埃及伊蚊唾液腺激肽SialokininI基因的克隆

唾液腺激肽是埃及伊蚊唾液中的舒血管物质 ,不仅在蚊虫吸血过程中有重要作用 ,还可能具有调节宿主细胞免疫的功能。本研究用PCR方法从基因组DNA扩增出唾液腺激肽的基因并进行了克隆测序 ,发现与报道的埃及伊蚊相应基因序列有几个碱基的差异 ,同源性 97 8% ,但成熟肽部分序列未发现差异 ,这一部分基因序列人工合成克隆入硫氧还蛋白融合表达载体进行了融合表达 ,为进一步的研究打下基础     

埃及伊蚊唾液腺激肽Sialokinin I基因的克隆

唾液腺激肽是埃及伊蚊唾液中的舒血管物质,不仅在蚊虫吸血过程中有重要作用,还可能具有调节宿主细胞免疫的功能.本研究用PCR方法从基因组DNA扩增出唾液腺激肽的基因并进行了克隆测序,发现与报道的埃及伊蚊相应基因序列有几个碱基的差异,同源性97.8%,但成熟肽部分序列未发现差异,这一部分基因序列人工合成克隆入硫氧还蛋白融合表达载体进行了融合表达,为进一步的研究打下基础.     

蚊媒刺叮对Balb/C小鼠感染登革Ⅱ型病毒的增强作用

登革热 登革出血热是我国重要的蚊媒病之一 ,白纹伊蚊和埃及伊蚊是主要媒介蚊种。本研究以Balb C小鼠为实验动物 ,探讨白纹伊蚊唾液对登革病毒感染宿主的增强作用。结果显示 ,在感染剂量相同的情况下 ,如果Balb C实验小鼠预先被一定数量的白纹伊蚊叮咬以后再皮下接种病毒 ,实验小鼠感染登革病毒的程度有所提高媒介蚊虫叮咬宿主吸血时会分泌唾液,蚊媒病毒随分泌的唾液传播给宿主,蚊虫唾液不仅是病毒传播的液体环境,还对病毒感染宿主有一定促进作用,通过影响宿主的免疫功能而起作用。蚊虫等吸血双翅目昆虫由于吸血时间短,被叮咬的宿主免疫系统可能来不及发生反应,所以以前推测它们对宿主免疫方面的作用可能比较小或没有(Champagne,1994)。近年研究发现能抑制或调节动物宿主免疫反应,影响宿主对虫媒病原体的免疫能力,如发现白蛉唾液中的舒血管物质能抑制宿主巨噬细胞功能,增加利什曼原虫的感染(TitusandRibeiro,1988;Theodosetal.,1993),之后相关的研究逐渐多起来(Bissonnetteetal.,1993;Crossetal.,1994)。对Cachevalley病毒感染传播研究发现只有通过蚊虫有效的叮咬Balbc实验小鼠才能产生病毒血症和相应的抗体,而仅皮下注射病毒则不能(Edwardsetal.,1998);对LaCross病毒的研究也发现同样的问题(Osorioeta     

Balb/c小鼠脾脏B10细胞分析

目的分析年龄、性别和环境因素对Balb/c小鼠脾脏B10细胞的影响。方法以年龄、性别和不同环境对小鼠进行分组,流式细胞仪分析小鼠脾脏CD5+CD1dhiB细胞的比例。体外培养小鼠脾细胞,在不加任何刺激或LPS+PIM刺激5 h后,流式细胞仪分析CD19+IL-10+B细胞比例。结果 6月龄小鼠脾脏中CD5+CD1dhiB细胞比例平均为2.9%,明显高于2月龄小鼠的2.28%(P<0.05);在不加任何刺激的情况下,两组小鼠脾脏中IL-10+B细胞的比例均很低且无统计学差异(P>0.05);加入LPS+PIM刺激5 h后,6月龄小鼠脾脏中IL-10+B细胞的比例平均为1.93%,高于2月龄小鼠的1.25%(P<0.05)。细胞表型和细胞内IL-10染色分析均显示年龄匹配的雌性和雄性小鼠脾脏B10细胞的表达无明显差异(P>0.05)。普通级和SPF级小鼠CD5+CD1dhiB细胞和LPS+PIM诱导的IL-10+B细胞比例无明显差异(P>0.05),而在不加任何刺激的情况下,普通级小鼠脾脏IL-10+B细胞比例平均为0.87%,明显高于SPF小鼠的0.38%(P<0.01)。结论脾脏B10细胞可随Balb/c小鼠年龄增大而扩增,B10细胞的表达与性别差异无明显关系,微生物环境可促进B10细胞的活化,但对B10细胞总数无明显影响。     

C肽光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的:研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清C肽(C peptide)的快速检测试剂盒.方法:采用夹心法建立C peptide AlphaLISA试剂盒.结果:自制C肽试剂盒灵敏度为0.06ng/ml.,可测范围为(0.06～22)ng/ml.批内与批间的精密度分别为4.0%～4.8%,5.6%～...     

登革病毒感染对白纹伊蚊生理生态特性的影响

目的了解登革病毒感染对白纹伊蚊生理、生态以及对杀虫剂敏感性的影响。方法观察比较通过胸腔接种方式人工感染登革病毒的白纹伊蚊和胸腔注射生理盐水的对照组蚊虫的死亡率、产卵量、孵化率、子代发育情况,以及对拟除虫菊酯类杀虫剂的敏感性。结果两组蚊虫在死亡率、存活时间、产卵量等方面的差异有统计学意义,其它方面的差异不显著。结论登革病毒感染能够增加白纹伊蚊的死亡率并降低蚊虫的产卵能力。     

神经激肽B受体在小鼠中枢神经系统内的定位分布

目的　研究神经激肽B受体 (NK3)在小鼠中枢神经系统内的定位分布。　方法　免疫组织化学染色。　结果　在小鼠中枢神经系统的绝大部分区域 ,NK3受体样免疫反应产物位于胞体和树突上 ,少部分区域位于神经毡 (neuropil)内。大量NK3受体样免疫反应神经元出现于前嗅核、伏隔核、隔区、腹侧苍白球、苍白球、尾壳核、终纹床核、下丘脑前区、下丘脑结节区、下丘脑外侧区、穹隆周区、视上核、弓状核、乳头体、黑质、腹侧被盖区、红核后区、上丘和下丘、导水管周围灰质、孤束核、及延髓和脊髓背角浅层。大脑皮质的浅层、梨状皮质、背侧海马、杏仁核、脑干网状结构等核团内也含有一定数量的阳性神经元。在丘脑的中线核团和板内核、腹侧海马和脚间核等处 ,NK3受体免疫反应产物主要位于神经毡内。　结论　NK3受体广泛分布于小鼠中枢神经系统内 ,提示它可能具有重要的生理功能     

登革病毒2型感染BALB/c小鼠的IL-4、IFN-γ产生动态观察

目的　探讨登革病毒 2型 (DEN2 )临床分离株感染BALB c小鼠后其血浆中IL 4、IFN γ产生动态及相关关系。方法　用不同剂量DEN2临床分离株经皮下多点注射 ,建立BALB c小鼠感染模型 ,并用双抗体夹心ELISA法检测感染后不同时间各组动物血浆中IL 4、IFN γ浓度。结果　DEN2感染可使BALB c小鼠产生IL 4、IFN γ增加 (P <0 .0 5 ) ,且细胞因子浓度与病毒感染剂量有关。初次感染阶段两者水平均有升高 ,而再次感染阶段以IL 4升高为主。结论　在初次感染阶段TH1 TH2应答均发挥重要作用 ;而再次感染阶段以TH2应答为主。     

天花粉蛋白及其片段对激肽系统的激活作用

本研究探讨了天花粉蛋白及其裂解片段(CBTf_1,CBTf_2)对人体激肽系统的作用。结果显示:天花粉蛋白对激肽系统有激活作用,实验组激肽释放酶活力单位为190±14mμ/ml,对照组为149±14mμ/ml,P<0.01;天花粉蛋白裂解片段CBTf_1同样可以激活激肽系统,而CBTf_2对激肽系统无影响。天花粉蛋白引起临床过敏反应及类过敏反应可能与激肽系统的激活有关。此外,作者还初步探讨了天花粉蛋白激活激肽系统的分子基础。     

熟地黄水提液对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响

为研究熟地黄水提液对Balb／C小鼠的抗肿瘤活性,用L929生物法研究熟地黄水提液刺激Balb／C小鼠单核细胞分泌TNF-α的作用。结果表明,熟地黄组单核细胞分泌TNF-α活性与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）,提示熟地黄水提液具有抗肿瘤活性。     

实验感染登革Ⅱ型病毒的2种蚊媒RT-PCR检测defensin A结果分析

白纹伊蚊和埃及伊蚊在经口大剂量感染登革Ⅱ型病毒1天、2天、3天和11天后,用RT-PCR方法都未能在其体内检测到defensin A的mRNA的表达,提示登革Ⅱ型病毒感染其有效媒介宿主白纹伊蚊和埃及伊蚊后并不诱导defensin A的表达,或者表达量极低用RT-PCR方法不能检测到.     

感染登革病毒Ⅱ型后白纹伊蚊氨基酸动态的研究

为研究感染登革病毒Ⅱ型 (DV2 )后白纹伊蚊氨基酸的动态变化 ,采用DV2经胸注射白纹伊蚊。分别测定感染后 5天 ,10天 ,2 0天白纹伊蚊氨基酸含量 ,并与未感染DV2相应龄期蚊虫氨基酸含量对比。结果显示DV2感染后 5天 :天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和精氨酸含量较对照组有明显升高 ,其余氨基酸变化不显著。DV2感染后 10天、 2 0天所有氨基酸含量的变化均不显著。本研究提示DV2可使感染初期白纹伊蚊的少数几种氨基酸含量升高。随着感染时间延长 ,DV2对白纹伊蚊氨基酸含量影响不大。白纹伊蚊可能通过自身内在调节机制维持其体内氨基酸的稳态     

白纹伊蚊感染登革2型病毒后基因表达变化的研究

白纹伊蚊感染登革 2型病毒 2 4h后 ,和对照蚊虫一起提取RNA ,用差异显示PCR (DDRT PCR)技术对蚊虫感染病毒后基因表达的变化进行研究。白纹伊蚊感染登革 2型病毒后 ,经过 8条随机引物和 3条 3′端锚定引物配对扩增 ,发现了 6条表达有差异的片段 ,其中 5条为感染后表达量增加的片段 ,1条为感染后表达量减少的片段 ,并对这些片段进行了克隆和测序 ,通过GenBank查询 ,其中 5条为未知序列 ,1条表达量增高的片段和果蝇核糖体蛋白S5基因有较高的同源性。这些差异片段的发现可能对探讨媒介蚊虫对登革病毒的易感性机理有意义     

围食膜在蚊虫对登革Ⅱ型病毒中肠感染屏障中的作用

通过透射电镜观察了致倦库蚊和白纹伊蚊围食膜的形成特点及登革Ⅱ型病毒感染蚊虫中肠上皮细胞的规律 ,针对围食膜在蚊虫对登革Ⅱ型病毒中肠感染屏障中的作用进行了探讨。结果表明 :DEN 2能在吸血 2h内侵染白纹伊蚊上皮细胞并大量复制 ,而经过一定的外潜伏期仍不能侵染致倦库蚊的上皮细胞 ,提示致倦库蚊对DEN 2存在中肠感染屏障。而从围食膜形成的时间及病毒感染的规律推测 ,围食膜在中肠感染屏障中不是决定性的因子     

白纹伊蚊干燥卵保存登革2型病毒的实验研究

感染登革2型病毒的白纹伊蚊卵在(25±1)℃、光照14h/天,75%±5%RH的相对干燥环境中保存42天,分别采用C6/36细胞培养分离病毒和RT-PCR方法,检测卵孵化的F1代蚊虫感染率。第1个生殖营养周环F1代蚊虫未检测和分离到病毒,PCR检测第2生殖营养周环蚊虫批阳性率为26.7%,最低感染率为1∶112.5;第3生殖营养周环蚊虫批阳性率为27.8%,最低感染率为1∶108。统计学检验结果表明第2和第3生殖营养周环卵孵化的F1代蚊虫感染率没有达到显著性水平(P>0.05)。结果表明感染白纹伊蚊卵在75%±5%RH的相对干燥环境中保存42天后,能在孵化的子代蚊虫中检测和分离到病毒,证实伊蚊卵在干燥环境中能够保存卵内病毒。     

登革2型病毒在C6/36细胞上受体蛋白的鉴定

应用VOPBA (病毒辅覆蛋白结合分析 )技术 ,结合免疫印迹化学发光的方法在C6 36细胞上鉴定出了登革 2型病毒唯一的大小约为 35kDa的受体蛋白成分。为研究病毒对白纹伊蚊的感染机理打下了良好的基础。     

溴氰菊酯对白纹伊蚊C6／36细胞株的杀伤作用及对其形态影响的研究

本文采用ＭＴＴ微量酶反应比色法，研究了溴氰菊酯对白纹伊蚊Ｃ６／３６细胞的杀伤作用、形态影响以及受损细胞的恢复。结果发现用溴氰菊酯处理２４ｈ后，对Ｃ６／３６细胞的半数毒性浓度（ＩＣ５０）为７４８８μｇ／ｍｌ，且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强。溴氰菊酯浓度在２０μｇ／ｍｌ以上时可以诱发Ｃ６／３６细胞形态学改变，表现为细胞呈多形性、细胞间有间隙、胞质内充满颗粒，以后随药物浓度的升高，胞质出现空泡、染色质凝成粗大颗粒或无结构大块、大片细胞脱落、崩解、死亡。高浓度溴氰菊酯（１６０μｇ／ｍｌ）作用于Ｃ６／３６细胞，其受损细胞的恢复与作用时间有关，作用２４ｈ的细胞，在经历一段生长停滞后，可缓慢恢复，而作用４８ｈ的细胞，则不可逆转的死亡     

C57black/6小鼠全脑缺血模型的海马区Bcl-2和Bax的表达

使用 C5 7black/6小鼠制造的全脑缺血模型 ,观察全脑缺血后海马 Bcl-2和 Bax的表达 ,为这种新的模型在脑缺血研究中的应用提供实验依据。双侧颈总动脉夹闭 15 min诱发全脑缺血模型 ,2 4h后取脑组织进行 Bcl-2和 Bax免疫组织化学染色。缺血组海马 Bax阳性反应神经元数目增多 ,主要分布在 CA1 区 ,胞浆深染 ,假手术组 Bax阳性细胞数目少 ,染色浅。缺血组 CA3区和齿状回 Bcl-2阳性反应神经元数目增多 ,胞浆染色深 ,假手术组 Bcl-2阳性细胞数目少 ,染色浅。C5 7black/6小鼠全脑缺血模型的海马内 Bcl-2和 Bax表达发生改变 ,Bax表达增加在 CA1 区 ,Bcl-2表达增加在 CA3区和齿状回 ,提示二者在该模型的脑缺血后神经细胞死亡过程中发挥作用