Suppression of experimental autoimmune myasthenia gravis by nasal administration of acetylcholine receptor

Experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) is a well established animal model, which can be induced in various animal species and strains with acetylcholine receptor (AChR) and represents an experimental counterpart of human myasthenia gravis (MG). Current im-munotherapies to both EAMG and MG are non specific and limited by their toxicity. Recently, toler-ance to EAMG has been achieved by oral administration of milligram quantities of Torpedo AChR. In the present report we demonstrate that nasal administration of microgram doses of Torpedo AChR to female Lewis rats prior to immunization with Torpedo AChR and complete Freund's adjuvant resulted in the prevention of subsequently induced EAMG, the suppression of serum anti - AChR antibody levels, the decrease of delayed -type hyersensitjvity responses to AChR, as well as the suppression of AChR -specific IgG secreting cells, AChR -reactive IFN -r secreting cells and T cell proliferation in peripheral lymphoid organs, particularly in popliteal and ing     

小鼠全身骨骼肌乙酰胆碱受体含量的测定

[目的 ]建立测定小鼠全身肌肉乙酰胆碱受体含量的方法 ,应用于实验性自身免疫性重症肌无力病情的判定 .[方法 ]从实验性自身免疫性重症肌无力小鼠全身肌肉中提取乙酰胆碱受体 ,应用放射免疫测定法测定小鼠全身肌肉乙酰胆碱受体的含量 .[结果 ]经计算得出 ,实验性自身免疫性重症肌无力小鼠全身肌肉中的乙酰胆碱受体含量为 19 8fmol,每克肌肉的乙酰胆碱受体含量为 4 4fmol.[结论 ]此方法具有简单、省时、耗材少的特点 ,适用于重症肌无力及实验性自身免疫性重症肌无力的研究 .     

重症肌无力转基因小鼠模型的建立

[目的]建立人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．[方法]用电鳐电器官分离纯化的乙酰胆碱受体免疫人免疫球蛋白转基因小鼠，以肌肉收缩力判定病情，以放射免疫测定法测定动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度及动物全身肌肉乙酰胆碱受体浓度．[结果]实验动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度为6～296nmol，全身肌肉乙酰胆碱受体损失率最高达65％，部分动物出现肌肉收缩无力表现．[结论]成功地建立了人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．     

实验性重症肌无力动物模型的建立

从牛骨骼肌中提取乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ），经用１２５Ｉ标记α银环蛇神经毒素（α Ｂｇｔ）鉴定受体活性良好。用ＡｃｈＲ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力（ＥＡＭＧ）模型。与对照组比较，小鼠在临床表现、肌电图衰减效应、血清中抗ＡｃｈＲ抗体和脾细胞对ＡｃｈＲ增殖反应检测中，均出现明显的阳性标志。ＥＡＭＧ动物模型的建立为进一步探索重症肌无力（ＭＧ）免疫发病机制和药物防治研究奠定基础     

Ad-ING4对人胃癌AGS细胞凋亡及其p53基因表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）的作用机制。方法将Lewis大鼠随机分为移植组、模型组和正常对照组,每组各10只。移植组、模型组大鼠腹腔注射单克隆抗体35（mAb35）建立EAMG模型,正常对照组大鼠腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。分离培养BMSCs并作鉴定后,调整密度至1.5x106/600滋lPBS,移植组尾静脉注射细胞悬液600滋l,模型组和正常对照组均予600滋lPBS。采用双盲法、免疫荧光检测、ELISA和real-timeRT-PCR分别测定3组大鼠Lennon临床评分、腓肠肌乙酰胆碱受体（AChR）数量变化、血清乙酰胆碱受体抗体（AChR-Ab）含量和腓肠肌AChR、基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达。结果移植组Lennon临床评分、血清AChR-Ab含量、腓肠肌AChRmRNA表达均低于模型组（P＜0.05）。正常对照组大鼠神经肌肉接头处可见明显红色荧光,移植组可见断断续续、较为微弱的荧光,模型组未见红色荧光。模型组大鼠腓肠肌MMP-9mRNA表达量明显高于移植组（P＜0.05）。结论BMSCs能缓解EAMG大鼠的临床症状,抑制MMP-9mRNA表达可能是其作用机制。     

抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7诱导实验性重症肌无力

目的:探讨抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7(Anti-AChR mAbA7)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用.方法:Lewis大鼠腹腔注射5ml 20倍浓缩的含Anti-AChR mAbA7培养上清液,建立EAMG被动转移模型.对照组腹腔注射同体积的PBS.每8 h监测体重和临床症状评分.48h后处死实验动物.用放射免疫法检测AChR,并计算出AChR的损失率.结果:Anti-AChR mAbA7诱导的EAMG模型AChR损失率高,为24.3%～45.2%.而且AChR损失率与临床症状评分相关(r=0.74,P＜0.01).Anti-AChR mAbA7攻击的位点在终板的AChR上.结论:Anti-AChR mAb A7可用作诱导EAMG模型而应用于重症肌无力的研究.     

重症肌无力中枢损害脾脏改变及细胞凋亡相关蛋白表达

目的 :探讨在重症肌无力 (MG)中枢损害模型中脾脏变化和细胞凋亡相关蛋白改变及其意义 .方法 :分别将自MG患者血中提取的IgG和健康人血中提取的IgG注入大鼠脑室系统 ,建立大鼠MG模型和健康对照组模型 ,一组大鼠不予任何处理作为空白对照组 .脾常规HE染色 ,并用免疫细胞化学方法观察FasL和Bag 1在脾脏中的表达 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型样症状 .在MG组脾脏淋巴细胞增生明显 ,淋巴小结及生发中心数目增多 ,Bag 1抗原阳性细胞弥漫分布于白、红髓区 ,FasL仅偶见或无 .在健康对照组脾脏中可散见Bag 1和FasL表达 (P <0 .0 5 ) ,两种对照模型镜下改变相似 .结论 :脑室注射抗神经肌接头 (NMJ)处的AchRab能够同中枢神经系统的AchR结合 ,引起外周免疫的变化 ,脾淋巴细胞增生 ,Bag 1表达增加 ,Fas/FasL表达受抑制 .这些可能导致EAMG脾脏中激活免疫细胞的正常凋亡过程抑制 ,并参与MG病变进展     

实验性重症肌无力大鼠模型的研究

目的 从丁氏双鳍电鳐的电器官分离乙酰胆碱受体(AChR)免疫大鼠,建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型.方法 参照徐氏法从丁氏双鳍电鳐的电器官提取AChR蛋白,并采用Folin-酚试剂法及酶联免疫吸附法检测提取蛋白的含量及活性;以提取的蛋白主动免疫Lewis大鼠,每天观察其临床表现,并于免疫后7周进行低频重复电刺激、单纤维肌电图及血清中AChRAb水平的检测.结果 提取蛋白的含量为35.4 mg/mL,AChR提取物可以与阳性血清中的AChRAb发生结合反应.免疫后1周左右,实验组有3只大鼠出现轻度的肌无力症状,持续2～5d自行缓解;免疫后5周左右实验组8只大鼠均表现出不同程度的肌无力症状.实验组大鼠低频重复电刺激阳性率达75%,其衰减率明显高于对照组.实验组大鼠单肌纤维动作电位平均连续差(MCD)值与正常对照组比较明显延长(P＜0.01),而福氏完全佐剂(CFA)对照组与正常对照组间MCD值无明显差异.实验组大鼠AChRAb水平明显高于CFA对照组(P＜0.01);实验组7只大鼠AChRAb的P/N值＞2.1,而CFA对照组P/N值均＜1.4.结论 从丁氏双鳍电鳐的电器官提取的AChR蛋白成功地诱导EAMG动物模型,可为重症肌无力进一步研究创造条件.     

电鳐乙酰胆碱受体诱导转基因小鼠重症肌无力的机制

[目的]探讨电鳐乙酰胆碱受体诱导人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力的机制.[方法]将电鳐电器官分离并纯化的乙酰胆碱受体作为免疫原,免疫人免疫球蛋白转基因小鼠,以放射免疫方法测定小鼠血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度,以免疫荧光技术观察小鼠骨骼肌中抗乙酰胆碱受体抗体的结合性.[结果]小鼠血清中的抗乙酰胆碱受体抗体滴度为155~539 pmol,小鼠肌肉中具有人抗乙酰胆碱受体抗体.[结论]电鳐乙酰胆碱受体刺激人免疫球蛋白转基因小鼠产生的人抗乙酰胆碱受体抗体,可与肌肉组织中的乙酰胆碱受体结合,导致肌肉收缩无力,可诱导重症肌无力.     

“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处AchR蛋白表达的影响

目的: 探讨"温阳补气"针法对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠腓肠肌神经肌肉接头(NMJ)处乙酰胆碱受体(AchR)蛋白表达水平的影响,阐明针灸治疗重症肌无力(MG)的作用机制。方法: 采用AchR α1129-145多肽片段免疫接种Lewis雌性大鼠,建立EAMG大鼠模型。在建模成功的EAMG大鼠中随机选取30只,分为模型对照组10只、药物对照组10只和针刺治疗组10只,并将同期购进的未建模的10只大鼠设为空白对照组。药物对照组大鼠予以18.5 mg·kg^-1·d^-1溴吡斯的明灌胃治疗;针刺治疗组大鼠予以"温阳补气"针法治疗;其余2组不予任何处置作为对照。记录治疗前后各组大鼠Lennon症状评分。治疗结束后,取4组大鼠腓肠肌NMJ处组织,采用Western blotting法检测各组大鼠NMJ处AchR蛋白表达水平。结果: 与空白对照组比较,建模成功后治疗前模型对照组、药物对照组和针刺治疗组大鼠Lennon症状评分明显升高(P<0.01);与模型对照组比较,经过2个疗程治疗后药物对照组和针刺治疗组大鼠Lennon症状评分均明显降低(P<0.01);与空白对照组比较,模型对照组大鼠腓肠肌NMJ处AchR蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与模型对照组比较,治疗后针刺治疗组和药物对照组EAMG大鼠腓肠肌NMJ处AchR蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论: "温阳补气"针法可以提高EAMG大鼠NMJ处AchR蛋白表达水平,发挥治疗EAMG的作用。     

受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

双类似物鼻黏膜耐受对EAMG临床发病的抑制作用

目的　采用双类似物 (Lys2 6 2 Ala2 0 7)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)模型进行鼻黏膜耐受预防性给药 ,观察临床发病变化 ,并评价疗效 ,探讨其控制EAMG临床发病作用机制。方法　应用AChR加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型 ,并在致敏前 10天 (A组 )及致敏当日 (B组 )鼻腔给药。观察给药后A、B组及相应对照组大鼠体重、临床症状及肌电图变化。结果　①急性期和慢性期A、B组体重明显超过、而病情明显轻于相应对照组 ,慢性期A组体重明显超过、病情明显轻于B组 ,P均 <0 .0 5 ;②A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率明显低于相应对照组 ,P均 <0 .0 5。结论　Lys2 6 2 Ala2 0 7鼻黏膜预防耐受可有效地抑制临床发病 ,为采用双类似物鼻黏膜耐受防治人类重症肌无力提供了依据。     

鼻腔AChR耐受低调EAMG大鼠特异性T淋巴细胞反应

用乙酰胆碱受体(AChR)加完全弗氏佐剂(CFA)免疫前,鼻腔给予大鼠AChR可有效地预防实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)。本文结果表明,与非耐受对照组相比,鼻腔AChR耐受组免疫后,腘窝、腹股沟淋巴结(PILN)的单个核细胞(MNC)AChR特异的淋巴细胞增生反应受到明显抑制,鼻腔耐受组PILN中AChR特异的CD4~+/CD8~-克隆增生亦明显受抑制,差异均有显著性。此外,鼻腔耐受组AChR特异性皮肤迟发型过敏反应(DTH)也显著降低。提示鼻腔AChR耐受后引起的特异性T淋巴细胞反应的低调可能是临床肌无力抑制的基础。     

“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠神经肌肉接头处 AchR mRNA 表达的影响

目的：探讨“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠神经肌肉接头处（NMJ）乙酰胆碱受体（AchR）mRNA表达的影响,阐明“温阳补气”针法对治疗EAMG的效应机制。方法：AchRα1 129-145多肽片段主动免疫60只SPF三级Lewis雌性大鼠,构建EAMG大鼠模型,模型制备成功后,随机选取30只大鼠分为模型对照组、针刺治疗组和药物对照组,每组10只,并将同批购进且相同条件下饲养的另外10只SPF三级Lewis大鼠设为空白对照组。空白对照组及模型对照组大鼠不予任何干预,针灸治疗组大鼠施以“温阳补气”针法治疗,药物对照组大鼠施以溴吡斯的明灌胃治疗。15d后,取实验大鼠腓肠肌NMJ处周围组织,采用RT-PCR法检测AchR mRNA表达水平,并定量分析各组之间的表达差异。结果：与空白对照组比较,针刺治疗组、药物对照组和模型对照组大鼠NMJ处γ-AchR和ε-AchR mRNA相对表达水平均升高（P<0.01）;与模型对照组比较,针灸治疗组与药物对照组大鼠NMJ处γ-AchR和ε-AchR mRNA相对表达水平均升高（P<0.01）。结论：“温阳补气”针法能够有效提高EAMG大鼠AchR mRNA表达水平,提示该方法可能是治疗重症肌无力的有效方法。     

重症肌无力相关细胞因子研究

重症肌无力及其动物模型——实验性自身免疫性重症肌无力是一种抗体介导,具有细胞免疫依赖的,神经肌肉接头处信号传递障碍的自身免疫性疾病。细胞因子通过复杂的机制参与重症肌无力发病与进展。撰文综述了与重症肌无力有关的几类细胞因子(干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子、转化生长因子、粒-巨细胞集落刺激因子),并对近年来基于细胞因子和细胞因子传导通路治疗重症肌无力的临床、实验研究进行探讨。     

重症肌无力合并癫痫的发病机制探讨

为探讨重症肌无力 (MG)合并癫痫 (EPI)的发病机制 ,对 1 5例合并癫痫的MG患者的临床表现及实验结果进行分析。发现 1 5例患者在MG症状加重时出现癫痫发作 ,在MG症状减轻时发作缓解。MG合并EPI组的脑脊液IgG及脑脊液 2 4hIgG合成率高于MG不合并EPI组及对照组。间接提示癫痫的发作与中枢神经系统内乙酰胆碱受体抗体 (AchRab)的异常合成有关。     

抗树突状细胞单克隆抗体对小鼠实验性自身免疫重症肌无力的作用

用部分纯化的乙酰胆碱受体(AchR)加完全福氏佐剂注射给C57BL/6小鼠可发生实验性自身免疫重症肌无力(EAMG),出现肌力递减,AchR刺激脾淋巴细胞有增殖反应及机体产生抗AchR抗体。预先用抗树突状细胞单抗封闭,可阻止这一过程发生。     

Sequence analysis of a mouse mAb against AchR

ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｍｏｕｓｅｍＡｂａｇａｉｎｓｔＡＣｈＲＭｅｎｇＦａｎｐｉｎｇ；ＹａｎｇＫａｎｇｊｕａｎ；Ｙ．Ｇｒａｕｓ；Ｍ．ｄｅＢａｅｔｓ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＹａｎｂｉａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅ...     

nAChR单克隆抗体建立重症肌无力被动转移小鼠模型的研究

目的采用乙酰胆碱受体(nAChR)单克隆抗体-mAb35建立C57BL/6幼年小鼠重症肌无力被动转移模型(passive transferred myasthenia gravis, PTMG),摸索成功建立动物模型的mAb35的有效剂量,为进一步探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的发病机制和免疫治疗提供实验动物模型.方法将实验组分为3组(E1、E2、E3),分别经腹腔注射含0.5、1.0、1.5 mg/kg mAb35的Ringer's液0.2ml给B6幼年小鼠,对照组(N)注射不含mAb35的Ringer's液0.2 ml.观察其临床表现,并进行药理学、神经电生理学及电镜超微结构鉴定,同时检测血清中nAChRAb水平,以判断模型建立是否成功.结果实验组小鼠表现不同程度的MG临床症状,电生理改变、药理学特征、血清学AChRAb升高及超微结构病理改变等均符合MG的病理生理特点.结论利用AChR单克隆抗体-mAb35可在幼年C57BL/6小鼠成功建立PTMG模型,其有效剂量为1.0 mg/kg,该方法简便、可靠、敏感,为研究儿童MG提供了一种很好的实验动物模型.     

重症肌无力重复神经电刺激检测的比较研究

目的比较肘肌、三角肌、小指展肌重复神经电刺激（RNS）对重症肌无力（MG）的诊断价值。方法应用低频RNS技术对18例MG患者的肘肌、三角肌、小指展肌进行疲劳前后的检测,用DANTECounterpoint肌电图仪记录。结果对照组肘肌、三角肌、小指展肌疲劳前RNS电压分别降低了1．54％±1．32％、1．64％±1．43％、0．62％±0．38％;疲劳后RNS电压分别降低了2．01％±1．75％、2．05％±1．98％、1．02％±0．75％。MG组肘肌、三角肌、小指展肌疲劳前测试阳性分别为9／18（50％）、10／18（55．6％）、3／18（16．7％）（P均＜0．05）;疲劳后RNS测试阳性分别为15／18（83．3％）、14／18（77．8％）、6／18（33．3％）（P均＜0．05）。经卡方检验,肘肌疲劳前后RNS测试阳性率有显著性差异（P＜0．05）。小指展肌、三角肌疲劳前后RNS测试阳性率对比无显著性差异。结论MG患者肘肌疲劳后RNS阳性率较疲劳前明显增高,而三角肌、小指展肌疲劳前后RNS阳性率无显著性差异;肘肌、三角肌RNS测试较小指展肌更敏感,但肘肌RNS方法简便,病人不适程度轻,有较大的临床实用价值。