我国肠道传播戊型肝炎的病原形态学研究

采用简易免疫电镜方法，从我国新疆非甲非乙型（戊型，ＨＥ）肝炎病人粪悬液中检出含有小圆形病毒颗粒的阳性标本５例，经细胞培养，从接种含病毒的２ＢＳ细胞中分离到一株能引起细胞病变、具有血凝活性的病毒（８７Ａ株）。电镜下可见感染细胞胞浆中呈现局灶性空泡、液泡病变区，并含晶格样排列的圆形病毒颗粒，核变形。该株病毒能被新疆疫区以及来自缅甸、印度、前苏联ＨＥ病人血清及美国接种ＨＥ病毒的黑猩猩急性期血浆所聚集，显示其间有密切血清学关系，提示该株病毒为我国新疆ＨＥ的致病病原。该病毒大小约３０ｎｍ，圆形，表面形态结构特殊；装配成熟过程与粗面内质网、包涵体、微丝等密切相关；病毒因细胞破碎而释放。这些形态及形态发生特征与嵌杯病毒科病毒相近。我们认为应归嵌杯病毒科新属成员。     

日本人群中HEV感染的血清学调查

应用纯化的ＨＥＶ（８７Ａ株）热灭活抗原进行ＥＬＩＳＡ试验，测定日本大阪地区收集的１４９例各种肝病患者急性血清中的抗ＨＥＶ抗体、获得１９份阳性（阳性率为１２．７％），其中单纯抗ＨＥＶ ＩｇＭ阳性１１份和抗ＨＥＶ ＩｇＧ阳性６份。两者都阳性的２份。     

我国戊型肝炎病毒87A株实验感染恒河猴的研究

用组织培养分离的戊型炎病毒（ＨＥＶ）８７Ａ株病毒液，以后腿静脉内接种４只恒河猴，其中２只在感染后第５周血清转氨酶（ＡＬＴ）开始升高，最高值达到染前猴的将近２倍，升主后肝活检可见特征性病理学改变，并从混合粪便液中分离出相同的病毒；感染的动物ＨＥＶ特异性抗体全部转阳。而２只对照猴无上述感染症状。表明８７Ａ株是一种直病毒。     

戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的鉴定

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定,并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度;微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度;腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,３周后取血清进行抗体检测;利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接种病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ,ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性;在２ＢＳ、Ａ５４９细胞中连传３代,病毒滴度稳定,在ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中病毒滴度稍低;在接种Ｆ８６株病毒的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中可检出特异性抗体;在其细胞培养物中检出ＨＥＶ聚合酶区一段核苷酸序列,测序结果与我国８７Ａ株的同源性为９８．７％。结论：Ｆ８６株病毒不能凝集人Ｏ型红细胞,对２ＢＳ、Ａ５４９及ＬＬＣ－ＭＫ２细胞均敏感,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠不致病。部分序列的测定结果表明该株病毒确为ＨＥＶ,从而由国外实验室证实ＨＥＶ可用人源性细胞分离。     

从我国肠道传播的非甲非乙型肝炎病人粪便中分离出一株小RNA病毒

从我国新疆肠道传播的非甲非乙型肝炎(NANBH)患者的急性期粪便中,用细胞培养分离到一株致细胞病变(CPE)和有血凝活性的病毒.分离的病毒能被新疆NANBH病人急性期混合血清所中和,在血凝抑制试验中病毒血凝能被病人血清所抑制,在免疫电镜检测中可与1∶160稀释的新疆NANBH病人血清起凝聚作用,而与甲型肝炎病人急性期混合血清仅在中和试验和免疫电镜中存在低滴度交叉现象,在血凝抑制试验中无交叉反应.在电镜下观察细胞培养物可见到直径为30～34nm圆形病毒颗粒,与病人粪便中见到的病毒颗粒相似.理化试验结果显示分离的病毒属无包膜的、耐酸的RNA病毒,在56℃水浴中作用30min,感染力降低.应用微量中和试验和血凝抑制试验测定5例患者双份血清的结果表明,有2例抗体有4倍或4倍以上升高.我国用细胞培养方法分离出肠道传播的NANB H病原体获得成功,这对该病毒的分子生物学研究、特异性诊断、流行病学调查以及防治都有重要意义.     

逆转录PCR－生物素探针杂交法鉴定戊型肝炎病毒

建立了生物素标记探针技术，以便用于戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ，ＨＥＶ）的诊断及与肠道病毒的鉴别。用Ａ５４９细胞培养ＨＥＶ８７Ａ株，收集上清，浓缩沉淀，酚／氯仿抽提ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＫ扩增ｃＣＮＡ，将其直接点于硝酸纤维素膜或扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，转移到硝酸纤维素膜上，制备待检样品。以光敏生物素标记ＨＥＶＥＴ１．１４１８６ｐ探针，对硝酸纤维素膜进行点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。结果表明，制备的ＨＥＶ探针，特别是合成的寡核苷酸ＨＥＶ探针和肠道病毒探针，能够分别特异地与８７Ａ株病毒和肠道病毒Ｅｃｈｏ－１３型病毒的核酸杂交。该方法特异性强，较单独用ＰＣＲ扩增、经琼脂糖凝胶电泳敏感性高，特异性强，且结果能长期保存，可用于戊型肝炎的临床诊断。     

军队散发性急性病毒性肝炎的流行病学研究

1993年3月～1994年2月对驻川某部队进行病毒性肝炎发病情况监测,并对其散发病例。经确诊急性病毒性肝炎患者血清标本72份,用ELISA方法进行分型检测,并作流行病学分布研究。结果:以甲肝为主(占52.78％)、乙肝为次(占20.83％)、丙肝最少(占1.39％),丁、戊肝两型均为2.7％。监测结果表明:该部病毒性肝炎年发病率为191.88/10万;干部肝炎发病率略低于战士,然乙肝发病率则较战士为高(P<0.05);新兵明显高于老兵,且甲肝发病率亦远较老兵为高(P<0.01)。提示:在肝炎防治中,应突出以甲、乙两型为重点,应以干部和新兵为主的预防对象。     

Hepatitis C in deceased drug addicts

Summary Needle sharing among drug addicts leads to the transmission of infectious diseases such as hepatitis B and AIDS. After development of a test system based on gene technology against the hepatitis C virus (HCV), drug addicts have been regarded as an important reservoir for hepatitis C. In our study 113 (40.1%) out of 282 addicts who died from drug abuse in Hamburg between 1988 and 1990 had antibodies against HCV (anti-HCV). The prevalence of anti-HCV differed in various age groups; the highest prevalence was found in addicts aged 30–34 years. Co-infections with hepatitis B and hepatitis C virus were found in 57 drug addicts (59.4%) out of 96 deceased with antibodies to hepatitis B (anti-HBc), whereas only 8 out of 23 HIV-infected were anti-HCV positive (34.8%).This study was supported by a grant from the Ministry for Research and Technology of the Federal Republic of Germany (FKZ Nr.II-077-89)     

我国登革3型病毒广西株基因组非编码区结构特征的研究

应用cDNA末端快速扩增法（RACE）,获得我国登革3型病毒株基因缓 的包括5‘和3‘端非编码区的扩增片段,经琼脂糖凝胶电泳观察其长度分别为710bp和470bp。序列分析表明,与登革3型病毒菲律宾株（H87株）核苷酸序列同源性＞99％。进化树分析提示,该株病毒属于登革3型病毒Ⅰ亚型。基因组的5‘和3‘端有含有较强的二级结构域。