莱菔硫烷对RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的调控作用

目的 观察莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对RhoC稳定敲低的口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA的影响。方法 选取口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA进行培养，用不同浓度的SFN处理对数期CAL27RhoC/shRNA细胞，通过RT-PCR和western blot检测SFN对细胞中Nrf2 RNA和蛋白水平的影响。分别通过MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测SFN对口腔鳞癌细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响；PHOD染色检测SFN对口腔鳞癌细胞F-actin聚合能力的影响。结果 应用SFN能有效抑制口腔鳞癌细胞CAL27 RhoC/shRNA的增殖能力、克隆形成能力、侵袭能力和F-actin蛋白聚合能力。结论 SFN可减弱RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的恶性能力。     

KLF4对口腔鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨KLF4对人口腔鳞癌细胞CAL27的增殖抑制作用.方法 构建KLF4慢病毒表达载体,并转染人口腔鳞癌细胞系CAL27,转染不含KLF4开放读码框的慢病毒载体LV105作为对照.采用RT-PCR、免疫细胞化学法对KLF4表达进行鉴定.MTT实验、流式细胞术检测KLF4对口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖抑制作用.结果 RT-PCR、免疫细胞化学实验均表明实验组细胞KLF4的表达明显高于对照组(P＜0.01).MTT实验结果表明与对照组CAL27/LV105组相比,CAL27/KLF4能够抑制细胞的增殖能力(P＜0.01).CAL27/KLF4主要通过使细胞周期中的G2/M期阻滞来抑制CAL27细胞的增殖(P＜0.01).结论 KLF4转染能够抑制口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖能力,可能在口腔鳞状细胞癌中作为抑癌基因发挥作用.     

山竹醇对人口腔鳞癌细胞糖酵解代谢通路的影响

目的 观察山竹醇(Garcinol)对人口腔鳞癌细胞系CAL27增殖和克隆形成能力的影响,以及对CAL27细胞糖酵解代谢的影响. 方法 培养人口腔鳞癌细胞系CAL27,不同浓度的Garcinol处理CAL27细胞, MTT法检测其对细胞增殖能力的影响.克隆形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响.RT-PCR检测Garcinol对细胞内糖酵解通路关键酶表达的影响,以及对糖酵解通路的重要基因表达的影响.并检测细胞上清液中葡萄糖、乳酸含量的变化来评估Garcinol对CAL27细胞内糖酵解水平的影响.通过酶活性实验检测细胞内糖酵解关键酶(HK、PK、LDH)的酶活性变化. 结果 Garcinol能显著抑制CAL27细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);能明显抑制CAL27细胞的克隆形成能力(P<0.01).同时,Garcinol能促进糖酵解关键酶己糖激酶(HK),丙酮酸激酶(PK),乳酸脱氢酶(LDH)的基因表达,增强糖酵解关键酶(HK、PK、LDH)的酶活性(P<0.05).Garcinol也能增加AKT和mTOR的基因表达水平(P<0.05).Garcinol还能促进CAL27细胞的葡萄糖吸收和乳酸分泌.结论 Garcinol能够抑制人口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖和克隆形成能力,同时也增加了细胞内的糖酵解水平.     

二甲双胍对口腔鳞癌细胞迁移的体外作用研究

目的:从体外细胞水平研究二甲双胍对口腔鳞癌细胞迁移能力的影响，并初步探讨可能的机制和潜在价值。方法:复苏培养口腔鳞癌细胞系SCC4和CAL27,选用含不同浓度(0、2、5、10、20 mmol/L)二甲双胍培养基处理培养SCC4和CAL27细胞，CCK-8法测定细胞活性。选定二甲双胍低细胞毒性浓度后采用细胞平板克隆、细胞划痕实验测定细胞增殖和迁移能力，明胶酶谱法测定口腔鳞癌细胞的细胞基质金属蛋白酶-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)的外分泌能力，免疫印迹法对口腔鳞癌细胞内与上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)相关的蛋白表达情况进行测定。结果:低细胞毒性浓度的二甲双胍对口腔鳞癌细胞体外增殖和迁移有显著抑制作用(P<0.05)。二甲双胍能够显著抑制口腔鳞癌细胞的外分泌MMP-2/9的能力(P<0.05)。二甲双胍能显著调控口腔癌细胞中EMT相关通路标志蛋白的表达(P<0.05),抑制其信号转导。结论:二甲双胍可通过下调MMP-2/9外分泌和调控EMT相关信号转导抑制...     

酸性培养对人舌鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响及其机制研究

目的 探究酸性培养条件对人舌鳞癌细胞SCC15和CAL27增殖、凋亡、迁移能力的影响及潜在的分子机制.方法 在pH6.2的酸性培养液中分别培养一定时间,噻唑兰(MTT)法检测舌鳞癌细胞SCC15和CAL27增殖能力;流式细胞分析法检测SCC15和CAL27细胞凋亡水平的改变;划痕愈合实验检测SCC15和CAL27迁移能...     

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的 检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法 体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9表达的影响。结果 三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组（P〈0.05）,细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论 低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。     

姜黄素联合紫杉醇对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨姜黄素和紫杉醇对人口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖和凋亡的影响.方法:培养人口腔鳞癌细胞系CAL27,采用不同浓度的姜黄素和紫杉醇及联合用药处理细胞24 h、48 h及72 h.MTT法检测对细胞增殖的影响,Tunel法检测对细胞凋亡的影响,Western印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和活性caspase-3表达的影响.采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:相对于姜黄素或紫杉醇对CAL27的单独作用,两者联合用药能更显著地抑制CAL27细胞增殖和促进CAL27细胞凋亡,更显著地下调Bcl-2表达和Bcl-2/Bax表达比例,上调Bax和活性caspase-3的表达.结论:相比于单一用药,姜黄素和紫杉醇联合用药对CAL27有更好的增殖抑制和凋亡诱导作用.     

扁塑藤素对口腔鳞癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨扁塑藤素对人口腔鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其可能的作用机制.方法:体外培养人口腔鳞癌细胞系CAL-27和SCC-15,不同浓度扁塑藤素诱导两种细胞后,CCK-8实验检测扁塑藤素对两种细胞增殖能力的影响,计算扁塑藤素不同作用时间的半数抑制浓度IC50;划痕实验及Transwell小室实验分别检测扁塑藤素对口...     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

大黄素对口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨大黄素对人口腔鳞状细胞癌CAL-27及SCC-15的增殖、侵袭和迁移能力的影响及作用机制.方法:采用不同浓度的大黄素处理CAL-27及SCC-15细胞,使用CCK-8法检测其增殖活性,根据结果计算不同作用时间细胞抑制率为50％时对应的药物浓度(IC50);划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测大黄素对两种细胞迁移、侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大黄素对细胞中金属基质蛋白酶-2(MMP-2)和金属基质蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平的影响;实时定量PCR(qRT-PCR)检测大黄素对细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平的影响.结果:与对照组相比,不同浓度的大黄素均可抑制CAL-27和SCC-15细胞的增殖能力(P<0.05),且呈时间-浓度依耐性;与对照组相比,大黄素可明显降低两种细胞划痕的愈合率和侵袭细胞数(P<0.05),具有浓度依耐性;与对照组相比,经大黄素处理的两种细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05).结论:大黄素在体外可以显著抑制人OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用可能与下调MMP-2、MMP-9的表达有关.     

纳米级钛颗粒对牙周组织细胞的影响

目的通过研究纳米级钛颗粒对牙周膜细胞和牙槽骨细胞增值、分化的影响,探讨种植体脱落纳米级钛颗粒在种植体周围炎的发生、发展过程中的作用与机理。方法 利用透射电子显微镜观察实验所用纳米级钛颗粒的大小与表面形貌;分离培养12月龄 SPF级大鼠下颌第一磨牙牙周膜细胞和牙槽骨细胞,加入5×10 6粒/ml纳米级钛颗粒处理细胞,取该培养液为条件培养基,未加入纳米级钛颗粒的细胞和培养液作为对照组。培养2、4、6、8天后,倒置显微镜下观察细胞形态并计数;利用real-time PCR检测细胞培养24h后TNF-α和IL-1基因表达情况;当培养细胞发生接触抑制时,更换培养液并进行von Kossa染色后,观测钙化基质的沉积;利用real-time PCR 检测细胞成骨标志基因的表达。分离大鼠胫骨和腓骨骨髓单核细胞,阳性对照加入20ng/ml MCSF和50ng/ml RANKL处理,实验组加入纳米级钛颗粒处理的或未处理的条件培养基,培养1周后,进行TRAP染色并计破骨细胞数。结果 透射电子显微镜下,纳米级钛颗粒大小均一,直径约50~100nm,表面光滑;纳米级钛颗粒对牙周膜细胞和牙槽骨细胞增值具有微弱抑制作用,但无统计学差异( P ﹥0.05);Real-time PCR结果显示,细胞培养24h后,实验组牙周膜细胞和牙槽骨细胞TNF-α和IL-1基因表达明显增高;von Kossa染色可见,纳米级钛颗粒处理的实验组牙周膜细胞和牙槽骨细胞成骨分化能力低于对照组;纳米级钛颗粒促进牙周膜细胞和牙槽骨细胞分泌RANKL( P< 0.05),其中牙周膜细胞分泌较为显著;用含纳米级钛颗粒的条件培养基来处理大鼠骨髓单核细胞时,破骨细胞生成增多。结论 纳米级钛颗粒对体外培养牙周膜细胞和牙槽骨细胞增值无明显作用,但是对其成骨分化有明显的抑制作用;同时促进牙周膜细胞和牙周骨细胞TNF-α、IL-1及RANKL的分泌;并可促进单核细胞分化为破骨细胞。     

天然抗ABCC3 IgG抗体对口腔鳞癌细胞增殖的影响

目的探讨天然抗ABCC3 IgG抗体对口腔鳞癌细胞CAL27和SCC15的影响。方法采用ELISA方法筛查富含天然抗ABCC3 IgG抗体的阳性血浆为实验组,低含天然抗ABCC3 IgG抗体的阴性血浆为对照组。采用qRT-PCR检测ABCC3基因的mRNA表达水平。CCK-8实验和流式细胞术检测天然抗ABCC3 IgG抗体对CAL27和SCC15细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果在CAL27和SCC15细胞中均有ABCC3基因的表达。与阴性对照血浆相比较,富含ABCC3 IgG抗体的阳性血浆可以明显抑制CAL27细胞的增殖(P<0.01),促进CAL27细胞的凋亡(P<0.01),并对CAL27细胞周期中的G2/M期产生阻滞作用(P<0.01),但对SCC15细胞无明显影响。结论天然抗ABCC3 IgG抗体对口腔鳞癌细胞的增殖有抑制作用,可能成为治疗口腔鳞癌的一种有前景的新药物。     

上颌第一前磨牙根管形态的锥形束CT研究

目的利用CBCT评估上颌第一前磨牙根管解剖形态。方法收集因种植手术前评估,正畸治疗前评估,复杂疑难根管治疗等原因拍摄的CBCT 710例,根据样本纳入标准得到404例双侧CBCT图像,记录患者的姓名,性别,年龄,牙位,牙根和根管数目,牙根弯曲方向和根分叉的位置。结果上颌第一前磨牙以单根牙和多根牙多见,三根牙最少见,单根牙发生率为65.1%,双根牙发生率为34.7%,三根牙发生率为0.2%,有2例左侧颊根分为两根,为三根牙。单根牙和双根牙在男女性别间的发生率无统计学差异,根管类型中14.7%有1个根管为Ⅰ(1-1)型,85.1%为复杂的两根管类型(Ⅱ型到Ⅶ型及2-1-2-1型),只有0.2%有三根管为Ⅷ型。上颌第一前磨牙牙根弯曲的发生率为38.1%。根据弯曲方向分为5种类型,颊侧弯曲22.7%,舌侧弯曲17.3%,近中弯曲11.6%,远中弯曲42.1%,S形弯曲6.2%。上颌第一前磨牙牙根分叉的发生率为34.9%,根据分叉的部位分为根冠1/3、根中1/3、根尖1/3分叉,发生率为31.6%,44.7%,23.8%。结论上颌第一前磨牙多为单根牙,而且多为单根牙双根管,单根牙的根管形态多样,牙根多向远中弯曲,牙根分叉位于牙根中段。     

A Retrospective Study of Oral Emergency Services During COVID-19

ObjectivesThis study was performed to examine changes in the number of patient visits and types of oral services in an oral emergency department from the beginning to the control stage of the coronavirus disease 2019 (COVID-19) outbreak in Beijing.MethodsThe numbers of daily oral emergency visits from January 20 to March 24, 2020, at a dental university hospital in Beijing and daily newly confirmed COVID-19 cases in Beijing during the same period were collected and analysed. All oral emergency patient information (including sex, age, and oral diagnosis) was also collected and analysed. Patients with incomplete medical data were excluded.ResultsIn total, 12,416 patients were included in this study. The number of daily emergency visits was negatively correlated with the number of newly confirmed local COVID-19 cases in Beijing (P < .001). The number of daily emergency visits during the COVID-19 stable period in Beijing was greater than that during the outbreak period (P < .001). Compared to those in the COVID-19 outbreak period, the percentages of females, children and adolescents, patients with acute toothache, and patients with nonurgent cases were higher in the stable period, and the numbers of patients with toothache, trauma, infection, and nonemergency conditions increased in the COVID-19 stable period (P < .001).ConclusionsCOVID-19 significantly influenced the number of patient visits and the percentages of patients with oral emergency situations in the oral emergency department. There were obvious differences in treatment seeking for oral emergencies between the COVID-19 periods in Beijing. There was an inverse relationship between daily oral emergency visits and daily confirmed COVID-19 cases in Beijing.     

锥形束CT测量牙周骨下袋体积方法的建立及体外研究实验

目的建立CBCT测量牙周骨下袋体积的方法,用体外实验评价不同层厚CBCT及对不同结构骨下袋体积测量的准确性和重复性。方法在猪颌骨上制备骨缺损32个,用CBCT扫描,分别用0.1、0.125和0.15mm层厚重建,在软件中对骨缺损逐层着色并计算体积;用硅橡胶法获取实际体积。另制备一壁、二壁、三壁骨袋共20个,用CBCT测量骨下袋体积。将测量值与实际体积相比较,以检测方法的准确性。由2名检查者对随机挑选的10例骨下袋重复测量,间隔期为1周,评价测量的重复性。结果不同层厚CBCT测量的骨缺损体积与实际体积的差值均无显著性(P>0.05)。在测量不同骨壁结构的骨下袋时,CBCT测量值与实际体积间差值为(0.23±6.05)mm^3(P>0.05),占实际体积的1.13%。2名检查者重复测量的自身一致性检测的ICC值分别为0.997和0.998,检查者间一致性检测的ICC值为0.983。结论本研究建立的CBCT测量骨下袋体积的方法,用于不同骨壁结构骨下袋的体积测量时准确性高,具有可重复性。     

A survey on dental care and oral implantology in Beijing, China

In this article,we present a survey on dental care and oral implantology in Beijing, China. The Chinese population comprises 1.2 billion or about 20% of the world's population. This survey shows: (i) there is a well‐developed dental system in China, mostly operated by the Chinese government; (ii) in Beijing, there are 1328 dentists and oral surgeons and 515 special dental nurses working in dental departments of hospitals: (iii) about 2 million new patients visit the dentist every year; (iv) oral implantology is a new technology for the Chinese dentist and oral surgeon, as shown by the finding that in 1992, only 384 persons were treated with oral implants in a few hospitals in Beijing; however, most hospitals are interested in performing oral implantology in the near future; (v) imported implants are too expensive for Chinese patients, and therefore good qualified domestic implants and cheaper imported implants have a great market potential.     

人健康牙周组织龈沟液中细胞因子表达水平的初步研究

目的初步探讨人健康牙周组织龈沟液中细胞因子的普遍水平,为确立诊断指标及后续研究提供正常标准范围参考。方法选择牙周组织健康者每人4～8颗后牙(第二前磨牙及第二磨牙),检查相关临床指标,测定龈沟液分泌量,并通过微量龈沟液炎症标志物组合的Luminex液相芯片多因子检测体系测定19种细胞因子表达水平,包括3种集落细胞刺激因子、7种白细胞介素、6种趋化性细胞因子、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子-α以及干扰素-γ。结果检测到人健康牙周组织中209颗后牙(第二前磨牙103颗、第二磨牙106颗)龈沟液分泌量及所含19种细胞因子表达水平。结论初步确定人健康牙周组织龈沟液中与骨代谢密切相关的19种细胞因子的大致标准范围。     

北京部分医疗机构口腔正畸矫治疗效评价与分析

目的    对北京地区开展口腔正畸矫治的三级综合医院、区域医疗中心和民营口腔医院进行正畸矫治疗效评价工作,以便进一步改进口腔正畸医疗工作,提高正畸矫治质量。方法    2014年8月至12月,北京口腔医疗质量控制与改进中心组织相关专家制定出北京地区口腔正畸矫治疗效的评价标准,即采用专家主观评价和治疗标准（peer assessment rating,PAR）指数客观测量相结合的方法,对北京地区77家开展口腔正畸诊疗项目的三级综合医院、区域医疗中心和民营口腔医院的正畸病例矫治疗效进行综合评价,对各个医疗机构提交的正畸矫治前后的病例资料进行编号,主、客观评价均采用盲法。用SPSS19.0统计软件对评分结果进行分析。之后将此次正畸矫治疗效评价结果、改进意见和总结反馈给各医疗机构及卫生行政部门。结果    在通知的77家医疗机构中,41家医疗机构提交了正畸病例资料,提交率53.2%。此次疗效评价工作共收到122份正畸病例,其中资料完整的病例共50份（占41%）。进行主客观评价的114份病例资料的评价总分均值为87.1分,表明绝大多数的提交病例正畸矫治疗效良好。在评价的40家医疗机构中,37家（92.5%）医疗机构的评价总分为80分以上。结论    北京地区医疗机构对正畸病例资料的收集工作有待进一步加强。此次疗效评价工作中,绝大部分提交的正畸病例矫治效果良好,参与此次疗效评价工作的医疗机构的正畸矫治水平较高。     

构建EIF5 A2基因敲除Cal27细胞株及功能分析

目的运用CRISPR/Cas9技术构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞系,观察EIF5A2在口腔鳞状细胞癌增殖与迁移中的作用。方法根据EIF5A2基因结构域,设计2个CRISPR靶向位点,利用pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin构建2个导向RNA(sgRNA)质粒。将sgRNA质粒与pST1374-NLS-flag-linker-Cas9共转染至Cal27细胞中,用嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选,并挑取单克隆。将单克隆细胞的DNA进行目的片段扩增,经凝胶电泳及测序鉴定后筛选出大片段敲除细胞株Cal27-2C5及碱基突变株Cal27-2D1。real time PCR及WesternBlot鉴定两株细胞系中EIF5A2的表达情况。用Transwell实验及CCK8分别检测EIF5A2敲除对Cal27细胞的体外迁移能力及体外增殖能力的影响。结果与对照组相比,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2在mRNA水平上表达均明显降低。在蛋白水平上,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2蛋白均基本不表达。敲除EIF5A2可明显降低Cal27细胞的体外迁移能力,而对Cal27细胞体外增殖能力没有明显影响。结论成功构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞株Cal27-2C5和Cal27-2D1,并初步验证EIF5A2可以影响Cal27细胞的体外迁移能力。     

单颗后牙种植修复体咬合特征改变的临床研究

目的探讨单颗后牙种植修复体咬合特征(咬合接触时间、咬合力)的改变规律,为临床诊疗提供参考。方法选择25例第一磨牙种植患者,T-scan咬合分析仪分别记录修复完成时、修复3个月后种植修复体及其对侧同名天然牙的咬合接触时间和咬合力百分比,并进行统计学分析。结果修复完成时种植修复体咬合接触时间晚于天然牙,咬合力百分比小于天然牙;修复3个月后,种植修复体的咬合接触时间缩短0.028s,仍晚于天然牙接触;种植修复体咬合力百分比增加2.05倍,仍小于天然牙。结论第一磨牙种植义齿修复后3个月咬合特征发生改变,但暂不需要调■处理,提示应注重种植修复体咬合的定期复查。