铅对细胞内钙离子及钙调蛋白影响的研究进展

本综述了近年来铅对细胞内钙离子及钙调蛋白影响的研究进展，现有资料表明，铅可通过多种途径进入细胞内，从而改变细胞内钙离子浓度；进入细胞内的铅离子可以与钙离子竞争钙调蛋白上的钙离子结合位点，激活钙调蛋白，影响细胞代谢，合成，分泌等过程。     

139 铅对细胞内钙离子及钙调蛋白影响的研究进展

本文综述了近年来铅对细胞内钙离子及钙调蛋白影响的研究进展.现有资料表明,铅可通过多种途径进入细胞内,从而改变细胞内钙离子浓度;进入细胞内的铅离子可以与钙离子竞争钙调蛋白上的钙离子结合位点,激活钙调蛋白,影响细胞代谢、合成、分泌等过程.     

阿特拉津对小鼠淋巴细胞钙离子浓度和钙调蛋白表达的影响

目的研究阿特拉津对小鼠脾脏淋巴细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及钙调蛋白(CaM)表达水平的影响。方法选用BALB/c小鼠分别以100、200和400mg/kg剂量的阿特拉津灌胃染毒,3周后处死,采用原子吸收光谱法测定血清中[Ca2+]i;脾淋巴细胞与荧光探针Fura-2/AM孵育后,用荧光分光光度法检测细胞内[Ca2+]i,蛋白印迹法观察细胞内CaM表达水平。结果各剂量组血清中[Ca2+]i无显著变化;中、高剂量组淋巴细胞内游离钙离子浓度显著高于阴性对照组(P<0.01);中、高剂量组细胞内CaM的表达均显著低于阴性对照组(P<0.01)。结论阿特拉津可致小鼠淋巴细胞内钙离子浓度升高,抑制其CaM的表达。     

铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对不同发育时期仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组、0.2%醋酸铅和1.0%醋酸铅组,从怀孕第0灭起开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后8、50 d处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,Western-blotting法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含最明显高于出生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).不同发育时期的染铅组仔鼠海马的PKC、CaM的蛋白表达均相应地下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达降低可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

氟对体外培养大鼠成骨细胞钙调蛋白表达影响

目的 观察不同浓度的氟在不同时间段对体外培养大鼠成骨细胞的钙调蛋白(CaM)的影响。方法 采用骨组织块法分离培养新生Wistar大鼠颅骨成骨细胞,将不同浓度的氟作用于大鼠成骨细胞,分别于染氟培养24,36和48h采用免疫细胞化学法检测CaM蛋白的表达。结果 在染氟培养24h,与对照组比较,0.5mg/L氟组成骨细胞CaM蛋白的表达明显增加,2mg/L氟组CaM蛋白的表达明显减少;染氟培养36h,与对照组比较,2mg/L氟组CaM蛋白表达明显增加,8mg/L氟组CaM蛋白的表达明显减少;而在染氟培养48h,各氟组CaM蛋白的表达较对照组均显著增加。结论 氟在一定浓度、时间范围内对成骨细胞的CaM蛋白表达影响的表现为先抑制后促进的作用。     

海马内注射淀粉样蛋白对大鼠海马细胞内钙稳态的影响

目的 研究海马内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)对大鼠海马细胞内钙稳态的影响.方法 将30只成年清洁级SD雄性大鼠按体重随机分为6组,每组5只.采用海马内注射方式染毒Aβ25～35,剂量分别为10、5、lμg/只,设立生理盐水组、假手术组和正常对照组.于术后14d,检测大鼠海马Ca2+-ATPase的活力及海马细胞内游离钙离子的浓度和海马内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平.结果 与生理盐水组相比,各Aβ25～35染毒组大鼠海马Ca2+-ATPase活力均降低,5、10μg Aβ25～35染毒组大鼠海马细胞内游离钙离子浓度和各Aβ25～35染毒组大鼠海马细胞内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着Aβ25～35染毒量的升高,大鼠海马Ca2+-ATPase活力呈下降趋势,海马细胞内游离钙离子的浓度和海马内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平均呈上升趋势.而假手术组、生理盐水组与正常对照组大鼠海马以上4个指标间比较,差异均无统计学意义.结论 Aβ25～35可以通过破坏大鼠海马细胞内钙稳态而发挥神经毒性作用.     

锰对神经元细胞内钙稳态影响的研究

目的研究锰对神经细胞内钙稳态的影响,重点观察神经元细胞钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的改变。方法选用原代培养神经元为模型,待细胞生长至最佳状态时,予以分组处理:锰处理组为含不同浓度氯化锰(0,25,100,400μmol/L)的培养液,培养神经细胞12h后,通过倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,并检测神经元细胞内钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的变化。结果随着染Mn剂量的加大,神经元形态出现异常,细胞内钙离子浓度逐渐升高;细胞Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性也逐渐下降。结论锰通过影响与维持钙稳态相关的酶(Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤。     

铅对胎鼠脑组织中蛋白激酶C和钙调蛋白M表达的影响

目的 研究铅对不同发育时期胎鼠脑组织中蛋白激酶C(PKC)与钙调蛋白(CaM)mRNA和蛋白表达的影响.方法 孕鼠随机分为去离子水对照组、0.2%醋酸铅组和1.0%醋酸铅组,从妊娠第0天起开始通过自由饮水染铅.分别于孕12、18 d处死孕鼠,取胎鼠脑组织,原子吸收光谱法测定脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Westen blotting)法分别观察各组PKC与CaM mRNA及蛋白的表达情况.结果 同一发育时期的染铅组胎鼠脑铅含量高于对照组,同一剂量染铅组孕18 d时胎鼠脑铅含量高于孕12 d时,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05).孕12 d时,与相应的对照组(mRNA:PKC:1.03±0.01、CaM:0.80±0.01,蛋白:PKC:0.70±0.05、CaM:0.75±0.05)相比,1.0%醋酸铅组胎鼠脑内PKC与CaM的mRNA(0.86±0.03、0.71±0.02)和蛋白表达(0.49±0.03、0.46±0.03)均降低;孕18 d时,0.2%和1.0%醋酸组胎鼠脑内PKC与CaM的mRNA和蛋白表达均较对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 孕期母鼠染铅可使胎鼠脑组织铅含量升高,并引起PKC与CaM mRNA和蛋白表达水平的下降.     

饲料钙水平对大鼠血钙及钙调蛋白的影响

为研究饲料中钙与血钙（Ｃａ）及钙调蛋白（ＣａＭ）的关系，本实验通过在大鼠低钙饲料中补充不同量的钙，平行研究饲料内钙水平对血钙及ＣａＭ的影响。Ｗｉｓｔａｒ大鼠按体重和性别分层均匀分为７组。基础低钙（ＬＣ）饲料是以玉米面为主的膳食配方配制，其中低钙特别突出。ＬＣ组大鼠血清钙水平明显低下，仅及常规饮食（ｓｔｏｃｋ）组的一半，体重增长迟缓，下丘脑ＣａＭ活性明显低下；当饲料补Ｃａ后，血Ｃａ水平随补Ｃａ量逐渐升高，补Ｃａ可使ＣａＭ水平升高，体重也随之升高，呈明显的量效关系，ＬＣ＋６００ｍｇ／ｋｇＣａ组血Ｃａ接近正常水平。说明饲料低钙、低血Ｃａ和细胞内ＣａＭ三者的变化是紧密联系的。当饲料内总钙在１０００ｍｇ／ｋｇ时，即ＬＣ＋６００ｍｇ／ｋｇ组，上述生长迟缓的状态即得到改善，Ｐ＜０．０１。     

丙烯酰胺对大鼠钙调蛋白和蛋白激酶C含量的影响

目的研究丙烯酰胺(ACR)对钙调蛋白(CaM)和蛋白激酶C(PKC)含量的影响。方法将27只健康SPF级成年雄性Wistar大鼠随机分为3组,分别为对照组(双蒸水)和20、40mg/kgACR染毒组,每组9只。采用腹腔注射方式染毒,隔天染毒,连续染毒8周。每周测量大鼠体重和步态得分。染毒结束后,迅速分离脊髓组织,采用ELISA试剂盒测定CaM的含量,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(WesternBlotting)测定蛋白激酶C(PKC)的含量。结果对照组大鼠的步态得分均为1分;20、40mg/kgACR染毒组分别自第7、3周开始出现步态得分增高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。与对照组相比,20、40mg/kgACR染毒组大鼠脊髓组织CaM含量均下降(P0.01),40mg/kgACR染毒组大鼠脊髓组织PKC含量下降(P0.05),差异有统计学意义。结论 ACR可降低大鼠脊髓组织CaM和PKC的含量,造成对神经丝(NF)的损害,这可能是ACR所致神经性疾病的发病机制之一。