急性髓性白血病病人外周血中RIZ1的表达变化与启动子区甲基化相关性的研究

目的:研究急性髓性白血病病人外周血中肿瘤抑制基因RIZ1的表达状况和该基因启动子区甲基化状态及两者之间的关系.方法:以37例初发急性髓性白血病病人和15例正常人外周血标本为研究对象.RT-PCR检测RIZ1 mRNA水平,甲基化特异性PCR(MSP)检测RIZ1基因启动子区甲基化状态.结果:急性髓性白血病病人标本与正常人标本比较,RIZ1基因的表达下降,差异具有统计学意义(P<0.05).急性髓性白血病标本中RIZ1基因启动子区甲基化率为29.7%(11/37).存在甲基化的急性髓性白血病病人外周血标本中,RIZ1基因表达缺失或降低.结论:RIZ1基因表达下降与急性髓性白血病的发生有关, 其部分机制在于基因启动子区甲基化.     

急性白血病CDX2基因启动子甲基化状态与其mRNA表达关系

目的研究急性白血病尾型同源盒-2(CDX2)基因启动子甲基化与其mRNA表达的关系,探讨CDX2基因表达上调机制。方法分别用甲基化特异性PCR(MSP)、实时定量PCR方法检测55例初诊急性髓细胞白血病(AML)、18例初诊急性淋巴细胞白血病(ALL)、17例对照CDX2基因启动子甲基化状态和CDX2 mRNA表达。结果 AML、ALL及对照组甲基化率均为100.0%,各组间差异无统计学意义(P0.05)。AML、ALL组CDX2 m RNA表达显著高于对照组,差异有统计学意义(Z=-5.437、-3.862,P均=0.000),AML、ALL两组间差异无统计学意义(Z=-0.794,P=0.427)。结论急性白血病患者CDX2 mRNA表达上调与其启动子甲基化状态无明显相关性。     

死亡相关蛋白激酶在急性白血病细胞中的表达及临床意义

目的 探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)表达与急性白血病(AL)患者临床特征之间的关系.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测DAPK mRNA在54例AL患者(AL组)及18例骨髓移植供者和健康体检者(对照组)骨髓细胞或外周血中的相对表达量.结果 AL组DAPK mRNA表达量(0.104 8±0.094 1)明显低于对照组(0.356 7±0.106 1),差异有统计学意义(P＜0.01).急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DAPK mRNA表达(0.057 7±0.099 5)低于急性髓系白血病(AML)患者(0.119 80±0.088 42),差异有统计学意义(P=0.003 7).DAPK mRNA表达改变与患者WBC计数、纤维蛋白原呈正相关(P＜0.05);与患者的性别、年龄、AML亚型、初诊AL第一次诱导缓解治疗疗效等结果均无相关性(P＞0.05).结论 DAPK mRNA表达在白血病细胞中显著降低.     

抗凋亡基因Livin在成人急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义

目的 探讨成人急性淋巴细胞白血病(ALL)原代细胞Livin基因的表达及临床意义.方法 采用RT-PCR检测52例成人急性淋巴细胞白血病患者Livin基因表达与否及相对表达水平,以12名健康人为正常对照.结果 LivinmRNA在初治ALL患者中的阳性表达率明显高于正常对照组(P＜0.05);治疗缓解后表达率明显下降(P＜0.05);复发后其表达率又升高.在初治成人ALL患者中,Livin mRNA表达阳性的患者完全缓解率低于表达阴性的患者(P＜0.05).结论 Livin基因的表达可能和成人ALL的发病、复发相关;Livin基因阳性表达的患者完全缓解率低,预后不良;Livin基因检测可能作为成人急性淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一.     

急性白血病患者WIF-1基因启动子甲基化及β连环蛋白表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者Wnt抑制因子1(WIF-1)基因启动子甲基化及β连环蛋白(β-catenin)的表达在白血病中的意义.方法 采用甲基化特异性PCR检测山东大学附属千佛山医院2009年1月至2010年6月55例AL患者及对照组骨髓单个核细胞WIF-1基因启动子甲基化情况,流式细胞术检测AL患者及对照组骨髓单个核细胞β-catenin表达.结果 32.7％(18/55)的AL患者WIF-1基因启动子区域有异常甲基化,对照组末检测到WIF-1基因甲基化,两组差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组首次诱导治疗完全缓解率(38.9％,7/18)低于非甲基化组(81.1％,30/37),差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组与非甲基化组β-catenin的表达(17.5％±3.3％、15.4％±3.6％)均高于对照组(10.5％±1.5％,均P＜0.05);甲基化组β-catenin的表达高于非甲基化组(P＜0.05).结论 WIF-1基因启动子甲基化及β-catenin过表达可能参与了AL患者Wnt/β-catenin途径的异常激活.     

The expression of WWOX and p73 in acute myeloid leukemia

目的 研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制.方法 收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况.结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化.对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象.WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义.     

食管癌组织hMSH2 mRNA的表达和启动子区甲基化

目的:检测食管癌组织中hMSH2 mRNA的表达和启动子区甲基化异常. 方法:食管癌标本及相应正常食管黏膜组织32例. 原位杂交法检测hMSH2 mRNA的表达,甲基化特异PCR(MSP)法检测错配修复基因hMSH2启动子区甲基化. 结果:食管癌组织中hMSH2 mRNA阳性表达率为46.9%,正常组织为84.4%(P＜0.05). hMSH2 mRNA阳性表达率与食管癌患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、浸润深度等均无关(P＞0.05). 食管癌组织中hMSH2启动子区甲基化发生率为34.4%,正常食管黏膜组织未发现甲基化,2组甲基化阳性率相比较差异有统计学意义(P＜0.01);高龄患者(≥70岁)癌组织中hMSH2启动子区甲基化发生率(85.7%)明显高于较低龄患者(＜70岁)(20.0%)(P＜0.05);病理组织学Ⅲ,Ⅳ级食管癌组织中hMSH2启动子区甲基化发生率(70.0%)高于Ⅰ,Ⅱ级(18.2%)(P＜0.05). 食管癌组织中hMSH2 mRNA阳性组启动子区甲基化的发生率(13.3%)低于hMSH2 mRNA表达阴性组(53.0%)(P＜0.05). 结论:hMSH2的表达缺失是食管癌发生的早期事件;食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化与患者年龄和肿瘤病理类型可能有关;hMSH2基因的失活与其甲基化有一定关系.     

急性白血病细胞中TSLC1基因表达及其甲基化的研究

目的检测急性白血病(acute leukemia,AL)细胞中肺癌肿瘤抑制物1(TSLC1)基因表达及其甲基化的状况,并探讨其在AL的发生、发展中的作用及其临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测40例AL患者(AL组)及10例对照者(对照组)骨髓细胞中TSLC1 mRNA的表达情况;应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测40例AL患者TSLC1基因甲基化情况。结果对照组10例患者均表达TSLC1 mR-NA,而AL组40例患者中17.5%(7/40)表达TSLC1 mRNA,两组患者的TSLC1 mRNA阳性表达率间差异有统计学意义(χ2=20.73,P<0.01);对照组10例患者TSLC1基因均无甲基化,40例AL患者中55%存在TSLC1基因甲基化;急性髓细胞白血病患者和急性淋巴细胞白血病患者TSLC1 mRNA阳性表达率、TSLC1基因甲基化表达率间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 AL中TSLC1-mRNA的失表达与其甲基化有关,可能是AL发生、发展的原因之一,可能对AL的早期诊断和预后评估有重要意义。     

Daxx在恶性血液病中的表达

目的 研究Daxx在血液病患者骨髓单个核细胞中的表达及其与急性白血病分类的关系.方法 应用RTPCR方法从mRNA水平检测了100例恶性和21例良性血液病患者骨髓单个核细胞中Daxx的表达,并分析了其与急性白血病分类的关系.结果 急性髓样白血病组(0.75±0.28)、其他血液系统恶性疾患组(0.57±0.34)Daxx的表达水平均显著高于良性组(0.33±0.19),差异均有极显著性意义(均P＜0.01);急性髓样白血病组Daxx的表达水平显著高于急性淋巴细胞白血病组(0.42±0.21),差异有极显著性意义(P＜0.01).结论 Daxx在血液病中广泛表达,在恶性组中高表达,其表达的高低与急性白血病的分类有关.     

多基因启动子甲基化参与的乳腺癌MCF-7对他莫昔芬敏感性探究

目的 探讨多基因启动子甲基化参与的乳腺癌MCF-7对他莫昔芬敏感性的关系.方法 用MTT法对比乳腺癌MCF-7细胞株与耐药株生长增殖差异;流式细胞检测亲本与耐药株细胞凋亡之间的差异;RT-PCR及Real-Time PCR对比两细胞株相关基因mRNA表达差异;甲基化特异性PCR(MSP)检测4个候选基因(DAPK、MGMT、P53、RASSF1A)在亲本及耐药株中的甲基化状态.结果 Real-Time PCR可见MCF-7/TAM细胞中抑癌基因DAPK、RASSF1A水平低于亲本株(P＜0.05);而MGMT、P53、DNMT1、DNM3B的mRNA表达水平却较亲本细胞株升高(P＜0.05);基因DNMT3A的mRNA表达水平较低,在亲本及耐药株中均未检出.MSP显示,在MCF-7细胞中,DAPK、P53呈非甲基化状态,而对他莫昔芬细胞株这2个基因为甲基化状态.结合Real-Time PCR检测结果,基因甲基化状态与甲基转移酶(DNMT1、DNMT3B)表达呈正相关性;除P53基因外,基因mRNA表达水平与甲基化状态呈负相关性.结论 相关基因表达差异及启动子的甲基化状态可能与乳腺癌细胞株对他莫昔芬敏感性相关,为下一步进行临床评估和机制探讨提供了依据.     

急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达

目的：检测GLIPR1基因在急性髓系白血病（AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。 方法：以5株白血病细胞株, 以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞胞白血病（ALL）患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1 mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR（MS-PCR）方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1 mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。 结果：GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平（0.38±0.20）明显低于ALL骨髓（0.76±0.18）、CML骨髓（0.80±0.14）和对照骨髓（0.85±0.12）,在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓（0.78±0.13 vs. 0.36±0.20）;而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓（37.5%)、CML骨髓（27.5%)和对照骨髓（14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5% vs. 75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论：GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。     

Expression of MRP1 gene in acute leukemia

CONTEXT AND OBJECTIVE: Overexpression of the multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) gene has been linked with resistance to chemotherapy in vitro, but little is known about its clinical impact on acute leukemia patients. Our aim was to investigate the possible association between MRP1 gene expression level and clinical outcomes among Iranian leukemia patients. DESIGN AND SETTING: This was an analytical cross-sectional study on patients referred to the Hematology, Oncology and Stem Cell Research Center, Sharyatee Public Hospital, whose diagnosis was acute myelogenous leukemia (AML) or acute lymphoblastic leukemia (ALL). All molecular work was performed at NIGEB (public institution). METHODS: To correlate with prognostic markers and the clinical outcome of acute leukemia, MRP1 gene expression was assessed in 35 AML cases and 17 ALL cases, using the quantitative real-time polymerase chain reaction and comparing this to the chemotherapy response type. RESULTS: Mean expression in AML patients in complete remission (0.032 +/- 0.031) was significantly lower than in relapsed cases (0.422 +/- 0.297). In contrast, no significant difference in MRP1 mRNA level was observed between complete remission and relapsed ALL patients. There was a difference in MRP1 expression between patients with unfavorable and favorable cytogenetic prognosis (0.670 +/- 0.074 and 0.028 +/- 0.013, respectively). MRP1 expression in M5 was significantly higher (p-value = 0.001) than in other subtypes. CONCLUSIONS: The findings suggest that high MRP1 expression was associated with poor clinical outcome and was correlated with the M5 subtype and poor cytogenetic subgroups among AML patients but not among ALL patients.     

IL-12B基因启动子区异常甲基化与卵巢子宫内膜异位症的发病风险相关性研究

目的探讨白细胞介素12B(interleukin-12B,IL-12B)基因启动子区甲基化状态及其mRNA在异位内膜和正常内膜组织中的表达水平,分析其在卵巢子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）中的作用。 方法应用焦磷酸测序和实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）技术分别检测50例卵巢EMs患者异位内膜组织和44例对照妇女正常内膜组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平和mRNA的表达情况。 结果与正常内膜组织相比,卵巢EMs患者异位内膜组织中IL-12B基因启动子区呈现明显的低甲基化状态(P＜0.001),而mRNA的表达水平则显著高于对照妇女正常内膜组织(P＜0.001)。相关性分析显示组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平与其mRNA表达水平呈明显负相关(r=-0.510,P＜0.001)。 结论IL-12B基因启动子区异常甲基化水平导致mRNA表达水平的改变可能在卵巢EMs的发生发展中起重要作用。     

乳腺浸润性导管癌中CDH1基因甲基化状态及其临床意义

目的 探讨CDH1启动子基因甲基化在乳腺浸润性导管癌中的意义.方法 采用甲基特异性PCR和免疫组织化学染色方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织中CDH1基因启动子甲基化状况及上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.收集相关临床病理资料(遗传背景、年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤细胞分级、临床分期和分子亚型),分析CDH1基因甲基化在乳腺癌中的意义.结果 250例乳腺癌患者共发现113例CDH1基因启动子甲基化,甲基化率为45.20％,CDH1基因启动子甲基化组和非甲基化组相比E-cadherin蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(x2 =21.360,P＜0.01).单因素分析结果显示,CDH1基因甲基化组和非甲基化组在腋窝淋巴结转移(x2=19.086,P＜0.01)、肿瘤组织学分级(x2=8.487,P=0.014)、人表皮生长因子受体2(CerbB-2)表达(x2=9.475,P=0.002)和分子分型(x2 =25.482,P＜0.01)比较,差异有统计学意义.COX回归分析显示,CDH1基因启动子甲基化和非甲基化组5年生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CDH1基因启动子甲基化引起基因mRNA表达下降,CDH1基因甲基化与乳腺癌的腋窝淋巴结转移相关,提示CDH1基因启动子甲基化在乳腺癌疾病进程中发挥了一定作用.     

急性髓系白血病病人CDH13基因甲基化状态检测及其临床意义

目的:检测急性髓系白血病(AML)病人CDH13基因甲基化状态,探讨其与病人临床特征及预后的相关性.方法:用甲基化特异性PCR法分别检测34例AML病人(AML组)和22例非恶性肿瘤的缺铁性贫血病人(对照组)骨髓标本中CDH13基因启动子甲基化状态,用半定量反转录PCR法检测2组标本中CDH13 mRNA相对含量.AML组病人随访2年,统计总体生存时间.结果:AML组标本CDH13基因甲基化阳性率为61.76%,高于对照组的27.27%(P<0.05);AML组CDH13mRNA相对含量为0.355 ± 0.109,明显低于对照组的0.745 ± 0.271(P<0.01).不同性别、年龄以及临床分型AML病人的CDH13基因甲基化差异均无统计学意义(P>0.05).Kaplan-Meier生存曲线分析显示,CDH13基因甲基化阳性的AML病人总体生存时间为(12.4 ± 3.3)个月,明显短于甲基化阴性病人的(18.6 ± 4.1)个月(P<0.01).结论:AML病人中存在CDH13基因甲基化现象,检测CDH13基因表达水平有助于判断AML病人预后.     

WWOX和p73基因在急性髓细胞白血病中的表达

目的研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制。方法收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况。结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化。对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象。WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义。     

Dickkopf1(DKK-1)基因甲基化在急性白血病中的表达分析

目的探讨WNT/β-catenin通路的关键抑制因子Dickkopf1(DKK-1)基因异常甲基化与急性白血病(AL)发病机制的相关性。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测4个AL细胞系(NB4、Jurkat、Molt-4、CEM)、65例AL患者及20例正常对照骨髓单个核细胞中DKK-1基因mRNA的表达情况;采用甲基化特异性PCR(M SP)方法检测各标本及细胞系中DKK-1基因启动子区域的甲基化状态。结果与正常对照组比较,AL患者DKK-1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05);正常对照组标本单个核细胞中不存在DKK-1基因的甲基化;DKK-1在AL患者中甲基化率为37.7%(24/65),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中甲基化率为41.2%(14/34),急性髄系白血病(AML)患者中甲基化率为28.6%(10/31)。结论 DKK-1甲基化及异常表达在急性白血病中是一种较为普遍的现象,其参与了部分急性白血病的发病过程。     

启动子DNA甲基化抑制白血病患者WT1基因的表达

目的 研究白血病患者WT1启动子区域DNA甲基化与WT1表达水平之间的关系及临床意义.方法 利用RT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP)检测64例白血病患者、56例对照者骨髓内WT1mRNA水平及DNA甲基化状态.结果 骨髓中WT1表达率与WT1启动子DNA甲基化程度呈负相关性,在急性白血病患者(初诊、复发及未缓解者)和慢粒进入加速期和急变期患者骨髓中WT1启动子DNA甲基化率低于健康者和非白血病患者.结论 WT1启动子区域DNA甲基化抑制WT1mRNA表达.激发WT1启动子区甲基化从而抑制WT1表达,与急性白血病发生转化有关,可以作为治疗和预防白血痛发生的一个研究方向和方法.     

Study on P16 gene in acute leukemia

P1 6gene is located in human chromosome9P2 1 ,the function of which is to suppresscancer.Itencodes 1 6 ku molecular weight nuclear phosphateprotein,regulates activity of cyclin- dependent kinaseK( CDK4) ,controlscellulartransition from G1phaseto Sphae and cellular proliferation.P1 6gene isasso-ciated with the development,progression and malig-nant changes of many,tumors[1] .In this study weexamined changes of P1 6gene expression in acuteleukemia.1　MATERIALSAND METHODS1 .1　 Samples…