Sox1过表达对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭及Wnt通路的影响

目的研究性别决定区域Y盒1(Sox1)过表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移以及Wnt通路的影响。方法荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测人正常口腔组织细胞系及口腔鳞癌细胞系HN4中Sox1 mRNA表达。采用Lipofectamin 2000试剂进行转染,分为三组:空白组、Sox1 NC组、Sox1 mimics组,每孔别按照不添加、0. 7μl 20μmol/L的p CMV6空载体、0. 7μl 20μmol/L的p CMV6-Sox1的水平加入相应试剂。检测Sox1 mRNA和蛋白水平,通过MTT试剂盒检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭能力,免疫印迹(Western blot)法检测Wnt通路相关蛋白表达水平。结果与正常细胞相比,口腔鳞癌细胞中Sox1 mRNA、Sox1蛋白表达水平显著降低(P 0. 05);空白组与Sox1 NC组Sox1 mRNA、蛋白表达差异无统计学意义(P 0. 05),与空白组、Sox1 NC组相比,Sox1 mimic组Sox1 mRNA、蛋白表达显著升高(P 0. 05); MTT试验显示,Sox1 NC组与空白组相比,0 h、24 h、48 h、72 h、96 h,OD值差异无统计学意义(P0. 05),与Sox1 NC组和空白组相比,Sox1 mimic组转染后72 h后OD值显著降低(P 0. 05); Western blot检测结果显示,空白组与Sox1 NC组相比Wnt、GSK-3β、β-Catenin、cyclin D1蛋白表达无显著差异(P 0. 05),与空白组、Sox1 NC相比,Sox1 mimic组Wnt、β-Catenin、cyclin D1蛋白表达明显下降(P 0. 05),GSK-3β表达量上升(P 0. 05)。结论口腔鳞癌组织中Sox1低表达,Sox1过表达通过Wnt通路降低口腔鳞癌细胞增殖、侵袭能力。     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用

目的 分析miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用。方法 回顾性收集2020年9月至2021年12月青岛大学附属青岛市中心医院行手术切除的治疗NSCLC患者39例,术中收取患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-218-5p表达,体外培养H1975细胞株,将H1975细胞分为NC组(mimics NC转染)、miR-218-5p组(miR-218-5p mimics转染)、TPD52-siRNA组(TPD52-siRNA转染)和miR-218-5p+TPD52-siRNA组(转染miR-218-5p mimics后再加入TPD52-siRNA试剂进行转染)。平板克隆形成实验检测H1975细胞的克隆形成数目,Transwell检测H1975细胞侵袭,划痕实验检测H1975细胞迁移,双荧光素酶实验测定miR-218-5p和TPD52靶向关系,蛋白质印迹检测TPD52蛋白表达。结果 NSCLC组织中miR-218-5p的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miR-218-5p的表达与性别、年龄、吸烟无相关性(P> 0...     

微小RNA-150-5p抑制鼻咽癌细胞恶性增殖及增强放疗敏感性的作用研究

目的 探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在鼻咽癌组织中的表达水平及其对癌细胞增殖和放疗敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-150-5p的表达水平。常规培养鼻咽癌细胞CNE2进行miR-150-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-150-5p过表达组(miR-150-5p mimic组)。采用MTT实验检测各组CNE2细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测各组CNE2细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)的表达。结果 miR-150-5p在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.74±0.39),低于癌旁组织中的(1.44±0.54),差异有统计学意义(t=8.140,P<0.001)。转染48 h后,miR-150-5p mimic组CNE2细胞中miR-150-5p的表达水平为(6.31±1.20),高于NC组中的(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=7....     

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。     

EP_4A对人CD34~+细胞干性因子表达的影响

目的:探讨前列腺素E_2特异性受体激动剂4(EP_4A)增强人CD34~+细胞干性因子表达的机制。方法:收集中山大学附属第一医院血液科20例健康供者经G-CSF动员后的外周血造血干细胞采集物,采用免疫磁珠法分选出人CD34~+细胞。以DMSO作对照,分别用EP_4A、EP_4A+EP_4A拮抗剂(EP_4AA)作用人CD34~+细胞72 h后,应用热图和Pathway富集分析检测与CD34~+细胞干性相关的差异基因和通路;再用qRT-PCR和Western blot检测不同组别细胞中通路蛋白和差异基因的mRNA及蛋白(β-catenin、Nanog、Oct4、Sox2、Stat3、AKT、P38)表达水平。结果:与对照组相比,EP_4A组人CD34~+细胞中β-catenin、Nanog、Oct4及Sox2 mRNA及其蛋白的表达均增高,而STAT3、AKT、P38 mRNA及其蛋白的表达无变化;EP_4A与EP_4AA(XAV939)共同作用人CD34~+细胞时,人CD34~+细胞β-catenin表达水平明显降低,并且Nanog、Oct4及Sox2基因及蛋白表达相应减少。结论:EP_4A可增加人CD34~+细胞干性因子(β-catenin、Nanog、Oct4和Sox2)表达,而不能增加STAT3、AKT、P38表达。     

MiR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控及其机制研究

目的:探讨miR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控作用及其机制。方法:选择2018年2月-2018年9月在本院接受治疗的CML患者46例(男性27例,女性19例)作为CML组,同时选择30例同期体检健康者作为对照组。利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-543模拟物(mimic)及阴性对照mimic转染至K562细胞后,应用CCK8方法检测miR-543对K562细胞增殖的影响,荧光素酶报告法分析miR-543对Wnt基因的靶向关系,流式细胞术检测miR-543对白血病细胞凋亡影响,Western blot方法检测Wnt、β-catenin、BCL-2、C-Myc及BAX表达水平。结果:慢性髓系白血病患者的miR-543水平显著低于健康对照组(P 0.05);miR-543 mimic组的miR-543的表达水平显著高于空白对照组(P 0.05);miR-543 mimic组的Wnt基因mRNA水平显著低于空白对照组(P 0.05)。miR-543 mimic可降低Wnt野生质粒的荧光素酶表达水平(P 0.05);miR-543 mimic对Wnt突变质粒的荧光素酶表达水平无抑制作用(P 0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞增殖水平显著低于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P 0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞凋亡水平显著高于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P 0. 05)。miR-543 mimic组细胞的Wnt、β-catenin、BCL-2及C-Myc蛋白水平均显著低于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P 0.05);miR-543 mimic组的BAX蛋白水平高于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P 0.05)。结论:miR-543可靶向Wnt蛋白,抑制Wnt信号通路活性,从而抑制白血病细胞的增殖能力,提高细胞凋亡水平。     

长链非编码RNA MALAT1对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制

目的探究长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)对口腔鳞癌细胞(OSCC)的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法转染小干扰MALAT1(si-MALAT1)至TSCCA细胞分为空白组、si-NC组、siMALAT1组;转染小干扰对照(si-NC)、si-MALAT1、抑制剂对照(inhibitor-NC)、miR-218inhibitor至TSCCA细胞分为空白组、si-NC+inhibitor-NC组、si-MALAT1+inhibitor-NC组、si-NC+miR-218inhibitor组、si-MALAT1+miR-218inhibitor组。qRT-PCR、WB法检测MALAT1、miR-218、Fbxw8表达; MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成; Transwell检测细胞迁移、侵袭能力;荧光素酶活性检测MALAT1、miR-218、Fbxw8三者靶向调控关系。结果与正常HIOE细胞系相比,TSCCA细胞系中MALAT1、Fbxw8表达均升高,miR-218表达均降低(P 0. 05)。与空白组、si-NC组相比,si-MALAT1组MALAT1表达、细胞菌落、迁移、侵袭数量降低,miR-218表达、细胞抑制率升高,差异均有统计学意义(P 0. 05)。在MALAT1 3'UTR-Mut细胞中,miR-218 mimis组荧光素酶活性低于miR-218NC组(P 0. 05)。与空白组、si-NC+inhibitor-NC组、si-MALAT1+miR-218inhibitor组相比,si-NC+miR-218inhibitor组MALAT1表达、菌落、细胞侵袭、迁移数量、Fbxw8蛋白表达升高,miR-218表达降低; si-MALAT1+inhibitor-NC组MALAT1表达、菌落、细胞侵袭、迁移数量、Fbxw8蛋白表达降低,miR-218表达升高(P 0. 05)。在Fbxw83'UTR-Mut细胞中,miR-218 mimis组荧光素酶活性低于miR-218 NC组(P 0. 05)。结论在OSCC中MALAT1、Fbxw8表达上调,miR-218表达下调,MALAT1可能通过miR-218介导Fbxw8调控OSCC的增殖、迁移和侵袭。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制研究

目的探讨miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制。方法收集2017年1月—2019年6月证实的胃癌组织和癌旁组织各70例,采用qRT-PCR检测miR-100-5p在胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45和人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中的表达,分析miR-100-5p表达与胃癌患者临床病理参数关系。选择miR-100-5p低表达的胃癌细胞系MKN45,转染miR-100-5p mimic,分为NC组和miR-100-5p mimic组,采用MTS实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测两组细胞转移能力;采用不同浓度奥沙利铂处理两组细胞48 h, MTS实验和流式细胞凋亡实验检测两组细胞对奥沙利铂化疗敏感性;采用Western blotting检测两组细胞中ERK1/2和pERK1/2蛋白表达。结果 miR-100-5p相对表达量胃癌组织低于癌旁组织,胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45均低于人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1,差异有统计学意义(P0.01)。miR-100-5p表达与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期和化疗效果相关(P0.05或P0.01)。细胞中miR-100-5p相对表达量miR-100-5p mimic组高于NC组,MKN45细胞增殖能力及MKN45细胞穿膜细胞数miR-100-5p mimic组低于或少于NC组,MKN45细胞对奥沙利铂化疗敏感性miR-100-5p mimic组较NC组增加,细胞中pERK1/2蛋白表达miR-100-5p mimic组低于NC组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 miR-100-5p可能通过调控ERK1/2信号通路抑制胃癌细胞增殖、转移和对奥沙利铂化疗耐药,是治疗胃癌的潜在靶标。     

微小RNA-1291对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA-1291(miR-1291)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 通过公共数据库分析miR-1291在胃癌组织、正常胃组织中的表达。培养人胃癌细胞SGC-7901、人胃黏膜上皮细胞GES-1,比较miR-1291表达水平。将miR-1291 mimic、miR-NC、miR-1291 inhibitor、miR inhibitor质粒分别转染至SGC-7901细胞,设为miR-1291组、miR-NC组、miR-1291 inhibitor组、miR inhibitor组。将BMP激活素膜结合抑制因子(BAMBI) mimic质粒、Vector质粒、sh-BAMBI质粒、sh-NC质粒分别转染至SGC-7901细胞中,设为BAMBI组、Vector组、sh-BAMBI组、sh-NC组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1291和BAMBI mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测BAMBI、转化生长因子-β(TGF-β)...     

miR-195-5p过表达对前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭的影响

目的探究miR-195-5p过表达对前列腺PC3细胞增殖和侵袭的影响。方法采用miR-195mimic转染前列腺癌PC3细胞,RT-PCR检测miR-195-5p和血管内皮生长因子A(vascular endothelial cell growth factor A,VEGFA)的表达,预测miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,采用双荧光素酶实验证明miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,利用免疫蛋白印迹检测VEGFA表达情况,CCK8方法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-195 mimic能促进PC3细胞miR-195-5p的表达水平,降低VEGFA的mRNA水平、VEGFA野生质粒的荧光素酶活性、PC3细胞增殖速度和细胞侵袭数,且miR-195-5p有VEGFA的结合位点,pc-VEGFA能升高PC3细胞VEGFA的蛋白表达水平,减弱miR-195 mimic对VEGFA表达的抑制作用,显著促进细胞增殖和侵袭能力,同时减弱miR-195 mimic对细胞增殖和侵袭能力的抑制作用。结论 miR-195-5p通过下调VEGFA的表达以抑制前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭能力。     

miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调对食管癌细胞侵袭、迁移的抑制作用

目的探讨miR-133b通过介导转化生长因子-β受体1(TGF-βR1)表达下调,抑制食管癌细胞侵袭、迁移的作用及机制。方法采用实时荧光定量PCR检测人正常食管上皮细胞和人食管癌OE19、ECA109细胞中miR-133b的表达;构建miR-133b过表达的人食管癌OE19、ECA109细胞;Transwell小室实验观察不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法检测不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞中TGF-βR1、SMAD3、p-SMAD3、E-cadherin、N-cadherin蛋白水平的影响;双荧光素酶报告基因试验检测miR-133b对TGF-βR1的靶向调控作用。结果成功构建miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞;miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞的侵袭和迁移能力显著降低(P<0.01);miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞中TGF-βR1、p-SMAD3、N-cadherin蛋白水平明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因试验检测发现miR-133b可靶向调控TGF-βR1的表达。结论 miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调,抑制TGF-βR1/SMAD3信号通路活化,抑制人食管癌OE19和ECA109细胞上皮间质转化的发生,抑制食管癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-128对胶质母细胞瘤U87细胞侵袭性的影响及作用机制

目的探讨miR-128对胶质母细胞瘤U87细胞侵袭性的影响及其作用机制。方法采用RTPCR法测定胶质母细胞瘤U87细胞和SHG-44细胞中miR-128的表达情况,应用Transwell侵袭和迁移实验检测U87细胞的侵袭性,采用荧光素酶报告基因分析法检测miR-128调节的靶基因,应用Western blot分析法检测MMP-7蛋白的表达情况,并与阴性对照组(NC组)进行比较。结果 miR-128在SHG-44细胞、U87细胞中的表达量分别为1.00±0.13、0.52±0.16,差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,肿瘤细胞高表达miR-128时两组穿膜细胞数分别为445±23、313±59,差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,肿瘤细胞过度表达miR-128时,MMP-7蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-128通过负性调控MMP-7蛋白的表达以抑制U87细胞的侵袭,提示miR-128可作为临床靶向治疗胶质母细胞瘤的关键。     

Prdm14对C3H10T1/2细胞增殖及干性的影响

目的 探讨PR结构域蛋白14(Prdm14)对C3H10T1/2细胞增殖及干性的影响。方法 该实验分为空白对照组(正常C3H10T1/2细胞)、阴性对照组(感染慢病毒空载体的C3H10T1/2细胞)以及实验组(感染Prdm14慢病毒的C3H10T1/2细胞),分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(WB)检测Prdm14 mRNA及蛋白水平。采用CCK-8及细胞克隆形成实验检测C3H10T1/2细胞增殖情况;通过碱性磷酸酶(ALP)染色及活性测定,观察ALP活性情况;采用WB检测干性因子Sox2、Nanog、Oct4表达。结果 与阴性对照组相比,实验组Prdm14 mRNA及蛋白水平均明显升高(P<0.05),ALP活性及细胞增殖能力增强(P<0.05),干性因子Sox2、Nanog蛋白水平均明显升高(P<0.05),Oct4蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Prdm14可促进C3H10T1/2细胞增殖及干性因子表达。     

miR-218靶向Bmi-1抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖的研究

目的:研究miR-218通过靶向调控Bmi-1抑制急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞增殖的分子机制。方法:选取HL-60细胞株,分别转染miR-218及RNA阴性对照序列。实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-218的表达水平;MTT检测转染miR-218对HL-60细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测并评价转染miR-218对HL-60细胞凋亡的影响;Western blot检测miR-218对肿瘤细胞Bmi-1表达的调节; Spearman相关分析法分析mi R-218及Bmi-1表达的相关性;荧光素酶实验验证miR-218与Bmi-1的靶向关系。结果:MTT实验表明,高表达miR-218可明显抑制HL-60细胞的体外增殖能力;流式细胞术结果表明,转染mi R-218后G1和G2期细胞增加,S期细胞减少;Western blot结果显示,转染miR-218后HL-60细胞中Bmi-1蛋白水平显著降低(P0.05);Spearman相关分析显示,HL-60细胞miR-218 mRNA水平与Bmi-1蛋白含量呈负相关(r=-0.326,P0.01);荧光酶实验证实,miR-218可直接靶向Bmi-1。结论:miR-218可抑制APL细胞增殖、转移及侵袭,这可能与下调Bmi-1有关。     

miR-1299通过靶向调控CCND1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移和凋亡的影响

目的 探讨miR-1299通过靶向调控细胞周期蛋白D1(CCND1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、转移和凋亡的影响。方法 回顾性收集2021年1月至2022年1月入青岛大学附属青岛市中心医院胸外科行原发性NSCLC手术的患者29例,取癌组织和癌旁正常肺组织,培养人正常肺上皮细胞16HBE和NSCLC细胞系H1299、A549、PC-9、H1975、SPC-A1,RT-qPCR法检测组织和细胞中miR-1299和CCND1的表达,取生长良好的H1299细胞,将其分为对照组(转染miR-control)、miR-1299 NC组(转染miR-1299 NC)、miR-1299 mimic组(转染miR-1299 mimic)、miR-1299 inhibitor组(转染miR-1299 inhibitor)、PCDNA组(转染pcDNA3.1-NC)、PCDNA-CCND1组(转染pcDNA3.1-CCND1真核表达载体)、miR-1299 mimic+PCDNA组(共同转染miR-1299 mimic和pcDNA3.1-NC)和miR-1299 mimic+PCDNA-CCND1...     

miR-495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用的影响及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸(microRNA,miR) -495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用下的影响及机制。方法 采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株Eca109（Eca109-RAD）及分次顺铂递增法诱导建立顺铂耐药型细胞株Eca109（Eca109-DDP）,实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR) 检测miR-495 在Eca109-RAD 及Eca109-DDP 细胞中的表达。Eca109-RAD 及Eca109-DDP 分为NC 组和miR-495 mimic 组,转染后qRT-PCR 检测各组细胞中miR-495 的表达,CCK8 检测不同放射剂量对Eca109-RAD 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,及不同浓度的顺铂对Eca109-DDP 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,NC 组和miR-495 mimic 组经放射及顺铂处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot 检测各组细胞中凋亡相关蛋白caspase 3,Bax 和Bcl-2 蛋白的表达。结果 与Eca109 细胞（0.99±0.01）相比,Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（0.48±0.03 ）及Eca109-DDP 细胞中miR-495的表达（0.52±0.05）均降低,差异有统计学意义(t=27.930,15.970, 均P=0.000)。与NC 组细胞相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（4.82±0.48 vs 1.00±0.03）及Eca109-DDP 细胞中miR-495 的表达（5.68±0.54vs 1.00±0.01）均显著增加,差异有统计学意义(t=13.760,15.100, 均P=0.000)。与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞对放疗敏感度增加,差异均有统计学意义(t=6.780 ～ 18.860,P = 0.000 ～ 0.001);与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-DDP 细胞对顺铂敏感度增加,差异均有统计学意义(t=7.510 ～ 21.630,均P=0.000)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞平板克隆形成能力（46.33±5.69 个vs 93.33±4.51 个）及Eca109-DDP（34.67±2.52 个vs 89.00±4.03 个）细胞平板克隆形成能力显著降低(t=11.210,19.800, 均P=0.000) 。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞凋亡率（25.66%±2.41% vs 8.39%±0.82%）及Eca109-DDP 细胞凋亡率（21.05%±5.37% vs 8.67%±1.15%）均显著增加(t=11.750,10.030,P=0.000,0.001)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞及Eca109-DDP 细胞中Bcl-2 蛋白表达均降低(t=4.650,7.450,P=0.006,0.001),Bax 和caspase 3 蛋白的表达均增加(t= 7.100 ～ 14.290, P=0.000 ～ 0.001)。结论 MiR-495 可能通过调控凋亡相关蛋白促进食管癌细胞放化疗敏感度。     

MicroRNA-214对骨髓间充质干细胞诱导脐血CD34~+细胞迁移的影响

目的:探讨MicroRNA-214(miR-214)对骨髓间充质干细胞(BM-MSC)诱导脐血CD34~+造血干/祖细胞迁移的影响。方法:以miR-214类似物(miR-214 mimic)或抑制物(miR-214 inhibitor)瞬时转染BM-MSC,实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-214的表达量,应用趋化实验观察各组细胞培养上清对人脐带血CD34~+细胞的迁移能力的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测培养上清中趋化因子SDF-1的分泌水平。结果:BM-MSC培养上清明显促进CD34~+细胞迁移。与未转染对照组(Control组)和阴性对照组(Negative Control组,NC组)相比,miR-214类似物组明显促进CD34~+细胞的迁移(P0.01),而miR-214抑制物组表现为抑制CD34~+细胞的迁移(P0.01)。ELISA检测显示,各组的SDF-1浓度无明显差异(P0.05)。结论:miR-214转染的骨髓间充质干细胞培养上清可促进CD34~+细胞的迁移,其原因与趋化因子SDF-1无明显相关性。     

YTHDF1通过增强肝癌细胞肿瘤干性及激活Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌进展

目的 探讨m6A甲基化修饰识别蛋白YTH家族蛋白1(YTH domain family protein 1, YTHDF1)促进肝癌细胞肿瘤干性及激活Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌进展的机制。方法 采用Western印迹法检测6组肝癌组织和癌旁肝组织中YTHDF1蛋白的表达情况。采用Western印迹法、RIP-PCR、qRT-PCR等检测β-catenin及其下游分子的表达。qRT-PCR、成球实验、克隆形成实验、CCK8等检测YTHDF1对肝癌细胞干性的影响。采用Kaplan-Meier生存曲线分析YTHDF1表达与肝癌患者临床预后的关系。结果 肝癌组织中YTHDF1的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.001）;过表达YTHDF1后,β-catenin及其下游分子的表达增加;过表达YTHDF1后,肝癌细胞的肿瘤干性明显上调、增殖能力显著增强;Kaplan-Meier生存曲线表明YTHDF1高表达的肝癌患者预后更差。结论 YTHDF1在肝癌组织中高表达,促进了β-catenin及其下游分子的表达,增强了肝癌细胞的干性,对肝癌患者的预后产生了不良影响。