人miRNA-埃博拉病毒相互作用的生物信息学研究

目的：初步探讨人微小RNA（ miRNA）与埃博拉病毒基因组5′尾标（ trailer）序列相互作用,为防治埃博拉病毒提供可能的靶向miRNA。方法运用Pita和RNAhybrid软件预测与埃博拉病毒5′尾标序列相互作用的人miRNA,并对其进行注释和分析。结果与结论发现人miRNA可能与埃博拉病毒5′尾标序列存在复杂的相互作用。根据以前关于宿主miRNA与病毒基因组相互作用的报道,我们认为,人miRNA与埃博拉病毒基因组5′尾标的相互作用可能会影响埃博拉病毒在人体内的复制以及人体细胞的正常功能。该研究将为埃博拉病毒的防治提供新的思考。     

整合因子复合体研究进展

整合因子复合体（ integrator complex ）是一个新近发现的多功能蛋白质复合物,由至少12个进化上保守的亚基（ integrator complex subunits , INTS1～INTS12）组成。该复合体能与RNA聚合酶Ⅱ（ RNAPⅡ）大亚基的具有重复氨基酸序列的C端相互作用,进而介导小核RNA（small nuclear RNA, snRNA）U1／U2的3′端加工。整合因子复合体还能通过与RNAPⅡ、延伸负调控因子NELF和转录延伸因子Spt5发生相互作用,调控NELF介导的RNAPⅡ的暂停－释放,进而调控mRNA的合成。近年来,有研究陆续报道整合因子复合体还在DNA损伤应答、核周动力蛋白的募集、细胞核内卡哈尔体（ Cajal body ）的完整性、脂肪细胞的分化成熟、造血、初级纤毛的形成、肿瘤的发生发展和病毒微小RNA（ microRNA,miRNA）形成等方面发挥重要作用。该文综述了整合因子复合体的研究进展。     

可选择性多聚腺苷酸化的生物学功能

可选择性多聚腺苷酸化（ alternative polyadenylation , APA）是一种普遍存在于真核生物中的基因调控机制。 APA事件的发生能使一个基因产生多种mRNA转录本,从而增加转录本的复杂度。选择不同的多聚腺苷酸化位点可以使不同的转录本具有不同的编码序列,或具有不同长度的3′端非翻译区（3′untranslated region,3′UTR）。不同长度的3′UTR可引起RNA结合蛋白或微小RNA（ miRNA）的结合位点发生变化,进而影响mRNA的稳定性、定位和翻译效率。近年来,APA的研究涉及APA的形成过程、调控APA的机制以及APA对生物学过程和疾病的影响。该文对APA的上述研究进展进行了综述。     

宿主microRNA靶向介导的减毒活疫苗研究进展

疫苗是预防病毒性传染病的最有效手段,包括减毒活疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗和基因工程疫苗等。减毒活疫苗模拟了病毒的感染过程,能有效诱导机体产生体液和细胞免疫应答,在临床上得到广泛应用。传统的减毒活疫苗一般通过连续传代获得,研发成本高。微小RNA（ microRNA,miRNA）靶向调节是新近发现的宿主调控基因表达的重要手段,具有明确的组织特异性和种属特异性。通过反向遗传学技术能够将特异的宿主miRNA靶向序列有效整合入病毒基因组,从而实现对病毒生物学特征的有效调节,在减毒活疫苗设计与研发领域有着良好的应用前景。该文综述了miRNA靶向介导的减毒策略及其在疫苗设计中的研究进展。     

电离辐射诱导microRNA研究进展

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类长度为21~23 nt的单链非编码小RNA。在真核生物中miRNA主要通过与编码蛋白质基因的信使RNA（mRNA）配对结合,在转录后水平抑制基因表达。越来越多的证据表明,miRNA与氧化应激特别是辐射生物效应相关,miRNA有可能成为放射病治疗的潜在新靶点。本文概述电离辐射诱导miRNA的研究进展。     

黄病毒属非结构蛋白5的研究进展

非结构蛋白5(NS5)作为黄病毒属中最保守的非结构蛋白,具有甲基转移酶活性和RNA依赖的RNA聚合酶活性,在病毒RNA复制过程中发挥着至关重要的作用。深入研究发现不同种黄病毒的NS5蛋白还能与宿主细胞的功能蛋白相互作用,通过不同的作用机制介导病毒的免疫逃逸。该文概述了NS5蛋白的结构、亚细胞定位及其功能,并阐述NS5蛋白在病毒复制及介导病毒免疫逃逸领域的机制研究以及靶向NS5蛋白的小分子抑制剂的研究进展。     

血清或血浆中的miR-375在肿瘤诊治和预后中的研究进展

microRNAs（miRNAs）是一类在转录后水平调控基因表达的内源性非编码小RNA分子,通过与下游靶基因3′-非编码区（3′-untranslated regions 3′-UTRs）结合,抑制mRNA的翻译或使其降解,进而发挥原癌基因或抑癌基因的作用。近年来研究表明,血清或血浆中的miR-375是肿瘤早期诊断、治疗、预后等密切相关的生物标志。     

MicroRNA与肝癌发生发展关系研究进展简

MicroRNA（miRNA）是一类内源性非编码的小RNA,通过与目标mRNA互补配对,涉及靶基因的转录后调控,在细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥重要的生理作用。利用实验生物学及生物信息学方法对与肿瘤相关的miRNA进行研究成为当前的热点。最近多项研究表明miRNA广泛参与肝癌的发生、发展、转移、多药耐药。本文就microRNA与肝癌发生发展之间的关系作一综述。     

登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用

目的探讨登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用。方法首先通过mfold3.2软件对登革4型病毒5′端RNA二级结构进行预测,确定了3个突变位点：SLB1,缺失位于短茎环82-87位5′UAR环化序列,并破坏其保守茎环结构;SLB2,在次环引入突变破坏其环状结构（M77G/C）;SLB3,突变仅涉及核苷酸,不破坏该次环二级结构（M77-78AG/GA）。然后在含有海肾荧光素酶（Renilla Luciferase,R·luc）报告基因的复制子（DEN-R·luc2A-RP）基础上,利用重叠PCR构建上述突变体。将突变体（包括相关的阳性和阴性对照复制子）分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光（IFA）、RT-PCR、R.luc报告基因技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译水平进行检测。结果SLB1突变体的翻译水平并未受到显著影响,但其复制水平出现显著下调。SLB2突变体的翻译水平亦未受到显著影响,但其复制水平受到完全抑制;SLB3突变体的复制和翻译水平均受到了完全抑制。结论登革4型病毒5′非编码区SLB元件对基因组RNA复制和翻译具有重要的调控作用。     

MicroRNA在垂体肿瘤中的作用研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类新发现的内源性非编码小RNA分子,在转录后水平与靶mRNA完全或不完全配对抑制靶mRNA翻译或降解mRNA。目前研究认为miRNA在细胞增殖、分化、凋亡、细胞粘附、细胞代谢、细胞转移和血管发生等过程中发挥重要调节作用。最近有研究表明一些miRNAs在垂体腺瘤中差异表达,且这些异常表达的miRNAs与垂体腺瘤的诊断、分型、大小、侵袭及临床疗效密切相关。本文将对miR-NAs在垂体肿瘤中的作用相关研究作详细的综述。     

miRNA参与p53基因调控网络研究进展

在细胞增殖和细胞死亡等过程中均发现一些miRNA可以作为肿瘤抑制基因或癌基因参与调节。研究发现miR-34作为p53转录激活的靶分子,参与了包括细胞周期阻滞和细胞凋亡等过程的调节,miR-34的缺失可使p53介导的细胞效应受阻。miR-29可激活p53的表达并诱导p53介导的细胞凋亡。此外,还有许多miRNA分子受到p53的转录抑制。一种miRNA可调节多种不同的靶蛋白分子,因此大大拓展了p53调控网络的层面。越来越多的证据表明miRNA参与了癌基因和抑癌基因网络的调控,同时为肿瘤治疗提供了新的治疗策略。     

动物胚胎发育中的MicroRNAs研究进展

MicroRNA（miRNA）是一类广泛存在于真核生物中的非编码RNA,具有调控功能,长度约有20～25个核苷酸,它通过与靶基因特异性的碱基配对引起靶基因的降解或者抑制其翻译,从而实现对靶基因的转录后表达的调控。文章综述了miRNA的发现、体内生成机制、作用机制及不同动物种类胚胎发育过程中miRNA的鉴定和研究．并并阐述了miRNA研究中的问题及应用前景。     

流感泰得小分子化合物修饰前后细胞摄取的比较

目的在反义寡核苷酸流感泰得（Flutide,FT）上偶联神经氨酸酶抑制剂奥司他韦,以期通过特定小分子化合物的修饰提高细胞对流感泰得的摄取,进而提高其抗流感的作用。方法采用3′荧光标记控孔玻璃珠（3′FAMCPG）合成全硫代修饰的流感泰得,并对其5′端进行巯基修饰,与结构改造后的奥司他韦分子进行连接得到流感泰得与奥司他韦偶联物（FTO）;修饰前后的反义药物直接转染流感病毒感染的人肺癌上皮A549细胞,通过荧光显微镜观察及流式细胞技术检测FTO与FT的胞内荧光强度来进行反义药物偶联小分子化合物前后胞内摄取量的比较;采用CCK8细胞增殖检测技术进行FT与FTO体外抗流感病毒活性评价。结果得到一种新的寡核苷酸偶联物FTO;荧光显微镜观察结果显示,细胞给予FTO后荧光强度强于FT;流式细胞检测结果表明,修饰后的FTO胞内平均荧光值明显高于修饰前的FT,其中给药12h时,病毒感染细胞＋FTO（BFTO）组的平均荧光值比病毒感染细胞＋FT（BFT）组增加了（102.3±56.0）%,正常细胞＋FTO（ZFTO）组的平均荧光值比正常细胞＋FT（ZFT）组增加了（89.4±44.7）%;给药24h后BFTO组的平均荧光值比BFT组增加了（115.2±28.4）%,ZFTO组的平均荧光值比ZFT组增加了（102.9±12.1）%,（P〈0.05）;体外抗流感病毒活性评价显示,FTO与FT的IC50值分别为（1.57±0.08）μmol/L与（4.44±0.11）μmol/L。结论流感泰得采用奥司他韦修饰后有助于提高其在细胞内的摄取量以及抗流感病毒活性。     

MAPK信号途径介导的17β-雌二醇快速激活人精子的研究

目的 观察17β-雌二醇（E2）对人精子快速的非基因组激活效应,并探讨其相关的作用机制.方法 雌激素受体拮抗剂Tamoxifen（0.05μmol/L）预处理20min后,分别用E2（1μmol/L）、雌二醇-牛血清白蛋白结合物（E2-BSA,5μmol/L）作用获能人精子15min,以三色法染色检测获能人精子顶体反应率,Western blotting检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）蛋白的表达变化.结果 E2、E2-BSA均能提高人精子的顶体反应率和促进p42/p44磷酸化MAPK蛋白的表达,且两者的作用均可被Tamoxifen所阻断.结论 人精子膜上可能存在膜雌激素受体（mER）,雌激素与mER结合后可通过MAPK信号途径快速激活人精子.     

微小RNAs在分子放射生物学中的研究进展

微小RNAs (miRNAs)是一类新近发现的能调节基因表达的短小非编码RNA.miRNAs通过负性调节靶基因,在辐射诱导的凋亡、辐射耐受性、旁观者效应等辐射反应中起重要作用.越来越多的证据表明,miRNAs与放射治疗所致的辐射生物效应相关.miRNAs有可能成为改善放射治疗肿瘤疗效的潜在新靶点.     

重组腺病毒肝细胞生长因子对乙型肝炎病毒感染滋养层细胞的抑制作用

目的：探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）体外感染滋养层细胞（JEGⅢ）的治疗作用。方法：在转染与不转染rAd-HGF两种情况下,HBV阳性血清感染JEGⅢ。用GIMSA染色、透射电镜及荧光定量PCR三种方法观察感染后细胞形态学及培养物中HBV-DNA含量的变化。结果：形态学观察转染rAd-HGF组细胞病变较未转染组有明显减轻,且未转染组胞质内可见HBV颗粒。荧光定量PCR显示未转染Ad-HGF组培养上清中HBV-DNA含量较转染组明显增高（P〈0.05）。结论：HGF可有效抑制HBV感染滋养层细胞。     

CLIP相关技术的研究进展

在真核生物基因表达的转录后调节中,RNA结合蛋白（ RBP）起着关键作用,很多RBP的异常与人类疾病的发生密切相关。自2000年的RNA免疫沉淀和芯片分析方法（ RNA immunoprecipitation with differential display or microarray analysis , RIP-ChIP）出现以来,人们开始就RBP与RNA相互作用进行了系统而广泛的研究。经过改良和发展,基于体内实时紫外交联免疫沉淀法（ ultraviolet crosslinking and immunoprecipitation , CLIP ）、交联免疫沉淀cDNA文库高通量测序法（ high-throughput sequencing of CLIP cDNA library , HITS-CLIP）、光催化核糖核苷增强交联和免疫沉淀法（ photoactivatable-ribonucleoside-enhanced crosslinking and immunprecipitation , PAR-CLIP）以及提高个别核苷酸分辨率交联和免疫共沉淀法（ individual nucleotide resolution CLIP , iCLIP）等RIP-ChIP衍生方法相继产生,使用这些方法,可以解析RBP的RNA识别特异性,而且通过与高通量测序技术结合,可以实现转录组尺度的RBP的靶序列的鉴定,分辨率也得到极大提高。该文就RNA与蛋白的相互作用的基本原理及其研究进展、相关技术存在的问题以及发展趋势进行简要综述。     

人类流感病毒多重PCR分型方法的建立

目的建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法。方法根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法。同时,对该方法的特异性和敏感性进行了评价,并利用该方法对39份疑似swineH1N1的临床标本进行检测。结果该方法可同时扩增出A型流感病毒M基因203bp,B型流感病毒M基因296bp,A型流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为362bp（H1）,112bp（H3）,188bp（H5）,494bp（swineH1）。该实验最低可检测新甲型H1N1（A/Beijing/501/2009）病毒RNA0.5TCID50。该方法的特异性实验结果显示,在多重PCR检测中未检出非特异扩增的PCR产物。同时,使用该方法从39份疑似新甲型H1N1的临床咽拭子标本中检测出新甲型H1N1阳性的标本4份（10.2%）,季节性H1N1亚型2份（5.1%）,H3N2亚型12份30.7%,本次实验结果与WHO通过实时PCR方法检测的结果一致。结论本研究建立的多重PT-PCR方法快速、敏感,特异性强,可用于人类流感病毒的分型检测。     

CpG寡脱氧核苷酸为佐剂的丙型肝炎生物治疗研究进展

丙型肝炎严重威胁人类健康,并在全球范围内流行,目前尚无有效办法预防和治疗丙型肝炎病毒感染,胞苷酸鸟苷（CpG）寡脱氧核苷酸（CpGODN）作为一类较强的免疫调节佐剂,能够广泛诱导交叉中和性抗体和细胞免疫反应,对丙型肝炎病毒感染具有治疗作用。本文对以CpGODN为佐剂的丙型肝炎生物治疗研究进展予以综述。