活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响

目的探讨活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中所诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响。方法制作脑缺血再灌注模型，80只大鼠随机平均分为4组，假手术组、模型组、阿司匹林组、活血通脉汤组，每组20只。应用免疫组织化学方法分别检测每组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达的情况。结果模型组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显高于假手术组（P〈0．01）；活血通脉汤组大鼠各时间点脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显低于模型组（P〈0．05，P〈0．01），且与阿司匹林组无显著差异性（P〉0．05）。结论活血通脉汤能降低大鼠脑组织Fas、Caspase-3表达水平，减轻缺血脑组织神经元坏死的程度，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，机制与降低Fas、Caspase-3表达水平有关。     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达

目的观察大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达。方法 48只成年健康Wistar大鼠,采用Naslund腹主动脉阻断法制作脊髓缺血再灌注损伤模型。随机分为空白对照组(n=6)、假手术组(n=6)和损伤组(n=36),观察脊髓缺血再灌注损伤后,脊髓的病理变化、细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达变化的规律。结果观察脊髓缺血再灌注损伤后Caspase-1阳性细胞在损伤后12h表达明显,1d损伤区域及周边出现表达高峰。Caspase-3阳性细胞在损伤后12h表达明显,2d损伤区域及周边出现表达高峰。TUNEL阳性细胞也在脊髓损伤后12h表达明显,2d出现表达高峰。空白对照组、假手术组:Caspase-1、Caspase-3免疫组化少有表达,少见TUNEL阳性细胞。结论脊髓缺血再灌注损伤后存在神经细胞凋亡,Caspase-1、Caspase-3均参与损伤的调节。     

心肌缺血大鼠心内神经节神经生长因子表达的变化

目的观察神经生长因子在急性心肌缺血大鼠心内神经节表达及其变化,探讨神经生长因子与心肌缺血的关系。方法采用免疫组织化学方法动态观察了正常大鼠以及大鼠冠状动脉结扎后1、6、12、24h心内神经节神经生长因子的表达及变化。结果各组大鼠的心内神经节均存在神经生长因子阳性神经元,并且神经生长因子阳性神经元的数目在冠状动脉结扎后1、6、12、24h后增多,表达也增强。结论心肌缺血大鼠心内神经节神经生长因子表达持续显著升高,提示神经生长因子可能参与心肌缺血的病变过程。     

癫痫持续状态大鼠海马Bim与Caspase-3的表达

目的:探讨在匹罗卡品致痫的癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)大鼠模型中,Bcl-2-相互作用细胞死亡介导因子(Bim)与Caspase-3在大鼠海马组织中的表达。方法:雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠,应用匹罗卡品产生SE 60 min后终止发作,24 h后取材,行HE染色及TUNEL染色,观察海马神经元的损伤及凋亡情况,Western Blot测定海马组织中Bim的表达,免疫组化检测Caspase-3的表达。采用Pearson相关分析法分析Bim与Caspase-3表达的相关性。结果:SE后24 h,海马组织HE染色见神经元数量减少,TUNEL染色阳性细胞数明显增加,Western Blot中Bim出现相对分子量26kD的条带,免疫组化染色可见大量Caspase-3阳性神经元。结论:大鼠SE后24 h,Bim与Caspase-3在海马组织神经元表达增加,且二者的表达呈正相关(r=0.901,P=0.001),海马神经元出现凋亡。     

罗格列酮对实验性大鼠脑出血后细胞凋亡的影响

目的:探讨罗格列酮对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后血肿周围脑组织细胞凋亡的影响。方法:88只健康老龄雄性SD大鼠,随机分为假手术组8只,模型组40只,罗格列酮干预组40只,后2组又分为6 h、12 h、24 h、72 h、7 d 5个亚组,每组8只。采用大鼠股动脉新鲜自体不凝血50μl注入大脑纹状体基底节区复制脑出血模型,干湿重法检测脑组织含水量(water content of brain,BWC);原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠脑细胞的凋亡情况;免疫组化法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)和半胱氨酸蛋白-3(Caspase-3)的表达情况。结果:(1)随着大鼠脑出血后时间的延长,ICH组BWC呈逐渐增高趋势,并在72 h达高峰。与模型组比较,罗格列酮干预组BWC均降低,组织水肿减轻(P0.05)。TUNEL染色结果显示凋亡细胞的数量与各位BWC的复化相一致。(2)免疫组化法检测结果显示:大鼠脑出血后72 h,Caspase-3凋亡相关蛋白的表达明显上调。罗格列酮干预后,与模型组相比,PPARγ高表达,同时Caspase-3表达和凋亡细胞数明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:PPARγ激动剂罗格列酮可能通过抑制Caspase-3的表达,降低脑出血后脑组织的继发性凋亡损伤,对脑组织起保护作用。     

LY-294002对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3表达的影响

目的研究LY-294002对急性脊髓损伤大鼠Caspase-3表达的变化。方法选取104只成年健康SD大鼠,按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8～9)急性压迫损伤模型,按随机数字表法分为假手术组8只、损伤组48只、LY-294002组48只。免疫组化和Western blot方法检测各组大鼠脊髓损伤部位Caspase-3的表达。结果免疫组化结果发现假手术组大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3阳性细胞较少;在脊髓损伤后8 h时,Caspase-3阳性细胞数明显增多,3 d达高峰,7 d表达开始减弱。在经LY-294002处理后的各时间点大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3阳性细胞明显少于相同时间点的脊髓损伤组大鼠。Western blot方法发现假手术组大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3的表达量很少,而在脊髓损伤后8h时,Caspase-3蛋白表达量明显增多,3 d达高峰,7 d表达开始减弱,在经LY-294002处理后的各时间点大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3蛋白表达则明显少于相同时间点的脊髓损伤组大鼠,与免疫组化结果一致。结论LY-294002能够下调急性脊髓损伤大鼠Caspase-3蛋白的表达。     

HMGB1参与HBSS诱导的Lewis细胞凋亡及其相关机制研究

目的探讨HBSS饥饿缓冲液能否诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡及可能的机制。方法 Hank′s平衡溶液(HBSS)饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12 h后采用Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡。Lewis细胞在HBSS处理30 min后流式检测ROS的产生,4、8、12 h后通过免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达。另外,HBSS刺激Lewis细胞12 h后采用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的表达。结果 HBSS饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12 h后与对照组相比凋亡百分比明显增多。流式结果表明Lewis细胞在HBSS处理30 min后ROS表达量明显上升,免疫印迹检测发现HBSS作用Lewis细胞3 h后HMGB1表达增加,6 h后在细胞培养上清中检测到HMGB1的分泌。另外,HBSS刺激12 h后Caspase-3表达也显著增加,且有统计学意义。结论 HBSS饥饿缓冲液能诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡,且凋亡可能依赖于ROS-HMGB1-Caspase-3通路。     

RGMb参与脑缺血再灌注损伤中大鼠海马神经元的凋亡

目的探讨RGMb(repulsive guidance molecule b)在大鼠脑缺血再灌注损伤中对细胞凋亡的影响。方法健康8周Wistar大鼠60只,随机分为:假手术组、缺血再灌注组、RGMb阻断组,每组依据缺血后再灌注6h、12h、24h、48h、72h不同时间点再分五个小组。采用免疫组织化学方法 ,Western blot方法检测Caspase-3在各组海马CAI区不同再灌注时间点的表达变化,应用TUNEL法检测海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注组Caspase-3蛋白表达量和凋亡细胞数明显高于假手术组(P0.01),而RGMb阻断组Caspase-3蛋白表达量和凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(0.01)。结论阻断RGMb可减少脑缺血再灌注损伤中神经元的凋亡。     

急性癫痫大鼠海马Ca3区的Bcl-2、Caspase-3蛋白表达变化

目的探讨Bcl-2、Caspase-3在马桑内酯所致癫痫大鼠海马Ca3区的表达变化。方法40只SD大鼠随机分为癫痫组30只（又分为3h、6h、24h三个亚组）和对照组10只，应用免疫组织化学方法检测海马神经元中Bcl-2、Caspase-3的表达。结果①Bcl-2于致痫后6h表达增加，并于24h减少，与对照组比较有显著性差异（p〈0．05）。②Caspase-3于致痫后6h表达增加，并持续增加到24h，与对照组比较有显著性差异（p〈0．05）。③致痫组Bcl-2与Caspase-3的表达成反比，差异有统计学意义（p〈0．05）。结论Caspase-3蛋白的表达水平在癫痫发作后神经元的损伤中占有重要的作用，参与其凋亡的发生及其它功能的调控。Bcl-2可通过抑制Caspase-3的活性而抑制神经元的损伤，但是这种抑制作用是有限的。     

力竭运动损伤模型大鼠运动预适应后心脏STAT3和Caspase-3的表达

背景：信号转导及转录激活因子3(STAT3)和Caspase-3是JAK2/STAT3信号通路中的重要因子,它们在运动预适应心肌保护中的作用目前相关研究较少。目的：分析运动预适应对大鼠心脏STAT3和Caspase-3表达的影响及其对心脏保护的作用机制。方法：将80只SD大鼠随机分为对照组、力竭组、运动预适应组、运动预适应+AG490组。连续3 d的间歇跑台运动建立运动预适应动物模型。对照组：常规饲养3 d;力竭组：常规饲养3 d后,以30 m/min的速度运动至力竭;运动预适应组：先进行3 d的运动预适应,24 h后以30 m/min的速度运动至力竭;运动预适     应+AG490组：在每天运动预适应前10 min,腹腔注射JAK2抑制剂AG490(3 mg/kg),余处理同运动预适应组。用HBFP染色法检测心肌缺血缺氧改变,用Western blot方法检测心脏STAT3表达,用免疫组织化学方法检测心脏Caspase-3表达。结果与结论：与对照组相比,力竭组心肌缺血缺氧面积、心脏STAT3表达和心脏Caspase-3表达均显著升高;与力竭组相比,运动预适应组心肌缺血缺氧面积和心脏Caspase-3表达均明显降低,而心脏STAT3表达显著升高;与运动预适应组相比,运动预适应+ AG490组心肌缺血缺氧面积和心脏对照组Caspase-3表达均显著升高,而心脏STAT3表达明显降低。提示运动预适应可以通过激活JAK2/STAT3信号通路,诱导心脏STAT3表达增加,下调心脏Caspase-3表达,减少心肌细胞凋亡,减轻心肌缺血损伤,从而对心肌发挥保护作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

慢病毒介导的RNA干扰下调IL-6抑制脊髓顿挫损伤后Caspase-3表达

目的通过慢病毒介导的RNA技术干扰IL-6的表达,探究脊髓顿挫损伤后Caspase-3的表达变化。方法Allen′s打击法制备脊髓顿挫伤(SCC)模型,BBB评分确认造模成功;免疫组织化学和Q-PCR技术定位和定量测定IL-6和Caspase-3的表达变化;Gene MANIA网站预测IL-6与Caspase-3的联系;慢病毒介导的RNA干扰技术构建IL-6干扰模型后,Q-PCR技术定量测定Caspase-3的表达变化。结果 SCC后SD大鼠BBB评分显著低于假手术组(P0.05);IHC结果显示:IL-6和Caspase-3均在在脊髓白质胶质细胞表达;Q-PCR结果显示:IL-6在损伤后12h表达显著增加,3d、28d表达持续下降;Caspase-3在损伤后12h、3d、28d表达持续下降。生物信息学分析结果:IL-6和Caspase-3在大鼠体内存在共定位关系。干扰组Caspase-3表达比空载组显著降低(P0.05)。结论在SCC后,抑制IL-6表达可降低Caspase-3表达水平。     

地塞米松对大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响

目的探讨地塞米松对体外培养大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的地塞米松处理BRL-3A细胞,于12、24、48、72、120 h后用MTT检测地塞米松对BRL-3A细胞活性的影响,同时分别用Annexin V-FITC双染法、PI单染色法、实时定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)等方法检测地塞米松对BRL-3A细胞周期和凋亡的影响。结果 MTT检测表明,地塞米松能够抑制BRL-3A细胞的活性;Annexin V-FITC双染法分析显示,地塞米松具有显著促进BRL-3A细胞凋亡的效果;PI单染色法检测细胞周期分布情况表明,地塞米松处理后的细胞与对照组相比增殖能力减弱;用Real-time PCR检测促细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和促增殖基因Ccnd1和Jun的mRNA表达情况,结果显示,用地塞米松处理后的细胞中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9均表达上调,而Ccnd1和Jun均表达下调,说明地塞米松能促进BRL-3A细胞的凋亡。结论地塞米松可以促进BRL-3A细胞的凋亡,并抑制其增殖。     

胸腺细胞凋亡的死亡信号表达

目的:探讨胸腺细胞凋亡过程中死亡信号通路的存在依据及其意义。方法:选用2月龄清洁级SD大鼠,用ABC法检测胸腺细胞Fas/FasL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-12表达,用RT-PCR法检测培养胸腺细胞的TNF-β和Caspase-3表达。结果:Fas在胸腺皮、髓质细胞弥散均匀分布,FasL阳性细胞较少,Caspase-3主要分布于皮质胸腺细胞,Caspase-8则分布于胸腺髓质,Caspase-12在皮、髓质胸腺细胞均匀分布,RT-PCR检测显示胸腺细胞均表达TNF-β和Caspase-3。结论:大鼠胸腺内存在完整的细胞凋亡死亡信号通路的各种成分。死亡信号通路在胸腺细胞凋亡过程中可能扮演重要角色。     

Caspase-3在脑出血后神经细胞凋亡中的作用

目的:探讨Caspase-3表达与大鼠脑出血后神经元凋亡的关系。方法:应用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,将动物随机分为假手术组、脑出血组,分别在不同时间点断头取脑,连续切片作TUNEL染色和Caspase-3免疫组化染色。结果:脑出血后6h血肿内部及周边组织出现TUNEL阳性细胞, 72h达高峰, 2w时仍有少量表达;Caspase-3在脑出血后6h表达明显增高, 24h达到高峰,各组与假手术组之间差异显著(P<0 05 )。脑出血后的TUNEL阳性细胞与Caspase-3的表达呈正相关(r=0. 547,P<0 01),且Caspase-3的高峰时间早于凋亡的发生。结论:脑出血后的细胞凋亡与Caspase-3的表达有关。     

大鼠肢体缺血再灌注可致脑组织细胞凋亡

目的：探讨肢体缺血再灌注（limbs ischemia-reperfusion,LIR）对脑组织的影响。方法：复制大鼠LIR模型,采用尼氏染色观察脑组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组化和Western印迹法检测凋亡相关因子Bcl-2、细胞色素C（cytoC）、Caspase-3的表达变化。结果：大鼠LIR后,脑组织海马区、中脑红核区神经元细胞受损,脑组织出现水肿裂隙,cytoC、Caspase-3凋亡相关蛋白表达明显上调,24h达高峰,与细胞凋亡数量的增加相一致,Bcl-2表达与再灌时程呈负相关。结论：LIR后可导致脑组织损伤,并出现细胞凋亡,其发生机制与Caspase-3、cytoC、Bcl-2凋亡相关蛋白的表达变化有关。     

癫痫大鼠海马神经元Fas、FasL和Caspase-3的表达

目的观察Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马神经元中的表达,探讨Fas、FasL和Caspase-3表达与癫痫的关系,为癫痫的生物治疗提供实验依据。方法通过腹腔注射戊四氮建立癫痫大鼠模型,用免疫组织化学方法和图像分析技术检测Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马神经元中的表达。结果 Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马神经元中的表达水平和阳性细胞数量与正常对照组相比均明显增多(<0.05)。结论 Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马过表达。     

CGRP和NGF对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质Caspase-3蛋白表达的影响

为了探讨外源性降钙素基因相关肽 ( CGRP)和神经生长因子 ( NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达的影响 ,在全脑缺血后再灌注模型上 ,应用免疫组织化学结合显微图象分析方法检测了 Caspase-3蛋白表达。结果发现 ,假手术组大鼠纹皮质未见 Caspase-3表达 ;缺血组较假手术组 Caspase-3表达显著增加 ( P<0 .0 1) ;CGRP组和 NGF组 Cas-pase-3表达均弱于缺血组 ( P<0 .0 5 ) ;CGRP和 NGF合用组 Caspase-3表达明显弱于缺血组 ( P<0 .0 1) ,分别弱于 CGRP组 ( P<0 .0 5 )和 NGF组 ( P<0 .0 5 )。缺血组缺血后再灌注 3 h Caspase-3开始表达 ,1d达高峰 ,3 d时减弱 ,CGRP和 NGF合用组 Cas-pase-3表达随着缺血后再灌注时间的延长而逐渐减弱。以上结果提示 :CGRP和 NGF分别抑制全脑缺血后大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达 ,联合应用则能显著抑制全脑缺血后大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达 ,二者对保护缺血神经元可能有协同作用     

维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织中Caspase-3表达情况

目的　本文旨在探讨维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织Caspase-3表达情况。 方法　选取孕10 d Wistar大鼠,实验组用溶有维甲酸（40mg/ml）的橄榄油,以135 mg/kg经胃管注入给药制作脊柱裂畸形大鼠模型;对照组选取孕10 d Wistar大鼠给等量橄榄油。将实验组及对照组按照孕12、15、17和20 d分为4组。应用免疫组织化学方法比较分析Caspase-3在对照组、畸形组胎鼠脊髓组织细胞中的分布和表达情况。 结果　脊柱裂大鼠脊髓神经组织中Caspase-3在15 d开始增多,一直持续到20 d胚胎大鼠。其增高情况明显高于同一时间点对照组大鼠。胚胎15、17和20 d显性脊柱裂畸形鼠脊髓组织Caspase-3阳性细胞数多于对照组,荧光强度高于对照组。 结论　维甲酸诱导的脊柱裂胎鼠Caspase-3表达明显高于正常发育胎鼠。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12在实验性淋巴滞留性脑病大鼠脑皮层及海马中的表达研究

目的探讨Caspase-12 mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠模型脑皮层及海马中的表达情况,及其与神经元凋亡之间的关系。方法健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为手术组、假手术组和对照组,手术组建立淋巴滞留性脑病实验动物模型,在脑淋巴阻滞后不同时间点（1、3、5、7、14d）取颞顶皮层、海马区脑组织,用半定量RT—PCR方法观察淋巴滞留性脑病大鼠损伤后Caspase-12 mRNA的表达情况。用假手术组、对照组观察并对比上述指标。结果在颞顶皮层,Caspase-12 mRNA的表达在术后1d即升高,3d时达到高峰,5d时开始下降,但仍高于正常对照组及假手术组,且有统计学意义（P〈0．05）,术后7d、14d降至接近正常对照及假手术组水平。在海马,淋巴阻滞后3d内Caspase-12 mRNA的表达升高,且以第一天时为最高,5d后逐渐接近正常对照组及假手术组。结论凋亡的发生可能与内质网应激有关。     

银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

探讨银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法以36只雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物随机分为3组:假手术组、心肌缺血再灌注模型组与银杏酮酯组。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组穿线后不结扎,模型组于缺血前30 min腹腔注射生理盐水,银杏酮酯组大鼠于缺血前30 min腹腔注射银杏酮酯(100mg/kg)。造模24h后处死大鼠,TUNEL法检测心肌细胞凋亡, Western blot方法检测心肌组织Bax和caspase-3蛋白表达,实时PCR方法检测心肌组织Bax mRNA和caspase-3 mRNA的表达。结果银杏酮酯预处理可明显降低心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡率,降低心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bax和caspase-3蛋白与mRNA表达水平。结论银杏酮酯预处理降低缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡率可能与抑制Bax和caspase-3表达相关。