进行性脊髓性肌萎缩症患者神经元存活基国及神经元凋亡抑制蛋白基因的缺失

目的：研究中国人群中进行性脊髓性肌萎缩症（ｓｐｉｎａｌ ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ,ＳＭＡ）患者中神经元存活基因（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｎ,ＳＭＮ）外显子７及神经元调亡抑制蛋白基因（ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｈｉｎｂｉｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ,ＮＡＩＰ）外显子５缺失情况,进一步探讨这２个ＳＭＮ基因外显子７区域和５５例患儿ＮＡＩＰ基因外显子５的缺失进行检测。结果：ＳＭＮ基因外显子７区域纯合缺失率分别为：ＳＭＡＩ型９２％（２３／２５）;Ⅱ型９０％（２７／３０）。患儿双亲中有２例母亲的１例父亲也有纯合缺失。在５５例ＳＭＡ患儿中未检测到有ＮＡＩＰ基因外显子５的纯合缺失,仅发现２例杂合性缺失。结论：中国人ＳＭＡ患者中ＳＭN     

应用PCR—限制性内切酶技术快速诊断脊肌萎缩患儿的SMN基因缺失

目的：检测脊肌萎缩患儿ＳＭＮ基因第７外显子缺失。方法：应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶技术检测ＳＭＮ基因第７外显子。结果：４例典型ＳＭＡ患儿有ＳＭＮ基因第７外显子缺失，１例临床疑诊病例没有该外显子缺失。结论：该检测方法快速、简便、价廉、安全、准确，可作为快速筛查脊肌萎缩患儿的基因诊断和产前基因诊断的方法。     

错配PCR-RFLP技术在小儿脊髓性肌萎缩基因诊断中的应用

目的 建立小儿脊髓性肌萎缩（ＳＭＡ）的基因诊断方法。方法 应用错配聚合酶链反应－限制性片段长度多态性技术对７例临床诊断的ＳＭＡ患儿及２１名健康儿童运动神经元存活（ＳＭＮ）基因进行检测。结果 ７例患儿的ＳＭＮ基因外显子７均有缺失,正常人ＳＭＮ基因均未缺失。结论 使用错配聚合酶链反庆－限制性片段长度多态性技术对ＳＭＡ患儿进行基因诊断,简便易行,结果可靠。     

脊髓性肌萎缩运动神经元存活基因和神经元凋亡抑制蛋白基因缺失的研究

目的 :研究国人脊髓性肌萎缩 (SMA )基因缺失特点。方法 :应用 PCR扩增及限制性内切酶技术对 15例儿童型 SMA ( 型 7例 , 型 4例 , 型 4例 )和 2例成人型 SMA进行运动神经元存活基因 (SMN)第 7外显子和神经元凋亡抑制蛋白基因 (NAIP)第 5外显子缺失分析 ,并对 1例有阳性家族史的家系进行了羊水胎儿产前诊断。结果 :14例儿童型 SMA携有 SMN基因第 7外显子缺失 ,占 93% ;2例 型 SMA携有 NAIP基因第 5外显子缺失 ,占 2 8.6 %。 2例成人型 SMA未显示 SMN或 NAIP基因缺失。结论 :儿童型 SMA的 SMN基因缺失频率高 ,可应用于临床 ,提高 SMA诊断率 ,适于产前诊断及鉴别诊断。 NAIP基因缺失可能与 SMA的严重程度有关。成人型SMA与儿童型 SMA为非等位基因突变。     

急性非淋巴细胞白血病中MGMT与p53基因突变的研究

目的 探讨肿瘤抑制基因ｐ５３、ＭＧＭＴ在急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中的改变。方法 用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对３１例ＡＮＬＬ患者、２２例正常人ｐ５３基因第５、６、７、８外显子和ＭＧＭＴ基因第１、４外显子进行突变分析。结果 ３１例ＡＮＬＬ中５例存在ｐ５３基因突变、４例存在ＭＧＭＴ基因突变,其中２例ｐ５３与ＭＧＭＴ同时发生突变。结论 ｐ５３基因突变在白血病发生中起一定     

糖尿病人群胰岛素受体基因变异的研究

动用聚合链反应及单链构型多态性技术分析５２例Ⅱ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）者及５４例正常对照组胰岛素受体基因第１７及２０外显子的变异。结果显示：外显子１７的１００８位ＧＧＣ－ＧＧＴ多态性频率在ＮＩＤＤＭ组为２９．４％，而在正常对照组为９．０７％（Ｘ＾２＝１０．０２，Ｐ〈０．００５）．外显子２０的１１６９位甘氨酸多态性ＧＧＴ→ＧＧＣ在ＮＩＤＤＭ与正常对照组的频率分别为１５．４％和３．７％（Ｘ＾２＝４．３７     

人肝细胞癌中PTEN基因的DNA杂交及突变分析

目的　研究人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因缺失及第５、第８外显子突变。方法　应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因限制性片段长度多态性和纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。应用聚合酶链单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）检查ＰＴＥＮ基因的第５、第８外显子的突变。结果　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,所有３４例肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见限制性片段长度多态性或纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。ＰＣＲＳＳＣＰ检测发现,２例肝细胞癌第５外显子ＰＣＲ产物均显示１条额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）。另２例肝细胞癌第８外显子ＰＣＲ产物呈现额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）,合计突变率为１１．８％（４／３４）。结论　所检３４例人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失,但存在突变。     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎性组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌中存在状态进行研究。结果表明，在１３例鼻咽癌组织中有１１例鼻咽癌组织有Ｒｂ基因的缺失或明显减弱，提示ｐ５３基因突变及Ｒｂ基因的缺失而导致的基因失活与鼻咽癌的发生有密切关系。     

PCR-SSCP法检测小儿原发性肾病综合征载脂蛋白E基因多态性

目的探讨小儿原发性肾病综合征（ＮＳ）脂质代谢紊乱机制。方法测定了６８例小儿ＮＳ及 １２０例健康对照组 ７项血脂指标,采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ ＰＣＲ－ ＳＳＣＰ）技术检测其载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性。并采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＮＳ组尿蛋白类型。结果所有７项指标在携不同 ＡｐｏＥ等位基因（Ａｐｏε２、Ａ ｐｏε３及 Ａｐｏε４）的患儿之间均无显著性差异（ Ｐ＞０． ０５）,而携Ａｐｏε３等位基因型的选择性蛋白尿（ＳＰＵ）组血总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）显著高于同型的非选择性蛋白尿组（ＮＳＰＵ）（ Ｐ＜ ０． ０５）。 ＮＳＰＵ组的 Ａｐｏε２等位基因频率显著高于健康儿童组（ １２．９６％ ｖｓ ５． ００％, Ｐ＜ ０． ０５）。结论小儿原发性 ＮＳ的脂质紊乱主要与其蛋白代谢异常有关而与ＡｐｏＥ基因多态性无明显关系。但携 Ａｐｏε２等位基因的 ＮＳＰＵ患儿有进行性肾脏损害的可能。     

白血病p16基因纯合子缺失的研究

为探讨白血病ｐ１６基因缺失的发生率及其与疾病预后的关系。对４８例初发的白血病患者用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法扩增ｐ１６基因外显子１及外显子２，进行ｐ１６基因缺失研究。４８例患者中有ｐ１６基因缺失者４例，分别为：Ｍ２２例，非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）并发急性Ｂ淋巴细胞白血病（Ｂ ＡＬＬ）、慢性髓性白血病（ＣＭＬ）急淋变各１例。有ｐ１６缺失的４例患者均病情进展迅速，治疗效果差，患者在短期内死亡。提示：ｐ１６基因缺失在部分白血病的发生、发展中起重要作用；有ｐ１６基因缺失者预后较差     

APC抑癌基因在髓系恶性疾病中的杂合性缺失

目的近年研究表明位于５ｑ２ｌ的ＡＰＣ抑癌基因涉及多种肿瘤的发生发展，而关于其与存在５ｑ频繁丢失的髓系恶性疾病的关系尚未见报道。此文分析７例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和３６例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中ＡＰＣ的等位基因缺失，并讨论其与髓系表型特异性、临床表现及预后的相关性。方法采用杂合性缺失（ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）试验（包括ＰＣＲ＋ＲＦＬＰ及ＰＣＲＳＳＣＰ技术），分析ＭＤＳ和ＡＮＬＬ中ＡＰＣ基因的缺失频率，并以正常人作对照。同时建立一个瘤细胞标本纯度参照体系以降低标本不纯对ＬＯＨ分析的影响。结果能提供缺失信息的包括９例正常人、２２例ＡＮＬＬ和４例ＭＤＳ。正常组未见１例发生ＬＯＨ（０／９），ＭＤＳ组１例ＲＡＥＢ阳性（１／４），而ＡＮＬＬ中ＬＯＨ阳性的有４例，其中３例为Ｍ２：（３／６），１例为Ｍ４ａ（１／１）。统计学证实Ｍ２ａ的阳性率与正常组差别有显著性（Ｐ＝０．０４４）。ＬＯＨ阳性的ＡＭＬ共同点有：（１）中老年人偏多；（２）外周血白细胞数较高，但浸润现象不明显；（３）对化疗较敏感。结论ＡＰＣ基因的异常可能是发生于髓系恶性疾病中粒系异常克隆的一个独立分子事件，代表着一部分具有特     

白血病中N－ras基因点突变的研究

Ｎ－ｒａｓ基因是ｒａｓ基因族其中一种，主要以点突变的方式激活。分子生物学研究提示，Ｎ－ｒａｓ的激活与白血病的发生存在一定程度的相关。此项工作取材９例急性髓细胞性白血病（ＡＭＬ）患者，以７例正常体检者为对照进行了Ｎ－ｒａｓ基因点突变的初步研究。研究样本均取自北京的三级医院，所有患者均被所在医院确诊为ＡＭＬ，其中男性４例，女性５例，平均年龄３７岁。点突变的探测方法采用等位基因特异寡核苷酸探针（ＡＳＯ）斑点杂交方法，人工合成ＡＳＯ探针４种，长度均为２０ｍｅｒ。探测对象为Ｎ－ｒａｓ基因第１２，１３位密码子Ｇ→Ａ的点突变。为验证方法的可靠性，对一例阳性发现者进行了ＤＮＡ序列分析。研究发现在９例ＡＭＬ患者中，３例发现有Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子Ｇ→Ａ的点突变。对照中未发现相同的点突变但有１例发现携有Ｎ－ｒａｓ第１３位Ｇ→Ａ的点突变。研究结果提示，Ｎ－ｒａｓ基因点突变，尤其是第１２位密码子的点突变，与白血病病因存在一定相关性。Ｎ－ｒａｓ在正常人中的突变情况及其意义尚需进一步探索。     

反义C—myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC—7721的生长抑制

针对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始妈ＡＵＧ及下游４个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸（ＯＤＮｓ）、并对合成的ＯＤＮｓ进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１培养体系中，对反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现（１）与正义和错配ＯＤＮｓ相比较，反义Ｃ－ｍｙｃＯＤＮ有明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的作用；（２）该生长抑制作用随ＡＳＯＤＮ剂量增加而增     

神经纤维瘤病Ⅰ型基因32、33号外显子突变的检测

检测中国人神经纤维瘤病Ⅰ型（ Ｎ ＦⅠ）基因３２ 、３３ 外显子突变。方法　应用聚合酶链反应单链构象多态性（ Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ） 法分析１４ 个 Ｎ ＦⅠ家系６２ 名成员及３０ 名正常对照外周血白细胞 Ｄ Ｎ Ａ的 Ｎ ＦⅠ基因３２ 、３３ 号外显子。结果　３ 个家系（２１４ ％ ） 、４ 例 Ｎ ＦⅠ患者（１１１ ％ ） Ｎ ＦⅠ基因３２ 号外显子的 Ｄ Ｎ Ａ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 发生泳动变位,可能为 Ｎ ＦⅠ基因３２ 号外显子发生突变。家系中其他成员及正 常对照组无此现象。通过３ 种不同的 Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 实验条件,未发现３３ 号外显子异常泳动变位。结论　３２号外显子可能为中国人 Ｎ ＦⅠ基因突变热点之一。本研究方法对 Ｎ ＦⅠ症状前诊断和产前诊断有重要应用价值。     

PML—RARa融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲａ）肯定了２例与急淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ，１５例缓在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型，８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎悸组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌在存在状态基因突变及Ｒｂ基因的缺     

磺脲类药物受体基因多态性与非胰岛素依赖型糖尿病的相关性

目的了解磺脲类药物受体（ＳＵＲ）基因与中国人非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）的相关关系。方法采用多聚酶链式反应限制性酶切片段长度多态性分析技术（ＰＣＲＲＦＬＰ）,对位于ＳＵＲ基因第２２外显子及第２４内含子的多态性位点同中国人ＮＩＤＤＭ的相关性进行了分子遗传学研究。结果ＳＵＲ基因第２４内含子的“ｃ”等位基因频率在中国人ＮＩＤＤＭ人群中显著增高（６８％比５５％,Ｐ＝０００７）,且“ｃｃ”纯合子基因型的频率亦在ＮＩＤＤＭ人群中显著增高（４１９％比２７７％,Ｐ＝００１３,ＯＲ＝４３９,ＣＩ：１５～１２７）。结论ＳＵＲ基因的多态性与不同人种的ＮＩＤＤＭ具有相关性,提示该基因在ＮＩＤＤＭ的发病中具有重要作用     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

乙型肝炎病毒基因疫苗诱导抗体的产生

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因疫苗可打破人群对ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）疫苗免疫无应答或低应答而产生保护性抗体,并有可能成为治疗ＨＢＶ持续性感染的特异性基因治疗剂。我们用构建的ＭＳ２－ｐｒｅＳ表达质粒ｐＭＩＰ、ＩＬ－２－ｐｒｅＳ原核表达质粒ｐＩＩＰ、ＩＬ－２－ｐｒｉＳ真核表达质粒ｐＣＷＩＩＰ产生抗体量高于ｐＭＩＰ（ＳＡＳ统计分析,Ｐ〈０．０１）,这说明ＩＬ－２－ｐｒｅＳ基因疫苗在体内可能有多种生物学     

喉鳞癌中p53基因的检测及其意义

为了探讨喉鳞癌中ｐ５３基因与肿瘤临床分期、病理分化程度及淋巴结转移的关系,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染系统检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第７外显子的突变情况。结果：ｐ５３基因第７外显子突变２５例,突变率为４１．７％。临床Ⅰ～Ⅱ期突变率为２６．９％（７／２６）,Ⅲ～Ⅳ期突变率为５２．９％（１８／３４）;高、中、低分程度分布为２３．５％（４／１７）、３７．５（９／２４）、６３．２％（１２／１９）;无淋巴结转移者为２８．１％（９／３２）,有淋巴结转移者为５７．１％（１６／２８）;差异均有显著意义（Ｐ〈０．０５）。结论：提示ｐ５３基因第７外显子突变与喉磷癌临床分期、病理分化程度及肿瘤颈淋巴结转移密切相关。