氯化镉和氯化锌对V79细胞凋亡的影响

目的通过体外实验，以两种简便方法了解氯化镉（CdCl2）、氯化锌（ZnCl2）对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）细胞凋亡的影响。方法采用MTT法了解CdCl2对于V79细胞的毒性；在此基础上采用碱性单细胞凝胶电泳法和激光共聚焦技术结合AO／EB双染法。研究不同剂量CdCl2对V79细胞凋亡的影响，并采用生理浓度的ZnCl2与CdCl2同时作用后观察细胞凋亡情况。结果MTT实验中．CdCl2对于V79细胞的毒性随染毒剂量增加而增强。呈线性关系；碱性单细胞凝胶电泳法和AO／EB双染法得到相似的结果，即1～32μmol／LCdCl2可以引起V79细胞凋亡。凋亡率、凋亡指数分别为3．0％～49．6％及3．5％～53．8％，且随剂量增加而增大。呈剂量一效应关系；凋亡率、凋亡指数与CdCl2染毒浓度间可拟合成直线方程：y=0．9315x-0．4152。10μmol／LZnCl2可以拮抗CdCl2所致的凋亡效应。结论在本实验条件下。采用单细胞凝胶电泳和激光共聚焦技术均可以灵敏、快捷地检测CdCl2对于V79细胞的凋亡作用和锌对镉所致细胞凋亡的拮抗效应。     

氯化镉的体外毒性及锌的拮抗作用

目的观察镉与锌体外对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)增殖的影响,初步探讨镉毒性机制。方法采用MTT法及3H-TdR掺入法,研究不同浓度氯化镉(CdCl2)单独或与生理浓度氯化锌(ZnCl2,10 μmol/L)同时染毒对V79细胞增殖的影响,并采用等离子体光谱仪测定细胞内Cd2 、Zn2 含量。结果 CdCl2对于V79细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性.采用MTT法和3H-TdR掺入法所得CdCl2染毒24 h后50%抑制浓度(IC50)分别为13.73 μmol/L和13.60 μmol/L.随着CdCl2染毒浓度的增加,细胞内Cd2 含量也增加.而同时给予锌则对镉的增殖抑制效应在一定程度上具有明显的拮抗作用,锌可使细胞内Cd2 含量降低。结论在本实验条件下,CdCl2对V79细胞增殖具有抑制作用,锌对镉的毒性有拮抗作用。     

sirt3的作用机制及抗肿瘤研究进展

沉默信息调节因子3(sirt3)是线粒体去乙酰化蛋白,参与线粒体蛋白去乙酰化调节,激活超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2),降低线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,维持细胞内稳态平衡,调节氧化、激素或者电离辐射等应激反应。sirt3是线粒体高保真蛋白和抑癌基因,其去乙酰化活性与长寿相关,因此,sirt3缺失可导致线粒体代谢异常和细胞损伤,引起与衰老相关的病理症状。本文对sirt3的线粒体定位、调节和抑癌作用进行讨论,阐明sirt3可以维持线粒体完整性和正常代谢活动,某种程度上能够抑制肿瘤的发生。     

氯化镉对V79细胞hprt基因位点突变频率的影响及锌的作用

目的了解氯化镉（CdCl2）对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79细胞）hprt基因位点突变频率的影响及锌的拮抗作用。探讨镉的遗传毒性机制。方法采用克隆形成法了解CdCl2对V79细胞的慢性毒性作用;在此基础上采用克隆法研究不同浓度CACl2对V79细胞hprt基因位点突变频率的影响,并采用生理浓度的氯化锌（ZnCl2）与CdCl2同时作用后,观察锌对于镉致突变效应的影响。同时观察不同浓度CdCl2预先染毒24h后,对过氧化氢（H。（）。）所致hprt基因位点突变效应的影响及锌的拮抗作用。结果克隆形成实验中,CdCl2对V79细胞的毒性随染毒浓度增加而增高,呈线性关系;CdCl2可以引起V79细胞hprt基因位点突变频率增加,在0．1和8μmol／L染毒浓度处分别有两个峰值。CdCl2与H2O2联合作用表现为协同效应。ZnCl2可以拮抗这种效应。结论在本实验条件下,CdCl2可以导致V79细胞hprt基因位点突变,并可使其他致突变物的致突变性增强,而锌瓦‘以拮抗此效应。     

锰的遗传毒性及锌对其毒性的拮抗作用

[目的]研究锰的遗传毒性及锌对其毒性的拮抗作用。[方法]昆明种小鼠分为7组,对照组、染锰组(分3个剂量给小鼠腹腔注射氯化锰)、干预组(注射相应3个剂量的氯化锰并在饮水中添加硫酸锌),6周后检测小鼠胸骨骨髓细胞微核情况,用彗星试验检测其外周血淋巴细胞DNA损伤。[结果]随染锰剂量的增加小鼠骨髓细胞微核率随之上升,中、高染锰组显著高于对照组(χ~2值分别为63.32,222.82,P<0.01),淋巴细胞DNA损伤程度逐渐加重,低、中、高染锰组均高于对照组(χ~2值分别为934.11,3 357.21,6 277.45,P<0.01);锌干预后,加锌染锰组微核率均低于相应不加锌染锰各剂量组,低锰组细胞微核率接近于对照,而加锌中、高锰组与相应不加锌染锰各剂量组比较差异均有统计学意义(χ~2值分别为2.33,158.27,P<0.01)。加锌染锰组DNA损伤均低于相应不加锌染锰各剂量组,差异均有统计学意义(χ~2值分别为83.15,81.66,241.76,P<0.01)。[结论]过量锰可导致小鼠淋巴细胞DNA损伤,具有遗传毒性,锌对其毒性有一定拮抗作用。     

锌,硒单独与联合作用对镉毒性拮抗作用的研究

本研究对镉，锌，硒单独或同时给与时相互之间的作用及影响进行了测定，以观察锌，硒对镉毒性的拮抗，实验中把４０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为镉，镉锌，镉硒，镉锌硒及对照共五组，观察指标为大鼠体重变化；血清，镉，硒，锌；尿：镉，硒，锌；尿蛋白及血清碱性磷酸酶（ＡＫＰ），结果进行统计学处理后表明：加入锌，硒后，镉中毒的大鼠体重回升，血镉下降，尿蛋白下降，血清ＡＫＰ回升，尿镉排出增加，提示锌，硒对镉中毒表现有拮抗作     

细胞骨架的激光共焦研究技术

激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)是细胞骨架研究的新手段,本文简要介绍了细胞骨架的共焦研究技术,包括细胞骨架的荧光标记方法和共焦图像采集与处理技术,分析了CLSM在细胞骨架研究中的优势.     

扶正解毒汤对硫酸镍遗传毒性拮抗作用

目的研究灌服复方中药扶正解毒汤(FJD)后兔血清对硫酸镍(NiSO₄)遗传毒性的抑制作用。方法采用3H-TdR掺入法,观察扶正解毒汤含药血清对NiSO₄诱导的体外培养人支气管上皮细胞(16HBE)非程序DNA合成(UDS)的影响。结果NiSO₄(100~200μmol/L)暴露组细胞UDS水平明显高于阴性对照组(P<0.05,P<0.01);高、中、低剂量扶正解毒汤血清对16HBE细胞UDS均无诱导效应,但与NiSO₄(200μmol/L)共同处理后细胞的UDS水平〔CPM分别为(221.45±34.93),(289.51±48.26),(672.47±56.68)〕;均低于NiSO₄暴露组[CPM为(998.63±81.36),P<0.05,P<0.01],FJD血清对NiSO₄诱导的UDS有显著的抑制作用,且呈剂量-效应关系(r=0.837,P<0.05)。结论体外实验结果显示,扶正解毒汤本身无致突变性,具有拮抗硫酸镍遗传毒性的作用及抗镍致癌潜能。     

中性粒细胞肺内集聚在急性呼吸窘迫综合征发病机制中的作用

目的探讨中性粒细胞肺内集聚在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)发病机制中的作用。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和ARDS模型组,经股静脉注射油酸(0.12 ml/kg)制作ARDS模型,对照组经股静脉注射等量生理盐水。而后,在不同时间点插管至颈动脉采集颈动脉血做血气分析,经肺动脉圆锥插管至肺动脉采血测血常规,采用ELISA方法对肺组织匀浆进行髓过氧化物酶(MPO)定量检测及肺组织病理学检查和评分,并检测肺组织自由基的电子自旋共振(ESR)波谱。结果模型组大鼠动脉氧分压在染毒后10 min时就开始下降,氧合指数具有相同的变化规律,2 h后达到其最低值(为189.45 mm Hg),达到了ARDS的诊断标准(<200 mm Hg)。与对照组比较,模型组肺动脉全血白细胞总数和中性粒细胞数在注射后1 h开始下降,最低值分别出现在染毒后3 h和1～3 h,平均值为4.46×109/L和1.82×109/L～2.16×109/L,6 h后,白细胞总数和中性粒细胞计数升高(平均值分别达到11.68×109/L和5.93×109/L);此外,模型组给予油酸后2 h,中性粒细胞百分比即见升高,6 h左右达到最高峰(平均值为58.25%),以后逐渐下降,而对照组肺动脉血和外周动脉血的白细胞分类均以淋巴细胞为主。模型组肺组织中的活性氧(ROS)含量在注射后10 min已见升高,1 h达到峰值(约为正常水平的6.5倍),峰值出现早于血氧下降。模型组肺组织的MPO活力在注射油酸后30 min见明显升高,2 h左右达到最大值(平均值为5.82 U/g),约6 h后逐渐降低,但24 h时与对照组比较仍有统计学意义。肺组织改变在注射油酸后10 min(病理评分平均值为4.33)已经出现;30 min(病理评分平均值为6.51)其变化与对照组比较有统计学意义;6 h时(病理评分平均值为9.78)已十分严重。结论肺内失控的炎症损伤是ARDS病程的核心环节,而肺内大量中性粒细胞集聚及其产生的大量ROS则可能是其最重要的启动因子,也是ARDS损伤启动的重要信号。     

灯盏花素对创伤性损伤大鼠的神经保护作用

目的 探讨灯盏花素(Bre)基于活性氧簇(ROS)-NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对创伤性脑损伤(TBI)大鼠的神经保护作用.方法 构建TBI大鼠模型,实验分为假手术组、模型组、低、中、高剂量Bre组、胞磷胆碱钠组.采用神经功能缺损评分表(NSS)对大鼠神经功能评分;测定脑组织含水量和血脑屏障通透性;酶联...     

氯化镉对DNA修复的影响及机制的体外研究

目的通过体外实验，了解氯化镉（CACl2）对过氧化氢（H2O2）引起的V79细胞DNA损伤后修复过程的影响及其相关机制。方法采用MTT法了解CdCl2对于V79细胞的毒性；以单细胞凝胶电泳实验分析软件中的几个评价指标，同时观察无细胞毒性浓度的CdCl2对H2O2所引起的V79细胞DNA损伤后修复所产生的影响；以生理浓度的氯化锌（ZnCl2）作为拮抗剂，与CdCl2同时作用后，观察对DNA修复影响的变化。结果MTT实验中，CdCl2对V79细胞的毒性随染毒浓度增加而增强，呈线性关系；在碱性单细胞凝胶电泳实验中，无细胞毒性浓度的CdCl2未明显增强H2O2V79细胞DNA的损伤，却明显地抑制了由H2O2所致的V79细胞DNA损伤后的修复过程，并以0．1μmol／LCdCl2浓度最为明显；生理浓度的锌可有效拮抗CdCl2的DNA修复抑制作用。结论在本实验条件下，无细胞毒性浓度的CdCl2对H2O2的DNA损伤效应无协同作用，却明显抑制DNA损伤后的修复过程；锌在一定程度上可以拮抗CdCl2的DNA修复抑制效应。     

氯化镉所致DNA损伤及锌的拮抗效应的研究

目的通过体外实验,了解氯化镉(CdCl2)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的直接DNA损伤作用及锌的拮抗作用,初步探讨镉的遗传毒性机制及预防措施。方法采用甲基四唑法(MTT法)了解CdCl2对于V79细胞的毒性,通过碱性单细胞凝胶电泳常用的几个评价指标,研究CdCl2体外对于V79细胞DNA的断裂损伤,并采用生理浓度ZnCl2(10μmol/L)加以拮抗。结果MTT试验中,CdCl2对于V79细胞的毒性随染毒剂量增加而增高,呈线性关系,线性方程为:y=-0.009 4x 94.472;在碱性单细胞凝胶电泳中,CdCl2单独染毒,随着染毒剂量增加,DNA损伤加重,而锌具有明显的拮抗作用。结论本实验条件下,CdCl2能造成V79细胞DNA损伤,生理浓度的锌可以拮抗镉的DNA损伤效应。     

氢醌/Cu2+对小鼠骨髓细胞线粒体氧化损伤的研究

目的 研究在Cu^2 存在的条件下,氢醌（HQ）对小鼠骨髓细胞线粒体的氧化损伤。方法 染毒：（1）在1μmol/LCu^2 存在的条件下,小鼠骨髓细胞用0、10、20和40μmol/LHQ染毒30min;（2）1μmol/LCu^2 存在的条件下,20μmol/LHQ染毒30、60、120min。观察骨髓细胞死亡率（CDR）、活性氧（ROD）生成、线粒体酶活力和线粒体电位（MMP）的改变。结果 在1μmol/LCu^2 存在的条件,HQ正最低剂量组（10μmol/L)和最染毒时间（30min,20μmol/L）即表现出ROS生成增加（为对照组的374％和541％）、CDR增加（为对照组的115％和117％）、线粒体酶活力下降（为对照组的54％和30％）和存在剂量、时间的依赖关系（ROS：r=0.941,r=-0.981;CDR:r=0.886,r=0.886;线粒体酶活力：r=-0.842,r=-0.902;MMP：r=-0.844,r=-0.961),ROS生成与MMP、CDR和线粒体酶活力间相关密切（r分别为－0。902,0。943,－0。977）。结论 在Cu^2 存在的情况下,HQ可导致小鼠骨髓细胞线粒体氧化损伤。细胞内ROS生成增加致线粒体氧化损伤可能是HQ诱导小鼠骨髓细胞毒性的重要途径之一。     

锌转运体的结构预测、转运机制和功能

机体维持细胞内锌内稳态具有很重要的意义,因而研究锌转运体的结构、转运机制和功能非常有必要。锌转运体家族种类很多,大体可以分为以下3种:Zrt-Irt样蛋白家族、助阳离子扩散体家族和双价金属转运体家族。Zrt-Irt样蛋白家族的主要功能是摄取锌进入细胞内,以补充细胞内锌的不足;而助阳离子扩散体家族成员主要参与锌的外排和锌在细胞内的区室化,以达到降低细胞内锌浓度并贮存锌到细胞器中的目的。双价金属转运体家族具有潜在锌转运活性,但目前尚有争议。     

牛磺酸对大鼠化学性急性呼吸窘迫综合征防治作用的实验研究

目的探讨牛磺酸对化学性急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的防治作用及可能机制。方法经股静脉注射油酸复制大鼠ARDS模型,应用电子自旋共振(ESR)技术观察大鼠肺内活性氧(ROS)自由基的生成情况,观察血浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化,进行肺湿干重、肺系数测定及肺组织病理学检查。结果牛磺酸组大鼠肺湿干重、肺系数及病理学指标皆得到显著改善,并且高剂量用药效果更佳。研究显示牛磺酸可显著降低ARDS大鼠肺内ROS含量,抑制组织脂质过氧化的发生,提高SOD活力。结论牛磺酸对化学性ARDS具有防治作用,其机制之一与减少体内活性氧自由基的生成有关。     

丹参对大鼠化学性ARDS的防治作用

目的 探讨丹参对化学性急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的防治作用及可能机制。方法 经股静脉注射油酸复制大鼠ARDS模型,应用电子自旋共振(ESR)技术观察大鼠肺内活性氧(ROS)自由基的生成情况,同时检测血浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,进行肺湿干重、肺系数测定及肺组织病理学检查,并与使用丹参组大鼠结果进行比较。结果 丹参组ARDS大鼠肺内ROS含量显著降低,SOD活力升高,MDA生成减少,肺湿干重、肺系数及病理学指标亦得到显著改善。结论 丹参对化学性ARDS具有防治作用,其机制之一与减少体内活性氧自由基的生成有关。     

去乙酰化酶SIRT3抗衰老研究进展

去乙酰化酶Sirtuin是一个在低等动物中被广泛研究的抗衰老蛋白因子。哺乳动物的同源蛋白家族SIRT3蛋白通过抗氧化机制防御氧自由基氧化应激介导的机体损伤,在抗衰老过程中发挥着重要作用。能量限制可通过增加SIRT3活性来延长寿命,SIRT3作为抗衰老和治疗衰老相关疾病的靶点正在成为研究热点。本文就SIRT3抗衰老的研究进展做一总结。