沉默lncRNA PCA3减少前列腺癌细胞雄激素受体表达抑制前列腺癌细胞增殖和转移

目的 研究沉默lncRNA PCA3 对前列腺癌细胞的影响。方法 选择前列腺癌细胞LNCaP 和C4-2 细胞,使用siRNA 干扰PCA3 在细胞内的表达,实时定量PCR 法检测干扰效果,检测siRNA 干扰PCA3 后对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,Western blot 法在前列腺癌C4-2 细胞内分别检测雄激素受体及其变体7 的表达情况。结果 PCA3 特异性的siRNA 可明显抑制前列腺癌细胞内PCA3 mRNA 的表达,抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭潜能。沉默PCA3 后的C4-2 细胞内雄激素受体及其变体7 表达明显减少。结论 沉默lncRNA PCA3可减少前列腺癌细胞内AR 及AR-V7 的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖和迁移等恶性转变。     

雄激素受体反义RNA对前列腺癌细胞雄激素受体表达的抑制作用研究

目的 观测雄激素受体（AR）反义RNA逆转录病毒表达载体在前列腺癌细胞中的表达及其对AR表达的影响。方法 将AR反义RNA逆转录病毒表达载体导入前列腺癌细胞株LNCaP，PCR检测AR目的片段在重组LNCaP细胞基因组中的存在，RT－PCR检测AR反义RNA表达和AR mRNA水平，Western blot检测AR蛋白表达水平。结果 PCR在LNCaP^as-AR基因组DNA中扩增出了AR目的片段，表明AR目的片段整合到了细胞基因组。RT－PCR证实LNCaP^as-AR有AR反义RNA表达，且其AR mRNA水平较LNCaP和空载体转染的LNCaP^Neo显著下调（P＜0.05)，Western blot证实LNCaP^as-AR细胞AR蛋白含量显著下降（P＜0.05)。结论 AR反义RNA可抑制前列腺癌细胞AR表达。     

雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化

目的:从雄激素受体表达水平变化的角度,探讨雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化的可能机理。方法:体外培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP细胞)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC-3细胞),应用流式细胞术测定两种细胞株在生理盐水和二氢睾酮(DHT)作用下雄激素受体(AR)的表达水平。结果:两种细胞株均有AR表达,两种条件下AR的表达水平分别为:LNCaP细胞生理盐水处理组85.99±4.97,DHT处理组93.74±3.63;PC-3细胞生理盐水处理组8.52±1.57,DHT处理组9.52±1.75,两种条件下LNCaP细胞的AR表达水平均高于相应条件下PC-3细胞的AR表达水平,两者有显著性差异(P<0.05)。DHT作用下LNCaP细胞的AR表达水平显著高于生理盐水作用下LNCaP细胞的AR表达水平(P<0.05);DHT作用下PC-3细胞的AR表达水平与生理盐水作用下PC-3细胞的AR表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:雄激素依赖性前列腺癌细胞过表达AR,并且二氢睾酮能促进其表达AR;雄激素非依赖性前列腺癌细胞AR表达较少,二氢睾酮对其AR表达无明显作用,雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化可能与前列腺癌雄激素受体表达水平下降有关。     

前列腺癌相关雄激素受体突变体的促细胞增殖效应

目的评价前列腺癌相关雄激素受体突变体(mtAR)对细胞生长的促进作用。方法利用三种腺病毒表达载体:野生型雄激素受体(Ad-wtAR);一个被广泛研究的前列腺癌(CaP)相关的mtAR(Ad-mtAR,T877A);以及作为对照的腺病毒载体,我们评价并比较了野生型AR及mtAR的促细胞生长效应。结果相对于被野生型或者对照的腺病毒转染的LNCaP、PC3细胞,转染mtAR的LNCaP、PC3细胞无论有无合成的雄激素(R1881)存在的情况下均显示出更强的细胞增殖作用。并且,用腺病毒载体转染T877A的LNCaP和PC3细胞显示了对R1881更强的反应性。结论这些发现提出了崭新的关于mtAR在CaP细胞中作用的细胞生物学方面的见解,并且表明mtAR(T877A)可能为前列腺癌病程的进展提供了选择性的细胞生长的便利。     

雄激素受体表达在前列腺癌中的意义

[摘要] 目的 探讨雄激素受体(AR)在前列腺癌（PCa）中表达的意义。方法 应用免疫组化Elivison法,检测53例PCa和50例前列腺增生患者组织标本中AR的表达,并探讨AR蛋白表达与PCa分级的关系。结果 AR在PCa和前列腺增生中阳性表达率分别为90.6％ 和58％,阳性表达率(P＜0.005)及表达程度差异均有显著性 (P＜0.0001)：Gleason评分≤7和Gleason评分>7PCa中阳性表达率分别为85.2％ 和96.2％,两组阳性表达率差异无显著性 (P＞0.05),但低分化PCa(Gleason评分>7)AR阳性表达程度显著增强(P<0．0001)。结论 AR在PCa患者中有较高表达,其阳性表达程度也较前列腺增生患者要高,并且AR阳性表达程度与PCa患者的分级有明显的相关性,对判断PCa的预后及指导治疗有一定的临床意义。 [关键词] 雄激素受体; 前列腺增生; 前列腺肿瘤     

睾酮对人单核细胞雄激素受体蛋白表达的影响

目的 研究不同浓度的睾酮对人单核细胞中雄激素受体(AR)蛋白表达的影响。方法 对培养的人单核细胞株THP-1予不同浓度的睾酮刺激,采用Western blotting检测细胞中AR蛋白表达量,进行半定量比较。结果 人的单核细胞中存在AR。AR表达量随睾酮浓度的增加而减少。加用选择性受体阻滞剂氟他胺可使这种作用完全阻滞。结论 AR表达量随睾酮浓度的增加而减少,并具有一定的时间、剂量依赖性。     

睾酮对人单核细胞雄激素受体蛋白表达的影响

目的 研究不同浓度的睾酮对人单核细胞中雄激素受体(AR)蛋白表达的影响。方法 对培养的人单核细胞株THP-1予不同浓度的睾酮刺激，采用Westem blotting检测细胞中AR蛋白表达量，进行半定量比较。结果 人的单核细胞中存在AR。AR表达量随睾酮浓度的增加而减少。加用选择性受体阻滞剂氟他胺可使这种作用完全阻滞。结论 AR表达量随睾酮浓度的增加而减少，并具有一定的时间、剂量依赖性。     

核转出蛋白对前列腺癌雄激素受体稳定性的调节

目的：探讨位于雄激素受体(androgen receptor, AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor, NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制。方法：绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)融合蛋白表达载体pEGFP-AR(1-918aa),pEGFP-NESAR(743-817aa),pEGFP-NAR (1-665aa)和pEGFP-NAR-NESAR,及NESAR的赖氨酸突变体（赖氨酸K突变为精氨酸R）pEGFP-NESAR K776R,pEGFP-NESAR K807R和pEGFP-NESAR K776R/K807R,瞬时转染前列腺癌细胞PC3后,采用荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫沉淀,检测NESAR对雄激素受体稳定性的调节。结果：在荧光显微镜下,含NESAR的融合蛋白呈胞浆定位,荧光信号强度比不含NESAR的融合蛋白明显减弱,且含NESAR的融合蛋白表达水平显著低于不含NESAR的融合蛋白表达水平。在蛋白合成抑制剂放线菌酮处理下,GFP-NESAR和GFP-NAR-NESAR的半衰期小于6 h,而对照GFP和GFP-NAR的表达相对更稳定,半衰期大于24 h。融合蛋白GFP-NESAR在蛋白酶体抑制剂MG132的处理下,其蛋白表达显著增加,并呈现剂量依赖性,而MG132对GFP蛋白稳定性没有显著影响;在蛋白合成被抑制的情况下,MG132同样显著抑制了GFP-NESAR融合蛋白的降解,且蛋白表达呈剂量依赖性的增加。GFP免疫沉淀的结果显示,GFP-NESAR融合蛋白的泛素化水平明显高于GFP对照。赖氨酸位点K776和K807突变的NESAR的泛素化水平显著降低,且蛋白稳定性提高,赖氨酸位点K776和K807是介导NESAR发生泛素化的关键氨基酸残基。结论：核转出蛋白NESAR具有降解不稳定性,作为多聚泛素化修饰的识别信号,介导了其融合蛋白在前列腺癌细胞中通过泛素-蛋白酶体途径的降解。本研究为AR蛋白水平和/或活性的调控开辟一种新的研究思路,有助于对AR降解分子机制的了解和在前列腺癌产生去势抗性的过程中对AR靶向的密切调控。     

雄激素受体在前列腺增生和前列腺癌组织中的表达

目的探讨雄激素受体(AR)在前列腺特异性抗原高的良性前列腺增生(BPH)组织和前列腺癌(PCa)组织中表达的意义。 方法采用免疫组化和RT-PCR法研究AR在32例前列腺特异性抗原(PSA)≥10ng／mL的BPH(简称高PSA组)、40例PCa组织中表达的情况;32例PSA<10ng／mL的BPH(简称低PSA组)组织为对照组。 结果低PSA组、高PSA组、PCa组AR表达的阳性率分别为84.38％、93.75％、65.00％,相互比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。AR在高PSA组上皮、间质组织中的表达高于低PSA组和PCa组织(P<0.05)。高分化癌、中分化癌、低分化癌的AR表达的阳性率分别为66.67％、55.56％、30.00％,高、中分化癌的AR表达的阳性率比低分化癌高(P<0.05)。早期前列腺癌的AR表达阳性率(68.75％)比晚期前列腺癌(41.67％)高(P<0.05)。早期前列腺癌的AR mRNA表达量比晚期前列腺癌高(P<0.05);高、中分化癌的AR mRNA表达量比低分化癌高(P<0.05)。 结论AR在高PSA组前列腺增生组织中表达增高,提示其在前列腺增生中的过表达可能是PSA增高的又一因素。AR的表达与肿瘤分级、分期相关。     

前列腺癌AR表达与细胞增殖的关系

目的探讨113例人前列腺癌雄激素受体(AR)与增殖相关因子表达的相关性.方法应用免疫组化标记AR、细胞增殖相关因子(Ki67、PCNA).EGFR及核仁组成区AgNOR染色,结合光镜、电镜观察及图像分析等方法,研究AR表达与PCa增殖的相互关系.结果前列腺癌AR(-)组细胞增殖作用较AR( )组明显增强.结论AR突变,造成PCa细胞的无限增殖能力增强,细胞生长迅速,异质性更明显,可能是PCa难于治疗的原因之一.     

敲低EEFSEC可体外抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨硒代半胱氨酸tRNA特异性真核延伸因子（EEFSEC）对人前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR法检测人正常前列腺细胞系RWPE1和人前列腺癌细胞系22Rv1、LNcap、Vcap、PC-3细胞中EEFSEC mRNA的表达;收集前列腺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用Western blot法检测前列腺癌组织中EEFSEC的蛋白表达情况。慢病毒感染22Rv1 细胞,Western blot检测敲低效率;XTT实验检测各组细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验用来检测细胞迁移能力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期;qRT-PCR检测敲低EEFSEC后周期相关基因的mRNA水平的变化。结果 与对照组相比,EEFSEC在前列腺癌中高表达（P<0.05）;且EEFSEC高表达导致前列腺癌患者不良预后;感染敲低EEFSEC的慢病毒后,可明显降低22Rv1细胞中EEFSEC的蛋白表达水平;与对照组相比,敲低EEFSEC可显著抑制22Rv1细胞的增殖（P<0.001）,迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.001）;敲低EEFSEC细胞周期主要阻滞在G0/G1期,qRT-PCR实验显示敲低EEFSEC可明显下调C-myc和CCNB1的表达,上调p15的表达。结论 敲低EEFSEC可能通过降低C-myc表达来抑制前列腺癌细胞22Rv1的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-221在前列腺癌细胞中的表达及对增殖的影响

目的研究前列腺癌细胞中miR-221的表达情况及其对癌细胞增殖的影响。方法运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异情况,利用细胞转染构建miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,再通过CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖情况的变化。结果 qRT-PCR检测细胞株发现miR-221在PC3、LNCa P和DU145三种前列腺癌细胞株中表达量均比前列腺正常细胞株Pr EC低(F=254.197,P<0.001),其中两两比较差异也均有统计学意义。细胞转染技术构建的miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,经qRT-PCR结果显示,miR-221在LNCa P和DU145细胞株中的表达水平明显升高(LNCa P,倍数变化=2.24,t=3.46,P<0.01;Du145,倍数变化=2.24,t=4.29,P<0.01)。细胞增殖实验结果显示,过表达了miR-221的LNCa P(P<0.001)和DU145(P<0.001)细胞生长速度慢于对照组。结论实验证明miR-221表达过度能减慢前列腺癌细胞的增殖,miR-221有可能成为前列腺肿瘤治疗的生物学标志物。     

甲基泼尼松龙对体外培养兔雪旺细胞迁移及增殖的影响

目的:观察及评价甲基泼尼松龙对体外培养的兔雪旺细胞迁移及增殖的影响.方法:将预变性7 d的新西兰兔坐骨神经植块分成3组培养:空白对照组(A)用含胎牛血清的DMEM培养液,小剂量甲基泼尼松龙组(B)、大剂量甲基泼尼松龙组(C)培养液中分别加入0.1 mg/L和1.0 mg/L的甲基泼尼松龙.比较各组植块雪旺细胞迁移出的时间和距离;各组第2代雪旺细胞继续培养10 d,隔日于相差显微镜下观察计数,计算增殖指数,并于传代后24 h和72 h进行流式细胞术分析处于S期的雪旺细胞的百分比.结果:与A组比较,B组和C组雪旺细胞迁出的速度和距离、第2代雪旺细胞各时间点的增殖指数和S期细胞百分比均较大(P＜0.05);B组和C组各指标间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:甲基泼尼松龙能增强体外培养雪旺细胞的迁移及增殖能力,进而有助于促进周围神经损伤的再生与修复.     

和厚朴酚对人舌癌CAL-27细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨和厚朴酚（HNK）对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养CAL-27细胞。并将其分为对照组和3个实验组,实验组分别加入20、40、60 μmol/L的HNK进行处理。用MTT法检测 不同浓度和厚朴酚对CAL-27细胞增殖的影响;划痕实验观察CAL-27细胞迁移能力;Hoechst33342荧光染色法和Annexin VFITC/PI法检测CAL-27细胞凋亡数及凋亡率;Western blot检测CAL-27细胞内p-Pi3k、p-Fak、Fak、MMP2、MMP9、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量。结果 HNK（0、20、40、60 μmol/L）处理24 h后CAL-27细胞增殖、迁移能力减弱;且随HNK浓度增大细胞凋亡数升高,凋亡率分别为（6.53±1.80）%、（15.24±2.06）%、（35.03±2.42）%、（48.13±4.61）%,细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9和Bcl-2蛋白表达量减少而Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加（P<0.01）。结论 HNK能抑制CAL-27细胞体外增殖及迁移,同时还能诱导其凋亡,作用机制可能与调控细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量有关。     

RNA干扰沉默雄激素受体基因对前列腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的设计、合成针对雄激素受体(AR)基因的具有高干扰效率的si RNA,观察其对前列腺癌细胞的生长抑制作用。方法设计、合成多个针对AR的si RNA,转染前列腺癌细胞LNCaP,筛选出对AR基因干扰效率最高的ARsi RNA,用RT-PCR检测AR mRNA水平,并计算细胞生长抑制率。结果采用Silencer si RNA Construction Kit成功合成了ARsi RNA,转染LN-CaP细胞,筛选出一个对其生长抑制作用最强的si RNA,并证实AR mRNA水平显著下降,LNCaP细胞的生长抑制率为78.2%。结论针对雄激素受体的si RNA可沉默雄激素受体基因,并抑制前列腺癌细胞的生长。     

MTBP调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的研究鼠双微体2 癌基因结合蛋白（MTBP）对人前列腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用 Western blot检测MTBP在22RV1、DU145及Lncap三种不同前列腺癌细胞中的表达水平。采用siRNA及MTBP质粒分别转染 细胞,转染48 h后,用Western blot检测MTBP蛋白的表达量,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂 直迁移及侵袭能力。用Western blot 检测细胞上皮间质转化（EMT）标志分子E-cadherin蛋白表达量的变化。结果在前列腺癌 细胞中,MTBP在转移性前列腺癌细胞DU145中表达最高,Lncap细胞次之,局限性前列腺癌细胞22RV1中最低,MTBP的表达 水平与前列腺癌细胞的转移侵袭能力呈正相关。siRNA干扰及MTBP质粒转染细胞分别能显著降低或提高前列腺癌细胞中 MTBP的蛋白表达水平。划痕实验结果显示抑制MTBP的表达后,前列腺癌细胞的迁移能力降低,而MTBP过表达能显著促进 前列腺癌细胞的迁移（P<0.01）。Transwell实验发现抑制MTBP的表达可降低前列腺癌细胞的迁移侵袭能力,而MTBP过表达 后,能显著促进前列腺癌细胞的迁移侵袭能力（P<0.01）;Western blot 结果显示抑制MTBP的表达可使前列腺癌细胞的Ecadherin 蛋白表达水平升高,而MTBP过表达的前列腺癌细胞中E-cadherin蛋白表达水平降低。结论MTBP可促进前列腺癌 细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与诱导EMT有关。     

Effects of blocking androgen receptor expression with specific hammerhead ribozyme on in vitro growth of prostate cancer cell line

Aseriesofstudieshaveindicatedthatandrogenreceptor(AR) playsakeyroleinthedevelopmentofprostatecancerbymediatingandrogenactivityontargetcells 1Ithasbeen proposedthatdecreasingandrogenandARlevelscouldbeaneffectivetherapeuticstrategyforprostatecancer 2 　InthisstudyaribozymeapproachtoselectivedegradationofARmRNAwasusedtoexploretheeffectsofblockingARexpressiononinvitrogrowthofhumanprostatecancercells METHODSRibozymedesignandsynthesisUsingtheMFOLDcomputerprogramanARspecificribozyme(RZ)was…