肾组织免疫电镜胶体金技术的应用

肾组织免疫电镜胶体金技术的应用梁国堂，白晓洋应用免疫电镜技术研究免疫介导的肾脏疾患，能够明确免疫损伤发生的准确位点，鉴定、识别抗原物质的性质，为探索肾脏病发病机理提供依据。本文着重介绍人肾活检组织胶体金标记葡萄球菌蛋白Ａ（ＳＰＡ）技术。材料与方法一、...     

免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体的试验研究

目的建立免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体(AOAb)的新方法。方法采用人源卵巢抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立免疫胶体金渗透技术法检测人血清抗卵巢抗体。分别检测72份抗卵巢抗体阳性血清和88份健康体检女性血清,并与酶联吸附试验的结果进行对比分析。结果与酶联免疫吸附试验的结果对比,其符合率为88.75%,特异性为90.91%,敏感度为86.11%。交叉试验与重复试验结果显示,免疫胶体金渗透技术测定抗卵巢抗体具有稳定性和特异性。结论免疫胶体金渗透技术可以快速准确地测定血清抗卵巢抗体,便于推广普及。     

微波辐射在胶体金免疫电镜技术中的应用

微波辐射在胶体金免疫电镜技术中的应用姜秀英，赖晃文，刘旭明，邹赛英（广州军区总医院医学实验科５１００１０乌鲁木齐军区总医院病理科）微波（ｍｉｃｒｏｗａｖａ，ＭＷ）是一种频率极高的电磁波，频率为２．５ＣＨ２，当微波照射免疫胶体金标记切片时，切片上的抗原...     

胶体金免疫比色法测定血清h-FABP水平的初步研究

目的初步建立一种基于胶体金均相免疫比色技术定量检测血清心脏型脂肪酸结合蛋白(hFABP)的方法。方法依据均相比色原理定量测定样本中抗原或抗体水平的免疫学检测技术原理,制备直径为80nm左右的胶体金颗粒并标记抗体,利用胶体金吸附标记物在540、660nm处吸收峰的变化初步建立用于检测血清h-FABP水平的方法。结果制备的胶体金颗粒液相分布均匀,制备的胶体金颗粒标记抗体呈均相分布,符合检测实验要求。通过实验确定反应体系组成为标本用量为30μL,h-FABP抗体标记量为100μg/100mL胶体金溶液,反应时间为10min,反应温度为37℃,以实验确定h-FABP≤3.6ng/mL为界限值,对临床标本进行初步分析并与免疫比浊的检测结果比较,符合率达95.09%。结论初步完成了h-FABP的胶体金免疫比色法的建立,与成熟的免疫比浊方法检测结果具有一定的符合性,有必要进行更深一步的研究。     

幽门螺杆菌IgG抗体免疫层析分型方法的建立

目的建立1种检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记SPA,将Hp重组抗原VacA、CagA和UreaA、UreaB抗原包被于硝酸纤维素膜NC上,制成免疫层析检测试纸条.血清中的抗Hp抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的酒红色线条。结果用GICA与免疫印迹试剂盒对比检测了180份血清标本中抗Hp抗体,显示本方法检测敏感度、特异度分别为95.4%和96.3%,两法总符合率为96.1%。结论用这种免疫层析GICA分型方法检测血清中抗Hp抗体,灵敏度高、特异性强、简便快速,有着广泛临床应用前景。     

胶体金免疫结合试验在检验医学中的应用

胶体金免疫结合试验是在酶免疫结合试验的基础上发展起来的一种固相标记免疫测定新技术。其特点是单份测定、简单、快速、除商品试剂外不需任何仪器设备 ,几分钟即可用肉眼观察结果。目前已在临床检测中获得广泛应用。现就其检测原理、试剂制作及应用现状和展望作一介绍。一、胶体金免疫结合试验的检测原理胶体金免疫结合试验的检测原理是以微孔滤膜为载体 ,包被已知抗原或抗体 ,加入待检标本后 ,经滤膜的毛细管作用使标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合 ,再通过胶体金结合物达到检测目的。根据检测装置的不同可分为金免疫渗滤试…     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 建立一种简易快速，自测式胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记乙型肝炎病毒表面抗体（抗ＨＢｓ）制成免疫层析检测试条，血清中ＨＢｓＡｇ与测试条件上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果 ＧＩＣＡ试条只有ＨＢｓＡｇ有特异性反应，与乙型肝炎病毒核心抗原，ｅ抗原等无交     

胶体金标记血小板膜糖蛋白的免疫电镜研究

目的建立胶体金标记血小板膜糖蛋白的稳定的免疫电镜技术,为开展血小板功能研究奠定基础。方法采集正常人外周静脉血,分离富血小板血浆,采用微波固定、常规固定两种方法,一抗为抗血小板GPⅢa单抗SZ21,分别选用直径10nm胶体金标记的羊抗鼠IgG(GAM-G)、直径15nm胶体金标记的葡萄球菌A蛋白(SPA-G)为探针。结果微波固定组血小板表面和开放管道系统可见到大量金颗粒的分布,而常规固定组的血小板未观察到金颗粒。结论以微波固定的方法,用大小合适的胶体金探针可特异性定位血小板表面和内部膜糖蛋白。     

胶体金渗滤法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(HP)细胞毒素相关蛋白A(CasA)抗体的胶体金免疫渗滤法(DIGFA)。方法 采用枸橼酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌A蛋白(SPA),将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上。血清中抗CagAIgG与金标记SPA及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后,形成肉眼可见的红色斑点。结果 用DIGFA与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对比检测了326份血清标本中抗CagA抗体,两法符合率为96．6％。结论 DIGFA检测血清中的抗CasA抗体特异性强,简便快速,无需特殊仪器设备,有实用价值。     

胶体金标记单克隆抗体测定单增李斯特菌试剂盒制备

目的制备单增李斯特菌54001、54002型的单克隆抗体（McAb）,制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测试剂板。方法以纯化单增李斯特菌为抗原,免疫Balb／c小鼠,制备单克隆抗体,鉴定其特性,建立并验证胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析试剂板的检测方法。结果筛选出2株单抗杂交瘤细胞株F5、F9,免疫球蛋白亚类均为IgM。通过选用柠檬酸钠法制备胶体金,测定其最适结合蛋白浓度为28g/ml,制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测板。结论为产单核李斯特菌提供了一个方便、快捷、切实有效的检测技术。     

胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

目的：建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒（HCMV）抗pp150抗体的胶体金免疫斑点法。方法：采用Frens法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌A蛋白（SPA），将本所利用基因工程技术生产的pp150抗原固定于0．45μm孔径的硝酸纤维素膜上，制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp150 IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合，然后滴加胶体金标记的SPA，在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果：胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了200份临床确诊血清标本中抗pp150 IgG抗体，胶体金法的特异性和敏感性分别为92％和90％。结论：胶体金免疫斑点法检测血清中的抗pp150抗体特异性、灵敏度较高，简便快速，不需要昂贵的仪器。     

免疫胶体金的制备及应用

1971年,Faulk和Taylor首先使用胶体金颗粒作为标记物用于免疫电镜技术,此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法得到了日益广泛的应用,不仅用于免疫电镜,     

软海绵酸胶体金免疫检测法的建立与应用

目的 建立并应用软海绵酸(OA)胶体金免疫层析检测法.方法 通过纯化抗OA单抗、制备胶体金、标记单抗、制备胶体金试剂条、样品模拟提取与加标回收检测、贝类染毒提取及检测,建立和优化金标免疫层析法.结果 选择30 nm胶体金颗粒用于单抗标记,金标单抗浓度为200 μg/mL,金标单抗包被量为2.5 μL/cm,二抗包被浓度为1.0 mg/mL,反应时间为3～5 min,对加标贝肉和染毒贝类的检测灵敏度为25 ng/mL.结论 建立了可用于OA检测的胶体金免疫层析检测法,满足规定的贝类OA含量安全阈值,为腹泻性贝毒检测与食品安全检验提供了新的技术方法.     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫渗滤试验(Dot-immunogoldfiltrationassay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21%,与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果基本相符。结论斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的：研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法：用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫汉滤试验（Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果：抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21％,与酶联免疫吸附试验（ELISA）的结果基本相符。结论：斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

中日电镜学术会议简讯

为促进我国功能电镜技术的发展和加强中日两国电镜工作者的学术交流,在煤炭部的资助下,由中国医学影像技术研究会电子显微分科会负责,中华医学会青岛分会为东道主,于1985年8月22～25日在青岛举办了“中日电镜免疫标记技术座谈会”,会议邀请近藤勇教授、牧田登之教授、荣鹤义人副教授等4位日本学者,出席会议的国内代表有44人。大会报告九篇,其它为座谈,内容以胶体金和过氧化物酶免疫标记技术为主,概括了电镜免疫标记     

滴金免疫测定法在检测血清抗幽门螺旋菌抗体中的应用

以幽门螺旋菌（HP）提取液为抗原，用胶体金标记的A蛋白为显示剂，建立了检测血清抗HP抗体的简便快速滴金免疫测定法。与美因Bio－Rad抗HP抗体IgGELISA试剂盒对比测定血清标本87份，方法的相对特异性和相对敏感性分别为92．9％和93．2％，符合率达93．1％。     

血型抗原-抗体结合与温度的关系:免疫金标记红细胞的电镜扫描

为了研究P、MN、Ii和ABO等血型系统抗体在低温下凝集作用增强的原因,作者采用胶体金探针与P_1、P~(?)、N、I、H、Y和A抗原结合,然后以相应鼠单克隆抗体,分别在室温及4℃致敏,在扫描电镜下观察胶体金标记细胞的表面抗原,从而分析温度与抗     

巨核细胞免疫酶标染色与瑞氏染色的比较

免疫酶标染色是以酶标记抗体与抗原特异结合，借助酶与底物反应、显色，识别抗原定位的技术。作者利用小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的单克隆抗体CD41标记上生物素作为一抗与标本上巨核细胞抗原作用，再将碱磷酶-链霉卵白素系统标记在二抗上，然后加入底物液和显色剂，从而在抗原部位产生有色沉淀反应，再用苏木素复染细胞核；同时常规瑞氏染色同一患者的骨髓片，对二者进行观察、比较。