难治性癫痫大鼠脑内多药耐药相关蛋白1表达的研究

目的 研究杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠脑内多药耐药相关蛋白1（multidrug resistant-associated protein 1 MRP1）表达的情况.方法 建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,用免疫组织化学及免疫蛋白印记（western blot）的方法,分析比较MRP1蛋白在癫痫模型组与正常对照组的表达.结果 药物难治性癫痫大鼠组脑内多药耐药相关蛋白的表达显著高于正常对照组（P〈0.01）.在癫痫大鼠脑内广泛分布的MRP1免疫阳性细胞主要为毛细血管内皮细胞和星形胶质细胞.结论 癫痫大鼠脑内高表达的MRP1参与了难治性癫痫的耐药机制.     

难治性癫痫患者脑内MDR1的表达

研究发现大约有三分之一的癫痫患者对抗癫痫药物产生耐药反应。其中又有近60%的患者为难治性癫痫。这类药物难治性癫痫患者的耐药可能机制为脑内多药转运体的过高表达从而导致脑实质内药物浓度的下降。多药耐药基因1(multidrug resistance gene1MDR1)其编码蛋白PGP(P-glycoprotein)是脑内重要的多药转运体。本实验通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),免疫组织化学和免疫蛋白印记的方法,对12例药物难治性癫痫患者脑内癫痫灶与12例对照组标本的MDR1表达进行研究。1资料与方法1.1研究对象12例药物难治性癫痫患者,均经过适当的抗癫痫药物正规…     

多药耐药相关蛋白-1在难治性颞叶癫痫患者脑组织中的表达及丙磺舒的干预作用

目的 观察难治性颞叶癫痫患者脑组织中多药耐药相关蛋白1( MRPl)及应用MRP1拮抗剂丙磺舒干预后的表达,探讨MRP1与难治性颞叶癫痫多药耐药的关系.方法 应用免疫组化检测难治性颞叶癫痫患者脑组织实验组和对照组MRP1的表达情况,同时应用免疫蛋白印记(Western blot)方法检测实验组、丙磺舒干预组和对照组MRP1的表达.结果 免疫组化结果显示MRP1在难治性颞叶癫痫患者脑组织中表达增强,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).Western blot结果显示丙磺舒干预组MRP1蛋白水平较实验组明显较少,差异有显著性(P＜0.05).结论 脑内高表达的MRP1参与难治性颞叶癫痫的耐药机制,丙磺舒可以降低脑组织内MRP1的表达.     

药物难治性癫痫大鼠脑内Bax和Bcl-2表达的研究

目的研究杏仁核电刺激点燃的药物难治性癫痫大鼠脑内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的情况。方法建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,通过药物筛选用出耐药大鼠和药物敏感大鼠,采用免疫组织化学及免疫蛋白印记（western blot）的方法,分析比较Bax和Bcl-2在耐药组与药物敏感组的表达。结果药物难治性癫痫大鼠组脑内Bax蛋白的表达显著高于药物敏感组（P〈0.01）,而Bcl-2蛋白的表达显著低于药物敏感组（P〈0.01）。结论癫痫大鼠脑内凋亡相关蛋白可能参与了难治性癫痫的耐药机制。     

多药耐药相关蛋白与难治性癫痫

难治性癫痫的发病机制尚不完全清楚,近年来发现在难治性癫痫患者病灶脑组织可检测出多药耐药相关蛋白(MRP)的过度表达,表明MRP与难治性癫痫耐药关系密切。MRP的过度表达受多种因素影响,其可能通过降低抗癫痫药物在血脑屏障的通透性,减少药物的有效浓度,从而引起抗癫痫药物耐药发生。鉴于MRP在难治性癫痫多药耐药中可能的重要作用,筛选非MRP底物的抗癫痫药物和选用适合长期服用的特异性强﹑安全性高﹑毒副作用性小的MRP抑制剂,可能会为今后临床治疗难治性癫痫翻开新的一页。     

脑发育异常性癫痫脑组织的MDR-1、MRP和GFAP表达一例并文献复习

目的：观察灰质异位性难治性癫痫中多药耐药基因蛋白（MDR-1）、耐药基因相关蛋白（MRP）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在发育异常性脑组织中的表达情况。方法：对确诊为脑灰质异位性症状性癫痫患者手术切除下病灶组织行免疫组化染色，观察脑组织中MDR-1、MRP及GFAP的表达情况。结果：在手术切除的病灶组织中，除一些增生性的星形胶质细胞同时具上述三种蛋白的阳性标记外，在一些异形的神经元内同时还存在有MDR-1和MRP的阳性表达。结论：灰质异位性难治性癫痫中MDR-1、MRP及GFAP不仅可在一些反应性的星形胶质细胞中表达，而且还可在一些发育异常的异形神经元中表达。     

凋亡抑制蛋白XIAP在难治性癫痫大鼠脑内的表达

目的研究杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠脑内凋亡抑制蛋白XIAP表达的情况。方法建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,通过药物筛选用出耐药大鼠和药物敏感大鼠,采用免疫组织化学及western blot的方法,分析比较凋亡抑制蛋白XIAP在耐药组与药物敏感组的表达。结果难治性癫痫大鼠脑内XIAP的表达明显高于药物敏感组。结论癫痫大鼠脑内凋亡抑制蛋白XIAP可能参与了难治性癫痫的耐药机制。     

MDR-1和GFAP蛋白在难治性癫痫脑组织的表达

目的：观察不同病因的难治性癫痫手术切除脑组织中多药耐药基因蛋白（MDR-1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。方法：在对22例难治性癫痫临床病理资料分析的基础上，应用免疫组化和免疫组化双标技术观察脑组织中MDR-1和GFAP蛋白的表达情况。结果：反应性胶质细胞增生是难治性癫痫共同的病理学特征。MDR-1蛋白的表达主要在一些增生性星形胶质细胞和毛细血管壁周围结构，而寡突胶质细胞、小胶质细胞及正常的神经元内无MDR-1蛋白的表达；增生性星形胶质细胞内MDR-1与GFAP具有共存现象。结论：在难治性癫痫的反应必脑胶质细胞内同时具有GFAP和MDR-1蛋白的高表达和共存。     

多药耐药蛋白对大鼠皮层细胞外液卡马西平和苯妥英钠影响的研究

目的观察多药耐药蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)拮抗剂丙磺舒对大鼠大脑皮层细胞外液卡马西平和苯妥英钠含量的影响,证明MRP能够减少皮层内抗癫痫药物的浓度,探讨脑内表达MRP和难治性癫痫多药耐药的关系。方法在健康大鼠大脑皮层内安置微透析探针,腹腔注射卡马西平(20mg/kg)和苯妥英钠(50mg/kg),在给药后不同时间点收集透析液,并用高效液相检测其中的药物浓度,通过微透析探针局部给于丙磺舒,观察后者能否提高大鼠大脑皮层细胞外液卡马西平和苯妥英钠的浓度。结果丙磺舒升高了皮层细胞外液中卡马西平和苯妥英钠的药物浓度,前者在给药后45min～120min显著增高(P<0.05),后者在给药后30min～150min显著增高(P<0.05)。结论MRP具有限制卡马西平和苯妥英钠通过血脑屏障的作用,引起抗癫痫药物在大鼠大脑皮层细胞外液中分布减低,MRP表达增加可能参与了难治性癫痫多药耐药机制的形成。     

苯妥英钠、苯巴比妥钠诱导建立难治性癫(癎)动物模型

目的探索性应用苯妥英钠（PHT）、苯巴比妥钠（PB）诱导建立难治性癫痫动物模型，并研究其多药耐药机制。方法将60只大鼠随机分为实验组50只和对照组10只；实验组给予亚抽搐剂量戊四氮腹腔注射，其中45只大鼠确定点燃．将其随机分为给药组35只和未给药组10只。给药组应用较大剂量PHT、PB腹腔注射，其间注射小剂量戊四氮．根据Racine行为分级以及脑电图改变，从中筛选出耐PHT和PB的难治性癫痫动物模型。应用免疫组化法观察比较P糖蛋白（Pgp）在各组脑组织中的表达。结果12只大鼠制成难治性癫痫动物模型（耐药组），11只为药物有效组，12只死亡。耐药组大鼠脑组织Pgp表达较对照组、未给药组和药物有效组增强，差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论应用较大剂量PHT和PB诱导点燃大鼠制作难治性癫痫的动物模型．方法可行。该模型可以用于研究难治性癫痫脑内PgP的表达。PgP的高表达与难治性癫痫发生密切相关。     

药物难治性癫痫患者脑内水通道蛋白-4的表达上调

目的研究水通道蛋白4(AQP4)在药物难治性癫痫脑组织中的表达。方法研究时间自2004年5月至2005年3月。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学和免疫蛋白印迹(WESTERN BLOT)技术,分析比较18例药物难治性癫痫患者癫痫灶脑组织与20例正常对照脑组织标本AQP4的MRNA和蛋白的表达水平。结果药物难治性癫痫患者脑组织AQP4的MRNA和蛋白的表达均显著高于正常对照组(P<0．01)。结论 AQP4可能参与了药物难治性癫痫患者癫痫发作后的脑水肿的发生,是癫痫继发脑水肿的重要分子基础。     

药物难治性癫痫患者脑内多种耐药基因表达的初步研究

目的研究药物难治性癫痫患者与正常对照组脑内多种药物耐药基因（ＭＤＲ１）表达的情况。方法　选择１５例药物难治性癫痫患者和５例对照组患者的脑组织标本,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,以Ｂ－ａｃｔｉｎ为内参照对ＭＤＲ１基因进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳分别得到２２６ｂｐ和５４８ｂｐ的条带,通过照相、扫描、计算ＭＤＲ１／ｂ－ａｃｔｉｎ比值进行半定量分析。结果统计学处理提示,药物难治性癫痫患者脑内ＭＤＲ１的表达明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论　Ｐ－糖蛋白为ＭＤＲ１的产物,能将药物从脑内排入血循环而降低脑内药物浓度。药物难治性癫痫患者因脑内ＭＤＲ１的高表达,导致脑内抗癫痫药物（ＡＥＤ）浓度较低而耐药。故应用ＭＤＲ１抑制剂也许可以提高ＡＥＤ在脑内的药物浓度,使癫痫的药物治疗效果更令人满意。     

Distribution and functional activity of P-glycoprotein and multidrug resistance-associated proteins in human brain microvascular endothelial cells in hippocampal sclerosis

Multidrug resistance protein, also referred as P-glycoprotein (P-gp, MDR1; ABCB1) and multidrug resistance-associated protein (MRP) 1 (ABCC1) and 2 (ABCC2) are, thus far, candidates to cause antiepileptic drug (AED) resistance epilepsy. In this study, we investigated P-gp, MRP1 and MRP2 expression, localization and functional activity on cryosections and isolated human brain-derived microvascular endothelial cells (HBMEC) from epileptic patients (HBMEC-EPI) with hippocampal sclerosis (HS), as compared with HBMEC isolated from normal brain cortex (HBMEC-CTR). We examined the expression and distribution of three transporters, P-gp, MRP1 and MRP2 on two major parts of the resected tissue, the hippocampus and the parahippocampal gyrus (Gph). P-gp showed diffuse expression not only in endothelium but also by parenchymal cells in both the hippocampus and the Gph. MRP1 labeling was observed in parenchymal cells in the Gph. By contrast, MRP2 was mainly found in endothelium of the hippocampus. P-gp and MRP1 expression in the Gph was relatively high in the patient with long-term seizure history. Quantitative RT-PCR analysis of HBMEC revealed that MDR1, MRP1 as well as MRP5 (ABCC5) and MRP6 (ABCC6) were overexpressed in HBMEC-EPI at the mRNA level. HBMEC from both normal and epilepsy groups displayed protein expression of P-gp, whereas MRP1 and MRP2 were seen only in HBMEC-EPI. Accordingly, it is of particular interest that MRP functional activities were observed in HBMEC-EPI, but not in HBMEC-CTR. Our results suggest that complex MDR expression changes not only in the hippocampus but in the Gph may play a role in AED pharmacoresistance in intractable epilepsy patients with mesial temporal lobe epilepsy (MTLE) by altering the permeability of AEDs across the blood-brain barrier (BBB).     

Expression of multidrug transporters in dysembryoplastic neuroepithelial tumors causing intractable epilepsy

OBJECTIVE: Dysembryoplastic neuroepithelial tumors (DNT) are relatively benign brain lesions that often cause medically intractable epilepsy. There is mounting evidence that multidrug transporters such as P-glycoprotein (P-gp) or multidrug resistance-associated proteins (MRP) play an important role in the development of resistance to antiepileptic drugs (AED). MATERIAL AND METHODS: In the present study, we examined the expression of several multidrug transporters in 14 cases of DNT. The peritumoral brain tissue as well as 9 cases of arteriovenous malformations (AVM) served as controls. P-gp, MRP2, MRP5 and breast cancer resistance protein (BCRP) expression was evaluated qualitatively and quantitatively using immunohistochemistry. RESULTS: All transporters were overexpressed quantitatively in DNT, but each revealed a different labeling pattern. P-gp and BCRP were predominantly located in the endothelium of brain vessels. MRP5 was detected primarily in endothelial cells, but notably also in neurons. The expression of P-gp, MRP2 and MRP5 was low in AVM, whereas BCRP demonstrated strong staining. Examination of MDR1 gene polymorphisms revealed no correlation with P-gp expression whereas the MRP2 exon 10 G1249A polymorphism was associated with different MRP2 labelling. CONCLUSIONS: Our results show that multidrug transporters are overexpressed in DNT. This finding supports the view that several of these transport proteins may play an important role in the mechanisms of drug resistance in epileptic brain tissue.