CpG ODN对2型糖尿病患者外周血单个核细胞功能的影响

近年发现，有免疫刺激活性的细菌DNA和一些人工合成的寡脱氧核苷酸序列中都含有非甲基化5＇-CG-3’二核苷酸，统称为CpG寡脱氧核苷酸（CpGODN），主要免疫效应为刺激单核-巨噬细胞产生细胞因子IL-12、IL-18和TNF-α，促进B细胞分泌IL-12和IL-6；通过IL-12上调NK细胞产生了γ-干扰素（IFN-γ），增强杀伤活性；通过上述一系列细胞因子和炎症细胞的相互作用，增强机体免疫能力。但有关CpG ODN能否改善糖尿病患者外周血单个核细胞功能的研究较少。     

CpG寡脱氧核苷酸对外周血单个核细胞功能的影响：1型糖尿病患者与健康者对照

背景：有研究表明CpG寡脱氧核苷酸可增强外周血单个核细胞的功能,但对1型糖尿病患者的影响至今少有报道。目的：观察CpG寡脱氧核苷酸对1型糖尿患者患者与健康志愿者外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12,10表达的影响。方法：将1型糖尿病患者与健康志愿者的外周血单个核细胞根据刺激物不同分为空白对照组、CpG寡脱氧核苷酸组。用RT-PCR法检测外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12mRNA和白细胞介素10mRNA的表达。结果与结论：1型糖尿患者γ干扰素和白细胞介素12mRNA的表达明显低于健康志愿者（P〈0.01）。1型糖尿患者与健康志愿者外周血单个核细胞经CpG寡脱氧核苷酸组刺激后,γ干扰素和白细胞介素12mRNA的表达增高（P〈0.01）,白细胞介素10mRNA的表达无差异（P〉0.05）。结果提示,CpG寡脱氧核苷酸可促进1型糖尿患者外周血单个核细胞表达γ干扰素和白细胞介素12。     

白细胞介素-23的研究进展

IL-23是最新发现的一种由P19及P40两条多肽链组成的异二聚体细胞因子,来源于活化的单核巨噬细胞、B细胞和树突状细胞(dendriticcell,DC),IL-23与IL-27同为IL-12家族成员。IL-23可促进CD4 T细胞的增殖并强化树突细胞抗原递呈能力,通过诱导T细胞和DC产生IFN-γ与IL-12,增强宿主针对肿瘤的免疫反应作用。     

白细胞介素-23的研究进展

白细胞介素-23(IL-23)是造血细胞因子家族成员,它是由p19和p40两个亚基组成的活性复合体,IL-23受体由IL-12β1和IL-23R构成,IL-23的信号途径与白细胞介素-12(IL-12)有相同的Jak-Stat信号分子,IL-23的功能与IL-12也存在许多相同之处,但也有其独特的功能。IL-23可作用于活化的T细胞、记忆性T细胞和树突状细胞,产生γ干扰素(IFN-γ)和IL-12等细胞因子,在炎症性疾病、自身免疫性疾病的发病以及抗肿瘤和抗感染等方面发挥重要作用,有望成为新的免疫治疗因子。     

CpGODN增强人肺癌细胞株A549放射增敏作用的研究

目的初步探讨CpG ODN增强人肺腺上皮细胞株A549放射增敏作用。方法 ELISA法检测细胞TNF-α、IL-12和INF-γ的分泌水平,Griess检测细胞NO的含量并观察CpG ODN1826与β射线诱导A549细胞AP-1活化的抑制作用。结果 CpGODN增加了人肺癌细胞株A549TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌,在联合β射线照射后对A549细胞的杀伤作用更加显著,并显著抑制A549细胞AP-1的活化。结论 CpG ODN对A549有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN增强A549细胞分泌TNF-α、IL-12、INF-γ、NO和抑制A549细胞AP-1的活化有关。     

CpG ODN免疫活化机制及其在肿瘤治疗中的应用

含有未甲基化鸟嘌呤胞嘧啶二核苷酸序列的寡核苷酸(CpG ODN)可以活化T,B淋巴细胞、抗原提呈细胞(APC),可以诱导免疫细胞产生IFN-γ等Th1型为主的炎性细胞因子,其具有活化机体固有和适应性免疫应答的能力.通过动物模型证实CpG ODN可以以疫苗佐剂、单一治疗、联合其他治疗方式的形式应用于肿瘤治疗中.CpG ODN用于人体也已经进入临床实验阶段,为肿瘤患者带来了新的治疗途径.     

白细胞介素-2联合白细胞介素-12刺激脐血单个核细胞的实验研究

目的探讨白细胞介素-2(IL-2)联合白细胞介素-12(IL-12)对人脐血单个核细胞(CBMC)抗肿瘤作用的影响。方法采用噻唑蓝还原法和半固体培养方法研究IL-2联合IL-12激活的CBMC对白血病细胞株K562和HL60的抗肿瘤活性及其造血祖细胞活性。结果①10U/mlIL-12激活的CBMC对K562及HL60细胞杀伤率分别为(35.12±3.46)%和(45.60±4.32)%;500U/mlIL-2激活的CBMC对K562及HL60细胞的杀伤率分别为(37.23±4.82)%和(23.69±4.86)%;IL-2、IL-12联合可产生明显的协同作用,对K562及HL60细胞的杀伤率分别达(68.60±4.68)%和(67.69±4.84)%。②CBMC经IL-2和IL-12刺激72h,可产生更多的肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、γ-干扰素。③IL-2、IL-12单独或联合应用激活CBMC产生抗肿瘤活性的同时对CBMC原有的造血祖细胞活性无明显影响。结论IL-2联合IL-12可提高CBMC的抗肿瘤活性,为临床应用CBMC治疗白血病提供了实验依据。     

湖北汉族人IL-18基因编码区105位点多态性及其血清含量相关性研究

白细胞介素-18(interleuk in-18,IL-18)是一种分布广泛的细胞因子,具有诱导γ-干扰素(IFNγ)等细胞因子的产生、增强自然杀伤(NK)细胞活性及促进T辅助(Th1)细胞的分化、增强Th1类反应等多种生物学活性,在介导炎症、调节机体的免疫功能方面具有重要作用。人IL-18基因位于11号染色体的长臂上(11q22.2~q22.3),由6个外显子和5个内含子组成。其中转录起始区位于第2外显子上,2个启动子分别位于第2外显子上游6.7 kb的区域和5′端非编码区。目前发现IL-18基因启动子区和编码区存在突变位点,而且启动子-137和-607位点多态性与IL-18的转录和表…     

乙型肝炎病毒感染孕妇IL-12、IL-18的表达与胎儿宫内感染的相关性研究

目的探讨白细胞介素-12(IL-12)及白细胞介素-18(IL-18)与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)的相关性在乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的意义。方法对105例血清乙肝表面抗原(HBsAg)阳性的孕妇(研究组,宫内感染13例,宫内未感染92例)和42例血清HBsAg阴性的正常孕妇(对照组)均采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定孕妇外周血乙型肝炎5项指标和细胞因子IL-12、IL-18、IFN-γ、IL-4水平;测定新生儿脐血乙型肝炎5项和HBV-DNA水平。结果宫内感染组孕妇的IL-12、IL-18、IFN-γ水平显著低于宫内未感染组及对照组,IL-4水平则显著高于宫内未感染组及对照组(均P<0.01)。宫内未感染组的IL-12、IL-18、IFN-γ和IL-4水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3组孕妇外周血IL-12、IL-18与IFN-γ呈显著正相关(r=0.956、0.927、0.885及r=0.926、0.943、0.856,均P<0.01),与IL-4水平呈显著负相关(r=-0.926、-0.921、-0.913及r=-0.935、-0.982、-0.939,均P<0.01)。结论IL-12、IL-18既可加强HBV感染的T细胞的反应和IFN-γ的生成,又能增强Th1介导的细胞免疫功能,有望成为HBV宫内感染免疫治疗的新靶位。     

白细胞介素12:重要的免疫调节因子

IL－12是由巨噬细胞和B细胞产生的一种异二聚体细胞团子,具有多种生物学活性的免疫效应细胞生长刺激因子。能显著增强NK／LAK细胞的杀伤活性,促进特异性CTL细胞的应答能力,诱导γ干扰素,它不仅对细胞免疫具有增强调节作用,且可与其它细胞因子协同作用,有可能成为重要的免疫治疗细胞因子。     

细胞因子联合高效扩增高纯度人外周血来源NK细胞并观察其细胞功能的变化

目的 探索从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的方法,并初步了解扩增后的NK细胞功能的变化.方法 采用免疫磁珠分选系统(miniMACS)阴性分选法,从外周血单个核细胞(PBMNC)中获得纯化的NK细胞,在干细胞培养基条件下,通过IL-2、IL-12和IL-15等细胞因子的不同组合,分别培养15 d,每3 d半量换液并补充细胞因子;检测分选及扩增前后NK细胞CD3-CD56+细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组NK细胞穿孔素、颗粒酶B mRNA的表达水平及IFN-γ的分泌水平.结果 经miniMACS阴性免疫磁珠分选后CD3-CD56+细胞含量由分选前的(11.2±5.2)%提高到(94.2±3.5)%.培养15 d后除对照组CD3-CD56+细胞纯度略下降外,其余组与扩增前无明显差异(P0.05).在IL-2、IL-2+IL-12、IL-2+IL-15、IL-2+IL-15+IL-12培养体系中,NK细胞扩增倍数分别为15.4±1.1,19.9±3.9,50.5±4.3和52.4±6.7,均显著高于对照组(6.1±1.0)(P<0.01),但IL-2+IL-15与IL-2+IL-15+IL-12组间比较,差异无统计学意义(P0.05).各组培养的NK细胞穿孔素、颗粒酶B基因的表达量均较扩增前明显增加(P<0.01),IL-2+IL-15组、IL-2+IL-12+IL-15组两种基因的表达量均显著高于其他组(P<0.01),但两组间比较差异无统计学意义(P0.05);各细胞因子组培养液中IFN-γ分泌水平均显著高于未加细胞因子的空白对照组(P<0.01),IFN-γ分泌水平IL-2+IL-12+IL-15组IL-2+IL-12组IL-2+IL-15组IL-2组(P<0.01).结论 经miniMACS免疫磁珠阴性分选法获得少量NK细胞后,应用IL-2+IL-15细胞因子联合培养是获得纯度高、细胞毒活性强、扩增效率高的NK细胞的简单有效方法.     

CpG ODN增强树突状细胞对胃癌细胞增殖周期和凋亡影响的实验研究

目的探讨CpG ODN1826增强树突状细胞(DC)抗胃癌效应的作用。方法分离正常人外周血DC,用GM-CSF和IL-4培养,于第5天加入TNF-α并分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组继续培养。第6天各组均加入胃癌细胞冻融抗原50μl,Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ组再分别加入CpG ODN182610μg/ml,第10天ELISA检测IL-12和IFN-γ的水平,MTT法检测CTL对MKN45、MKN28、SGC7901和A549细胞的体外杀伤效应。流式细胞术检测CpG ODN1826增强DC对胃癌细胞增殖周期、凋亡的影响。结果体外培养第10天,加入CpG ODN1826后各组IL-12、IFN-γ的分泌量明显提高;CpG ODN1826协助DC对同种不同分化类型的胃癌细胞株MKN45、MKN28、SGC7901均有强烈的杀伤效应(P<0.01),杀伤活性显著高于A549(P<0.01)。体外应用CpG ODN1826对肿瘤细胞周期比例:G0/G1间期(MKN4568.35%、MKN2869.23%、SGC790169.80%),S期(MKN4539.45%、MKN2839.75%、SGC790139.55%),G2/M期(MKN456.50%、MKN286.30%、SGC79016.42%);与A549(G0/G1间期57.68%,S期25.13%,G2/M期18.46%)比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时,不同肿瘤细胞株的凋亡率分别为MKN4575.20%、MKN2373.87%、SGC790172.43%、A54951.43%,表明CpG ODN1826能显著增强DC对胃癌细胞周期的抑制作用,促进胃癌细胞的早期凋亡(P<0.01)。结论 CpG ODN1826体外可显著增强DC诱导出高效而特异的抗胃癌效应,显著抑制胃癌细胞分裂增殖、促进凋亡,可作为胃癌免疫治疗的一种有效方法。     

IL-12治疗肿瘤的临床进展

白细胞介素12(IL-12)是近年来发现的一种新的细胞因子,又称细胞毒性淋巴细胞成熟因子(cytotoxic lymphocyte maturation factor,CLMF)或自然杀伤细胞刺激因子(Natural Killer Cell Stimulatory Factor,NKSF),是由40KD和35KD两个亚基以二硫键相连组成的异源二聚体.最初是在病毒转染的人B淋巴母系RPMI-8866和佛波酯刺激的人B淋巴母细胞系NC-37的上清液中纯化的鉴定到[1],由巨噬细胞、B淋巴细胞等抗原递呈细胞在免疫应答能力中产生,IL-12具有多种生物学活性:能显著增强NK细胞活性,促进CTL细胞的应答能力,诱导T细胞和NK细胞分泌IFN-γ,促使Th细胞向Th1细胞发育.近年大量的动物实验证明也-12具有强大的抗瘤活性和抗转移作用.与IL-2相比,其抗瘤活性是IL-2的100～1000倍,而副作用极小,因而IL-12已成为肿瘤细胞因子疗法中的研究热点,正受到越来越多的关注.本文结合最新的文献资料,对IL-12抗肿瘤机制和临床应用进展情况作一简要综述:     

哮喘患者血清中IL-4，IL-12，IL-13，IFN-γ，IgE水平的测定及其临床意义

目的 探讨哮喘发作期和缓解期血清白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-13(IL-13)和干扰素(IFN-γ)与免疫球蛋白E(IgE)的浓度变化及其意义.方法 采用生物素亲合素双抗体夹心和间接ELISA法分别对60例哮喘急性发作期和缓解期患者进行血清IL-4,IL-12,IL-13,IFN-γ和IgE水平的测定.结果 60例哮喘急性发作期和哮喘缓解期患者血清IL-4,IL-13水平均高于正常对照组(P<0.01);而血清IFN-γ,IL-12水平均较对照组(40例)显著下降(P<0.01);哮喘急性发作期患者血清IL-4,IL-13水平高于哮喘缓解期患者(P<0.01),而IFN-γ,IL-12水平均较缓解组显著下降(P<0.01);在哮喘发作期患者血清中IL-4,IL-13水平与IgE含量呈显著正相关,而IL-12,IFN-γ水平与IgE呈显著负相关.结论 细胞因子分泌紊乱、网络失衡是哮喘病急性发作的重要因素,而细胞因子IL-4,IFN-γ,IL-12,IL-13等在其发生、发展中起着重要的调控作用.     

白细胞介素-23的研究进展

白细胞介素-23(IL-23)是造血细胞因子家族成员，它是由p19和p40两个亚基组成的活性复合体，IL-23受体由IL-12β1和IL-23R构成，IL-23的信号途径与白细胞介素-12(IL-12)有相同的Jak-Stat信号分子，IL-23的功能与IL-12也存在许多相同之处，但也有其独特的功能。IL-23可作用于活化的T细胞、记忆性T细胞和树突状细胞，产生γ干扰素(IFN-γ)和IL-12等细胞因子，在炎症性疾病、自身免疫性疾病的发病以及抗肿瘤和抗感染等方面发挥重要作用，有望成为新的免疫治疗因子。     

CpG ODN增强人外周血单个核细胞对肝癌细胞系HepG-2杀伤活性的实验研究

目的 探讨CpG ODN在体外对人外周血单个核细胞的活性和肿瘤杀伤作用的影响。方法 用CpG ODN刺激在体外分离培养的人外周血单个核细胞,检测其活性和对肝癌细胞系HepG-2杀伤作用。结果 CpG ODN组PBMC培养上清IFN-γ显著高于对照组（P〈0.05）。经CpG ODN刺激72小时后与HepG2细胞作用,48小时后乳酸脱氢酶在培养液中活力较对照组增强,差别具有显著性（P〈0.05）。结论 CpG ODN可明显提高人外周血淋单个核细胞对肿瘤的杀伤活性。     

体外联合应用CD80和CD28/CpG ODN共刺激活化人外周血单个核细胞 对胃癌细胞株MKN45有靶向杀伤作用吗?

背景:启动维持并调节活化级联反应,决定了T细胞是活化增殖或转变为无反应状态甚至凋亡.B7分子与CD28的结合能有效协同T细胞受体途径活化T细胞,增强T细胞的增殖活性. 目的:初步分析CD80和CD28/含CpG的寡脱氧核苷酸(CpG containing oligodeoxynucleotides,CpG ODN)共刺激活化的人外周血单个核细胞对胃癌细胞株MKN45的杀伤作用.方法:Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入白细胞介素2及CD28,CpG ODN共刺激活化培养1～5 d.取MKN45细胞,设立4组:CD28/CpG ODN共刺激组、CD80联合CD28/CpG ODN共刺激组、单纯CD80组、空白对照组.以MTT法检测细胞杀伤率,电镜观察凋亡的MKN45细胞超微结构,流式细胞仪检测MKN45细胞凋亡率.结果与结论:单纯CD80组对MKN45细胞无明显杀伤作用;与CD28/CpG ODN共刺激组比较,CD80联合CD28/CpG ODN共刺激组对MKN45细胞的杀伤作用显著增强(P < 0.05),效应细胞与靶细胞之比达15︰1时即可达到半数杀伤率.电镜下效应细胞作用24 h,MKN45细胞就部分发生坏死,部分细胞可见凋亡.与空白对照组比较,单纯CD80组MKN45细胞凋亡率显著升高(P < 0.01).提示CD80与共刺激活化的外周血单个核细胞合用,可提高活化的外周血单个核细胞对MKN45细胞的靶向性杀伤作用.     

白细胞介素12：重要的免疫调节因子

ＩＬ－１２是由巨噬细胞和Ｂ细胞产生的一种异二聚体细胞因子,具有多种生物学活性的免疫效应细胞生长刺激因子。能显著增强ＮＫ／ＬＡＫ细胞的杀伤活性,促进特异性ＣＴＬ细胞的应答能力,诱导γ干扰素,它不仅对细胞免疫具有增强调节作用,且可与其它细胞因子协同作用,有可能成为重要的免疫治疗细胞因子。     

白细胞介素18研究进展

白细胞介素18,以前称IFN-γ诱导因子,是一种新发现的细胞因子.在结构上与IL-1相似,在功能上与IL-12相似.它可刺激T细胞增殖,增强Th1及NK细胞毒活性,参与细胞因子的生成和骨的重塑,并具有抗肿瘤和抗微生物感染的作用.还可引起内毒素诱导的肝损害,并与变态反应性疾病及非肥胖性糖尿病有关,是一个多功能的值得进一步研究的细胞因子.