商陆皂苷甲对BXSB小鼠肾组织PCNA、Caspase-3、Fas和FasL表达影响

[目的]观察商陆皂苷甲(esculentosideA,EsA)对BXSB小鼠肾组织细胞增殖核抗原(PCNA)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)、凋亡诱导因子(Fas)和凋亡诱导因子配体(FasL)蛋白表达影响。[方法]将24只18周龄雄性BXSB小鼠随机分为模型组、地塞米松组和商陆皂苷甲(EsA)组,8只/组。腹腔注射干预:模型组RPMI1640培养液0.2mL/d;地塞米松组,地塞米松溶液1mg/kg·d;商陆皂苷甲组,EsA溶液20mg/kg·d;每只小鼠1次/d,连续4周,处死小鼠取肾组织标本检测(终点为小鼠22周龄)。干预始点及结束前,留取尿标本检测尿蛋白和尿肌酐浓度。[结果]与模型组相比,商陆皂苷甲组和地塞米松组尿蛋白/肌酐比值下降,肾脏病理变化有不同程度改善,肾组织中PCNA表达减弱,肾组织Caspase-3、Fas和FasL表达增强(P0.05)。[结论]实验剂量EsA和地塞米松能够降低BXSB小鼠尿蛋白,改善肾脏病理变化;EsA和地塞米松减轻BXSB小鼠肾损害可能机制是通过抑制BXSB小鼠肾组织细胞增殖和促进肾组织细胞凋亡实现。     

商陆皂苷甲对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:观察商陆皂苷甲(EsA)对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖影响,并探讨其作用机制。方法:用不同浓度的EsA(0.625mg/L,1.25mg/L,2.5mg/L,5.0mg/L,10mg/L,20mg/L)刺激rGMC,并设对照组(不加药物干预),4-甲基偶氮四唑蓝(multiply-table tournament,MTT)法检测其对rGMC增殖与毒性的影响。结果:与正常对照组比较,EsA(2.5～5mg/L)作用48,72h能够显著抑制血清诱导的rGMC的增殖(P<0.05或P<0.01),在本实验浓度(0.625～20mg/L)内EsA对rGMC无明显细胞毒性作用(P>0.05)。结论:在体外EsA(2.5～5mg/L)可显著抑制rGMC的増殖;肾小球系膜细胞可能是EsA的作用靶细胞。     

商陆皂苷甲致肾细胞毒性的研究

目的:考察商陆皂苷甲Esculentoside A(EsA)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)的毒性。方法:1)MTT法测细胞活力;2)检测细胞上清液LDH、细胞内SOD及MDA;3)采用倒置显微镜及电镜观察细胞形态学;4)采用Hoechst-PI染色及流式细胞仪观察细胞凋亡的情况。结果:1)EsA对肾细胞的活力有显著的抑制作用,其IC50为149.11μg·mL-1,且存在一定的时效和量效关系;2)EsA能升高肾细胞培养上清中的LDH,使肾细胞内SOD/MDA比值有所下降;3)EsA能使肾细胞及其超微结构发生变化,出现凋亡或坏死,有一定的量效关系。结论:大于100μg·mL-1浓度的商陆皂苷甲对HK-2细胞有一定的毒性,其毒性机制与细胞氧化应激、凋亡等相关。     

商陆药材中商陆皂苷甲的含量测定

目的 建立商陆药材中商陆皂苷甲的高效液相色谱(HPLC)分析方法.方法 采用Ultimate AQ-C18(4.6 mm × 250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.02%磷酸(32∶68)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长203 nm,柱温30℃.结果 商陆皂苷甲在1.0～7.0 μg呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为99.1 %(RSD=2.7 %).8批不同产地商陆药材中商陆皂苷甲的质量分数在0.25 %～0.62 %.结论 方法简单、重复性好,可用于商陆药材的质量控制.     

商陆皂苷甲致肝毒性的研究

目的通过体外、体内实验相结合的方法考察商陆皂苷甲所致的肝毒性。方法 MTT法测肝细胞(L-02细胞)活力;以不同质量浓度的商陆皂苷甲与肝细胞共培养后,测细胞培养上清中的AST(谷草转氨酶)、ALP(碱性磷酸酶)和LDH(乳酸脱氢酶)水平,并在光镜下对细胞形态进行观察;Hoechst-PI双标染色观察细胞的凋亡和坏死情况;取KM种小鼠分为正常组和给药组,给药组的小鼠每天尾静脉注射10 mg/kg商陆皂苷甲,连续给药7 d,考察小鼠血清肝功能指标和肝组织的病理学变化。结果 MTT的结果显示,商陆皂苷甲能显著抑制肝细胞活力,其IC50为360.18μg/mL;400μg/mL的商陆皂苷甲能升高细胞培养上清中的AST、ALP和LDH(P<0.01)并使肝细胞出现变圆、减少和死亡的现象;300和350μg/mL的商陆皂苷甲能使肝细胞发生凋亡和坏死;体内实验表明,小鼠血清中的AST和ALT(谷丙转氨酶)水平均明显升高(P<0.01),小鼠肝脏多出现肝细胞多发灶性坏死及肝细胞再生现象。结论大剂量的商陆皂苷甲对肝脏具有一定的毒性作用。     

商陆皂苷甲对IL-17诱导肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:观察商陆皂苷甲(EsA)对IL-17诱导的肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响,探讨EsA对系膜细胞增殖性肾病的作用机制。方法:将GMC分为对照组(不加药物干预),IL-17(5 ng/ml)组,IL-17(10 ng/ml)组,IL-17(20 ng/ml)组,IL-17(50 ng/ml)组,IL-17(100 ng/ml)组,同步化后分别培养24、48、72 h,MTT法检测各组对rGMC增殖的影响,确定IL-17诱导rGMC增殖的作用浓度;将rGMC分为对照组(加入IL-17)、干预组(加入IL-17、终浓度为5 mg/L EsA),同步化后分别培养24、48、72 h,MTT法检测各组对GMC增殖的影响,ELISA法检测各组细胞上清液中纤维连接蛋白(FN)的表达。结果:IL-17各浓度组均促进了GMC增殖(P<0.05);EsA抑制了IL-17(100 ng/ml)诱导的GMC增殖(P<0.05),并下调了FN的表达(P<0.01)。结论:EsA可抑制IL-17诱导的GMC增殖,并减少FN的分泌。     

商陆水溶性浸出物、商陆皂苷甲含量变异规律与优良种源筛选

目的:为商陆种质资源利用与优良品种选育提供依据。方法:收集全国主分布区商陆野生种质资源23份,考察其经纬度、海拔、农艺性状,用热浸法测定块根水溶性浸出物含量,用HPLC-ELSD法测定块根商陆皂苷甲含量,用DPS 6.55,Excel 2003软件进行单因素方差分析、相关性分析、主成分分析与聚类分析。结果:商陆不同种源间农艺性状存在显著差异(P0.05),其中福建、广西种源生长势好,植株高大,茎粗,叶片大而多狭长,块根产量高;不同种源间水溶性浸出物、商陆皂苷甲含量也存在显著差异(P0.05),2个成分变异规律相似,与种源地、经纬度、海拔、农艺性状存在相关性,其中陕西、浙江种源含量较高;与株高、茎粗、叶片长、叶片宽、叶柄长、块根纵径、块根横径、块根产量呈负相关关系,与根形指数、纬度、海拔呈正相关关系,与叶形指数、经度相关性较低;12个生长与成分性状指标可简化为5个主成分,累计贡献率达93.611 9%;23个种源可划分为5类。结论:高纬度、高海拔种植商陆有利于块根中水溶性浸出物与商陆皂苷甲含量积累;共筛选出5个农艺性状优良种源与4个高成分含量优良种源,可作为高产、优质商陆品种选育备选种质。     

狼疮平颗粒对BXSB狼疮性肾炎小鼠B淋巴细胞活化因子表达的影响

目的研究B淋巴细胞活化因子(Blymphocyte activating factor,BAFF)在BXSB狼疮性肾炎小鼠血清和外周血B淋巴细胞(PBBC)中的表达,并观察中药狼疮平颗粒的治疗作用。方法将11周龄雄性BXSB狼疮性肾炎小鼠18只随机分为狼疮对照组、激素治疗组、狼疮平治疗组,每组6只;另取11周龄雄性C57BL/6小鼠6只作为正常对照组。分别给予灌胃生理盐水(10mL/d)、甲泼尼龙[5mg/(kg·d)]、狼疮平颗粒[4g/(kg·d)]、生理盐水(10mL/d),治疗4周,测定各组尿蛋白、ds-DNA和体重,分别应用ELISA、RT-PCR方法检测血清中可溶性BAFF(sBAFF)和外周血B细胞中BAFF-mRNA的表达及变化,并观察肾脏病理活动性计分、24h尿蛋白定量、ds-DNA与sBAFF的关系。结果狼疮性肾炎小鼠血清sBAFF、PBBC中BAFF mRNA水平、24h尿蛋白定量、血清ds-DNA含量均较正常小鼠明显升高。激素和狼疮平治疗组治疗后sBAFF、BAFF mRNA较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后sBAFF、BAFF mRNA水平无明显差异(P>0.05)。狼疮性肾炎小鼠血清sBAFF水平与肾病理活动性计分、24h尿蛋白定量、ds-DNA成正相关(r=0.8098、0.8220、0.8535,P<0.01)。结论 BAFF在狼疮性肾炎的发生发展中起着重要的作用,可以监测病情变化并预测复发,是狼疮性肾炎治疗的理想靶点之一。中药狼疮平可以通过降低BAFF水平而改善狼疮性肾炎病情,值得进一步临床推广应用。     

商陆中商陆皂苷A的含量测定

目的:利用HPLC-ELSD测定不同产地商陆药材中商陆皂苷A的含量以控制其质量。方法:采用HPLC-ELSD含量测定法,Phenom enex Luna C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(68∶31∶1)为流动相。结果:商陆皂苷A在4.05~20.24μg呈线性,回收率为98.8%,RSD 1.4%。测定11个不同来源的药材,其商陆皂苷A的含量在0.32%~1.11%。结论:本法可快速、准确测定商陆药材中商陆皂苷A含量,可用于商陆药材的质量监控。     

土贝母皂苷甲对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的:探讨中药土贝母主要成分土贝母皂苷甲(TBMSⅠ)通过激活Egr1/p21信号通路对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法:体外培养MCF-7细胞,并把细胞分为空白组、TBMSⅠ高剂量组(20μg/ml)、TBMSⅠ中剂量组(15μg/ml)、TBMSⅠ低剂量组(10μg/ml),使用对应浓度的TBMSⅠ干预MCF-7细胞。干预24、48、72 h后,使用CCK-8法检测细胞增殖情况。干预MCF-7细胞48 h后,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡、细胞周期分布情况。采用Western blotting、qRT-PCR检测各组细胞Egr1、p21蛋白及mRNA表达。结果:干预24、48、72 h后,TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组的MCF-7细胞得到抑制,且抑制率呈时间与剂量依赖性。干预48 h后,TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组、TBMSⅠ低剂量组MCF-7细胞的凋亡率高于空白组,差异有统计学意义(均P<0.05)。TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组、TBMSⅠ低剂量组G₀/G₁期细胞占比低于空白组,G₂     

葛根散等3首解酒方对急性酒精性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的影响

目的:比较葛根散等3首方剂对急性酒精性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的干预效果,探讨3首方剂防治酒伤的部分作用机制。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、各给药大、中、小剂量组,制备急性酒精性肝损伤模型,给药组以中药水煎剂灌胃,对照组代以蒸馏水,检测肝组织病理学改变、肝细胞凋亡指数、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠肝组织脂肪变性、肝细胞凋亡指数及肝细胞Bax阳性表达均明显升高(P<0.01),肝细胞Bcl-2阳性表达明显降低(P<0.01)。与模型对照组比较,葛根散和葛花解酲汤在一定剂量下都能显著减少小鼠肝组织脂肪变性、肝脏凋亡指数和Bax蛋白的表达(P<0.01),显著增加小鼠肝细胞Bcl-2蛋白的表达(P<0.01);石膏汤在一定剂量下能显著减轻小鼠肝组织脂肪变性(P<0.01),但对小鼠肝脏凋亡指数及Bcl-2、Bax的表达无影响,与葛根散比较具有显著差异(P<0.05)。结论:葛根散和葛花解酲汤能减轻肝细胞的变性、坏死,减少细胞凋亡,可能与其解酒机制有关。     

甘露消毒丹对CoxA16小鼠模型的影响

目的:探讨甘露消毒丹对柯萨奇病毒A16型(CoxA16)小鼠模型的影响。方法:7日龄ICR小鼠150只,随机分为正常组、模型组、阿昔洛韦组、甘露消毒丹组,每组25只;除正常组外,其余各组每只小鼠腹腔内注射20ul 107TCID50的CoxA16标准株原液进行造模,造模后的第5天,除正常组和模型组外,其余4组使用相应的药物干预治疗。观察小鼠临床表现;在光镜下观察肌肉组织形态学变化;用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测肌肉匀浆液对Hela细胞存活率的变化;电镜观察肌肉组织病毒颗粒的变化,采用ELISA法检测肌肉组织IL-6、IL-10、INF-γ的浓度。结果:与模型组比较,发现阿昔洛韦及甘露消毒丹(24.4g/kg、12.2g/kg、6.1g/kg)均可提高小鼠的生存率并使体重恢复到正常情况。HE染色和电镜结构表明甘露消毒丹(24.4g/kg、12.2g/kg、6.1g/kg)和阿昔洛韦均可减轻CoxA16病毒对肌肉的损伤,并减少肌肉内病毒的颗粒。通过肌肉组织匀浆液对Hela细胞存活率的变化表明甘露消毒丹能抑制病毒在肌肉内的生长。ELISA检测结果发现阿昔洛韦与甘露消毒丹均能减少IL-6的浓度,并提高IL-10、INF-γ的表达。结论:甘露消毒丹对CoxA16感染的小鼠有保护作用,能够抑制并杀死体内的CoxA16病毒。     

补肾固精方结合激素对BXSB狼疮小鼠肾脏基质金属蛋白酶表达的研究

目的:探讨中药补肾固精方结合激素对BXSB狼疮小鼠肾脏基质金属蛋白酶表达的影响与治疗狼疮性肾炎的作用机制.方法:BXSB小鼠随机分为4组.检测尿蛋白定量及MMP-2、TIMP-2、Col-Ⅳ的阳性表达.结果:与模型组相比,补肾固精方组尿蛋白定量显著减少,Col-Ⅳ表达显著降低;结合组MMP-2,TIMP-2,Col-Ⅳ均有显著差异.与其他两治疗组相比,结合组显著降低TIMP-2、Col-Ⅳ的阳性表达,促进MMP-2的表达.结论:补肾固精方可以降低尿蛋白定量和Col-Ⅳ在肾组织中的沉积.其与激素协同作用,可以通过调节肾组织中MMP-2/TIMP-2的表达,抑制Col-Ⅳ的聚集,延缓肾脏病变,从而达到治疗狼疮性肾炎的目的.     

山茱萸总苷对急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡通路的影响

目的:探讨山茱萸总苷对急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡通路的影响。方法:原代培养乳鼠的心肌细胞,采用液体石蜡封闭法建立缺血缺氧模型,并将原代培养3天的心肌细胞分为正常组、缺氧组(1h、2h、3h、5h)及药物治疗组,药物浓度采用山茱萸总苷三个剂量组,免疫组化法检测各组cleaved caspase-9表达。结果:与对照组相比,缺氧各组caspase-9表达增加(P<0.01),并且随着时间延长,阳性表达的比例增加,5h达到最高,给予山茱萸总苷干预之后,治疗组每个时间点cleaved caspase-9表达都有所下降,随着山茱萸总苷剂量的增加,cleaved caspase-9表达逐渐下降,与缺氧组相比,没有统计学意义,但0.049g/L和0.49g/L组差异有统计学意义(P<0.01)。山茱萸总苷起效剂量为0.049g/L,剂量范围为0.049g/L⁰.49g/L。结论:山茱萸总苷可以抑制cleaved caspase-9的表达,可能是通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路去实现对心肌细胞起保护作用。     

青蒿琥酯片对狼疮样模型小鼠外周血淋巴细胞表面CD4、CD8、CD54表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯片不同剂量对狼疮样小鼠部分免疫调节作用机制。方法:运用不同剂量的青蒿琥酯对8~10周龄的狼疮样小鼠进行干预治疗8 d,观察其对狼疮样小鼠外周血淋巴细胞表面CD4、CD8、CD54表达的影响。结果:青蒿琥酯片对狼疮样小鼠外周血CD4、CD8的表达有升高的作用,对狼疮样小鼠外周血CD54的高表达有抑制作用,以高剂量组最为明显。结论:青蒿琥酯片可调节狼疮样小鼠的细胞免疫功能,抑制狼疮样小鼠的过度免疫反应。     

小檗碱对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

目的观察高糖对体外培养小鼠足细胞活力、凋亡的影响以及小檗碱的保护效果。方法通过温度条件培养方法诱导永生代小鼠足细胞株分化成熟,分为正常糖对照组(NG,5 mmol/L)、甘露醇高渗对照组(MA,30 mmol/L)、高糖模型组(HG,30 mmol/L)、高糖(30 mmol/L)+小檗碱治疗组(BBR,1.25μmol/L),干预24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用MTT法检测足细胞活力,用流式细胞仪分析细胞凋亡率,并用Q-PCR法检测podocin和nephrin的mRNA表达水平。结果 NG对照组和MA对照组之间的细胞活力、凋亡率和凋亡相关分子的mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05);与NG对照组比较,HG模型组足细胞活力和足细胞凋亡率差异有统计学意义(P0.01),对podocin和nephrin的mRNA表达有明显的抑制作用(P0.01),并且这种高糖刺激作用可随着作用时间的延长而增强;与HG模型组比较,BBR治疗组足细胞活力和凋亡率差异有统计学意义(P0.01),podocin和nephrin的mRNA表达水平明显增加(P0.01)。结论高糖环境可诱导小鼠足细胞凋亡,且这种诱导凋亡作用与高渗环境无关;小檗碱对高糖诱导的足细胞凋亡有保护作用。     

益肾解毒汤治疗活动性系统性红斑狼疮疗效观察

目的观察益肾解毒汤治疗活动性系统性红斑狼疮的临床疗效。方法将67例活动性系统性红斑狼疮患者随机分为2组,对照组33例予醋酸泼尼松龙片和环磷酰胺治疗,治疗组34例在对照组治疗的基础上加益肾解毒汤口服,2组均治疗3个月后检测24h尿蛋白定量、血清白蛋白(Alb)、血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平,并评定临床疗效。结果 2组治疗后24h尿蛋白定量、Alb、Cr、BUN及ALT较治疗前均明显有改善(P0.05),且治疗组改善优于对照组(P0.05);治疗组总有效率91.1%,对照组总有效率75.7%,2组总有效率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论益肾解毒汤配合西医常规治疗活动性系统性红斑狼疮疗效确切。     

木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡

[目的] 探究木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡的作用机制。[方法] 通过 CCK8 法检测木香内酯对 U87 细胞增殖作用的影响; 采用 Annexin V-FITC/PI 双染法检测木香内酯对 U87 细胞凋亡率的影响, 采用 JC-1染色法检测木香内酯对 U87 细胞线粒体膜电位的影响; 采用 DCFH-DA 探针检测木香内酯对 U87 细胞中 ROS 含量的影响;采用生化法检测木香内酯对 U87 细胞氧化应激指标丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、微量还原型谷胱甘肽（GSH）和一氧化氮（NO）含量的影响; 采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测木香内酯对U87 细胞 Caspase-3、Bax、Bcl-2 的 mRNA 表达水平的影响; 采用分子对接寻找木香内酯与 Caspase-3、Bax、Bcl-2 的具体结合位点。[结果] 木香内酯呈剂量依赖性抑制 U87 细胞的生长, 细胞半抑制浓度 IC₅₀ 为 11.27 μmol/L;细胞凋亡水平检测结果显示木香内酯 20 μmol/L 组 U87 细胞凋亡率增加, 差异具有统计学意义（P<0.001）; 线粒体膜电位水平检测结果显示木香内酯 5 μmol/L 组、10 μmol/L 组、20 μmol/L 组 U87 细胞线粒体膜电位降低, 差异具有统计学意义（P<0.001）;氧化应激检测水平显示, 木香内酯呈剂量依赖性上调 U87 细胞中 ROS、MDA、NO 水平; 下调 SOD、GSH 水平, 差异具有统计学意义（P<0.05）; 木香内酯 20 μmol/L 组 U87 细胞 Caspase-3、Bax mRNA 表达水平均上调, 差异具有统计学意义（P<0.01）, 而 Bcl-2 mRNA 表达水平下调, 差异具有统计学意义（P<0.05）。分子对接结果显示木香内酯分别与 Caspase-3、Bcl-2、Bax 氨基酸残基 ARG-164, LEU-168, ARG-66 形成稳定的结合能。[结论] 木香内酯能明显抑制 U87 细胞生长和介导细胞高氧化应激水平, 降低线粒体膜电位并促进细胞凋亡。