脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

目的 为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。 方法 我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的DNA混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，48 h后收集II细胞期胚胎细胞。结果 (1) 精子可转染上外源DNA，转染率达53%；(2) 转染有外源DNA的精子可使II细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为11.5%。结论 小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源DNA转染并可作为载体将此外源DNA带入早期胚胎。     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。方法我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的ＤＮＡ混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，４８ｈ后收集Ⅱ细胞胚胎细胞。结果（１）精子可转染上外源ＤＮＡ，转染率达５３％；（２）转染有外源ＤＮＡ的精子可使Ⅱ细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为１１．５％。结论小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源ＤＮＡ转染并可作为载体     

低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。     

精原干细胞体内转染途径建立rsP3111转基因小鼠的可行性研究

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。     

猪精子细胞电穿孔及DNA转染的新途径

用动物精子作为外源DNA载体已成为转基因的主要方法之一,外源DNA通过精子导入后代,有可能简化转基因动物的生产。目前转基因最普遍采用的是微注射法,但其技术要求高、实验设备昂贵、效率低,导致生产成本高。因而寻找一种简单、高效的转基因方法具有重要的意义。而电穿孔法是促进DNA与动物精子结合的一种重要方法。电穿孔法利用高压电场使精子质膜产生暂时性孔洞,从而使外源DNA比较容易地进入细     

精子细胞输精管及附睾管内转染法建立转基因小鼠

目前，生产转基因动物主要的方法仍是受精卵显微注射法，所需设备复杂，技术难度大，成功率低。为此，人们都在寻找一种新的方法。利用精子携带外源DNA进入卵母细胞的精子载体法是设想之一。九十年代初，Mare和Rottmann等分别报导了电击法和脂质体转染法让精子在体外携带上外源DNA，再行体外受精的方法，引起了学者们的广泛关注，但其结果不稳定，阳性率极低。我们采用脂质体包裹外源DNA，直接注入输精管内，数天后与雌鼠交配的方法，得到了较为满意的结果，现简报如下。1材料和方法将构建好的WAP－t－PA质粒与脂质体混合制备成转染…     

转基因动物技术与转基因动物制药

转基因动物技术始于上个世纪 80年代 ,2 0多年来 ,转基因动物在制作方法上由最初的显微注射法、逆转录病毒法和胚胎干细胞法 ,发展到体细胞核移植技术、腺病毒载体法、精子头与转移基因共注射法等。随着转基因技术的不断发展 ,利用转基因动物生产药用蛋白质即转基因动物制药的研究也取得了突破性进展 ,目前 ,转基因动物制药正走向产业化的道路 ,具有十分广阔的前景     

转基因动物技术与转基因约

转基因动物技术始于上个世纪80代，20多年来，转基因动物在制作方法上由最初的显同注射法，逆转录病毒法和胚胎干细胞法，发展到体细胞核移植技术，腺病毒载体法，精子头与转移基因共注射法等。随着转基因技术的不断发展，利用转基因动物生产药用蛋白质即转基因动物制药的研究也取得了突破性进展，目前，转基因动物制药正走向产业化的道路，具有十分广阔的前景。     

克隆化基因的真核细胞转染

真核转染技术是将克隆化的外源基因通过某种特定的手段导入真核细胞的一种方法。可以用来导入高效表达的蛋白 ,研究其结构或生化特性 ,也可以用于研究基因表达调控的机制等。目前真核转染技术已经用于基因的结构与功能分析、基因表达与调控、基因治疗与转基因动物等方面的研究。根据研究目的不同 ,基因转染有瞬时转染和稳定转染两种。瞬时转染是在转染后不对转移进去的目的基因进行筛选 ,被转染的群体细胞瞬时表达效率取决于细胞摄入转染DNA的数量、基因的拷贝数和每一基因的表达水平。稳定转染是在转染后进行选择 ,分离出外源基因稳定整…     

卵胞质内单精子注射与转座子介导的转基因技术

通过卵胞质内单精子注射(ICSI)已经成为治疗人类不育症和小鼠生殖生物学研究的一种有效手段.而且ICSI介导的转基因作为一种动物转基因技术,仍然不够完善.但是相比传统的原核注射技术,该技术最大的优势是可以导入较大片段的外源基因(比如人工酵母染色体YAC).最近研究者们又发展了一种ICSI与转座子结合的转基因技术,能够高效地生产转基因后代,其效率几乎可以与慢病毒载体法相媲美,值得在转基因动物研究中加以推广和应用.     

GDNF表达载体的构建及其转染STO细胞的研究

目的：制备过表达GDNF的转基因 STO 细胞,用于富集精原干细胞。方法：构建 GDNF、EGFP 双顺反子表达载体,采用XhoⅠ、SspⅠ酶切法鉴定重组质粒,用脂质体介导法将质粒转入STO细胞,经G418抗性筛选后,分离扩增培养表达绿色荧光蛋白的抗性细胞,采用PCR法鉴定转基因细胞。结果：成功构建重组GDNF表达载体,将其转染STO细胞后,能够稳定整合到细胞染色体中,获得了表达绿色荧光蛋白的转GDNF基因STO细胞。结论：通过构建表达载体,制备GDNF转基因STO细胞,为富集精原干细胞的研究奠定了基础。     

基因打靶技术在转基因动物中的进展

80年代初发展起来的基因定位整合技术(gene targeting)以及同期建立的小鼠胚胎多潜能千细胞系(Es，emgbryonic stem cell)的体外培养方法，使转基因技术更加前进了一步，为人们在动物体内分析某一特定基因提供了有力的手段。转基因技术是将外源基因导入动物生殖细胞或ES细胞，也就是将动物原来没有的基因或不占主导地位的基因导入该动物的基因组中并使之表达，观察其表达后对动物产生的影响。而基因打靶技术则是应用外源DNA与染色体上一段与其具有高度同源性序列进行同源重组(homologous recombination)的原理使动物体内某种正常基因失活，     

转基因小鼠及其在免疫学研究中的应用

转基因小鼠(transgenic mice)是用注射等人工方法,将外源基因导入小鼠的受精卵中,再将它移植于假孕小鼠的输卵管内,使其历经正常的胚胎发育过程而培育成的携带外源基因的小鼠。这类小鼠不仅能表达外源基因,且可将其传给后代。1980年Gordon首次报道转基因小鼠后,迄今已有多种转基因小鼠问世,如:表达β-珠蛋白、人胰岛素、免疫球蛋白、细胞因子及其受体、乙型肝炎病毒以及小鼠和人类MHC抗原等基因的转基因小鼠。1989年10月在法国曾召开转基因小鼠在免疫学中应用的会议,讨论了许多关键问题,引起众多学者重视。目前,该类小鼠已成为现代免疫学研究中一类新型的实验动物。本文简述转基因小鼠的研究现状及其在免疫学研究中的应用。     

转基因小鼠——一种新型实验动物

转基因小鼠是通过人工的方法把外源基因整合到小鼠生殖细胞培育而成的携带外源基因的小,鼠它能把该基因传递给后代。 Gordon等首次将克隆化基因注入小鼠受精卵,再移植于假孕雌鼠输卵管中,育成了转基因小鼠[‘’。尔后,国内外许多学者纷纷从事这方面的研究,并成功地将10多种基因导入小鼠体内,得到各型转基因小鼠。本文简要介绍特基因小鼠培育的方法和意义。     

转基因动物研究进展

转基因动物就是指通过人工的方法将外源基因导入动物染色体基因组,使之稳定表达并能遗传给后代的一类动物。目前制备转基因动物的方法主要有显微注射法,反转录病毒感染法,胚胎干细胞法等。转基因动物技术已广泛渗透于分子生物学、免疫学、生物制药、畜牧育种以及器官移植等研究领域中。本文通过对当前转基因动物的研究进展做出分析,以探讨当前转基因动物的发展方向和展望未来转基因动物的前景。     

生物技术在肿瘤发生、癌早期检测、基因工程和基因治疗中的作用和展望(续完)

２．３．２转基因技术及其实验动物是将体外克隆的基因，通过基因携带体，植入靶动物体内并释放功能蛋白，此种转基因只能维持一定时期的功能，如果使基因携带体稳定的结合到动、植物细胞的基因库内，并能复制给后代，此种动物或植物称为永久性转基因动物或转基因植物。此...     

PAMAM-D对异种移植用外源基因转染猪精子细胞的安全性研究

目的 研究应用PAMAM-D对异种移植用外源基因hDAF转染猪精子细胞的安全性.方法 制备PAMAM-D/hDAFcDNA复合物,将PAMAM-D及复合物与处理后猪精子细胞共孵育,经精子质量检测工作站检测孵育后的精子活力和精子畸形率.结果 经精子质量检测工作站检测,PAMAM-D和PAMAM-D/DNA复合物对猪精子细胞活力和精子细胞畸形率没有明显影响.结论 PAMAM-D及其复合物对猪精子细胞没有明显毒性,应用PAMAM-D制备异种移植用转基因动物是一种安全的方法.     

转基因动物与遗传病模型

转基因动物(transgenic animals)是指通过基因转移技术，将外源基因导入受精卵或早期胚胎，使之在动物体内得以表达并能稳定遗传的一类动物。自从1979年Mintz等将SV40病毒DNA导入小鼠胚胎细胞，获得第一个带有人工导入的外源基因的嵌合体小鼠以来，转基因动物技术已渗透到各个研究领域，在人为改造物种或生物性状方面显示了广阔的应用前景，为许多基础理论的研究提供了大量的宝贵资料。     

精子介导基因转移建立转基因动物的研究进展及展望

精子介导基因转移技术制备转基因动物是在传统的转基因技术的基础上建立起来的一种新技术。由于该技术具有技术路线简单、操作方法简便、所需仪器设备少等优点,因而具有广泛的应用前景。本文主要介绍了精子介导基因转移制备转基因动物的基本原理、最新研究进展、目前存在的问题以及该技术的应用前景。     

转基因小鼠技术在肿瘤研究中的应用与进展

转基因动物 (transgenicanimals)是指用实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定地整合并可以表达和传与后代的一类动物。自 1980年Gordon等[1 ] 将猿猴病毒 (SV4 0 )和人单纯疱疹病毒 (HSV)的tk基因 (thymidinekinase) ,即胸腺嘧啶核苷激酶基因 ,整合后的质粒直接注入到小鼠受精卵原核中 ,首次成功的培养出转基因小鼠 (transgenicmice ,TGM)后 ,先后出现转基因大鼠、兔、鱼、鸡、羊、猪、牛等。1　转基因小鼠技术自转基因小鼠技术创立以来 ,该项技术和方法经过不断改进和发展 ,并被迅速应用于肿瘤研究。具体方法是将某种与肿瘤相…