心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

目的 探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase,cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用.方法 纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点.制作野生型cMLCK (WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感...     

人心肌肌球蛋白轻链的提取、纯化和电泳分析

用一种简便有效的方法，从１３０ｇ成人心室肌中先提职心肌肌球蛋白纯品３１８ｍｇ，再从中进一步分离和纯化得到肌球蛋白轻链１８ｍｇ。纯化肌球蛋白轻链的核酸含量＜０．０１％，基本不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，人肌球蛋白轻链１和轻链２的分子量为２４ｋＤ和２０ｋＤ。纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性为０．４６μｍｏｌＰｉ／ｍｇ／ｍｉｎ，其分离后的轻链亚基则无此活性。本文对人和猪的心室肌肌球蛋白轻链的电泳行为进行了分析。     

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。     

人心肌内肌球蛋白轻链mRNA测定新方法

采用异硫氰酸胍－苯酚－氯仿一步法提取心肌内总ＲＮＡ，随机引物将所有ｍＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ；用特异肌球蛋白轻链２（ＭＬＣ２）ｃＤＮＡ扩增引物增产ＭＬＣ２ｃＤＮＡ，以１８ｓｒＲＮＡ为内标，用激光光密度扫描仪扫描ＭＬＣ２及１８ｓｒＲＮＡ之扩增条带，计算出ＭＬＣ２ｍＲＮＡ的相对量。依此确定在不同心脏疾病状态下心肌内ＭＬＣ２ｍＲＮＡ的量。此方法重复性好，为直接从人心肌研究ＭＬＣ２对心肌收缩力的调节作用提供     

人心肌肌球蛋白的提取、纯化轻链成份的制备及其理化性质

采用比较简便、有效的提取方法,从150g人心肌中得到660mg肌球蛋白粗品,经DEAE-Sephadex A-50纯化后得到纯肌球蛋白320mg,比活力达5.05u/mg蛋白,酶活力回收36％。进一步以纯肌球蛋白制得电泳纯的心肌肌球蛋白轻链,并以之免疫新西兰兔而获得抗人心肌肌球蛋白轻链的抗血清。抗血清具有较好的特异性,亲和常数为1.16×10~9M~(-1);当稀释度为1:2000时,可用于酶联免疫吸附分析。此外,还测定了心肌肌球蛋白及其轻链成份的理化特性和酶反应动力学特征。     

人血小板肌球蛋白轻链激酶的研究

报道了人血小板匀浆上清液肌球蛋白轻链酶微量快速测定方法，对该酶的性质进行了初步研究，并建立了较为合适的测定酶活性的体系。该酶活性依赖于Ｃａ＾２＋和ＣａＭ，其半激活浓度分别为０．３５ｍｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ，ＴＦＰ能抑制该酶活性，其半抑制浓度为１５０μｍｏｌ／Ｌ。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法：32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、NaHS治疗组(DM+NaHS组)和NaHS对照组(NaHS组),每组8只。采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型。造模成功后,DM+NaHS组和NaHS组大鼠腹腔注射NaHS溶液28 μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠左心室功能指标;计算心体比;测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isozyme,CK-MB)水平;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化; RT-PCR和Western印迹分别检测心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达。结果：与NC组比较,NaHS组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05),而DM组左心室收缩和舒张功能下降,心体比明显增大(均P<0.01),血清中LDH和CK-MB水平明显增高(均P<0.01),心肌超微结构损伤明显,心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,DM+NaHS组左心室功能和心肌超微结构损伤明显改善,心体比明显降低(均P<0.05),血清中LDH和CK-MB水平明显下降(均P<0.01),MLCK mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01)。结论：外源性H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,机制可能与增强心肌MLCK表达有关。     

狗内毒素休克心肌肌球蛋白轻链磷酸化改变的研究

采用一种新方法测定并研究内毒素休克狗左心室心肌肌球蛋白可磷酸化轻链(P-LC)的磷酸化程度。结果表明正常组和内毒素组磷酸化的P-LC 分别为37.00%(±1.68)和19.58%(±3.94),后者显著降低(P<0.01)。向肌球蛋白粗提液中分别添加10~(-3)MCa~(++)、5mMATP 和100u/ml 钙调蛋白(CaM),或10~(-6)M 异丙基肾上腺素,或10~(-6)McAMP 后,正常组磷酸化的P-LC 分别为63.27%(±5.19),75.57%(±6.55)和69.30%(±6.84),较之未添加的对照组(37.00%)显著增加(P<0.01);内毒素组添加上述物质后各组磷酸化的P-LC 数值分别为48.10%(±2.99),43.12%(±5.86),和37.58%(±6.55),较之未添加的对照组(19.58%)亦有明显增加(P<0.01)。这些物质对P-LC 磷酸化的影响在内毒素组中又比正常组更为明显(P<0.05)。     

人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。     

超敏心肌肌钙蛋白T在急性冠状动脉综合征诊断中的应用

目的评价超敏心肌肌钙蛋白T（hs．cTnT）在急性冠状动脉综合征（ACS）诊断中的临床应用价值。方法收集在急诊科就诊的表现为胸部不适或呼吸短促等疑似ACS患者入院即刻（0h）及住院后4h、12h、20h的血清标本,对不同时间段标本进行hs．cTnT、传统心肌肌钙蛋白T（con．cTnT）、肌红蛋白（MYO）、肌酸激酶同工酶（CK．MB）浓度检测,比较各检测指标在疑似ACS和确诊急性心肌梗死（AMI）患者中的阳性检出率。结果在559例疑似ACS患者中,4种心肌标志物在0h检测时,hs—cTnT阳性率与con—cTnT、MYO、CK．MB阳性率比较差异有统计学意义（x。值分别为189．262、210．563和146．282,P〈0．05）;在79例AMI患者中,4种心肌标志物在0h、4h、12h、20h的不同时间点的阳性率也有较大差异,在入院0h时hs．cTnT检出阳性率与con．cTnT、MYO、CK．MB的阳性率比较差异有统计学意义（xz值分别为20．721、29．187和16．892,P〈0．05）;在入院4h时hs．cTnT阳性率与con．cTnT、MYO、CK—MB的阳性率比较差异有统计学意义（x：值分别为6．452、28．299、21．597,P〈0．05）;在人院12h时hs．cTnT阳性率与COll．cTnT、CK．MB阳性率差异无统计学意义（x2值分别为1．006和4．104,P〉0．05）,但与MYO的阳性率差异有统计学意义（x。值为41．712,P〈0．05）;在人院20h时hs．cTnT阳性率与con．cTnT阳性率差异无统计学意义（x。值为3．058,P〉O．05）,但与MYO、CK．MB的阳性率比较差异有统计学意义（x2值为102．042和19．050,P〈0．05）。结论hs．cTnT是一种敏感的心肌损伤早期诊断生物标志物,相比较con-cTnT、MYO、CK．MB能够为AMI的早期诊断提供可靠依据,是疑似ACS患者发生不良事件很好的预测指标。     

聚合酶链反应与酶联免疫吸附试验诊断结核性脑膜炎

采用脑脊液聚合酶链反应（ＰＣＲ）与抗结核抗体酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）观察结核性脑膜炎３２例，对照组３０例，以评价两种技术的诊断价值。结果显示：ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ单独应用时其敏感性及特异性无明显差异（Ｐ＞０．０５），二者作平行试验时其敏感性高达９６．８８％，明显高于两者单独应用，特异性和准确性较单独应用时差异无显著性。提示：ＰＣＲ是诊断结核性脑膜炎较有前途的技术，ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ的平行试验具有互补作用。     

t－pA ELISA测定方法的建立和应用

本文建立了测定血浆组织型纤溶酶原活化素（ｔ－ＰＡ）抗原的ＥＬＩＳＡ法，分析以该法测定ｔ－ＰＡ的最小可测浓度、回收率、稳定性和特异性，还与市售同类试剂盒同时测定的３５份血浆ｔ－ＰＡ浓度作比较。结果：测定１１１名中青年正常人的血浆ｔ－ＰＡ，均值为４．０８±２．５９μｇ／Ｌ，１３名高龄正常人平均为１７．６３±８．１５μｇ／Ｌ，明显增高（Ｐ＜０．００１）。正常人一日内血浆ｔ－ＰＡ以上午８时较高，下午４时较低；静脉阻断试验后ｔ－ＰＡ水平可明显增高（Ｐ＜０．００１）。另外，测定了９３名包括肾疾患、高血压、冠心病、急性心肌梗塞和脑梗塞以及深静脉血栓形成患者的血浆ｔ－ＰＡ，对测定结果作了分析和讨论。     

床旁临时起搏器作为AMI的常备急救设备及其在基层医院推广应用研究

目的 床旁临时起搏器作为急性心肌梗死（AMI）的常备急救设备的价值及其在基层医院推广应用的可行性研究。方法 回顾性研究分析2001-2003年间不能床旁植入临时起搏器与2004-2005年能床旁植入临床起搏器抢救AMI的住院病死率、心衰、心源性休克、2mo后再次住院发生率。临时起搏器植入术安全性的指标比较。结果 不能床旁植入临时起搏器组的住院病死率为14．58％，心衰发生率为27．08％，心源性休克发生率为12．5％，2mo后再次住院发生率为16．67％。床旁植入临时起搏器组的住院病死率为3．57％，心衰发生率为7．14％，心源性休克发生率为3．57％，2mo后再次住院发生率为3．57％，两组相比p〈0．01有显著性差异。而起搏器植入的安全性指标：起搏器植入成功率为100％，脱位率为10．7％，并发症发生率为14.3％，住院病死率3．57％。结论 床旁临时起搏器抢救AMI住院病死率低，心衰发生率、心源性休克发生率及2mo后再次住院发生率低，应作为AMI抢救的常备急救设备，另外床旁临时起搏器植入是安全的、有效的，成功率高，操作不难，在基层医院（二甲医院）可推广应用。     

FQ-PCR检测人巨细胞病毒方法的建立及临床初步应用

目的:建立快速、敏感、特异的人巨细胞病毒(HCMV)实时荧光定量聚合酶链(FQ-PCR)反应检测巨细胞病毒.方法:选择HCMV的IE(立早基因)片段,设计出上下游引物和对应的TaqMan探针建立FQ-PCR反应体系,应用克隆的质粒对体系进行优化,建立标准品并制作出标准曲线,进行重复性检测,并以其他微生物为对照进行特异性检测,最后检测50例临床乳汁标本.结果:当HCMV质粒标准品浓度在1010-106 copy/L时,相关系数R＝0.997,相关性良好,各浓度标准品的Ct值变异系数小于5％,重复性较好.其他种类的细菌、病毒均未出现特异性扩增.50例临床乳汁标本中有43例扩增出阳性,检出率为86％(43/50).结论:实时FQ-PCR检测HCMV,具有快速,灵敏,方便的特点,有助于HCMV感染的病理机制和流行病学研究.