黄豆苷元对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨黄豆苷元(daidizein)对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法用H2O2处理体外培养的PC12细胞建立细胞损伤模型,并加入daidizein预处理作为保护,显微镜下观察PC12细胞形态改变,MTT法检测活细胞数,LDH法检测细胞膜的损伤情况.结果 H2O2处理细胞24 h后,细胞形态发生明显改变,胞体变小、突起缩回,MTT吸光值减小,活细胞数减少,LDH释放量明显增加,与正常对组组比较差异有显著性(P<0.01).daidizein处理组细胞形态明显改善,MTT吸光值显著增加,LDH释放量明显降低,与H2O2处理组相比差异有显著性(P<0.01).结论 daidizein能显著抑制H2O2对PC12细胞的毒性,具有较强的神经保护作用.     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。     

桔梗多糖对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 研究桔梗多糖（PGP）对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;比色法测定细胞内乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性;DCFH-DA检测细胞内ROS;qPCR、Western Blot方法分别检测NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达。结果 与模型组相比,PGP预处理24h后,加入终浓度为600 μmol/L H2O2处理2h,LDH、MDA含量和细胞内ROS减少,SOD与GSH-Px活性增强,同时,PGP下调NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达水平。结论 PGP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制NADPH氧化酶2(NOX2)过表达有关。      

亚硒酸钠对H2O2氧化损伤PC12细胞的保护性作用

目的 研究亚硒酸钠对H2O2损伤PC12细胞的保护性作用.方法 培养PC12细胞,加入亚硒酸钠,使其终浓度为0、0.5、1、5、8、10、20、50和150μg/mL,测定PC12细胞活力,选择不影响PC12细胞生长活性的亚硒酸钠浓度作为干预浓度,然后将细胞分为:正常对照组、损伤(+H2O2)组和亚硒酸钠保护组(+Na2SeO3+H2O2)组,采用甲基四唑蓝比色法(MTT)和流式细胞仪检测研究亚硒酸钠对H2O2氧化损伤PC12细胞的影响.结果 ①0.5μg/mL的亚硒酸钠对PC12细胞无抑制(P＞0.05),随着浓度增大对PC12细胞的抑制率也增加(P＜0.05).②0.5μg/mL亚硒酸钠可以增强PC12细胞的抗H2O2氧化损伤的能力,提高细胞的生存率(P＜0.05).③经H2O2处理后,加入亚硒酸钠保护的细胞早期和晚期凋亡率较损伤组细胞有明显下降(P＜0.05).结论 0.5μg/mL的亚硒酸钠对PC12细胞具有抗H2O2氧化损伤的保护性作用.     

白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法用不同浓度的Aβ25-35处理PC12细胞,建立细胞毁损模型,然后加入不同浓度的白藜芦醇,在显微镜下观察PC12细胞形态的变化及突起生长情况。采用MTT检测技术观察PC12细胞的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用瑞士-吉姆萨染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果损伤组加入Aβ25-35,24 h后细胞形态不规整,突起出现不同程度的肿胀破裂,48 h后见不到完整的突起结构;保护组加入白藜芦醇预孵育后明显延缓突起损伤,24 h后仍能观察到比较完整的突起结构,48 h后远端发生轻微断裂。保护组细胞突起长度和D(λ)值明显大于损伤组(P<0.01),细胞凋亡数以及LDH活性明显低于损伤组(P<0.01)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤保护机制

目的：探讨蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）损伤保护的作用机制。方法：在Aβ25—35诱导PC12细胞损伤模型的基础上加入蜜环茵多糖含药血清,采用比色法检测含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤培养液中乳酸脱氢酶的活力、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活力的影响。结果：不同浓度的含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,含药血清浓度在5％时达最大值（P〈0．05或P〈0．01）;5％浓度的含药血清可明显降低模型细胞培养液中LDH活力、MDA含量,提高SOD活力。结论：蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞有保护作用．机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

雌激素对Aβ25-35致PC12细胞损伤的影响

目的观察可溶性Aβ25-35作用下PC12细胞细胞活力的改变及17β-雌二醇(17βE2)对此改变的影响。方法培养的PC12细胞作为神经细胞体外模型,可溶性Aβ25-35作用于PC12细胞作为AD早期病理损害的细胞模型,实验设空白对照组、Aβ损伤组、雌激素干预组,雌激素干预组再分为五个剂量亚组,分别于培育各时间点(0.5,6,24,48,72 h),用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤程度。结果Aβ损伤组与空白对照组相比,PC12细胞代谢活力(MTT还原率)明显降低(P<0.01),细胞培养液上清中LDH漏出明显增多(P<0.01),以上损伤出现较早,并随着时间的延长而加重。与Aβ损伤组比较,在10-9-10-6mol/L各浓度下,17βE2组细胞MTT还原率均有显著提高,细胞培养液上清LDH漏出均有显著降低,且有剂量依赖性。结论超生理量的Aβ即使呈可溶解状态也可以对神经元细胞造成毒性损害,雌激素具有剂量依赖性的抗Aβ损伤和神经细胞保护作用。     

茶多酚对 H2O2 诱导 PC12 细胞损伤的保护作用

目的 研究茶多酚 (tea polyphenols, TP) 对H2O2 所致大鼠嗜铬细胞 PC12 细胞损伤的保护作用。 方法PC12细胞用 TP 及H2O2 处理,MTT 法观察细胞活力,乳酸脱氢酶 (LDH) 法检测细胞膜通透性及完整性,流式细胞术测定细胞周期分布,BrdU 免疫荧光法检测细胞周期相S期 DNA 合成。 结果 500 μmol/L H2O2作用 PC12 细胞 2 h,细胞出现明显损伤,细胞活力下降,培养上清液中 LDH 量增加,DNA 合成减少;5、10、20 μmol/L TP 预处理可有效提高细胞存活率,减少 LDH 渗漏,提高S期 DNA 合成。 结论 TP 对H2O2所致的 PC12 细胞损伤有保护作用。     

蜕皮甾酮对Aβ25-35细胞毒的保护作用

目的观察蜕皮甾酮(Ecdysterone,ECR)对Aβ25-35诱导的PC12细胞毒的保护作用.方法PC12细胞受损及存活情况分别由乳酸脱氢酶释放量(LDH)及MTT法检测.结果100μmol·L-1Aβ25-35与PC12细胞作用24h时,MTT吸光值减小,LDH释放量则明显增加(均P＜0.01).如果用1-100μmol·L-1ECR预处理PC12细胞0.5h,则Aβ25-35的PC12细胞毒作用明显被抑制(ECR50,P＜0.05;ECR100,P＜0.01).结论ECR能够抑制Aβ25-35的毒性,对PC12细胞有明显的保护作用.     

CeO2的制备、表征及对PC12细胞氧化损伤的保护作用

[摘要]　目的　制备纳米氧化铈（nanoceria,CeO2）,初步探讨其对肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12氧化损伤的保护作用。　方法　采用均相沉淀法制备纳米CeO2,对其晶粒大小和晶粒形貌进行表征。将粗浓度为250 mmol/L的CeO2加入PC12细胞培养液,通过20 μmol/L H2O2诱导细胞损伤,建立PC12细胞的氧化应激损伤模型,采用MTT法检测对照组、CeO2组、CeO2+H2O2组,H2O2组的细胞活性,测定CeO2对PC12细胞的保护作用。　结果　采用均相沉淀的方法合成粒子直径为5~10 nm的CeO2。 MTT实验显示H2O2组细胞存活率为（74.61±3.97）%,CeO2 +H2O2组的细胞存活率为（99.21±4.01）%,明显高于H2O2组（P<0.05）。　结论　CeO2对H2O2造成的氧化损伤细胞具有保护作用。     

Aβ诱导PC—12细胞凋亡建立阿尔茨海默病细胞模型

目的 用β－淀粉样蛋白（Aβ25－35）诱导PC－12细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型。方法 体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC－12细胞，以不同浓度Aβ25－35诱导并于不同时间收获细胞，应用MTT法观察细胞活力，Fura-2/AM荧光分析法检测细胞内游离Ca^2 浓度，Hoechst 33258及碘化丙啶复染分析细胞凋亡。结果 Aβ25－35作用于PC－12细胞后，细胞活力逐渐下降，并呈时间和剂量依赖性；同时细胞内Ca^2 浓度显著上升；不同浓度Aβ25-35作用后，PC－12细胞于不同时间出现凋 的典型形态学特征，该时间比Ca^2 浓度上升约晚6－12h。结论 Aβ25－35诱导后PC－12细胞活力下降、细胞内Ca^2 浓度上升及细胞凋亡，可作为较理想的阿尔茨海默病细胞模型。     

人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞O_2~-和H_2_O_2损伤的保护作用

目的：研究人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞自由基损伤的保护作用。方法：应用O-2和H2O2对培养大鼠皮层神经细胞损伤模型。结果：与损伤组比较，人参皂甙保护组的乳酸脱氢酶（LDH）释放量显著减少（P<0．01）；而细胞存活率显著增高（P＜0．01）。结论：人参皂甙能保护培养大鼠皮层神经细胞少受自由基损伤。     

ATP敏感钾通道在硫化氢钠对抗β-淀粉样肽诱导细胞损伤中的作用

【目的】探讨ATP敏感性钾通道（KATP）在硫化氢（H2s）对抗β-淀粉样多肽（Aβ）诱导嗜铬细胞瘤细胞（PCI2）细胞损伤中的作用。【方法】应用硫化氢钠（NaHS）作为H2S的供体，碘化丙啶（PI）染色流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡率，Hoechst染色检测细胞凋亡的形态学变化，罗丹明123（Rh123）染色FCM检测细胞线粒体膜电位（MMP），双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧（ROS）的含量。【结果】20μmol／L和40μmol／LAβ25-35能明显地诱导PC12细胞凋亡，增加细胞凋亡率．并能明显地抑制PC12细胞MMP及增加细胞内ROS生成；100mol／L和200μmol／LNaHS本身不损伤PC12细胞。但能明显地抑制Aβ25—35的致细胞凋亡作用，降低PC12细胞的凋亡率，并能显著地抑制Aβ25-35引起的MMP降低及胞内ROS水平增多；在应用NariS与Aβ25-35作用PC12细胞之前30min，应用KATP抑制剂Glybenclamide（Gly）（10μmol／L）对PC12细胞进行预处理，能部分地对抗NaHS的细胞保护作用．使PCI2细胞凋亡率增加，MMP降低及ROS生成增多。【结论】NaHS能明显对抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤作用，此细胞保护作用可能与NaHS保护PC12细胞的MMP及抑制胞内ROS生成有关；KATP通道抑制剂Gly能部分地阻断NaHS的细胞保护作用。提示KATP通道开放可能是NaHS对抗Aβ25-35损伤作用的机制之一。     

Phloretin对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨Aβ25-35(β-amyloid)诱导PC12细胞凋亡过程中氯通道阻断剂Phloretin的保护作用及其机制.方法:采用MTT比色,LDH(lactate dehydrogenase)活力检测、Hoechst33258染色和琼脂糖凝胶电泳比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 PMoretin组的PC12细胞存活与凋亡;Western Blot印迹检测3组的JNK,P-JNK蛋白表达.结果:10 mmol/L Phloretin可明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,减少PC12细胞核固缩、碎裂,降低P-JNK蛋白的表达(P<0.01).结论:小剂量氯通道阻断剂Phloretin对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制与下调JNK的磷酸化激活有关.     

雷公藤甲素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

探讨雷公藤甲素对β- 淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导PC12 细胞损伤的保护作用及其机制。方法通过噻唑蓝（MTT）法确立Aβ25-35诱导PC12 细胞损伤模型的工作浓度;同时利用MTT 法检测1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L雷公藤甲素对细胞活性的影响,以及雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞后对细胞活性的影响。PC12细胞随机分为3组：对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-35和雷公藤甲素处理组。细胞处理24 h后,利用免疫荧光法检测细胞中活化Caspase-3的表达,同时采用逆转录聚合酶链反应检测凋亡相关基因-2 和的表达水平。结果Aβ25-35在10 μmol/L工作浓度下可诱导PC12 细胞复制阿尔茨海默病体外细胞损伤模型,其细胞存活率为（58±6）%;单纯雷公藤甲素在1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L浓度下处理细胞对细胞活性无显著影响。Aβ25-35处理细胞后,细胞活性降低,活化Caspase-3在细胞中表达升高,同时Bax mRNA表达升高,而Bcl-2 mRNA 的表达下降。然而,雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞时,前者能够降低Aβ25-35对PC12 细胞的毒性损伤,且细胞活性随雷公藤甲素浓度的增加而升高;同时活化Caspase-3在细胞中的表达,Bcl-2 和Bax mRNA 表达水平也受抑制。结论雷公藤甲素可能通过调节-3、及-2 基因的表达以抑制细胞凋亡,从而对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤发挥保护作用。     

β分泌酶抑制剂对岗田酸（OA）诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的：研究β分泌酶抑制剂对岗田酸（OA）诱发PC12细胞损伤的保护作用。方法：将培养的PC12细胞分为3组：正常对照组、OA损伤组和药物保护组。OA损伤组用OA处理细胞,药物保护组在用OA处理前30min加入β分泌酶抑制剂。采用MTT法、免疫组化法观察β分泌酶抑制剂的保护作用,Western blot检测全长APP和β-C末端片段（β-C-terminalfragment,βCTF）。结果：药物保护组与OA损伤组相比细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;OD490值显著升高（P〈0.01）。OA诱导PC12细胞内全长APP和βCTF含量增加,β分泌酶抑制剂进一步增加细胞内全长APP含量,并减少βCTF含量。结论：β分泌酶抑制剂对岗田酸（OA）诱发PC12细胞损伤有保护作用,其机制可能和β分泌酶抑制剂减少βCTF水平有关。     

查尔酮类似物清除DPPH自由基和保护H2O2诱导的PC12细胞损伤的抗氧化活性

目的：探究合成的查尔酮类似物清除DPPH自由基和保护H2O2 诱导PC12 细胞损伤的抗氧化活性。方法：将PC12 细胞分为对照组（DMSO组）、损伤组（H2O2组）、查尔酮类似物+H2O2组和阳性对照组（槲皮素+H2O2组）。设计合成16个查尔酮类似物,通过DPPH自由基清除实验检测自由基清除活性;MTT法检测细胞活性;MDA试剂盒检测脂质过氧化;Hoechst染色检测细胞凋亡;Western blot法检测cleaved-caspase-3、Bcl-2 和Bax蛋白表达。结果：筛选得到活性佳、毒性小的抗氧化剂13。与DMSO组比较,H2O2组的细胞存活率、Bcl-2蛋白表达显著下降,而cleaved-caspase-3和Bax蛋白表达、MDA含量显著增加（P ＜0.05）;与H2O2组比较,化合物13组呈剂量依赖性提高细胞存活率,增加Bcl-2蛋白的表达,减少cleaved-caspase-3和Bax蛋白的表达,降低MDA水平（P ＜0.05）。结论：新型查尔酮类似物13抑制H2O2诱导PC12的细胞凋亡,具有良好的抗氧化活性。     

褪黑素对过氧化氢损伤的心肌细胞自身NO生成的影响

目的：探讨氧化损伤时褪黑素（Melatonin,MT)对心肌细胞自身NO生成的影响以及NO水平与其它氧化指标的关系。方法：分高培养原代心肌细胞，分5组：对照组，H2O2处理组，MT组，MT干预组和N－硝基－L－精氨酸（L-nitro-arginine methylester,L-NAME)干预组；用外源性H2O2造成氧化损伤，用生化法检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）浓度，硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛（MDA）含量，用试剂盒检测细胞培养液中NO含量。结果：H2O2处理组和L－NAME干预组中NO的含量，LDH含量和MDA含量与对照组相比，均差异显（P＜0．01），只是H2O2处理组中三项均比对照组明显增高，而L－NAME干预组中NO含量比对照组明显低；MT组中这三项指标没有明显的变化。MT干预组中虽然与对照组相比也升高，但低于H2O2处理组（P＜0．01）。MT干预组与L－NAME干预组相比其LDH含量和MDA含量也较低（P＜0．01），与H2O2组相比，加入MT干预后，培养液中NO和LDH及MDA含量明显降低（P＜0．01）。，结论：心肌细胞在受H2O2损伤时，心肌细胞自身产生的NO增加，并且在一定程度上参与了对心肌细胞的氧化损伤；MT不仅能抑制LDH和MDA的升高，还能抑制NO的产生。     

二甲双胍激活Nrf2通路对PC12细胞H2O2氧化损伤的机制研究

目的：研究二甲双胍对H2O2诱导的PC12 细胞损伤可能的保护作用机制。方法：使用CCK-8法检测二甲双胍对PC12细胞的细胞活力;建立H2O2损伤PC12细胞的细胞模型,使用CCK-8法和LDH法检测二甲双胍对PC12细胞生存率和LDH释放量,采用Hoechst 33342染色法和流式细胞术检测二甲双胍对PC12细胞的凋亡和ROS水平情况。qPCR和Western blot法检测二甲双胍对Nrf2/HO-1通路mRNA和蛋白表达水平。使用小干扰RNA沉默Nrf2检测二甲双胍对H2O2诱导细胞的保护作用。结果：二甲双胍在浓度0.5、1和2 mmol/L下对PC12细胞不表现毒性作用。预处理二甲双胍可对H2O2造成的PC12细胞损伤产生浓度依赖性保护作用和降低LDH。同时,二甲双胍降低H2O2造成的细胞凋亡和ROS水平。二甲双胍能激活细胞内Nrf2/HO-1通路起到抗氧化保护作用。结论：二甲双胍预处理后通过激活细胞内Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导的 PC12 细胞损伤具有保护作用。     

N-硬脂酰酪氨酸对H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤的影响

目的研究N-硬脂酰酪氨酸（NsTyr）预处理对过氧化氢（H2O2）诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养传代的PC12细胞分为空白对照组、H2O2损伤组（不同浓度H2O2诱导16h）和NsTyr预处理组（不同浓度NsTy预处理30min后加入100μmol／LH2O2诱导16h）。流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧类（ROS）生成,Westernblotting检测Bax和Bcl-2的表达。结果与H2O2（100μmol／L）损伤组比较,5、10μmol／LNsTyr预处理组PC12细胞存活率显著升高（P〈0．01）,凋亡细胞率降低（P〈0．05）,细胞内ROS生成减少（P〈0．05,P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值升高（P〈0．05）。结论NsTyr能提高PC12细胞的抗氧化应激损伤能力,上调Bcl-2表达和下调Bax表达,抑制细胞凋亡。