人CD4+CD25+调节性T细胞的体外培养扩增

目的 建立人CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的分离和体外扩增方法,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能。方法 免疫磁性分离(MACS)方法分离人CD4⁺CD25⁺Treg细胞,加入刺激因子与之共培养扩增,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测细胞的活性和纯度,流式细胞法检测细胞主要表型标记,实时定量PCR检测Treg核心标记Foxp3的表达,混合淋巴细胞反应试验分析其免疫抑制功能,ELISPOT方法检测产生细胞因子的细胞数目。结果 扩增2～3周的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞数目达到新鲜细胞的3500倍,活性> 97 %,纯度>96 %;扩增的细胞与新鲜的细胞保持了相似的表型、Foxp3表达,其抑制功能略强于新鲜的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞,其差异具有统计学意义（71% vs 51%, P<0.05）,可能与其产生抑制性细胞因子的细胞数目增加有关。结论 本试验室创建的分离和体外扩增人CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的方法,可以大量扩增出高纯度、有活力且不影响其抑制功能的Treg细胞,解决了CD4⁺CD25⁺ Treg细胞数目少的问题。     

CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增

 【目的】 探讨有效的体外培养扩增CD4+CD25+Treg的方法。【方法】 收集健康志愿者外周血5例，免疫磁珠法分选出CD4+CD25+Treg。将实验分为三组，第一组在CD4+CD25+Treg中加入100 nM rapamycin (1μg/ml)和包被了CD3/CD28单抗的磁珠培养3周，第8 天开始加入1000U/mL的IL-2，第二组培养条件除不加rapamycin外其余与第一组相同，第三组培养细胞为CD4+CD25-T细胞，培养条件同第一组。培养第7、14、21天收集细胞计数，第21天收集细胞行流式细胞术三标法检测CD4、CD25、FOXP3的表达。MTT法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD4+T细胞增殖的抑制作用。 【结果】 三组细胞均有明显的扩增，加rapamycin培养的CD4+CD25+Treg细胞的扩增率比不加rapamycin扩增倍数低，但细胞的纯度明显增加。CD4+CD25-T细胞组在培养第一周扩增迅速，从第二周开始增殖减慢，CD4+CD25+ Treg 细胞的比例较培养前无明显的差别。三组至第三周时扩增倍数分别为 89.4+20.53、338.4+77.64 、215.6+54.58（F=484.655,p<0.0001），细胞的纯度分别为84.32+4.62%、34.04+5.78%、0.68+0.39% (F=24.660,p<0.0001)。体外抑制实验显示体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体和异体的CD4+T细胞增殖均有明显的抑制作用，并且随着效靶比浓度的降低而降低。在CD4+T/Treg比例为8：1、4：1、2：1、1：1时对自体CD4+T细胞的抑制率分别为9.65%、16.43%、28.75%、55.34%，对异体CD4+T细胞的抑制率分别为6.43%、14.72%、26.47%、50.25%，而且在各浓度梯度其抑制作用在自体和异体之间均无明显的差异。结论 我们采用rapamycin+CD3/CD28单抗标记的磁珠+IL-2在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg，其扩增的倍数为89.4+20.53，具有免疫抑制功能，有望进一步应用于临床。     

CD19+CD27+IgD+B细胞与甲状腺相关性眼病患者疾病活动度相关性研究

目的:探讨甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy, TAO)患者外周血CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例变化与病情活动度的关系。方法:采用流式细胞术检测TAO患者和健康对照组CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例,分析TAO患者CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例与健康对照组的差异,并分析CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例与TAO疾病活动度之间的相关性。结果:TAO患者CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例明显低于健康对照(P<0.05);活动性TAO患者CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例细胞显著低于非活动性TAO患者;CD19     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平及临床意义

目的：观察抗病毒治疗前的慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4⁺CD25^high调节性T细胞（Treg）和CD4⁺CD25⁺CD127^low/-reg百分比和临床指标的相关性。方法：分离28例CHB患者和24例健康对照的外周血单个核细胞(PBMC),以三色流式分析法分别对CD4⁺CD25^highTreg和CD4⁺CD25⁺CD127^low/-Treg进行分析。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测。结果：CHB组CD4⁺CD25^highTreg和CD4⁺CD25⁺CD127^low/-Treg占CD4⁺T细胞的百分比分别为 3.36%±2.59% 和 4.05%±1.63% ,均高于正常对照组（1.60%±0.66%和1.75%±0.83%,P<0.01）。ALT大于100 U•L^-1的患者中CD4⁺CD25^highTreg占CD4⁺T淋巴细胞的百分比（4.26%±3.10%）高于ALT小于100U•L^-1的患者（2.52%±2.72% ,P<0.05）。CD4⁺CD25^highTreg占CD4⁺T淋巴细胞的百分比与ALT水平呈正相关（r=0.44,P<0.05）。结论：CHB患者体内CD4⁺CD25⁺Treg的升高可能抑制细胞免疫反应,影响病毒清除。CD25高表达水平易受转氨酶水平的影响,CD127用来作为调节性T细胞的鉴定更为可靠。     

人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分选及扩增方法的建立

目的建立人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)的免疫磁珠分选法(MACS)及体外扩增方法 ,并对扩增前后Treg细胞纯度及表型进行鉴定。方法流式细胞术检测人外周血Treg细胞占CD4~+T细胞的比例;免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg细胞,用CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4~+CD25~+Treg细胞进行体外扩增培养,在扩增培养的第0、7、14、21天分别进行细胞计数及检测细胞的活性,取扩增培养第0天及第14天细胞行流式细胞术检测扩增前后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3的表达情况。结果正常人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg水平占CD4~+T细胞(7.94±1.86)%,MACS能够成功分选出CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞,分选平均纯度达(95.86±0.65)%,细胞活性95%;以CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4~+CD25~+Treg细胞进行外扩增培养后,细胞有明显扩增。经2周扩增后,细胞扩增倍数达到原细胞数量的(21.33±1.53)倍,扩增后细胞Foxp3的表达由(95.86±0.65)%下降至(93.71±1.30)%,但差异无统计学意义(P0.05)。结论免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞,体外成功扩增CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞,扩增前后Treg细胞的纯度及表型无明显变化。     

外周血CD4+CD25+Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的关系

目的 探讨外周血CD4⁺CD25⁺Treg细胞、TLR4、人巨细胞病毒(hCMV)-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死(As-ACI)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法 选取89例As-ACI患者(脑梗死组),另选取健康体检者43例(对照组)。根据颈内动脉超声结果将As-ACI患者分为内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组。比较各组外周血CD4⁺CD25⁺Treg细胞水平、单个核细胞TLR4表达水平、hCMV-IgM抗体阳性率和内膜中膜厚度(IMT)。分析As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素,分析CD4⁺CD25⁺Treg细胞、TLR4与IMT的相关性及其对颈动脉狭窄的预测价值。结果 脑梗死组CD4⁺CD25⁺Treg细胞、HDLC水平低于对照组,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、TC、TG、LDLC、hs-CRP水平、IMT高于对照组(P<0.05)。内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组CD4     

射频消融术对原发性肝癌患者甲胎蛋白和外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响

目的: 观察原发性肝癌患者经射频消融治疗后外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞以及甲胎蛋白水平的变化,探讨CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞与肝癌预后的关系。方法：采用流式细胞仪检测58例经过多电极射频消融仪治疗的原发性肝癌患者术前术后外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞及CD4⁺／CD8⁺比值,采用化学发光方法检测甲胎蛋白值,并进行统计学分析。结果：原发性肝癌患者术前CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞与甲胎蛋白水平存在相关性,而术后甲胎蛋白恢复正常的患者同时出现CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞的显著下降。结论：CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞水平在原发性肝癌射频消融治疗过程中与甲胎蛋白的变化存在显著相关性,可能成为肝癌预后的重要预测指标。     

TLR7对日本血吸虫感染诱导的脾脏ICOS+CD4+ T细胞的影响

目的 研究日本血吸虫感染小鼠脾脏中Toll样受体7(TLR7)对可表达诱导共刺激分子(ICOS)的CD4⁺ T细胞的含量、表型和功能的影响。方法 使用日本血吸虫分别感染C57BL小鼠和TLR7基因敲除(TLR7 KO)小鼠,并分别设未感染对照组。分离脾脏,制备单细胞悬液,使用流式细胞计数分别检测ICOS⁺CD4⁺ T细胞的含量、ICOS⁺CD4⁺ T细胞活化和功能相关分子的表达情况。结果 与未感染对照组相比,C57BL/6组小鼠脾脏ICOS⁺细胞的比例由(13.7±3.1)%升高至(24.6±4.3)%,差异有统计学意义(P<0.05);感染C57BL/6组小鼠ICOS⁺CD4⁺ T细胞中表达CD69、CD40L和CXCR5分子细胞的比例明显升高,分别达到(32.2±7.1)%、(4.0±1.4)%、(6.1±1.1)%(P<0.05),CD62L⁺细胞的比例明显下降至(20.1...     

CD4+CD25+调节性T淋巴细胞在儿童传染性单核细胞增多症的变化及作用

目的观察儿童传染性单核细胞增多症(IM)治疗前后外周血T淋巴细胞亚群和CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)比例变化,分析Treg对IM的影响。方法选取2017年1月至2018年5月安徽医科大学第二附属医院儿科收治的IM患儿60例作为观察组,以同期于本院儿童保健门诊行体检的40例健康儿童作为对照组,采用流式细胞术检测观察组治疗前、后及对照组的外周血T细胞亚群(CD3+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞比例,CD4/CD8比值)、CD4~+CD25+调节性T淋巴细胞比例,对比分析两组患者机体细胞免疫功能的变化。结果观察组治疗前CD3+T细胞比例、CD3~+CD8~+T细胞比例显著高于对照组; CD3~+CD4~+T细胞比例、CD4/CD8比值低于对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。观察组治疗后CD3~+T细胞比例、CD3~+CD8~+T细胞比例均低于观察组治疗前; CD3~+CD4~+T细胞比例、CD4/CD8比值高于治疗前,差异均有统计学意义(P <0. 05)。观察组治疗前外周血Treg细胞比例低于正常对照组,差异有统计学意义(P <0. 05);而观察组治疗后外周血Treg细胞比例高于治疗前,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 IM患儿存在T细胞亚群比例的变化,Treg细胞水平的降低,可能参与IM患儿疾病的发生发展过程。     

低剂量环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞功能的影响

目的：研究低剂量环磷酰胺（CTX）单次注射对Lewis肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞功能的影响,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型,随机分成3组：CTX组、肿瘤组、单纯对照组。采用CTX单次注射,观测各组肿瘤体积动态变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测各组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平;采用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用LDH释放法检测脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)细胞的杀伤活性。结果：与未治疗肿瘤组相比,CTX治疗可延缓荷19 d Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长;CTX组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞功能明显高于肿瘤组（P<0. 05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞杀伤活性比肿瘤组略高,但变化不显著（P>0.05）。结论：CTX单次注射可降低Lewis肺癌小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞的数量及Foxp3 mRNA表达,使T淋巴细胞增殖功能及脾细胞中CTLs杀伤功能增强。     

大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的分选和提取

目的 分选提取大鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+调节性T细胞并进行纯度和活性检测.方法 用免疫磁珠两步法既阴性选择和阳性选择分选提取大鼠CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪检测细胞纯度,台盼蓝染色计算细胞存活率.结果 免疫磁珠分选提取的CD4+CD25+调节性T细胞纯度在86% 以上,并且活性良好,活细胞百分率大于97%.结论 通过免疫磁珠分选能够提取高纯度高活性的CD4+CD25+调节性T细胞.     

FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞细胞增殖及功能的影响

目的探讨FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)比例及功能的影响。方法选择43例胃癌术后化疗患者,于化疗前1天、化疗结束后第5天采集外周血。采用流式细胞法检测外周血Treg细胞的比例;RT-PCR法检测外周血Treg细胞FoxP-3 mRNA表达水平;将分选的Treg细胞和CD4+CD25-T细胞按单纯Treg细胞组、1∶1混合细胞组,单纯CD4+CD25-T细胞组培养,3H-TdR掺入法检测Treg细胞体外抑制CD4+CD25-T细胞增殖的能力。结果 43例胃癌患者化疗前1天外周血Treg细胞占CD4+T细胞的比例为17.63%±6.31%,化疗后降至13.79%±4.82%(P<0.01);化疗后FoxP-3表达水平较化疗前显著下降(P<0.01);化疗后Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的增殖抑制率由化疗前的54.64%±5.15%下降至24.63%±2.34%(P<0.01)。结论 FOLFOX化疗方案可减少胃癌患者外周血Treg细胞数量,下调其表面标志物FoxP3基因的表达水平,减弱Treg细胞的免疫抑制功能,有利于诱生抗肿瘤免疫效应。     

磁激活分选法双重分离大鼠外周血单个核细胞CD4~+CD25~+调节性T细胞

目的:应用磁激活细胞分选(MASC)技术从卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出大量高纯度CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg),以研究其在支气管哮喘中的作用。方法:从OVA免疫耐受大鼠外周血中分离出PBMCs,应用MASC技术阴性分选CD4+T细胞,再阳性分选出CD4+CD25+Treg;流式细胞仪检测。结果:分选前的CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的11.07%,CD4+T细胞占总数的21.88%;CD4阴性分选后,CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的10.95%,CD4+T细胞占总数的89.28%;CD25阳性分选后,CD4+T细胞超过总数的95%,而CD4+CD25+Treg细胞占总数的90.92%,CD4+CD25+Treg细胞纯度大于90%。结论:应用MASC技术成功从OVA免疫耐受大鼠的PBMCs中分选出了高纯度的CD4+CD25+Treg细胞。     

CD4~+ D25~+调节性T细胞在晚期食管癌中的表达及临床意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)在食管癌中的表达及其临床意义。方法:应用流式细胞术分析60例食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平,与20例健康对照组比较。结果:食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数量增加(15.9±4.1)%,表达高于正常人(5.91±3.7)%(P<0.001)。食管癌患者外周血中Treg细胞数量与患者的病理类型无关(P>0.05),但与淋巴结转移和组织学分化程度有关(P<0.01)。结论:Treg细胞在食管癌患者中比率明显升高,是患者免疫功能紊乱的一个证据。     

脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能特征的比较

目的分离成人外周血、脐血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞,并检测其功能,以了解脐血CD4^＋CD25^＋T细胞的特性。方法应用免疫磁珠分选法从健康成人外周血、脐血淋巴细胞中分离纯化CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞。应用流式细胞术检测分离纯度,胎盘蓝染色检测细胞存活率;RT-PCR技术检测CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞中Foxp3的mRNA的表达;体外增殖实验检测其对CD4＋CD25-T细胞的免疫抑制作用。结果 MACS分离的CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4＋CD25-T细胞纯度达（92.7±1.6）%、（90.3±1.2）%,细胞存活率达（95.3±2.1）%;体外经抗CD3、CD28单克隆抗体刺激培养的脐血及成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞同时得到扩增,而且高表达Foxp3;CD4^＋CD25^＋T细胞能有效的抑制效应T细胞的增殖,当效靶比为1︰1时,其抑制效应T细胞的作用最强,成人外周血抑制率为（81.36±1.61）%、脐血抑制率为（90.74±2.43）%。结论脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞,与成人外周血相比,培养后的脐血CD4^＋CD25^＋T细胞比成人外周血有更强的免疫抑制功能。     

人CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞蛋白质组的双向电泳分析

目的 用双向电泳技术分析人CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达的蛋白质组，建立二者之间的差异表达谱。方法 从人脾脏分选CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞，用双向电泳技术分析两种细胞蛋白质组的表达差异。结果 分选细胞纯度分别为CD4^ CD25^ T细胞82.3%,CD4^ CD25^-T细胞96.5%，双向电泳分析发现有4个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^ T细胞检测到表达，有9个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^-T细胞检测到表达。结论 CD4^ CD25^-T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达蛋白质组有明显差异。     

IVF-ET超促排卵及妊娠状态CD4^＋CD25^＋Treg、CD152的表达

目的研究超排及妊娠对CD4^＋CD25^＋Treg、CTLA-4（CD152）的影响,并比较妊娠结局CD4^＋CD25^＋Treg细胞及CTLA-4（CD152）水平。方法采用流式细胞仪检测对照组卵泡期、黄体期及研究组卵泡期、黄体期、HCG日CD4^＋CD25^＋Treg／CD4^＋．CTLA-4（CD152）,CD4^＋百分数,并检测研究组不同妊娠结局CD4^＋CD25^＋reg／CD4^＋百分数。结果对照组与研究组的卵泡期CD4^＋CD25/CD4^＋百分数比较,其差异无统计学意义。对照组与研究组黄卵泡期CD4^＋CD25^＋CD152^＋／CD4^＋CD25^＋百分数之间相比较,二者差异无统计学意义（P〉0．05）,研究组卵泡期与HCGCD4^＋CD25＋CD152^＋／CD4^＋CD25^＋百分数之间比较,二者差异无统计学意义（P＞0．05）,三者相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。未妊娠组与生化妊娠组相比差异无统计学意义（p〉0.05）。临床妊娠组卵泡期、黄体期的百分数明显升高。E2与CD4^＋CD25^＋／CD4^＋之间并无相关关系。生化妊娠与临床妊娠的CD4^＋CD25^＋／CD4^＋作回归关系分析二者之间存在相关关系。结论①超排中多个卵泡同步发育所致的高雌孕激素水在无外来抗原植入的情况下不能刺激CD4^＋CD25^＋Treg的增殖及CTLA-4（CD152）表达增高。②妊娠外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞数量上的高低与妊娠结局有相关关系,CD4^＋CD25^＋Treg细胞在妊娠免役耐受中有重要作用。     

脓毒症患者CD4~+CD25~+调节性T细胞检测的临床意义

目的探讨脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平与机体细胞免疫状态的关系及其检测的临床意义。方法将脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为3组:脓毒症组14例,严重脓毒症组15例,脓毒症休克组11例。所有入选的40例脓毒症患者在入选当天行流式细胞术检测血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平。比较脓毒症组、严重脓毒症组和脓毒症休克组血中CD4+CD25+调节性T细胞比例变化和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平变化。同时选取20例健康人为对照组。结果健康对照组CD4+CD25+调节性T细胞表达率脓毒症休克组最高,严重脓毒症组次之,脓毒症组最低,三组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+较正常对照组明显升高(P<0.05),CD8+较正常对照组差异不明显(P>0.05)。严重脓毒症组和脓毒症休克患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较正常对照组明显降低(P<0.05),CD8+较正常对照组改变不明显(P>0.05)。结论脓毒症患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达增加,可能导致CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低,免疫抑制加强。提示CD4+CD25+调节性T细胞在脓毒症的免疫发病机制中可能起着重要作用,对评估患者预后有临床价值。     

人 CD4+T细胞在肠道细菌抗原刺激前后CD25与FOXP3的表达

目的：探讨新鲜分离及自身肠道菌群抗原刺激后的人外周血CD4^＋T细胞CD25和FOXP3表达的相关性及变化规律．方法：分离人的外周血单核细胞和淋巴细胞，单核细胞经自身肠道菌群抗原刺激后与淋巴细胞混合培养，新鲜分离及混合培养14d的淋巴细胞用三色流式细胞术在单细胞水平同时检测CD4，CD25和FOXP3的表达．结果：新鲜分离的淋巴细胞约43．4％表达CD4，在CD4^＋T细胞中，约5．8％表达CD25，而高表达的只有1．9％，约5．2％表达FOXP3，CD25和FOXP3均表达的占3．3％，CD25^hi FOXP3^＋细胞占1．6％，CD4^-细胞几乎不表达FOXP3．经抗原刺激后，淋巴细胞总数均轻度增加（与未刺激组比较，平均增加21．0％，P〈0．001）．CD4^＋细胞的比例均明显上升（67．1％vs43．4％，P〈0．001），CD25^＋，FOXP3^＋及CD25^＋FOXP3^＋细胞的比例变化不大．CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞占CD4^＋CD25^＋T细胞的比例及CD4^＋CD25^hi FOXP3^＋T细胞占CD4^＋CD25^hiT细胞的比例在所有研究对象中均呈下降趋势（前者从59．8％降到52．0％，后者从86．3％降到77．9％，均P〈0．05）．结论：CD25和FOXP3的表达具有一定的相关性，但CD25及CD25^hi均不能很可靠地标记人类的调节性T细胞，尤其是在淋巴细胞受到抗原刺激以后．肠道菌群抗原作为外来抗原刺激自身的淋巴细胞后，活化增殖的细胞中主要是CD4^＋CD25^＋FOXP3^-反应性T细胞，而不是CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞．