U87群体细胞及其干细胞凋亡。