丹参粉针剂对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞表达MMP9及ICAM-1的影响

目的:研究丹参粉针剂对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)及细胞粘附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法:建立脐静脉内皮细胞模型,在培养液中加入ox-LDL致使脐静脉内皮损伤,分别加入130μg/ml、100μg/m1、75μg/ml、50μg/ml、25μg/ml5种浓度的丹参粉针剂溶液,观察丹参粉针剂对ox-LDL诱导内皮细胞损伤的保护作用.结果:ox-LDL可诱导脐静脉内皮细胞表达MMP9及ICAM-1,有效血药浓度内,75μg/ml、100μg/ml和130μg/ml的丹参粉针剂溶液可使MMP9及ICAM-1的表达下降.结论:丹参粉针剂可下调ox-LDL诱导的内皮细胞MMP9及ICAM-1的表达,对内皮细胞具有保护作用.     

氧化低密度脂蛋白对体外血管内皮细胞损伤的剂量反应关系

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)造成的损伤效应。方法:分别用不同浓度的ox-LDL作用于对数生长期的HUVEC细胞24 h,进行细胞形态学观察比较,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,计算细胞生长抑制率,并测定细胞中丙二醛(MDA)含量。结果:随着ox-LDL浓度的增加,细胞形态发生明显变化,变得结构松散,ox-LDL高浓度时甚至出现细胞破碎、死亡。MTT实验的吸光度值(OD)在ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度干预24 h后细胞中MDA含量与MTT实验结果一致。当ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,细胞抑制率分别达到23.2%、45.2%、62.0%。结论:当HUVEC细胞暴露于ox-LDL 24 h后,干预浓度越大细胞活力越低,细胞生长抑制率越大,细胞中MDA含量增加。ox-LDL浓度为200μg/m L以内时,ox-LDL对HUVEC细胞可造成较明显的氧化损伤且呈现剂量效应关系。     

体外血管内皮细胞氧化损伤模型的建立

目的：建立体外血管内皮细胞氧化损伤模型。方法：用Cu^2 引发脂质过氧化过程，制备氧化低密度脂蛋白（ox-LDL)，应用含不同浓度丙二醛（MDA）的ox-LDL，分别作用于对数生长期的内皮细胞，采用四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力，并测定内皮细胞MDA含量。结果：当内皮细胞暴露于含MDA浓度分别为0.2,0.5,0.8,1.0,1.2,1.5nmol/ml的ox-LDL24h后，含MDA1.0,1.2,1.5nmol/ml浓度组与空白对照组比较，MTT降低，差别有显著性（P＜0．01），MDA含量增加，差别有统计学意义（P＜0．01）。结论：通过细胞活力，MDA的检测以及形态学观察，认为ox-LDL的MDA浓度为1.0nmol/ml时为最适宜氧化损伤浓度。     

氧化低密度脂蛋白对高糖状态下血管内皮细胞NO释放及ET-1分泌的影响

目的 观察高糖状态下氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的血管内皮细胞(ECV-304)一氧化氮(NO)释放及内皮素-1(ET-1)分泌的影响.方法 不同葡萄糖(Glu)浓度(5.5 mmol/L,20 mmol/L)的培养液细胞中,分别加入含不同浓度ox-LDL(0 μg/ml,50 μg/ml,100 μg/ml)进行氧化损伤48 h,观察细胞形态、3H-TdR标记法测定细胞增殖、特异性硝酸还原酶法检测细胞内NO表达、放射免疫法测定ET-1含量.结果 ①高糖状态下高浓度ox-LDL抑制ECV-304的增殖,且呈浓度依赖性;②高浓度Glu和ox-LDL具有正协同作用,促进ET-1的分泌,且对ET-1的促分泌作用高浓度ox-LDL可能要强于高血糖.而NO含量则随作用时间延长表现出先升高后下降的动态变化过程.结论 高浓度Glu和ox-LDL对ECV-304具有协同损伤作用,高糖状态下ox-LDL可直接导致VEC-304功能的异常,引起ET-1产生增多以及损伤内皮NO系统,促进糖尿病血管并发症的发生、发展.     

氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(H-UVEC)孤儿核受体NOR1表达的影响

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)孤儿核受体NOR1表达的影响。方法:采用ox-LDL建立人脐静脉内皮细胞损伤模型,将细胞分为空白组、ox-LDL高、中、低剂量组(25μg/ml、50μml、100μg/ml、200μg/ml),采用CCK8法检测HUVEC活性,采用实时荧光定量PCR分析NOR1转录水平变化,采用Western-Blot分析NOR1蛋白表达的变化。结果:在HUVEC中加入不同浓度ox-LDL共同培养12h后,CCK8值与ox-LDL呈现明显的剂量反应关系,与空白对照组相比具有显著性差异(P<0.01)。Ox-LDL能够诱导NOR1 mRNA转录和蛋白表达,NOR1 mRNA峰值出现在ox-LDL共同培养后的3h,NOR1蛋白质最大值出现在ox-LDL共同培养后的6 h。结论:ox-LDL能够损伤HUVEC,并能诱导NOR1的表达上调,其在内皮细胞损伤和动脉粥样硬化炎性反应中的作用有待进一步研究。     

高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤及盐酸贝那普利对其保护作用的实验研究

目的探讨盐酸贝那普利对体外高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞株分别培养在含5.5mmol/L葡萄糖(A组)、33.3mmol/L葡萄糖(B组)、33.3mmol/L葡萄糖 0.1μmol/L盐酸贝那普利(C组)、33.3mmol/L葡萄糖 1.0μmol/L盐酸贝那普利(D组)、33.3mmol/L葡萄糖 10.0μmol/L盐酸贝那普利(E组)的培养基中培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,并分别进行细胞活力、细胞培养上清液谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)活力、丙二醛(MDA)含量、NO分泌量的测定。结果B、C、D、E组的细胞活力、MDA含量、GSH-PX活力、NO分泌量与A组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。C组、D组、E组的细胞活力、MDA含量、GSH-PX活力与B组间差异均有统计学意义(P<0.01);NO分泌量与B组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸贝那普利对体外高糖诱导损伤的血管内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能通过清除活性氧、降低脂质过氧化、提高内皮细胞抗氧化酶体系的活力而实现对高糖损伤血管内皮细胞的保护效应。     

氧化低密度脂蛋白对大鼠心肌成纤维细胞胶原的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响.方法 体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24 h,3H-胸腺嘧啶核苷掺人法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达.结果 和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24 h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成.ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用最强.50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强.结论 ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程巾起一定的作用.     

苦参碱联合吉西他滨抗血管生成作用的实验研究

目的 探讨苦参碱联合吉西他滨对体内外血管生成的抑制作用.方法 采用HTT法观察苦参碱联合吉西他滨对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响;采用transwell板,观察苦参碱联合吉西他滨对HUVEC迁移的影响.结果 25μg/ml的苦参碱分别与1.25μg/ml、2.5μg/ml的吉西他滨联合应用对内皮细胞的增殖的抑制作用具有显著的协同效应;50μg/ml的苦参碱分别与1.25μg/ml、2.5μg/ml的吉西他滨联合应用对内皮细胞的增殖的抑制作用具有显著的协同效应;相同浓度下苦参碱、吉西他滨对人肠癌细胞株细胞的抑制低于对内皮细胞的抑制,具有明显的差异细胞毒作用;6.25μg/ml的苦参碱分别与0.625μg/ml、1.25μg/ml的吉西他滨联合应用对内皮细胞的迁移的抑制作用具有次加效应;12.5μg/ml的苦参碱与1.25μg/ml的吉西他滨联合应用对内皮细胞的迁移的抑制作用具有次加效应;12.5μg/ml的苦参碱与0.625μg/ml的吉西他滨联合应用对内皮细胞的迁移的抑制作用具有显著的协同效应.     

黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的保护作用

目的；探讨黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的影响。方法：取SD乳鼠的心脏，经济化，分离及纯化制成心肌细胞悬液并接种至24孔培养板中，通过缺氧缺糖，建立心肌细胞“缺血性”损伤的实验病理模型，在此基础上观察黄芩苷对缺氧缺糖心肌细胞形态及细胞内SOD、MDA水平及NO分泌的影响。结果：0．1－10μg/ml的黄芩苷可显著提高缺氧化心肌细胞中SOD活性，10μg/ml的黄芩苷显著抑制MDA的生成，1μg/ml黄芩苷显著增加NO分泌，10μg/ml黄芩苷又抑制NO分泌。结论：黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞损伤具有一定的保护作用。     

油酰乙醇胺对大鼠原代血管平滑肌细胞泡沫化病变的治疗作用

目的 探讨动脉粥样硬化的脂质代谢过程中，油酰乙醇胺(oleoyl ethanolamine, OEA)作为重要参与者的作用及其可能的分子机制。方法 通过氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)诱导大鼠原代血管平滑肌细胞泡沫化病变。将大鼠原代血管平滑肌细胞分为正常组(正常培养)、模型组(100μg/ml的ox-LDL刺激48 h)和OEA组(100μg/ml的ox-LDL与50μmol/L OEA刺激48 h),使用实时荧光定量PCR检测细胞泡沫化密切相关的受体与酶的mRNA表达水平，包括过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPAR-α)、B类清道夫受体白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)、B族Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)、胆固醇酰基转移酶A(acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransfera...     

木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(Luteolin)对体外抗肿瘤细胞增殖,以及其与抗肿瘤药联用的增敏作用.方法:选用5 μmol/L或10 μmol/L木犀草素与不同浓度抗肿瘤药联合作用肿瘤细胞24 h后,用MTS法检测其体外抗增殖作用.结果:5 μmol/L木犀草素对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃腺癌细胞(AGS)、人胃癌细胞(MGC-803)的抗增殖作用均<20%,对人结肠癌细胞(Caco2)和人肝癌细胞(HepG2)的抗增殖作用约20%.Bexarotene单一用药时对Hela细胞抑制率达50%(IC_(50))的浓度约为2 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约0.2 μmol/L,5 μmol/L木犀草素与0.1 μmol/L Bexarotene联用对Hela细胞的抗增殖作用达44%,Bexarotene与木犀草素联用在MGC-803、HepG2、A549细胞中增敏较小,在Caco2和MCF-7细胞中无增敏作用;顺铂单一用药时对Hela细胞的IC_(50 )>30 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约3 μmol/L,联用后在MGC-803、HepG2和A549中增敏较小;博来霉素单一用药时对Hela细胞的IC_(50)>100 μmol/L,对A549细胞的IC_(50)约为100 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后Hela细胞的IC_(50)约为1 μmol/L,与10 μmol/L木犀草素联用后A549细胞的IC_(50)约为10 μmol/L.木犀草素与格列卫联用在MGC-803、HepG2、A549和AGS中增敏较小.结论:木犀草素在低于10 μmol/L浓度时,对肿瘤细胞体外抗增殖作用较小.低浓度(5 μmol/L~10 μmol/L)的木犀草素在不同的肿瘤细胞中对抗肿瘤药的增敏作用强度不同,在Hela细胞中增敏作用最显著.     

Ghrelin抑制ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的:研究ghrelin对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用。方法:采用Ho-echst 33258荧光染色、Western blot法和硝酸还原酶法研究ghrelin对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用。结果:Hoechst 33258染色荧光检测发现,与正常对照组相比,ox-LDL组HUVEC中出现大量凋亡细胞,凋亡率明显增加,与ox-LDL组比较,ghrelin预处理组HUVEC细胞凋亡率呈剂量依赖性下降;Western blot检测结果表明,与对照组比较,ox-LDL可上调内细胞中Caspase-3表达,而经过ghrelin预处理后能剂量依赖性降低Caspase-3蛋白表达;硝酸还原酶法结果显示,ox-LDL可显著减少内皮细胞培养液中NO含量,经过ghrelin预处理后,ghrelin能剂量依赖性增加NO含量。结论:ghrelin对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有拮抗作用,可能与其抑制ox-LDL引起的细胞内Caspase-3蛋白水平升高及NO合成下降有关。     

北极刺参多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的保护作用

目的:研究北极刺参多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的保护作用。方法:采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤模型。MTT法测定血管内皮细胞的增殖活性,硝酸还原酶法测定血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)活力和NO释放量,TBA法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,DNA-Ladder法检测血管内皮细胞的凋亡。结果:不同浓度的北极刺参多糖和胶原蛋白多肽均能显著抑制ox-LDL对血管内皮细胞的氧化损伤,促进血管内皮细胞增殖(P<0.05,P<0.01),降低细胞内MDA含量(P<0.05,P<0.01),促进血管内皮细胞NO释放量(P<0.05,P<0.01),提高细胞NOS活力(P<0.05,P<0.01),拮抗ox-LDL引起的血管内皮细胞凋亡。刺参皂苷具有显著的细胞毒性作用,仅能降低ox-LDL氧化损伤细胞内MDA含量(P<0.05,P<0.01),而无其他上述作用。结论:北极刺参多糖和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的脂质过氧化物损伤均具有显著的保护作用。     

氯沙坦保护ox-LDL诱导的内皮细胞损伤与ADMA的关系

目的：探讨氯沙坦对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其与内源性一氧化氮合酶抑制物非对称性二甲基精氨酸（ADMA）的关系。方法：用ox-LDL（100mg／L）孵育人脐静脉内皮细胞株HUVEC12 24h或用10^-8～10^-6mmol／L的氯沙坦预孵育HUVEC12 30min后再与ox-LDL共孵育24h,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、ADMA含量和细胞内二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）活性。结果ox-LDL孵育HUVEC12细胞24h后细胞培养液中LDH活性、TNF-α和ADMA含量明显增加（P〈0．05）,同时NO含量下降和细胞DDAH酶活性受到抑制（P〈0．05）;氯沙坦（10^-8～10^-6mmoL／L）可显著减轻ox-LDL诱导的LDH活性、TNF-α和ADMA含量的增加以及NO含量的降低（P〈0．05）,并呈浓度依赖性的增加DDAH活性（P〈0.05）。结论：氯沙坦对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤具有保护作用,该作用可能与增加DDAH活性,降低ADMA浓度有关。     

尿酸对DOCA-Salt高血压大鼠内皮细胞的影响

目的探讨不同尿酸浓度对DOCA-salt高血压大鼠内皮细胞的影响。方法根据Theodora Szasz的方法制备DOCA-Salt高血压大鼠模型,4周后与对照组分别培养胸主动脉内皮细胞,然后用10、50、100μm尿酸和载体NaOH和内皮细胞孵育1/2h,比较ET-1、NO及NF-κBmRNA表达的差别。结果在100μm尿酸的作用下,DOCA-salt高血压大鼠组血压ET-1和NF-κBmRNA表达均明显高于对照组（P〈0.05）,而NO的表达明显低于对照组（P〈0.05）。结论 100μm尿酸促进了DOCA-salt高血压大鼠内皮细胞功能的失调,可能通过NF-κB影响了ET-1和NO的表达,从而促进并加重高血压及其血管的病变。     

阿魏酸镧配合物对H2 O2氧化损伤的血管内皮细胞的影响

目的：探讨阿魏酸镧配合物（ Lanthanum Ferulate,LF）对氧化损伤的血管内皮细胞的影响。方法体外培养内皮细胞,将细胞分为7组,即空白对照组、溶剂对照组（ DMSO）、氧化损伤组（ H2 O2）、氧化损伤加阿魏酸对照组、氧化损伤加阿魏酸镧配合物低、中、高浓度组（ LF- L＋ H2 O2、LF- M ＋ H2 O2、LF- H ＋ H2 O2）。阿魏酸及不同浓度阿魏酸镧配合物预培养内皮细胞24 h后,加入200μmol /L H2 O2继续培养12 h,用MTT法观察阿魏酸镧配合物对H2 O2损伤的内皮细胞活性的影响,检测各组细胞培养液内乳酸脱氢酶（ LDH）、一氧化氮（ NO）、丙二醛（ MDA）含量。结果阿魏酸镧配合物呈剂量依赖性降低H2 O2对内皮细胞生长抑制率,降低MDA、LDH量,增加培养液中NO-2/NO-3含量,各指标差异有统计学意义（P〈0.05）。结论阿魏酸镧配合物可拮抗和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与其抗氧化和促进NO释放有关。     

益气解毒片对鼻咽癌细胞端粒酶和端粒酶RNA抑制作用的实验研究

为研究益气解毒片对鼻咽癌细胞端粒酶和端粒酶RNA的影响,先用MTT法检测其杀伤鼻咽癌细胞(HNE1)的半抑制浓度(IC50),再用10×IC50、1×IC50、0.5×IC50作用HNE1 12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,然后检测HNE1端粒酶(Telomerase)活性和端粒酶RNA的表达.结果:10×IC50作用HNE1 24 h,端粒酶活性下降为阴性,同时端粒酶RNA的表达受到抑制;1×IC50作用后,端粒酶活性稍有下调,但端粒酶RNA表达无明显改变;0.1×IC50作用后,端粒酶活性没有明显变化,但低于白空对照组.这提示较高浓度益气解毒片在体外能抑制端粒酶的活性和端粒酶RNA表达,可能通过对鼻咽癌细胞及其端粒酶的活性抑制而发挥抑瘤效应.     

ox-LDL对PLGF作用内皮细胞释放NO和内皮细胞黏附分子的影响

目的：探讨氧化型低密度脂蛋白对胎盘生长因子-1作用人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮和内皮细胞黏附分子的影响。方法：在ox-LDL（25μg／mL）条件下,应用不同浓度的PLGF-1（20、40、80ng／mL）孵育ECV-304,对照组为内皮细胞未受损时,相同浓度梯度的PLGF-1孵育ECV-304,3h、6h、12h、24h后应用ELISA法检测内皮细胞黏附分子-可溶性细胞间黏附因子-1、可溶性血管内皮细胞黏附因子-1的表达,硝酸盐还原酶法检测NO的表达。结果：正常生理条件下,PLGF诱导NO和内皮细胞黏附分子的表达,且呈时间（当t=6h达到最理想的分泌量）、浓度依赖关系。在氧化损伤条件下,PLGF诱导NO的表达下降,而内皮细胞黏附分子的表达则增高,以VCAM-1表达增多更为明显。结论：氧化损伤是动脉粥样硬化的独立危险因素,而PLGF诱导内皮的活化,上调内皮黏附分子的表达,可进一步促使疾病的恶化。故认为抑制PLGF的生物活性可达到控制炎症反应的作用。     

右美托咪定对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制

目的 研究右美托咪定(Dex)对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及机制.方法 应用高浓度谷氨酸处理PC12细胞以建立细胞缺氧损伤模型.应用MTT法测定细胞存活率,采用试剂盒分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶释放量,细胞丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力,DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,Fluo-8染色流式细胞仪检测细胞内钙离子含量,JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位.结果 在0.01～100 μmol/L浓度范围内,Dex浓度依赖性地拮抗谷氨酸所致PC12细胞损伤,至100 μmol/L时,细胞存活率达到正常组的(86.6±2.2)％,显著高于模型组(P＜0.01),乳酸脱氢酶释放量为正常组的1.4±0.1倍,显著低于模型组(P＜0.01).1μmol/L Dex预处理谷氨酸损伤的PC12细胞,与模型组相比,能够显著降低丙二醛含量(P＜0.01),提高超氧化物歧化酶活力(P＜0.01),抑制胞内活性氧过度生成(P＜0.01),降低细胞内Ca2+浓度(P＜0.01),稳定细胞线粒体膜电位(P＜0.01).结论 Dex对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与Dex抗氧化和抑制细胞内钙超载,保护线粒体功能相关.