rhIL—1β及TGF—β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的：探讨rhIL-1β及TGF－β对髁状突软骨细胞增殖的影响。方法：以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL-1β及TGF－β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果：MTT检测，rhIL-1β（10，20ng/ml）处理软骨细胞48h后，可明显抑制软骨细胞增殖，经统计学检验，处理3－6d有显著性差异（P＜0．01,t检验）；加入TGF－β（10，20ng/ml)可明显拮抗rhIL-1β对软骨细胞增殖的抑制作用，并且浓度愈高对rhIL-1β的抑制作用愈强。PCNA检测，rhIL-1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低，随rhIL-1β的刺激浓度增加，阳性率明显降低；加入外源性TGF－β可以使PCNA的阳性率提高。结论：rhIL-1β对髁状突软骨细胞增殖具有报制作用，外源性TGF－β对该作用具有明显的拮抗效应。     

静张应力与TGF-β_1对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节初步研究

目的：探讨转化生长因子-β(TGF-β1)在静张应力环境下对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法：（1）将传代培养至第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在12孔培养板上培养，采用流式细胞仪测定加入不同浓度TGF-β1（0.1、1、10ng/ml）0.6、12、18、24h后，对髁突软骨细胞增殖活性（PI值）的影响。（2）将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性（PI值）的影响。结果：不同浓度TGF-β1（0.1、1、10ng/ml）在模拟生理环境下以剂量依赖型的方式整体促进了髁突软骨细胞增殖效应，对髁突软骨细胞的增殖活性调节作用主要在12、18h段，增殖峰值在18h左右；在5kPa静张应力联合TGF-β1刺激下培养较TGF-β1的单独效应具有更强的促髁突软骨细胞增殖作用。结论：静张应力联合TGF-β1可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

TGF-β_1在不同发育阶段胎儿髁突软骨中的表达

目的 :研究β转化生长因子 - 1(TGF - β1)在胎儿髁突软骨中表达 ,探讨该因子在软骨发育中的作用。方法 :30例 13～ 33周胎儿分为A、B、C和D四组 ,应用HE染色和免疫组化S -P法观察髁突软骨TGF - β1的表达。结果 :TGF - β1在所观察各组髁突软骨各层中均有表达 ,成软骨细胞层表达最强 ,主要在胞浆。TGF - β1积分光密度在上、中、下三层之间存在差异 (P <0 .0 5 )。平均灰度和平均光密度在不同胎龄组间存在差异 (P <0 .0 5 )。A组与B组、A组与C组、B组与D组、C组与D组之间有显著性差异。结论 :在髁突软骨不同发育时间、不同分化阶段TGF - β1的表达水平不同。     

体外rhIL—1β诱导髁状突软骨细胞HSP70的表达及其意义

目的 明确热休克蛋白70（HSP70）在人重组白细胞介素－1（rhIL-1β）刺激下对下颌骨髁状突软骨细胞的保护作用。方法 通过原代细胞培养获得兔髁状突软骨细胞,在生长良好的第三代软骨细胞中分别加入不同浓度的rhIL-1β,并利用原位杂交及免疫组织化学技术检测rhIL-1β处理软骨细胞后HSP70的表达变化。结果 正常髁状突软骨细胞胞浆内有HSP70蛋白弱表达,rhIL-1β（10ng/ml）作用12h后HSP70出现表达升高,部分细胞核内也可见表达,48h后信号开始减弱。HSP70mRNA的表达与蛋白表达基本一致。结论 一定浓度的rhIL-1β刺激髁状突软骨细胞可诱导HSP70的转录及蛋白合成,提示HSP70可能在骨关节炎症损伤中对软骨细胞起到保护作用。     

静张应力与TGF-β_1对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节初步研究

目的　探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在静张应力环境下对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法　(1) 将传代培养至第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在12孔培养板上培养,采用流式细胞仪测定加入不同浓度TGF-β1(0·1、1 、10 ng/ml) 0、6、12、18、24 h后,对髁突软骨细胞增殖活性(PI值)的影响。(2)将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在细胞膜式张应力施加装置上培养,检测不同浓度TGF-β1及5 kPa静张应力联合应用0、6、12 h后,对髁突软骨细胞增殖活性 (PI值)的影响。结果　不同浓度TGF-β1(0·1、1、10 ng/ml)在模拟生理环境下以剂量依赖型的方式整体促进了髁突软骨细胞增殖效应,对髁突软骨细胞的增殖活性调节作用主要在12~18 h段,增殖峰值在18 h左右;在5 kPa静张应力联合TGF-β1刺激下培养较TGF-β1的单独效应具有更强的促髁突软骨细胞增殖作用。结论　静张应力联合TGF-β1可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

TGF-β及HSP70在rhIL-1β介导的TMJ髁状突软骨炎症损伤中的作用

目的 探讨TGF－β及HSP70在人重组白细胞介素－1（rhIL-1β）介导颞颌关节炎症损伤中的作用。方法 SD大鼠颞下颌关节腔内反复多次注射rhIL-1β，建立颞凳关节炎症损伤模型，利用免疫组织化学检测髁状突软骨炎症损伤过程中TGF－β及HSP70的表达变化。结果 注射后1－3d，实验侧髁状突软骨全层均可见TGF－β阳性软骨细胞，以增殖层阳性表达最明显，7d除髁状突软骨增殖层表达仍较强，前肥厚层TGF－β表达开始减弱，30d髁状突软骨全层TGF－β表达与对照侧相近。HSP70的表达与TGF－β具有相似的特点，注射后1－3d，实验侧髁状突软骨浅层HSP70的表达明显增强，7d后表达逐渐减弱，15d后HSP70表达与对照侧相近。结论 在rhIL-1β介导的髁状突软骨关节炎症损伤中，早期TGF－β与HSP70的表达增强，提示TGF－β及HSP70可能参与了软骨炎症损伤的修复过程。     

TGF-β1影响钛表面成骨细胞增殖分化的体外研究

目的动态观测TGF—β1和钛片表面微形态对胎鼠成骨细胞增殖分化的影响以及两者之间的相关关系。方法将传代后的成骨细胞接种于不同处理（机械打磨、喷砂处理TPS）钛片表面，加入外源性TGF-β1（浓度为10ng／ml）后MTT法检测细胞增殖，并检测细胞内ALP和细胞外OC的合成分泌状况；设置玻片对照组。结果外源性TGF—β1后对各组钛片表面的成骨细胞增殖均有不同程度的抑制作用，细胞接种后期抑制作用更明显。细胞接种早期，ALP活性和OC分泌量各实验组和对照组与未加因子相比有明显增加（P〈0．05）。细胞接种后期，成骨细胞ALP合成在机械组与未加因子相比明显减少（P〈0.05），喷砂组和TPS组则仍然增加；OC分泌量在机械组和对照组变化不明显，而喷砂组和TPS组OC分泌与未加因子相比明显增加（P〈0．05）。结论浓度为10ng／ml的外源性TGF—β1对不同钛片表面成骨细胞增殖有一定抑制作用。外源性TGF-β1和粗糙钛片表面对成骨细胞分化有一定协同促进作用。     

转化生长因子β1对A系小鼠胚腭突细胞增殖代谢的影响

目的 研究不同剂量转化生长因子β1(TGFβ1)对A系小鼠胚腭突细胞增殖和DNA、蛋白质及PGE2合成的影响。方法 实验分为9组，每组设平行4孔(瓶)，每组分别加入TGFβ1使其终浓度为0．005ng／ml，0．01ng／ml，0．05ng／ml，0．1ng／ml，0.5ng／ml，1ng／ml，5ng／ml，10ng／ml，50ng／ml，每组均设空白对照，在实验后第1、3、5天分别检测细胞的OD值、DNA、蛋白质和PGE2的含量。结果 在高浓度血清条件下，TGFβ1可显著刺激腭突细胞的增殖，但在低浓度血清条件下，TGFβ1对A系小鼠胚腭突细胞具有双重效应，即在其0．005～0．01ng／ml时促进腭突细胞增殖，而随着TGFβ1浓度的增大，逐渐抑制腭突细胞的增殖。TGFβ1使腭突细胞PGE2及蛋白质合成增加。结论 TGFβ1对A系小鼠胚腭突细胞的增殖具有双重作用，可能是腭突正常发育的重要调节因子。     

紊乱对猴髁突软骨中TGF-β1分布的影响

目的 :探讨渐进性咬合紊乱所致猴颞下颌关节退形性变中 ,髁突软骨TGF β1的分布变化特点及其意义。方法 :2只青年恒河猴分成实验组和对照组。采用拔牙和固定矫治技术造成实验组后牙渐进性咬合紊乱。 8月后 ,对髁突进行HE染色和TGF β1免疫组化定量分析。 结果 :①实验组髁突前内侧出现明显的退性形变 ,与对照猴相比 ,其髁突各部位软骨厚度均变薄 (P <0 .0 1) ,其中变化程度最大者为前部内份 ,其次是髁突前部中份和中部内份。②与对照猴相比 ,实验组髁突软骨各部位TGF β1表达均升高 (P <0 .0 1)。结论 :渐进性咬合紊乱可导致髁突退性形变 ,髁突软骨中TGF β1表达明显增强 ,TGF β1可能参与了关节软骨的修复活动。     

生长激素、张应力对兔下颌髁突软骨细胞增殖活性及功能的影响

下颌髁突软骨在颅面的生长发育中起着重要作用。功能矫形治疗中 ,下颌髁突软骨的生长改建一直是国内外学者关注的焦点。大量体内实验证明 ,功能矫形前伸下颌后 ,颞下颌关节及下颌髁突周围组织结构的生物力学环境发生改变 ,生长期动物下颌髁突软骨内的激素和生长因子 (如雌激素、胰岛素、睾酮、甲状腺素、甲状旁腺素、IGF 1、TGF β,PGE2等 )的含量和分布发生改变 ,髁突软骨细胞增生 ,下颌骨生长 ,达到功能矫形治疗错畸形的目的。大鼠下颌髁突软骨细胞体外培养研究发现 ,静张应力、压应力、bFGF、IGF l、TGF β以及静张应力与TGF β联合作用 ,在一定的力值范围、一定的时间内可以促进髁突软骨的增殖活性 ,且静张应力联合TGF β共同作用时的促增殖效应比单独使用TGF β更强 ,但随作用时间延长 ,逐渐表现出抑制作用。而外源性生长激素 (GH)及张应力能否促进体外培养兔下颌髁突软骨细胞的增殖活性及分泌功能 ,生长激素与张应力联合应用是否具有协同促进作用 ,目前尚未见报道。本研究通过兔下颌髁突软骨细胞体外培养 ,采用四点弯曲细胞力学加载仪 ,对细胞施加不同浓度的外源性生长激素和张应力 ,使用流式细胞仪和免疫组织化学方法 ,探讨生长激素和张应力在不同时间段对下颌髁突软骨细胞增殖活性及分     

静压力对髁突软骨转化生长因子β1表达影响的体外研究

目的:观察静压力对体外培养髁突软骨细胞表达TGF-β1的影响。方法:解剖、培养SD大鼠髁突软骨,应用静压力加载装置对实验组软骨加载强度为10kPa的持续静压力1h。对照组除软骨不加力外,其它培养条件与实验组相同,加力完成后2组同时收集样本。用免疫组化技术检测2-实验组和对照组髁突软骨TGF-β1的含量和分布,用彩色病理图像分析仪检测髁突软骨各层TGF-β1表达的强度。结果:实验组的髁突软骨各层细胞TGF-β1表达均增强,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。其中成软骨细胞层改变最明显(P<0.01)。结论:静压力促进髁突软骨各层细胞TGF-β1表达增强,其中成软骨细胞层表达增强最为明显。     

透明质酸、TGF-β1对下颌骨髁突软骨增殖分化的影响

目的:研究透明质酸(HA)、TGF-β1因子对下颌骨髁突软骨增殖分化的影响.方法:取新生小鼠的下颌骨髁突软骨体外进行组织培养,按培养液内添加因子不同分为对照组、HA(0.5 mg/ml)、TGF-31(5 ng/ml)组,于培养1、2、4、6、8周后进行形态学观察、软骨面积测量、茜素红染色以及碱性磷酸酶染色研究.结果:对照组中髁突软骨在培养4周后软骨内开始出现高密度光阻射区,茜素红染色、碱性磷酸酶染色提示软骨基质出现了钙化、软骨内成骨的过程;HA组中髁突软骨内未出现高密度光阻射区,而髁突软骨面积却显著增大(P ＜0.05);TGF-β1组中髁突软骨在培养2周后提前出现了高密度光阻射区,然软骨面积无显著改变(P＞0.05).结论:在体外培养下,HA可以促进髁突软骨的增殖,对软骨细胞的肥大分化有一定的抑制作用,TGF-31在早期可显著促进髁突软骨细胞的肥大分化.     

生长因子对人髁突软骨细胞DNA及胶原合成的影响

目的:研究胰岛素样生长因子(IGF-)、碱性成纤维样生长因子(bFGF)及转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髁突软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法:采用体外细胞培养技术及同位素掺入法。结果:在0.4%新生小牛血清(NCS)条件下,bFGF对人髁突软骨细胞DNA合成有显著的促进作用,浓度在1ng/ml以上具显著性(P<0.05)。IGF-在10～100ng/ml呈剂量效应地促进3H-TdR的掺入,而TGF-β1无显著作用。bFGF在0.1～100ng/ml可显著促进人髁突软骨细胞3H-Proline掺入,最大效应剂量为10ng/ml(增加60%)。IGF-在10～100ng/ml能够明显促进细胞胶原合成,最大值在100ng/ml(增加98%)。TGF-β1在1～10ng/ml明显抑制3H-Proline掺入,最大抑制浓度为1ng/ml,抑制率约为24%。结论:生长因子可有效促进软骨细胞增殖及基质合成,为关节软骨损伤性疾患的治疗提供一种有效的途径     

功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨β转化生长因子-1(TGF-β_1)表达变化的研究

目的：检测快速生长期大鼠髁突软骨在功能矫形前伸下颌后β转化生长因子－１（ＴＧＦ－β１）分布的变化，探讨髁突软骨生长代谢的生长因子控制机理。方法：实验组戴模拟临床功能矫治器，引导大鼠下颌前伸，并在实验后不同时期处死大鼠，取下髁突，应用免疫组织化学方法探测ＴＧＦ－β１在髁突中的含量及分布。结果：髁突各层软骨细胞均有ＴＧＦ－β１的分布，以成熟层阳性强度最高；功能矫形前伸下颌后，髁突软骨细胞各层ＴＧＦ－β１的表达均增强。结论：ＴＧＦ－β１介导了功能矫形的机械刺激作用，使软骨细胞增生，分化功能增强，髁突软骨增生     

压力对髁突软骨细胞增殖及TGF-β_lmRNA表达影响的体外研究

目的 :观察体外单层培养的髁突软骨细胞加载机械压力后增殖活性和转化生长因子βlmRNA(TGF βlmRNA)表达在不同时点的变化 ;对压力刺激导致的TGF βlmRNA表达与软骨细胞增殖之间的关系进行初步探讨。材料和方法 :选用新生SD大鼠的髁突软骨作为原代培养的组织来源 ,建立髁突软骨细胞有限细胞系 ;应用自行设计的静压力加载装置对培养细胞加载强度为 12 0 g/cm2的持续压力 1h。分别于加力后 0、6、12、18、2 4h收集样本 ,用流式细胞仪分析各样本中细胞的DNA含量和细胞周期并计算增殖指数 ;用原位杂交技术检测压力作用后细胞TGF βlmRNA的表达 ,以彩色病理图象分析仪检测各样本表达的阳性率。对照组细胞除不加力外 ,其它培养条件和检测方法与实验组相同。结果 :加力后 0h体外培养的髁突软骨细胞增殖活性和S期细胞百分比在加力结束时都较对照组增大 (P <0 .0 5 ) ,但在加力后 12h恢复 ,12～ 2 4h内实验组细胞增殖指数和S期细胞比例与对照组保持相同的变化趋势和相似的水平 ;实验组TGF βlmRNA表达在停止加力后 0h也较对照组明显增强 (P <0 .0 5 ) ,但 6h左右即恢复到与对照组相似的水平 ,之后 6～ 2 4h内的变化与对照组比较无明显差别。结论 :(1)本研究所设计的压力加载装置以气体为介质对细胞施加稳定、     

IGF-1信号通路相关蛋白在大鼠髁突软骨细胞增殖分化中的表达

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号转导通路在大鼠髁突软骨细胞增殖分化调控过程中相关基因的表达。方法:体外单层培养并鉴定出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞。免疫组织化学方法检测细胞内IGF-1表达情况,Real-time PCR及Western印迹法检测细胞内IGF-1R、Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。饥饿培养24 h后,实验组加入质量浓度为100 ng/mL的重组大鼠IGF-1细胞因子(rrIGF-1)继续培养24、48 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Real-time PCR技术检测各组髁突软骨细胞内IGF-1R、IGF-2R、Raf1、GSK-3、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、Bax、integrin、TGF-βmRNA表达情况;对照组培养液不加rrIGF-1。结果:各鼠龄组SD大鼠髁突软骨细胞内IGF-1表达均阳性,IGF-1R mRNA及蛋白表达相对平稳,Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达逐渐增强,在出生14 d后表达下降(P<0.05)。加入100 ng/mL rrIGF-1后,髁突软骨细胞增殖速度显著增加,细胞凋亡减少,Real-time PCR结果显示实验组IGF-1R、GSK-3、Bax、integrin mRNA表达整体呈下降趋势;IGF-2R、Raf1、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、TGF-βmRNA表达水平总体呈上调趋势,差异有统计学意义。结论 :IGF-1介导的信号转导途径参与了髁突软骨细胞的增殖、分化以及软骨形成早期的调控,并可能与integrin、TGF-β等其他蛋白相互作用,共同参与髁突发育过程。     

TGF—β1在不同发育阶段胎儿髁突软骨中的表达

目的：研究β转化生长因子－1（TGF－β1）在胎儿髁突软骨中表达,探讨该因子在软骨发育中的作用。方法：30例13－33周胎儿分为A、B、C和D四组,应用HE染色和免疫组化S－P法观察髁突软骨TGF－β1的表达。结果：TGF－β1在所观察各组髁突软骨各层中均有表达,成软骨细胞 层表达最强,主要在胞浆。TGF－β1积分光密度在上、中、下三层之间 存在差异（P＜0．05）。平均灰度和平均光密度在不同胎龄组间存在差异（P＜0．05）。A组与B组、A组与C组、B组与D组、C组与D组之间有显著性差异。结论：在髁突软骨不同发育时间、不同分化阶段TGF－β1的表达水平不同。     

rhIL-1α/rhTGF-β1诱导下大鼠髁突软骨细胞PRG4的表达

目的:观察rhTGF-β1对rhIL-1α作用下大鼠髁突软骨细胞蛋白多糖4(PRG4)表达的影响.方法:酶消化法获取髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定.细胞上清液中加入10 ng/ml的rhIL-1α,48 h后加入10 ng/ml的rhTGF-β1.不同时间点应用RT-PCR检测PRG4 mRNA的表达情况,ELISA法检测PRG4蛋白的分泌变化.结果:加入rhIL-1α 24、48、72 h组的PRG4表达量与对照组均有统计学差异(P<0.05),且逐渐降低.48 h组再加入rh TGF-β1 24h后PRG4表达量与对照组无统计学差异(P>0.05),而48 h后与各组均有统计学差异(P<0.05),且最高.结论:rhTGF-β1可以上调髁突软骨细胞PRG4的表达,且可逆转IL-1α的下调作用.     

TGF-β_1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖和凋亡影响的研究

目的　研究TGF β1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖与凋亡的影响。方法　以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113诱导产生的耐药细胞系Tca8113/CDDP为研究对象。应用ELISA法检测转化生长因子TGF β1在Tca8113/CDDP细胞中的表达水平。另在体外用不同浓度的TGF β1对Tca8113/CDDP细胞进行作用 ,通过吉姆萨(Giemsa)染色、MTT比色法和DNA琼脂糖凝胶电泳 ,观察Tca8113/CDDP细胞的凋亡情况。结果　ELISA检测可知Tca8113/CDDP细胞内和无血清培养液中的TGF β1的表达水平均低于Tca8113(P <0 .0 1)。体外诱导凋亡实验 ,TGF β1的浓度高于 0 .1ng/ml时 ,Tca8113/CDDP即有显著的凋亡特征出现 ,细胞皱缩脱落。Geimsa染色可见凋亡小体形成 ;MTT法显示Tca8113/CDDP细胞的凋亡与TGF β1的浓度有一定的相关性 ;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯状条带。结论　Tca8113/CDDP自身的TGF β1的表达水平与其增殖状态有关 ;外源TGF β1(0 .1ng/ml)可以显著的诱导Tca8113/CDDP凋亡。     

雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖与碱性磷酸酶活性联合效应的研究

目的:探讨雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的联合刺激效应.方法:体外培养髁突软骨细胞分为对照、90kPa/1 h刺激、高、中、低浓度雌激素刺激及压力与各实验浓度雌激素联合刺激组,采用MTT法检测细胞增殖、酶动力学方法检测细胞ALP活性.结果:压力与雌激素都可促进MCCs的增殖与ALP活性,压力的存在并不影响外源性雌激素的促细胞增殖作用,但外源性雌激素可对压力的促增殖作用产生明显的抑制效应,双因素联合作用对ALP活性的促进作用最强.结论:雌激素与压力联合作用对髁突软骨细胞的增殖并不产生叠加效应,但对ALP活性显示出明显的叠加刺激效应.